WO2011039999A1 - 脂肪分解促進作用を有する組成物 - Google Patents

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    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/332—Promoters of weight control and weight loss

Definitions

  • the present invention relates to a composition having a lipolysis-promoting action and its pepsin and trypsin degradation products have an angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory action, and more specifically salmon white extract, brewer's yeast extract, barley
  • ACE angiotensin-converting enzyme
  • the present invention relates to a composition comprising a young leaf extract and tricollagen (chicken collagen), a lipolysis accelerator for oral intake containing such a composition, and an ACE inhibitor for oral intake.
  • Fat is an excess of energy consumed as food that accumulates in white adipose tissue, resulting in obesity due to the accumulation of excess white adipose tissue, resulting in various lifestyle-related diseases as well as cosmetic aspects. But it is a big problem. Scientific evidence reveals that the increase in white adipose tissue recently formed around the viscera (mesenteric fat) causes metabolic syndrome by inducing hypertension, insulin resistance, impaired glucose tolerance, and hyperlipidemia Therefore, prevention and improvement are socially eagerly desired.
  • adipokines When fat accumulates in fat cells and enlarges, the secretion of good adipokines from adipocytes decreases, and various bad adipokines (eg, TNF ⁇ , resistin, etc.) are secreted, and insulin resistance (ie, decreased insulin sensitivity) is achieved. Is caused. As a result, the blood sugar level cannot be lowered sufficiently, and insulin is excessively secreted to control the blood sugar level, resulting in hyperinsulinemia. When hyperinsulinemia occurs, metabolic syndrome is caused by the action of excess insulin on lipid metabolism and the like.
  • bad adipokines eg, TNF ⁇ , resistin, etc.
  • Adiponectin is one of the good adipokines, which promotes fatty acid combustion and sugar uptake, and improves insulin resistance (Non-patent Document 1). Fatty acid burning by adiponectin does not occur in adipocytes but is due to activation of AMP-activated protein kinase (AMPK) in liver and skeletal muscle. In the liver, sugar formation is suppressed and fatty acids are burned, and in skeletal muscle, sugar is taken in and fatty acids are burned.
  • AMPK AMP-activated protein kinase
  • Adiponectin expression is induced with differentiation from preadipocytes to adipocytes. And when fat cells are not enlarged, they are actively secreted from fat cells. On the other hand, when adipocytes are enlarged, the action of adiponectin is attenuated by the above-described TNF ⁇ . Moreover, when adipocytes are enlarged, adiponectin transcription is suppressed, and adiponectin is deficient to cause metabolic abnormalities (Non-patent Document 1).
  • Patent Document 2 citrus plant
  • Patent Document 3 thistle plant
  • pepper plant Patent Document 4
  • orange leaf orange Examples thereof include flower, dandelion leaf and barracuda root
  • Patent Document 5 pearl barley, barley, Seiko, Soseki coffee and Pu'er tea
  • a lipolysis accelerator containing at least one of a lipolysis accelerator (Patent Document 7) containing lotus or an extract thereof as an active ingredient, an extract of birch family birch and an extract of Gramineae (patent document 7) Reference 8), fat accumulation suppression and promoter containing a hydrolyzate of wheat protein (Patent Document 9), and the like.
  • hypertension is a typical symptom of metabolic syndrome, and the number of patients is increasing year by year. Hypertension is known to cause various complications such as cerebral hemorrhage, subarachnoid hemorrhage, cerebral infarction, myocardial infarction, angina pectoris, nephrosclerosis, and various studies on the mechanism of hypertension have been conducted. It is known that the renin-angiotensin system involved in blood pressure increase and the kallikrein-kinin system involved in blood pressure play important roles.
  • angiotensinogen secreted mainly from the liver is converted into angiotensin I by renin produced in the kidney, and further converted into angiotensin II by angiotensin converting enzyme (ACE).
  • ACE angiotensin converting enzyme
  • This angiotensin II contracts vascular smooth muscles and increases blood pressure.
  • antihypertensive kallikrein acts on kininogen to produce bradykinin.
  • This bradykinin has the effect of dilating blood vessels and lowering blood pressure, while ACE has the action of degrading this bradykinin.
  • ACE is involved in an increase in blood pressure by two actions, production of angiotensin II, which is a pressor peptide, and inactivation of bradykinin, which is a hypotensive peptide. Therefore, it is possible to suppress an increase in blood pressure by suppressing the enzyme activity of ACE.
  • Captopril and enalapril which are proline derivatives developed as ACE inhibitory active substances, are widely used for the treatment of hypertension.
  • peptides which are enzyme degradation products of food material proteins, have ACE inhibitory activity.
  • collagenase degradation product of gelatin Patent Document 10
  • trypsin degradation product of casein Patent Documents 11 to 16
  • thermolysin degradation product of ⁇ -zein Patent Document 17
  • pepsin degradation product of sardine muscle Patent Document 18
  • a thermolysin degradation product of bonito Patent Document 19
  • a thermolysin degradation product of sesame protein Patent Document 20
  • a degradation product of kappa-casein such as pepsin
  • An object of the present invention is to provide a composition that has a lipolysis promoting action and an ACE inhibitory action, and has no problems in terms of safety such as side effects and toxicity as food, and can be taken orally. is there.
  • the inventor has obtained a mixture prepared by combining salmon white extract, beer yeast extract, barley young leaf extract, and tricollagen (chicken collagen). Furthermore, the digestion mixture which processed the mixture of barley young leaf, a salmon white extract, a brewer's yeast extract, and tricollagen using the digestive enzymes pepsin and trypsin has ACE inhibitory activity. As a result, the present invention has been completed.
  • the present invention (1) A composition comprising salmon roe extract, brewer's yeast extract, barley young leaf extract, and tricollagen, having a lipolysis-promoting action, and the pepsin and trypsin degradation product are angiotensin converting enzyme (ACE) ) A composition having an inhibitory action, (2) Salmon white extract 14.0-14.5 parts by weight, brewery yeast extract 2.8-3.2 parts by weight and tricollagen 5.7-6.2 parts by weight per 100 parts by weight of the barley young leaf extract
  • the composition according to (1) above comprising: (3)
  • the salmon roe extract is an extract containing low molecular components decomposed into oligonucleotides and oligopeptides, obtained by enzymatic treatment of salmon roe, characterized in that the above (1) or (2 )
  • the composition according to (4) The composition according to (1) or (2) above, wherein the brewer's yeast extract is an extract containing a low molecular weight RNA component obtained by enzymatic treatment of brewer'
  • composition according to (1) or (2) above, wherein the barley young leaf extract contains 30% indigestible dextrin (6)
  • An oral lipolysis promoter characterized by comprising the composition according to any one of (1) to (5) above
  • An oral angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitor characterized by comprising the composition according to any one of (1) to (5) above
  • ACE angiotensin converting enzyme
  • the present invention it is possible to provide a composition having an excellent lipolysis promoting action and a digested product thereof having an ACE inhibitory action. Since the composition of the present invention has no problems such as side effects and toxicity as food, it can be easily taken continuously for a long period of time, and is extremely useful for preventing and improving adult diseases such as obesity and hypertension.
  • the amount of glycerol in the culture supernatant of the adipocytes cultured in the presence of the composition of the present invention is such that the adipocytes cultured in the presence of salmon white extract, beer yeast extract, barley young leaf extract, or chicken collagen alone. It is a figure which shows having increased notably compared with the amount of glycerol in a culture supernatant.
  • shaft of the figure has shown the value of the percentage on the basis of the amount of glycerol in the culture supernatant of an additive-free group.
  • shaft of the figure has shown the value of the percentage on the basis of the survival rate of the fat cell of an additive-free area.
  • the ACE inhibitory activity of the pepsin and trypsin-treated product of the composition of the present invention is remarkable compared to the ACE inhibitory activity of the pepsin and trypsin-treated salmon white extract, beer yeast extract, barley young leaf extract, or chicken collagen treated product alone. It is a figure which shows that it is excellent in.
  • composition of the present invention having a lipolysis-promoting action and having an angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory action after degradation with pepsin and trypsin
  • examples of the composition of the present invention having a lipolysis-promoting action and having an angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory action after degradation with pepsin and trypsin include salmon white extract, brewer's yeast extract, barley young leaf extract, and
  • the composition containing tricollagen (chicken collagen) is not particularly limited, but 14.0 to 14.5 parts by weight of salmon white extract and 100% by weight of beer yeast extract per 100 parts by weight of barley young leaf extract.
  • Particularly preferred is a composition comprising 8 to 3.2 parts by weight and 5.7 to 6.2 parts by weight of tricollagen.
  • the salmon roe extract is not particularly limited as long as it can be used for food, but salmon roe containing low molecular components decomposed into oligonucleotides and oligopeptides by enzymatic treatment of salmon roe. Extracts are preferred.
  • salmon roe extract containing 20 to 50% of oligonucleotide or oligopeptide having a molecular weight of 1000 to 3000 is preferred.
  • Such a salmon eggplant extract can be obtained from Nissei Bio Inc., for example.
  • the brewer's yeast extract is not particularly limited as long as it can be used for foods, but a brewer's yeast extract containing RNA that has been reduced in molecular weight by enzymatic treatment of brewer's yeast is preferable.
  • a beer yeast extract containing 20 to 50% of RNA having a molecular weight of 1000 to 3000 is preferred.
  • Such a brewer's yeast extract can be obtained from Nissei Bio Inc., for example. Although it does not restrict
  • a barley young leaf extract manufactured by Laxon which contains 20 to 30% of the hardly digestible dextrin, can be preferably exemplified.
  • limit especially as said tricollagen The tricollagen for foodstuffs can be used suitably,
  • the tricollagen made from LS factory company can be mentioned suitably.
  • the composition of the present invention can be used as an oral fat accumulation accelerator, an oral fat accumulation inhibitor, an obesity preventing agent, and an obesity improving agent, as well as an oral ACE inhibitor, captopril, etc. Unlike these synthetic pharmaceuticals, they can be used as an antihypertensive agent with no or very little side effects after ingestion, and as a prophylactic or ameliorating agent for hypertension. Furthermore, the composition of the present invention can impart a lipolysis promoting action and an ACE inhibitory action to food and drink by using it in a food and drink. As described in the following examples, the composition of the present invention exhibits an excellent ACE inhibitory action after digestion with digestive enzymes pepsin and trypsin. It can be effective for improvement.
  • an effective amount of the active ingredient is added and blended at the production raw material stage of the food or drink, or at the stage of the manufactured product.
  • the “effective amount of active ingredient” means a content such that the active ingredient is ingested when the amount normally consumed in each food or drink is ingested. It can be determined depending on body weight, symptoms, administration time, dosage form, administration method, combination of drugs and the like.
  • the food / beverage products of the present invention are not particularly limited as long as they contain the composition of the present invention.
  • the food / beverage products prepared as the food / beverage products and supplements as they are examples include those further blended with proteins, saccharides, fats, trace elements, vitamins, liquids, semi-liquids or solids, and those added to and blended with general foods and drinks.
  • the food and drink of the present invention may be health food, functional food, food for specified health use, or food for the sick.
  • the oral lipolysis accelerator, oral ACE inhibitor, and food and drink of the present invention are generally used for the production of additives and compounding agents such as excipients, extenders, binders, disintegrants, Adjuvants such as lubricants, dispersants, preservatives, wetting agents, solubilizers, preservatives, stabilizers, capsule bases, food materials and the like can be used.
  • component of the adjuvant examples include lactose, fructose, glucose, starch, gelatin, magnesium carbonate, synthetic magnesium silicate, talc, magnesium stearate, calcium carbonate, methylcellulose, carboxymethylcellulose, or a salt thereof, gum arabic, polyethylene Glucol, syrup, petrolatum, glycerin, ethanol, propylene glycol, citric acid, sodium chloride, sodium sulfite, sodium phosphate, pullulan, carrageenan, dextrin, reduced palatinose, sorbitol, xylitol, stevia, synthetic sweetener, citric acid, ascorbine Specific examples include acids, acidulants, baking soda, sucrose esters, plant oils and fats, potassium chloride, safflower oil, beeswax, soybean lecithin, and fragrances.
  • Sample preparation In the examples of the present invention, the samples used for evaluation were salmon white extract (Nissei Bio Inc.), beer yeast extract (Nissei Bio Inc.), barley young leaf extract (Laxon Inc.) Manufactured, containing 30% indigestible dextrin) and chicken collagen (Tricollagen: manufactured by L.S Factory Co., Ltd.) alone or in combination. Table 1 shows the concentration of each component used for the preparation of the sample.
  • Mouse preadipocyte cell line 3T3-L1 cells were seeded in 96-well culture plates at 3 ⁇ 10 4 cells / 250 ⁇ l / well and contain 10% CS. Preincubation was performed for 2 days using DMEM medium (10% CS / DMEM), and the cells were cultured until they became confluent (day 0).
  • An adipocyte differentiation inducer [0.5 mM isobutylmethylxanthine (IBMX), 1 ⁇ M dexamethasone (DEX), 10 ⁇ g / ml insulin] was added to the medium and further cultured for 3 days to induce differentiation into adipocytes.
  • Test Results As described above, the determination of the lipolysis promoting action was obtained using the measured value of the amount of glycerol produced by lipolysis as an index. The graph of the results is shown in FIG. 1, and the numerical results are shown in Table 2. In the group to which the mixture (sample) containing barley young leaf extract was added, the values of control were 208.67% and 504.17% at the concentrations of 1 mg / ml and 5 mg / ml, respectively.
  • the lipolysis rate in the group to which each component was added alone was 141.57% in the barley extract addition group of 810 ⁇ g / ml, 255.22% in the group of 4.05 mg / ml addition; 116 ⁇ g / ml salmon white extract 95% in the group, 95.44% in the group added with 580 ⁇ g / ml; 95% in the group added with brewer's yeast 24 ⁇ g / ml, 81.6% in the group added with 120 ⁇ g / ml; 87. 8% in the group added with chicken collagen 48 ⁇ g / ml. It was 116.7% in the group with 67% and 240 ⁇ g / ml added.
  • ACE inhibitory activity was measured based on a modification of the Lieberman assay.
  • the freeze-dried sample treated with the enzyme as described above was prepared so as to have the concentrations shown in Table 1 in the same manner as the concentration before the enzyme treatment.
  • Hip-His-Leu substrate solution 250 ⁇ l
  • borate buffer pH 8.3
  • 400 mM NaCl 400 mM NaCl was added and incubated for 5 minutes in a constant temperature water bath at 37 ° C. did.
  • a 600 mu / ml (6 mU) ACE solution (100 ⁇ l) was added and stirred immediately, followed by a reaction at 37 ° C.
  • Inhibition rate (%) ⁇ (E C ⁇ E S ) / (E C ⁇ E B ) ⁇ ⁇ 100
  • a stick-type supplement was prepared by mixing 1687 mg of barley young leaf extract, 240 mg of salmon white extract, 50 mg of beer yeast extract, 100 mg of chicken collagen, 723 mg of indigestible dextrin, and 500 mg of dextrin.

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Abstract

　本発明の課題は、脂肪分解促進作用及びアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有し、且つ、食品として副作用や毒性等の安全性の点で問題がなく、経口摂取することが可能な組成物や、該組成物を含む飲食品やサプリメントを提供することである。発明者は、脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を有する食品用組成物を提供すべく種々の食材について鋭意検討した結果、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを組み合わせて調製した組成物が、優れた脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害活性作用を有することを見い出した。本発明の組成物を有効成分として用いることにより、脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を有する飲食品やサプリメントを提供することができる。

Description

脂肪分解促進作用を有する組成物
　本発明は、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有する組成物、より詳細には、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲン(チキンコラーゲン)からなる組成物や、かかる組成物を含有する経口摂取用の脂肪分解促進剤や、及び経口摂取用のＡＣＥ阻害剤に関する。
　脂肪は食物として摂取した余剰のエネルギーが白色脂肪組織に蓄積されたものであり、過剰な白色脂肪組織の蓄積によって肥満となり、その結果、様々な生活習慣病の原因となるばかりでなく、美容面でも大きな問題となっている。特に最近内臓周囲（腸間膜脂肪）に形成される白色脂肪組織の増大が高血圧、インスリン抵抗性、耐糖能異常、高脂血症を誘発することによりメタボリックシンドロームを引き起こすことが科学的に明らかにされ、その予防と改善が社会的に切望されている。
　脂肪細胞に脂肪が蓄積して肥大すると、脂肪細胞からの善玉アディポカインの分泌が減り、種々の悪玉アディポカイン（例えば、ＴＮＦα、レジスチン等）が分泌され、インスリン抵抗性（すなわち、インスリン感受性の低下）が引き起こされる。その結果、血糖値を十分に低下させられなくなるので、血糖値を制御するためにインスリンが過剰分泌され、高インスリン血症となる。高インスリン血症になると、過剰のインスリンによる脂質代謝などへの作用によって、メタボリックシンドロームが引き起こされる。
　アディポネクチンは、善玉アディポカインの１つであり、脂肪酸の燃焼および糖の取り込みを促進し、インスリン抵抗性を改善する（非特許文献１）。アディポネクチンによる脂肪酸の燃焼作用は、脂肪細胞で生じるのではなく、肝臓および骨格筋におけるＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化によるものである。肝臓においては、糖の新生を抑制して脂肪酸を燃焼し、そして骨格筋では、糖を取り込んで脂肪酸を燃焼させる。
　アディポネクチンの発現は、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化に伴って誘導される。そして、脂肪細胞が肥大していないときに脂肪細胞から活発に分泌される。一方、脂肪細胞が肥大した場合には、上述のＴＮＦαなどによってアディポネクチンの作用が減弱される。また、脂肪細胞が肥大すると、アディポネクチンの転写は抑制され、アディポネクチンが欠乏して代謝異常が引き起こされる（非特許文献１）。
　野菜または果実由来のカロテノイドが、インスリン誘導時における前駆脂肪細胞からの脂肪細胞への分化を抑制することが報告されているが（特許文献１）、上述のように、前駆脂肪細胞からの脂肪細胞への分化を抑制するとアディポネクチンの発現も抑制されるため、脂肪細胞への分化を抑制することが、即抗肥満作用につながるかは疑わしい。
　従来から、肥満の予防と改善については、食事制限、過剰エネルギーの吸収の遅延及び阻害、あるいは消化管における糖質吸収阻害物質の探索など、摂取エネルギーを制限するような様々な研究が行われてきた。しかし、エネルギー摂取の制限は基礎代謝量を低下させる要因にもなり、必ずしも肥満が改善されないことがある。したがって、肥満を解消するためには蓄積された脂肪を積極的に代謝、分解して熱エネルギーとして発散することが理想的である。これらのことから、近年、食品素材中から脂肪分解促進作用を有する機能性成分の探索が活発に行われ、多くの脂肪分解促進剤及び飲食品が提案されている。
　既に知られている天然由来の脂肪分解促進剤の有効成分としては、ミカン科植物（特許文献２）、アザミ族の植物（特許文献３）、コショウ科植物（特許文献４）、オレンジリーフ、オレンジフラワー、フキタンポポ葉およびカラマスルート（特許文献５）、ハトムギ、大麦、決明子、蕃石榴およびプーアル茶（特許文献６）などがある。さらに最近では、ハスまたはその抽出物を有効成分とする脂肪分解促進剤（特許文献７）、カバノキ科シラカバの抽出液及びイネ科クマザサの抽出物の少なくともいずれかを含有する脂肪分解促進剤（特許文献８）、小麦タンパク質の加水分解物を含有する脂肪蓄積抑制および促進剤（特許文献９）等を挙げることができる。
　一方、高血圧症は代表的なメタボリックシンドロームの症状であり、その患者数は年々増加している。高血圧症は脳出血、クモ膜下出血、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、腎硬化症など種々の合併症を引き起こすことが知られており、高血圧症の発症メカニズムについて様々な研究が行われてきており、血圧の昇圧に関与するレニン・アンジオテンシン系と、降圧に関与するカリクレイン・キニン系が重要な役割を果たしていることが知られている。レニン・アンジオテンシン系では主に肝臓から分泌されるアンジオテンシノーゲンが腎臓で生産されるレニンによってアンジオテンシンIとなり、更にアンジオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)によってアンジオテンシンIIに変換される。このアンジオテンシンIIは血管平滑筋を収縮させ、血圧を上昇させる。一方、降圧系のカリクレインはキニノーゲンに作用してブラジキニンを産生する。このブラジキニンには血管を拡張して血圧を下げる効果があるが、ＡＣＥにはこのブラジキニンを分解してしまう作用がある。このように、ＡＣＥは昇圧ペプチドであるアンジオテンシンIIの産生と降圧ペプチドであるブラジキニンの不活化という２つの作用によって血圧の上昇に関与していることが明らかにされている。従って、このＡＣＥの酵素活性を抑制することにより血圧の上昇を抑制することが可能となる。ＡＣＥ阻害活性物質として開発されたプロリン誘導体であるカプトプリルやエナラプリル等は高血圧症の治療に広く用いられている。
　また、最近では食品素材蛋白質の酵素分解物であるペプチドにＡＣＥ阻害活性のあることが報告されている。例えば、ゼラチンのコラーゲナーゼ分解物(特許文献１０)、カゼインのトリプシン分解物(特許文献１１～１６)、γ－ゼインのサーモライシン分解物(特許文献１７)、イワシ筋肉のペプシン分解物(特許文献１８)、かつお節のサーモライシン分解物(特許文献１９)、ゴマ蛋白のサーモライシン分解物(特許文献２０)、κ－カゼインのペプシン等の分解物(特許文献２１)など多数の報告がなされている。
特開２００３－９５９３０号公報 特開平８－８１３８２号公報 特開平８－３０１７８０号公報 特開平８－２４５４１０号公報 特開平１１－２２８４３１号公報 特開２００２－２７５０７８号公報 特開２００４－３０７３６５号公報 特開２００６－０４５１２０号公報 特開２００７－１０６６８３号公報 特開昭５２－１４８６３１号公報 特開昭５８－１０９４２５号公報 特開昭５９－４４３２３号公報 特開昭６０－２３０８６号公報 特開昭６０－２３０８７号公報 特開昭６１－３６２２６号公報 特開昭６１－３６２２７号公報 特開平２－３２１２７号公報 特開平３－１１０９７号公報 特開平４－１４４６９６号公報 特開平８－２３１５８８号公報 特開平８－２６９０８８号公報
門脇孝ら、「アディポネクチンと糖尿病・心血管病の分子メカニズム」，第１２８回日本医学会シンポジウム記録集「糖尿病と動脈硬化」２００４年１２月２日，３４－４５頁
　本発明の目的は、脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を有し、且つ、食品として副作用や毒性等の安全性の点で問題がなく、経口摂取することが可能な組成物を提供することにある。
　発明者は、種々の食材について脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害活性について鋭意検討した結果、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲン（チキンコラーゲン）を組み合わせて調製した混合物が、優れた脂肪分解促進作用を有することを、さらに、大麦若葉、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、トリコラーゲンの混合物を消化酵素であるペプシン及びトリプシンを用いて処理した消化混合物がＡＣＥ阻害活性を示すことを見い出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち本発明は、
（１）サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを含む組成物であって、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有することを特徴とする組成物、
（２）大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０～１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８～３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７～６．２重量部を含むことを特徴とする、上記（１）記載の組成物、
（３）サケ白子抽出物が、サケ白子を酵素処理することにより得られる、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含む抽出物であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の組成物、
（４）ビール酵母抽出物が、ビール酵母を酵素処理することにより得られる、低分子化したＲＮＡ成分を含む抽出物であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の組成物、
（５）大麦若葉エキスが、３０％難消化性デキストリンを含むことを特徴とする上記（１）又は（２）記載の組成物、
（６）上記（１）～（５）のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用脂肪分解促進剤、
（７）上記（１）～（５）のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、及び
（８）上記（１）～（５）のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする飲食品に関する。
　本発明により、優れた脂肪分解促進作用及びその消化物がＡＣＥ阻害作用を有する組成物の提供が可能となった。本発明の組成物は、食品として副作用や毒性等の問題がないため、長期間継続して簡便に摂取することが可能であり、肥満や高血圧などの成人病予防・改善に極めて有用である。
本発明の組成物の存在下で培養した脂肪細胞の培養上清中のグリセロール量が、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、又はチキンコラーゲンの単独存在下で培養した脂肪細胞の培養上清中のグリセロール量と比較して顕著に増加していることを示す図である。図の縦軸は、無添加区の培養上清中のグリセロール量を基準とした百分率の値を示している。 本発明の組成物の存在下で培養した脂肪細胞の生存率と、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、又はチキンコラーゲンの単独存在下で培養した脂肪細胞生存率との間に顕著な差が認められないことを示す図である。図の縦軸は、無添加区の脂肪細胞の生存率を基準とした百分率の値を示している。 本発明の組成物のペプシン及びトリプシン処理物のＡＣＥ阻害活性が、ペプシン及びトリプシン処理したサケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、又はチキンコラーゲン処理物単独のＡＣＥ阻害活性と比較し顕著に優れていることを示す図である。
　本発明の、脂肪分解促進作用を有し、且つ、ペプシン及びトリプシンによる分解後にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有する組成物としては、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲン（チキンコラーゲン）を含む組成物であれば特に制限されるものではないが、大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０～１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８～３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７～６．２重量部を含む組成物であることが特に好ましい。
　上記サケ白子抽出物としては、食品用として使用できるものであれば特に制限されるものではないが、サケ白子を酵素処理することにより、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含むサケ白子抽出物が好ましい。特に分子量１０００～３０００のオリゴヌクレオチド、オリゴペプチドを２０～５０％含有するサケ白子抽出物が好ましい。このようなサケ白子抽出物は、例えば日生バイオ株式会社等より入手することができる。
　上記ビール酵母抽出物としては、食品用として使用できるものであれば特に制限されるものではないが、ビール酵母を酵素処理することにより、低分子化したＲＮＡを含むビール酵母抽出物が好ましい。特に分子量１０００～３０００のＲＮＡを２０～５０％含有するビール酵母抽出物が好ましい。このようなビール酵母抽出物は、例えば日生バイオ株式会社等より入手することができる。
　上記大麦若葉エキスとしては、特に制限されるものではないが、食品用に低温でスプレードライした大麦若葉エキスを好適に用いることができる。大麦若葉エキスに難消化性デキストリンを含んでいるものも用いることができる。難消化性デキストリンを含んだ大麦若葉エキスとしては２０～３０％の難消化性デキストリンを含有しているラクソン社製の大麦若葉エキスを好適に挙げることができる。
　上記トリコラーゲンとしては、特に制限されるものではないが、食品用のトリコラーゲンを好適に用いることができ、例えば株式会社エル・エス・ファクトリー社製のトリコラーゲンを好適に挙げることができる。
　本発明の組成物は、経口用の脂肪分解促進剤の他、経口用の脂肪蓄積抑制剤、肥満予防剤、肥満改善剤として用いることができ、また、経口用ＡＣＥ阻害剤の他、カプトプリルなどの合成医薬品とは異なって、摂取後副作用がない、あるいは極めて少ない血圧上昇抑制剤、高血圧症の予防若しくは改善剤として用いることができる。さらに、本発明の組成物は飲食品に配合して用いることにより、飲食品に脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を付与することができる。下記の実施例に記載のように、本発明の組成物は消化酵素であるペプシン及びトリプシンで消化した後に、優れたＡＣＥ阻害作用を示すことから、食品として経口摂取することにより高血圧症の予防・改善に効果を奏することができる。本発明の組成物を飲食品に配合して用いるためには、その有効成分の有効量を飲食品の製造原料段階、あるいは製造した製品の段階等で添加、配合する。ここで「有効成分の有効量」とは、個々の飲食品において通常喫食される量を摂取した場合に、有効成分が摂取されるような含有量を意味するものであり、受容者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定することができる。
　本発明の飲食品は、本発明の組成物を含有するものであれば特に制限されるものではなく、具体的には、本発明の組成物をそのまま飲食品やサプリメントとして調製したものや、各種タンパク質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類等をさらに配合したものや、液状、半液体状若しくは固体状にしたものや、一般の飲食品へ添加、配合したものを例として挙げることができる。
　さらに、本発明の飲食品は、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、あるいは病者用食品であってもよい。本発明の経口用脂肪分解促進剤、経口用ＡＣＥ阻害剤、及び飲食品は、その製造に関しては、通常用いられる添加物や配合剤、例えば、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、分散剤、保存剤、湿潤化剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化材、カプセル基剤、食品素材等の補助剤を用いることができる。該補助剤の成分としては、例えば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはその塩、アラビアガム、ポリエチレングルコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム、プルラン、カラギーナン、デキストリン、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、ステビア、合成甘味料、クエン酸、アスコルビン酸、酸味料、重曹、ショ糖エステル、植物硬化油脂、塩化カリウム、サフラワー油、ミツロウ、大豆レシチン、香料等を具体的に挙げることができる。
　以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
（１）試料の調製
　本発明の実施例において、評価に用いた試料は、サケ白子抽出物（日生バイオ株式会社製）、ビール酵母抽出物（日生バイオ株式会社製）、大麦若葉エキス（ラクソン社製、３０％難消化性デキストリン含有）、チキンコラーゲン（トリコラーゲン：株式会社エル・エス・ファクトリー社製）を単独又は組み合わせて調製した。試料の調製に用いた各成分の濃度を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（２）脂肪細胞への分化及び脂肪分解活性の測定
　マウス前駆脂肪細胞株３Ｔ３－Ｌ１細胞を、９６ｗｅｌｌ培養プレートに３×１０４ｃｅｌｌｓ／２５０μｌ／ｗｅｌｌとなるように播種し、１０％ＣＳを含むＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ／ＤＭＥＭ）を用いて２日間プレインキュベートを行い、コンフルエント （ｄａｙ０）になるまで培養した。脂肪細胞分化誘導剤[０．５ｍＭイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、１μＭデキサメサゾン（ＤＥＸ）、１０μｇ／ｍｌインスリン]を培地に添加し、さらに３日間培養することにより脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導後の細胞を、１０μｇ／ｍｌインスリンを含む１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培地にて３日間培養した後、基本培地で６日間培養した。この６日間の培養中、培地を２日間おきに交換し脂肪滴を蓄積させた。その後、表１に記載の混合物、及び、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、チキンコラーゲンを単独で添加して、さらに、４８時間の培養を行った。培養終了後に上清を回収し、Adipolysis assay kitを用いて培養上清中のグリセロール量を測定した。この培養上清中のグリセロール量を脂肪分解の指標とした。グリセロール遊離率はコントロールの値を１００％とした場合の相対的な値である。
脂肪分解促進率％＝[Ａ/Ｂ]×１００
Ａ：抽出物添加時の遊離グリセロール量
Ｂ：抽出物無添加時の遊離グリセロール量
（３）試験結果
　上述のように、脂肪分解促進作用の判定は、脂肪分解により生成するグリセロール量の測定値を指標として求めた。結果をグラフにしたものを図１に、数値化したものを表２にそれぞれ示す。大麦若葉エキスを含む混合物（試料）を添加した区において、１ｍｇ／ｍｌと５ｍｇ／ｍｌ濃度において、それぞれｃｏｎｔｒｏｌの２０８．６７％、５０４．１７％の値を示した。一方、各成分を単独で添加した区における脂肪分解率は、大麦エキス８１０μｇ／ｍｌ添加区で１４１．５７％、４．０５ｍｇ／ｍｌ添加区で２５５．２２％；サケ白子抽出物１１６μｇ／ｍｌ添加区で９５％、５８０μｇ／ｍｌ添加区で９５．４４％；ビール酵母抽出物２４μｇ／ｍｌ添加区で９５％、１２０μｇ／ｍｌ添加区で８１．６％；チキンコラーゲン４８μｇ／ｍｌ添加区で８７．６７％、２４０μｇ／ｍｌ添加区で１１６．７％を示した。以上のように、大麦若葉エキス、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、チキンコラーゲン成分を組み合わせて調製した試料が示すような顕著な脂肪分解促進作用は、各成分単独では認められないことが明らかとなり、大麦若葉エキス、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、チキンコラーゲン成分の組み合わせることにより顕著な相乗効果が認められることが示された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
（４）細胞生存率の測定
　さらに、上清を回収した後の細胞生存率を、Cell counting Kit-8（Dojindo社製）を用いて測定した。図２に結果を示すように、混合物及び各成分の添加区において生存率には差が認められないことを確認した。
（１）試料及び各成分のペプシン及びトリプシン分解物の調製
　０．１Ｍ　ＨＣｌ・ＫＣｌ（ｐＨ２．５）を用いて、表１に示す混合物及び各成分の１０％溶液を調製し、ペプシンを加えて、３７℃で２．５時間酵素処理した。処理後、沸騰水浴中９０℃で１０分間加熱し、ペプシンを失活させた。この処理液を、０．１Ｍ　リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を用いて５倍希釈し、さらに、トリプシンを加えて、３７℃で２４時間酵素処理した。処理後、沸騰水浴中９０℃で１０分間加熱し、トリプシンを失活させた。この処理液を遠心し、上清を凍結乾燥し、以下の実験に用いた。
（２）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性の測定
　ＡＣＥ阻害活性の測定はＬｉｅｂｅｒｍａｎ測定法の変法に基づいて行った。上記のようにして酵素処理した凍結乾燥試料を酵素処理前の濃度と同様に表１に記載の濃度となるように調製した。この調製液（３０μＬ）に、４００ｍＭ ＮａＣｌを含むホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）で５ｍＭに希釈したＨｉｐ－Ｈｉｓ－Ｌｅｕ基質溶液（２５０μｌ）を添加し、３７℃の恒温水槽中で５分間保温した。６００ｍｕ／ｍｌ（６ｍＵ）のＡＣＥ溶液（１００μｌ）を添加し、直ちに撹拌した後、３７℃で６０分間反応を行った。１Ｎ塩酸（２５０μｌ）を添加し、撹拌して反応を停止させた後、酢酸エチル（１．５ｍｌ）を添加し、十分に撹拌することにより馬尿酸を遊離させた。３，０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離後に上層の酢酸エチル層を１．０ｍｌ回収し、エバポレーターで乾固した。さらに減圧デシケーター内で６０分間乾燥させた後、超純水を３ｍｌ添加し、その溶液の吸光値（２２８ｎｍ）を測定した。なお、阻害活性は以下の式により阻害率（％）として算出した。
阻害率（％）＝｛（ＥＣ－ＥＳ)／(ＥＣ－ＥＢ）}×１００
　ここでのＥＳは、試料溶液を添加したときの吸光値、ＥＣは試料溶液の代わりに超純水を添加したときの吸光値、ＥＢはあらかじめ１Ｎ塩酸を添加して反応させたときの吸光値をそれぞれ示している。
（３）試験結果
　図３に結果に示すように、混合物１ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌの場合、対応する濃度の各組成物単独の場合に比べてＡＣＥ阻害活性が顕著に高いことが明らかとなり、相乗的な効果が認められた。
　一本あたり、大麦若葉エキス１６８７ｍｇ、サケ白子抽出物２４０ｍｇ、ビール酵母抽出物５０ｍｇ、チキンコラーゲン１００ｍｇ、難消化性デキストリン７２３ｍｇ、デキストリン５００ｍｇを配合した、スティックタイプのサプリメントを調製した。 

Claims (8)

  1. サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを含む組成物であって、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有することを特徴とする組成物。
  2. 大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０～１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８～３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７～６．２重量部を含むことを特徴とする、請求項１記載の組成物。
  3. サケ白子抽出物が、サケ白子を酵素処理することにより得られる、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含む抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２記載の組成物。
  4. ビール酵母抽出物が、ビール酵母を酵素処理することにより得られる、低分子化したＲＮＡ成分を含む抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２記載の組成物。
  5. 大麦若葉エキスが、３０％難消化性デキストリンを含むことを特徴とする請求項１又は２記載の組成物。
  6. 請求項１～５のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用脂肪分解促進剤。
  7. 請求項１～５のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤。
  8. 請求項１～５のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする飲食品。 
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