JPH04144696A - アンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野： 本発明は、天然物から調製でき、殊に血圧降下剤又は血
圧降丁用食品として有用であるアノギオテンンン変換酵
素阻害剤含有組成物の製造法に間引る。

従来の技術 アンキオテンノン変換酵素は、主として肺や血管内皮細
胞、腎近位尿細管に存在し、アノキオテンノノ１（Ａｓ
ｐ−へｒｇ−Ｙａｌ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ
　−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ　−Ｌｅｕ’）に作用して、アノキ
オテノンノ１のＣ末端よりノペプチト（Ｈｉｓ９−　Ｌ
ｅｕｌｏ）を開裂遊離させ、強力な背圧作用をａ才ろア
ノキオテノノノ・ｌを生成５せる酵素て力るっま几、ニ
ア）酵素は−Ｌ体内陣「］［物質であるブラノキニノを
分解し不活化する作用し併何し、昇圧系に強力に関すし
ている。

従来よζ）、７ノキオテンノン変換酵素の活性を阻害ｔ
ツーば、降■に働き、臨床的には高血圧症の予防、治療
に有効であると考えられてＬする。

最近ではフロリン誘導体てめるカプトプリルか合成され
、降圧活性か確認５７つて以来、種々のアノキオテノノ
ン変換酵素阻害物質の合成研究か盛んであり、又天然物
力＼らの取得も試みられているところである。

天然物由来のアノギオテンノン変換酵素阻害剤は食品あ
るいは食品原料から得られるので低毒性で安全性の高０
降圧剤となることか期待されるからである。

コ発明が解決しようとする課題 しかしながら、天然物中に見出されるアンギオテンシン
変換酵素阻害物質は極めてまれで、僅かにブラノル産や
日本産蛇毒より得られ１こテブロタイト（ノナペプチド
５Ｑ２０８８１）等や、ストレプトミセス属に属する放
線菌の代謝産物ｌ５８３　（特開昭５８−１７７９２０
号公報）か知られているに過ぎ一〇−まｆこ、天然物を
酵素処理して得らｆ−ｊニアンキオテンンノ変換酵素阻
害物質としては、牛乳カセインをトリプトツノにより分
解して得ｆニベプヂド類等が知られているか（特開昭５
８−１０９４２５号、同５９−４４３２３号、同５９−
４４３２４号、同６］−３６２２６号、同６１−３６２
２７号）新規な阻害物質の開発か望まれているところで
あるっ課題を解決するための手段 本発明者らは、かかる課題を解決ずへく天然物質て副作
用の少ないアンキオテンノン変換酵素阻害物質を鋭意探
索した結果、蛋白質、特にカツオ若しくはカツオ由来物
質、魚肉、豚肉、牛肉又は鶏肉をサーモライノンにより
加水分解しｆ二組成物中にアノキオテ／ツノ変換酵素阻
害活性を有するペプチド類が存在することを見出し本発
明を完成するに至った。

サーモライツノとはバチルス・サーモプロテオリティカ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｅｒｍｏｐｒｏｔｅｏｌｙ
ｔｉｃｕｓ）か産生ずるプロテアーゼの一種である。

本発明の活性をもつ組成物は上記のサーモライノンを用
いる場合に特に効果的に得られ、他の公知のプロテアー
ゼであるペブノン、トリプシン、キモトリプ／ン等で蛋
白を分解してし本発明の如き強力な作用をもつ組成物は
得らメー４ｆ；（＋。

蛋白質としては、動物由来や微生物由来のもの等が任意
に用いられるが、特に有用ならのはカツオ若しくはカツ
オ由来物質、イワノ等の魚肉、豚肉、牛肉、鶏肉類であ
る。

蛋白質をサーモライツノて加水分解するには、蛋白質の
性状により処決は異なるか、難溶性の場合には熱水に蛋
白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズした後、サーモ
ライツノを蛋白質溶解液に対して００５〜５重量％添加
し、温間ｌＯ〜６０°Ｃ，ＰＨ４〜８、反応時間１０分
〜ｌＯ時間、好ましくは１〜６時間の反応条件下て疎水
性アミ７）酸のペプチド結合か分解率５％以上になるま
て静置又は撹拌下、反応を続けて目的物を得る。

分解率は全窒素に灯するアミノ態窒素９％て表′４−ｏ
但し、　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ａｇｒｉｃｕｌｔ
ｕｒａｌ　　ａｎｄ　　Ｆｏｏｄ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　　２４Ｎｏ、６１０９０−１０９３　（１９７６）
に基ツ０て測定する。

かくして得られたアンギオテノン／交換酵素阻害剤含有
組成物は各種のペプチドの混合物であり、そのまま使用
してら良く、又後処理加工して用いてら良し）。

本発明で得られるペプチド類の投与経路としては、経口
投与、非経口投与、直腸内投与のいすイーでしよいが、
経口投与か好ましい。本発明のペプチド類の投与量は、
化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等により異
なるか、通常１回０．００１〜Ｉ　Ｏ００ｍ９、好まし
くは０．０１〜１０ｍ９を１日当几０１〜３回である。

本発明のペプチド類は通常、製剤用担体と混合して凋製
乙ｆ二製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチド類と反
応しない物質か用いられる。具体的には、例えば乳糖、
ブドウ糖、マンニット、デキストリン、ノクロデキスト
リン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミノ酸マクネノ
ウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルホキノメチルセル
ロースナトリｒ’ｌム、ヒトロキノブロビルデノプン、
カルホキノメチルセルロースカルノウム、イオン交換樹
脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒド
ロキンプロピルセルロース、ヒドロキノプロピルメチル
セルロース、ポリヒニルピロリトン、ポリヒニルアルコ
ール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マクネノウム、タ
ルク、トラカット、ベントナイト、ビーカム、酸化チタ
ン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウ
ム、クリセリン、脂肪酸クリセリンエステル、精製ラノ
リン、クリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴー
ル、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フ
ルオロカーホン、非イオン界面活性剤、プロピレンクリ
コール、水等が挙げらｆ−る。剤型としては、錠剤、カ
プセル剤、顆粒剤、散剤、ノロノブ剤、ｐｆ！Ａ剤、注
射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製
される。尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適
当な媒体に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠
剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注
射剤の場合には、本発明のペプチド類を水に溶解させて
調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ
糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加
してもよい。

これらの製剤は、本発明のペプチド類を０．０１％以上
、好ましくは０５〜７０％の割合で含有ずろことかでき
る。これらの製剤はまた、治療上価値ある他の成分を含
有していてもよＬｌ。

１作　　用］ 本発明は天然物から調製でき、殊に血圧降下剤又は血圧
降下食品として有用てあろアノキオテノノン変換酵素阻
害剤含佇組成物か製造できる。

二実施例］ 以下、本発明を実施例を挙ニアて更に詳しく説明する。

実施例１、比較例１〜４ カツオ節５９に水４０ｍｌを加え充分ホモジナイズし、
第１表に示すプロテアーゼを作用させ１こ後、１００℃
で１０分間煮沸後放置して得ｆ二上澄液のアシキオテノ
ノン変換酵素阻害活性を測定し１こ。

（プロテアーゼの作用条件） サーモラインン、トリプノン、キモトリプンンを作用さ
せる場合は反応液を水酸化ナトリウムでＰ　Ｈ７、０と
し、又ペブノンを作用させる場合は塩酸でＰＨ１，６と
して、反応温間３７℃で５時間静置反応を行つに。

酵素量はカツオ節液に対して全てＩ／１００重量部添加
した。

（アンギオテンノン変換酵素阻害活性の測定）アンギオ
テンノン変換酵素阻害活性の測定は、ＣｈｅｕｎｇとＣ
ｕｓｈｍａｎの方法ＪＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａ
ｒａｍａｃｏｌｏｇｙ　２０１６３７（１９７ｎ：に準
して以下の方法で行つｆコ。

酵素基質；Ｂｚ（ヘンノル）　−Ｇｌｙ　−Ｈｉｓ　−
Ｌｅｕ（８６ｍ＠を水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶
解しに溶液） 酵　素、うさぎの肺のアセトン７くウダー（ノクマ社製
）（Ｉｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍ１中で粉砕し
た後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μＣ１酵素溶液を１２μｅ及び
本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を２５
０μ夕としＬ後、３７℃で３０分間反応を行った。

反応はｌＮ−ＨＣｌ　　２５０μｇを用いて終了させ几
。

反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れ〜７　ｏｒｔ
ｅｘて１５秒撹拌し、それを遠心分離した。

酢酸エチル層から１．ｏｍｌをとり出して、酢酸エチル
を留去し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し
、抽出されｆコ馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ
　、、８）を測定した。

阻害率は阻害剤なして反応したときの０Ｄ−＝ａを１０
０％とし、反応時間０分のときのＯＤ　、２．を０％と
して求め阻害率５０％の時の阻害剤（本発明のペプチド
）の濃度Ｉ　Ｃ５ｏ　（ｍｈ／　ｍＱ）で活性を表示し
ｒニ。

結果を第１表に示す。

第１表 実施例２、比較例５〜８ 実施例１においてカツオ節をいわし４０９に変えた以外
は同側に準じて実験を行った。

結果を第２表に示す。

第　　２　　表 実施例３、比較例９〜１２ 実施例１においてカツオ節を豚肉４ 外は同側に準して実験を行った。

結果を第３表に示す。

５９に変更しに以 第 表 実施例４、比較例１３〜１６ 実施例Ｉにおいてカツオ節を牛肉５ 外は同例に準して実験を行っ几。

結果を第４表に示す。

０９に変更しに以 第 表 実施例５、比較例１７〜２０ 実施例１においてカツオ節を鶏肉５ 外は同例に準して実験を行った。

結果を第５表に示す。

０９に変更しｆ二以 第 表 ５効 果ｊ 本発明は、 天然物から調製でき、 殊に血圧降下剤又は 血圧降下食品として有用であるアンキオテンンン変換酵
素阻害剤含有組成物か製造できる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、蛋白質をサーモライシンで加水分解することを特徴
   とするアンギオテンシン交換酵素阻害剤含有組成物の製
   造方法 ２、蛋白質としてカツオ又はカツオ由来物質を使用する
   請求項１記載の製造方法 ３、蛋白質として魚肉を使用する請求項１記載の製造方
   法 ４、蛋白質として豚肉又は牛肉又は鶏肉を使用する請求
   項１記載の製造方法