KR20110087416A - 꽁치 가수분해물을 포함하는 고혈압 예방 또는 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다. 상기 꽁치 가수분해물은 안지오텐신 전환효소의 저해활성을 통하여 확인한 결과 항고혈압효과가 우수하고, 실험동물을 이용하여 확인한 결과에서도 혈압 저하능이 뛰어날 뿐만 아니라, 식용으로 사용되는 천연물로부터 수득한 것이므로 부작용 등이 문제되지 아니하여, 상기 꽁치 가수분해물은 심혈관계 질환 치료, 개선 또는 예방을 위한 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

Description

꽁치 가수분해물을 포함하는 고혈압 예방 또는 개선용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING OR IMPROVING HYPERTENSION CONTAINING HYDROLYSATES OF COLOLABIS SAIRA}

본 발명은 천연물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환에 대한 치료, 개선 또는 예방 효과기 있는 조성물에 관한 것이다.

급속한 경제발전과 더불어 질병양상도 크게 변하여 고혈압, 허혈성 심질환 및 뇌혈관질환 등 순환기계 질환의 중요성이 더욱 커지고 있다. 최근 통계청이 발표한 자료에 의하면, 2005년 총인구 중에서 65세 이상 노령인구의 비율은 9.1%를 차지하고 있고, 14세 이하 유년인구의 비중은 점차 줄어들고 있으며, 65세 이상 인구의 비중은 지난 2000년에 7.2%를 기록하여 우리 사회는 이미 고령화 사회로 진입한 것으로 평가된다. 또한, 2003년 기준으로 우리나라 국민의 평균수명은 77.5세로 노령인구가 급격하게 증가되고 있는 추세이다. 한편, 통계청이 발표한 우리나라 1인당 GNI는 2004년 14,162달러였으며, 매년 10% 이상 증가하고 있어 삶의 질은 점차 나아지고 있다고 할 수 있다.

이러한 사회적 조건의 변화에 의해, 과거 주요한 사망원인인 전염성 질병에 의한 사망자 수는 급격하게 줄어들고 있는 반면에 암, 고혈압, 뇌혈관질환, 당뇨병 등의 퇴행성 질환에 의한 사망자 수는 꾸준히 증가하고 있다.

고혈압은 만성 순환기계 질환 중 발생빈도가 가장 높은 질환으로 비교적 증상이 없는 편이지만 뇌졸증, 심부전, 관상동맥질환 등 치명적인 합병증을 유발할 수 있기 때문에 보다 적극적인 관리와 치료가 요구된다. 특히, 본태성 고혈압은 고혈압의 80%에 해당하며 유전적 인자와 환경적 인자의 복합적인 산물로서 고혈압의 가족력, 인종, 염분의 섭취량, 인슐린의 저항성, 비만 그리고 과도한 음주 및 노화 등이 관여하는 것으로 생각되고 있다. 혈압 상승의 중요한 기전인 레닌-안지오텐신계(Renin-Angiotensin System, RAS)의 일반적인 생리활성은 다음과 같다. 우선, 신장에서 혈류량, 나트륨의 감소, 교감신경계의 활성증가에 의해 레닌-안지오텐신계가 활성화되고, 신장동맥의 방사구체세포(juxtaglomerular cell)에서 분비된 레닌이 안지오텐신을 안지오텐신 Ⅰ으로 분해시키며, 이는 다시 안지오텐신 전환효소(angiotensin converting enzyme, ACE)에 의해 안지오텐신 Ⅱ로 전환된다. 상기 안지오텐신 Ⅱ가 결과적으로 신경조절과 알도스테론 합성 증가를 통하여 혈압을 조절한다.

따라서, 안지오텐신 전환효소의 저해물질 또는 안지오텐신 전환효소 저해제(ACE inhibitor)는 고혈압, 심장병, 동맥경화 또는 뇌출혈 등의 심혈관계 질환이나 신장병 등을 치료 또는 예방할 수 있는 것으로 보고되고 있으며, 이에 대한 많은 연구가 진행되고 있다. 구체적으로, 만성신장병, 동맥경화, 심장발작과 그로 인한 사망 등을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 확인하여 주는 여러 임상연구 및 임상실험의 결과가 보고되고 있다.

현재 이러한 결과에 기초하여, 라미프릴(ramipril), 캅토프릴(captopril), 에날라프릴(enarapil), 리시노프릴(risinopril), 포시노프릴(fosinoril)이나 스피라프릴(spirapril) 등과 같은 화학적으로 합성된 많은 안지오텐신 전환효소 저해제가 고혈압 치료제로 사용되고 있다. 그러나 이러한 화합물들은 약학적 투여 형태에서 쉽게 분해되어 즉, 안정성이 떨어질 뿐만 아니라 다른 세포에도 작용하여 전신에 힘이 빠지거나, 백혈구 감소, 혈관 부종, 간기능 이상, 구토, 마른 기침, 두통, 식욕부진, 및 미각이상을 일으키는 등 부작용과 관련된 문제가 있는 것으로 보고되고 있다.

이러한 문제점을 해결하기 위하여, 부작용이 문제되지 아니하고 안전성이 확보되는 천연물질 유래 안지오텐신 전환효소 저해제의 개발이 시급히 요구되고 있다. 특히, 식품으로 사용되는 천연물 유래의 안지오텐신 전환효소 저해제의 경우, 안전성 확보가 용이하므로, 이에 대한 연구의 필요성이 증가되고 있다.

상기와 같은 요구에 부응하기 위하여, 본 발명은 안지오텐신 전환효소를 효과적으로 저해하고, 혈압 강하능이 있어, 심혈관계 질환의 치료, 예방 또는 개선에 유용하고 식용으로 사용될 수 있는 천연물에서 비롯하여 부작용 등이 문제되지 아니하고, 안전성이 우수한 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 안지오텐신 전환효소를 효과적으로 저해하고, 동물 실험에 의하여 확인한 결과 혈압 강하능이 우수할 뿐만 아니라 천연물에서 비롯하여 부작용 등이 문제되지 아니하고, 안전성이 우수한 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 개선 또는 예방용 식품조성물을 제공한다.

본 발명자들은 식품으로 이용되는 천연물의 경우 부작용이나 내성 등과 관련된 안전성이 문제될 가능성이 기존 화학적으로 합성된 약물에 비하여 훨씬 적다는 점에 착안하여, 천연물 유래 조성물 특히, 식용으로 이용되는 동물의 가수분해물의 약리효과에 대해 연구하던 중, 꽁치 가수분해물이 안지오텐신 전환효소의 저해활성을 통하여 확인한 결과 항고혈압효과가 우수하고, 동물 실험을 통하여 확인한 결과 혈압 강하능도 우수하다는 것을 통하여, 이를 유효성분으로 포함하는 상기 조성물은 심혈관계 질환을 치료, 예방 또는 개선할 수 있다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명은 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 꽁치(pacific saury, Cololabis saira)는 동꽁치목 꽁치과의 바닷물고기로, 공어, 청갈지 또는 삼마라고도 불리운다. 한국의 동해와 남해 및 북태평양 해역에 분포하고, 주요 서식장소는 수심 0 m 내지 230 m 정도의 바다 속이다. 보통 근해에서 무리를 지어 생활하며, 일본의 남부 해역에서 겨울을 보내고, 봄과 여름 사이에 북쪽으로 이동하여 동해안 부근에서 알을 낳는 습성이 있다. 알에서 깨어나면 바다에 떠다니는 해조류에 붙어서 동물성 플랑크톤을 먹으며 자라고, 점차 몸집이 커지면 작은 갑각류나 다른 물고기의 알과 어린 새끼를 잡아먹으며 자라며, 최대 2년 정도 살 수 있는 것으로 보고되어 있다.

본 발명에서 가수분해물이란 단백질 분해 후 생산되는 물질로, 단백질가수분해산물이라고도 하고, 꽁치 가수분해물이란 꽁치 단백질이 단백질 가수분해효소에 의해 가수분해되어 생산되는 물질을 의미한다. 상기 단백질 가수분해효소는 단백질 분자 속의 펩티드 결합 등을 가수분해하여 단백질을 아미노산 또는 펩티드 혼합물로 만드는 화학반응을 수행하는 효소를 의미한다.

본 발명의 꽁치 가수분해물은 어류 가수분해물 제조를 위한 통상의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 바람직하게는 효소를 이용한 가수분해에 의해 제조된 것일 수 있다. 더욱 바람직하게는 본 발명의 꽁치 가수분해물은 머리, 내장 및 꼬리 부분을 제거한 꽁치에 증류수를 첨가하고 완전분쇄한 후에, 단백질 가수분해 효소를 첨가하여 반응시키고, 상기 반응이 끝나면 효소를 불활성화 시킨 후에 불용물을 제거하며, 상기 불용물을 제거한 가수분해액을 동결건조하여 수득할 수 있다.

이 때, 상기 증류수는 꽁치 1kg에 500ml에서 2,000ml, 더욱 바람직하게는 700ml에서 1,500ml를 첨가할 수 있고, 상기 꽁치의 분쇄과정은 통상의 분쇄기를 사용하여 수행할 수 있으며, 예를 들어 가정용 믹서기를 이용하여 3분간 2회 믹서하여 수행할 수 있고, 상기 단백질 가수분해 효소는 바람직하게는 알카라제, 프레보라임, 프로텍스, 파라타제 및 뉴트라제로 이루어진 군중에서 선택된 하나 이상의 단백질 가수분해 효소, 더욱 바람직하게는 알카라제 효소일 수 있으며, 상기 알카라제 효소는 상기 분쇄하기 전 꽁치 1kg 당 바람직하게는 0.1g 내지 2g, 더욱 바람직하게는 0.5g 내지 1.5g을 첨가할 수 있다.

상기 효소 반응은 효소의 종류에 따라 적절하게 수행되어 질 수 있으며, 바람직하게는 50℃ 내지 70℃ 더욱 바람직하게는 57℃ 내지 63℃의 교반 배양기(shaking incubator)에서 30분 내지 24시간, 바람직하게는 1시간 내지 12시간, 더욱 바람직하게는 1시간 30분 내지 3시간을 반응시킬 수 있고, 상기 반응 pH는 pH 6 내지 pH 10, 바람직하게는 pH 6.5 내지 pH 8.5, 더욱 바람직하게는 pH 6.7 내지 pH 7.5일 수 있다.

상기 효소의 불활성화는 효소의 종류에 따라 적절하게 선택된 통상의 방법으로 수행되어 질 수 있고, 80℃ 내지 95℃, 바람직하게는 82℃ 내지 90℃, 더욱 바람직하게는 84℃ 내지 87℃에서 3분 내지 25분, 바람직하게는 7분 내지 15분, 더욱 바람직하게는 8분 내지 12분간 가열처리하여 수행할 수 있다.

상기 수득한 꽁치 가수분해물은 급속 냉동 냉장고(deep freezer)를 이용하여 보관할 수 있다. 또한, 상기 꽁치 가수분해물은 수득된 가수분해물을 농축 및 동결건조를 통하여 수분이 완전히 제거된 것일 수 있다.

상기 꽁치 가수분해물은 가수분해 반응을 수행하기 전에 꽁치 분쇄과정을 수행한 꽁치 분쇄물에 기름층을 제거하는 과정을 추가로 수행한 후, 가수분해반응을 진행하는 방법으로 제조할 수 있다.

상기 기름층의 제거는 상기 꽁치 분쇄과정을 수행한 꽁치 분쇄물에 NaOH를 첨가하여 pH를 pH 9 내지 pH 12, 바람직하게는 pH 10 내지 pH 11.5로 조정하여, 7000rpm 내지 9000rpm, 바람직하게는 7500rpm 내지 8500rpm, 더욱 바람직하게는 7800rpm 내지 8300rpm으로 원심분리한 후, HCl을 첨가하여 pH를 pH 4 내지 pH 7, 바람직하게는 pH 5 내지 pH 6로 조정하여, 7000rpm 내지 9000rpm, 바람직하게는 7500rpm 내지 8500rpm, 더욱 바람직하게는 7800rpm 내지 8300rpm으로 원심분리하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 기름층을 제거한 꽁치 분쇄물의 pH를 pH 6.5 내지 pH 8.5, 더욱 바람직하게는 pH 6.7 내지 pH 7.5로 조절한 후, 상기와 같은 방법으로 가수분해반응을 수행할 수 있다.

상기 꽁치 가수분해물은 바람직하게는 꽁치 가수분해물의 분획물, 더욱 바람직하게는 상기 꽁치 가수분해물에 대해 중압액체크로마토그래피(Middle Pressure Liquid Chromatography, MPLC)를 수행하여 수득한 것일 수 있다. 상기 중앙액체크로마토그래피는 물과 에탄올 혼합 용매를 이용한 것일 수 있고, 상기 혼합용매는 에탄올의 농도가 30% 내지 70%, 바람직하게는 30% 내지 40% 또는 60% 내지 70%, 더욱 바람직하게는 60% 내지 70%인 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 중압액체크로마토그래피는 C18 컬럼(C18 column)을 이용하여 수행하는 것일 수 있다.

상기 꽁치 가부분해물의 분획물은 상기 중압액체크로마토그래피를 수행하여 수득한 분획물은 사용 시까지 급속 냉동고(deep freezer)에 보관할 수 있다. 또한, 상기 꽁치 가수분해물의 분획물은 상기 수득한 분획물에 포함되어 있는 분출용매를 농축 및 동결건조를 통하여 완전히 제거시킨 것일 수 있으며, 상기 용매를 완전히 제거시킨 분획물은 분말형태로 사용하거나 상기 분획물을 상기 분획물 제조에 사용된 분획용매, 증류수 또는 통상의 용매에 녹여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 꽁치 가수분해물 또는 꽁치 가수분해물의 분획물은 안지오텐신 전환효소의 저해능이 우수하고, 동물실험을 통하여 확인한 결과 혈압강하능이 뛰어날 뿐만 아니라, 식용으로 사용될 수 있는 천연물을 이용하여 제조한 것이므로 부작용 등이 문제되지 아니하고, 안전성이 우수하므로, 상기 꽁치 가수분해물 또는 상기 꽁치 가수분해물의 분획물은 심혈관계 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학적 조성물의 유효성분 또는 심혈관계 질환의 개선 또는 예방을 위한 식품 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

본 발명에서 있어서, 심혈관계 질환이란 심장질환과 혈관질환을 포함한 질환으로, 고혈압, 고혈압성 심장질환, 심장병, 부정맥, 뇌졸중, 혈전증, 협심증, 심부전, 심근경색, 죽상경화증 및 동맥경화로 이루어진 군중에서 선택된 어느 하나일 수 있으며, 바람직하게는 고혈압 또는 고혈압성 심장질환일 수 있다.

보고된 자료에 의하면, 안지오텐신Ⅱ는 부신, 혈관평활근세포, 신장, 심장 등에 존재하는 4종의 AT 수용체(AT receptor)에 작용하며, 이들은 혈관수축, 알도스테론(aldosterone)과 바스포레신(vasopressin) 방출, 세뇨관의 나트륨 흡수, 신장으로의 혈류량 감소 등을 유발함으로써 심혈관, 신장 및 중추신경 부위에 여러 가지 병변을 가져올 수 있으므로, 안지오텐신 전환효소의 저해물질 또는 안지오텐신 전환효소 저해제(ACE inhibitor)는 고혈압, 심장병, 동맥경화 또는 뇌출혈 등의 심혈관계 질환을 치료, 개선 또는 예방할 수 있다.

본 발명에서 혈압이란 혈액이 혈관 벽에 가하는 힘을 말한다. 혈압을 읽을 때에는 수축기 혈압(최고혈압)과 확장기 혈압(최저혈압)으로 나누어서 읽는다. 수축기 혈압은 심장이 수축하면서 혈액을 내보낼 때 혈관에 가해지는 압력이고, 확장기 혈압은 심장이 확장(이완)하면서 혈액을 받아들일 때 혈관이 받는 압력이다.

상기 고혈압이란 18세 이상의 성인에서 수축기 혈압이 140mmHg 이상이거나 확장기 혈압이 90mmHg이상인 질환으로, 원인이 발견되지 않는 경우를 본태성(일차성) 고혈압과 원인이 밝혀져 있고 이에 의해 고혈압이 발생하는 경우으로 구분되며, 전체 고혈압 환자의 약 95%는 본태성 고혈압이다. 상기 고혈압에 의해 유발되는 질병으로는 고혈압심장병(hypertensive heart disease) 등이 있다.

상기 동맥경화는 동맥의 벽이 두꺼워져 동맥의 탄력이 저하되는 질환을 의미한다. 상기 동맥경화가 발병되면 경화된 동맥으로부터 혈액을 공급받던 장기에 대한 혈액 공급이 감소하게 되어, 추가적인 질병이 발병될 수 있다. 이와 관련된 대표적인 질병의 예는 심장의 근육에 혈액을 공급하는 심장동맥에 동맥경화의 변화가 오는 심장동맥병 등이 있다.

상기 꽁치 가수분해물 또는 상기 꽁치 가수분해물의 분획물은 안지오텐신 전환효소를 저해할 수 있고, 혈압강하능이 있으므로, 심혈관계 질환의 치료, 예방 또는 개선용 조성물로 사용될 수 있고, 상기 심혈관계 질환 치료, 예방 또는 개선 기능과 관련하여, 상기 꽁치 가수분해물의 분획물은 바람직하게는 에탄올 및 물의 혼합용매를 이용하여 중압액체크로마토그래피를 수행하고, 상기 혼합용매는 에탄올의 농도가 30% 내지 70%, 바람직하게는 30% 내지 40% 또는 60% 내지 70%, 더욱 바람직하게는 60% 내지 70%인 조건에서 수득한 분획물일 수 있다.

상기 심혈관계 질환이란 심장질환과 혈관질환을 포함한 질환으로, 고혈압, 고혈압성 심장질환, 심장병, 부정맥, 뇌졸중, 혈전증, 협심증, 심부전, 심근경색, 죽상경화증 및 동맥경화로 이루어진 군중에서 선택된 어느 하나일 수 있으며, 바람직하게는 고혈압 또는 고혈압성 심장질환일 수 있다.

상기 고혈압은 혈관관련 질병으로, 주로 동맥의 혈압이 높은 동맥성 고혈압일 수 있다. 상기 고혈압은 동맥경화나 고혈압심장병(hypertensive heart disease) 등을 유발할 수 있다.

또한, 안지오텐신 전환효소는 혈관과 신장의 근위세뇨관, 내피, 심장, 폐, 활성화된 대식세포, 뇌조직 등에서 발견되는 디카르복실 펩타이드(dicarboxyl peptides)의 하나로, 혈관수축, 알도스테론(aldosterone)과 바소프레신(vasopressin) 방출, 세뇨관의 나트륨 흡수 및 신장으로의 혈류량 감소 등을 유발함으로써 심혈관, 신장 및 중추신경 부위에 여러 가지 병변을 가져올 수 있는 것으로 보고되고 있다. 따라서, 상기 안지오텐신 전환효소의 저해물질 또는 안지오텐신 전환효소 저해제(ACE inhibitor)는 고혈압, 심장병, 동맥경화 또는 뇌출혈 등의 심혈관계 질환이나 신장병 등을 치료 또는 예방할 수 있는 것으로 보고되고 있으며, 구체적으로 임상연구 및 임상실험 결과에 의하면, 안지오텐신 전환효소 저해제는 고혈압, 만성신장병, 동맥경화, 심장발작과 그로 인한 사망 등을 효과적으로 감소시킬 수 있는 것으로 보고되고 있다.

상기 꽁치 가수분해물은 안지오텐신 전환효소를 유효하게 저해하고, 동물 실험을 통하여 확인한 결과 혈압강하능이 있으므로, 고혈압 및 심장병, 동맥경화 또는 뇌출혈 등의 심혈관계 질환에 치료, 예방 또는 개선 효과가 있다.

상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화나 배성 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다.

본 발명의 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 질병의 치료 또는 예방용 조성물은 꽁치 가수분해물을 단독으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물에 유효성분인 꽁치 가수분해물 외에 다른 성분이 첨가된 혼합물로 제공되는 경우, 상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물 총 중량에 대하여 상기 꽁치 가수분해물을 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 99 중량 %, 더욱 바람직하게는 1 중량% 내지 50 중량% 포함할 수 있다.

상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 질병의 치료 또는 예방용 조성물이 약제로 사용하는 경우 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일 예로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.

또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 방법을 채택하여 제형화될 수 있다.

일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 리모나데제(LIMONADES), 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

또한, 비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 안연고제, 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 리니멘트제(LINIMENTS), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있다.

더 나아가, 본 발명의 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.

상기 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아키시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다.

또한, 상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용 할 수 있으나, 바람직하기로는 경구 투여용으로 할 수 있다. 구체적으로 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럼제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일예로, 본 발명의 상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물은 1일 유효성분의 함량 즉, 상기 꽁치 가수분해물의 함량을 기준으로 0.0001 mg/kg(체중) 내지 1000 mg/kg(체중)으로, 보다 효과적이기 위해서는 0.01 mg/kg(체중) 내지 100 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 치료 또는 예방용 조성물은, 꽁치 가수분해물 이외에 공지의 항고혈압효과를 갖는 화합물, 가수분해물 또는 펩타이드를 더욱 포함할 수 있으며, 꽁치 가수분해물 100 중량부에 대하여 각각 5 중량부 내지 20 중량부로 포함될 수 있다.

또한, 본 발명은 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 개선 또는 예방용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 식품 조성물의 예로는 식품, 식품첨가제, 음료 또는 음료첨가제를 들 수 있다.

상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 개선 또는 예방용 식품 조성물은 그 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 명세서에서 식품이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이다.

본 발명의 식품 조성물의 유효성분인 상기 꽁치 가수분해물이 포함될 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류, 아이스크림류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등), 비타민 복합제, 알코올 음료, 주류 및 그 밖의 건강보조식품류를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

본 발명에서 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능, 보다 구체적으로 항고혈압기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 5 내지 12g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기 첨가제는 본 발명의 유효성분인 꽁치 가수분해물 100 중량부 당 0 내지 20 중량부, 바람직하게는 0.00001 내지 15 중량부 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서 기능성 음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.

상기 기능성음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 유효성분인 상기 꽁치 가수분해물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 중량부 내지 20 중량부, 바람직하게는 1 중량부 내지 18 중량부, 더욱 바람직하게는 5 중량부 내지 12 중량부 포함될 수 있다.

또한, 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 질병의 개선 또는 예방용 식품 조성물에 있어서, 상기 꽁치 가수분해물의 양은 전체 식품 중량의 0.00001 중량% 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 음료 조성물의 경우 식품 전체의 부피 100 ml 를 기준으로 0.001 g 내지 50 g, 바람직하게는 0.01 g 내지 10 g의 비율로 포함될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 안지오텐신 전환효소를 저해할 수 있어 고혈압을 포함한 심혈관계질환의 치료, 개선 또는 예방에 도움이 되고, 특히 동물 실험을 통하여 확인한 결과 혈압강하능이 우수하여 고혈압에 대한 치료, 개선 또는 예방 효과가 인정되며, 식용으로 사용되는 천연물로부터 제조된 것이므로 안전성에 문제가 없어, 심혈관계 질환을 갖는 환자 또는 상기 질병의 위험성이 있는 환자에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다.

또한, 본 발명은 심혈관계 질환 개선 또는 예방효과가 있는 꽁치 가수분해물의 분획물 제조방법을 제공한다.

상기 심혈관계 질환 개선 또는 예방효과가 있는 꽁치 가수분해물의 분획물 제조방법은 꽁치와 증류수를 혼합한 후, 분쇄기를 통하여 분쇄하는 꽁치 분쇄액 제조 단계; 상기 제조된 꽁치 분쇄액에 상기 꽁치 1kg을 기준으로 알카라제 0.5g 내지 1.5g을 첨가하고, 57℃ 내지 63℃ 및 pH 6.7 내지 pH 7.5에서 1시간 30분 내지 3시간을 반응시켜 꽁치 가수분해액을 제조하는 단계; 상기 꽁치 가수분해액을 84℃ 내지 87℃에서 7분 내지 15분 동안 처리하여 효소를 불활성화시키는 단계; 상기효소를 불확성화 시킨 꽁치 가수분해액을 7500rpm 내지 8500rpm으로 원심분리한 후, 여과하여 동결건조하여 꽁치가수분물을 수득하는 단계; 상기 수득된 꽁치가수분해물을 중압액체크로마토그래피(MPLC)하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.

상기 제조방법에서 상기 꽁치 분쇄액 제조단계 및 상기 꽁치 가수분해액을 제조하는 단계 사이에 추가로 꽁치 분쇄액에서 기름층을 제거하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 기름층을 제거하는 단계는 상기 꽁치 분쇄과정을 수행한 꽁치 분쇄물에 NaOH를 첨가하여 pH를 pH 9 내지 pH 12, 바람직하게는 pH 10 내지 pH 11.5로 조정하여, 7000rpm 내지 9000rpm, 바람직하게는 7500rpm 내지 8500rpm, 더욱 바람직하게는 7800rpm 내지 8300rpm으로 원심분리한 후, HCl을 첨가하여 pH를 pH 4 내지 pH 7, 바람직하게는 pH 5 내지 pH 6로 조정하여, 7000rpm 내지 9000rpm, 바람직하게는 7500rpm 내지 8500rpm, 더욱 바람직하게는 7800rpm 내지 8300rpm으로 원심분리하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 기름층을 제거한 꽁치 분쇄물의 pH를 pH 6.5 내지 pH 8.5, 더욱 바람직하게는 pH 6.7 내지 pH 7.5로 조절한 후, 상기와 같은 방법으로 가수분해반응을 수행할 수 있다.

상기 수득된 꽁치가수분해물을 중압액체크로마토그래피(MPLC)하는 단계는 용출용매로 에탄올 및 물 혼합용매를 사용하여 농도구배에 따라 에탄올의 농도를 조절하면서 특정 분획을 중압액체크로마토그래피로 분리하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 중압액체크로마토그래피를 이용한 분획은 농도구배에 따라 상기 혼합용매의 에탄올 농도구간을 전체 10개의 구간으로 구분하여 분리하는 방법으로 수행할 수 있으며, 상기 혼합용매의 에탄올의 농도가 30% 내지 70%, 바람직하게는 30% 내지 40% 또는 60% 내지 70%, 더욱 바람직하게는 60% 내지 70%일 수 있다.

상기 방법에 의하여 제조된 꽁치 가수분해물의 분획물은 다른 분획물에 비하여 안지오텐신 전환효소 저해능이 우수하여, 심혈관계 질환을 갖는 환자 또는 이러한 위험성이 있는 경우에 유용하게 사용될 수 있다는 장점이 있다.

본 발명의 꽁치 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 안지오텐신 전환효소를 저해할 수 있어 고혈압을 포함한 심혈관질환의 치료, 예방 또는 개선에 유효하고, 동물실험을 통하여 확인한 결과 혈압강하능이 뛰어날 뿐만 아니라, 인공 화합물질이 주를 이루는 기존의 고혈압 치료제와 달리 천연물질에서 유래된 물질을 유효성분으로 하는 것으로 부작용의 문제가 발생되지 아니하여 심혈관계 질환의 질병을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 식품 또는 의료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있으므로, 본 발명의 조성물은 기존의 화학적으로 제조된 심혈관계 질환 특히, 고혈압에 대한 치료 또는 개선용 물질을 대체할 수 있다는 점에서 관련 산업에 폭 넓게 이용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 꽁치 가수분해물의 혈압강하능을 실험동물을 이용하여 측정한 것으로, Normal은 정상 실험동물인 WKY 마우스를 나타낸 것이고, Control은 혈압 실험동물 모델인 SHR 마우스를 나타낸 것이며, PSH-20은 본 발명의 꽁치 가수분해물을 SHR 마우스의 체중 kg당 20 mg 투여한 실험군을 나타낸 것이고, PSH-50은 본 발명의 꽁치 가수분해물을 SHR 마우스의 체중 kg당 50 mg 투여한 실험군을 나타낸 것이며, JPP-40은 혈압 저하능을 가진 것으로 확인되어 시판 중인 정어리 펩타이드를 40 mg 투여한 실험군을 나타낸 것이고, 상기 그래프의 가로축은 시간을 나타낸 것으로, 실험 시작 후 경과된 주수를 의미하며, 상기 그래프의 세로축은 실험동물의 평균치 혈압(mmHg)을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 꽁치 가수분해물에 대해 중압액체크로마토그래피를 수행한 분획물 각각의 안지오텐신 전환효소 저해능을 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위하여 제조예 및 실시예를 제시한다. 그러나, 하기 제조예 및 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 예시한 것을 뿐, 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 예들에 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 꽁치 가수분해물의 제조

신선한 상태로 춘천시 동부시장에서 구입한 꽁치를 머리, 내장 및 꼬리 부분을 제거한 후, 꽁치 1kg에 1,000ml의 증류수를 넣고 가정용 믹서기를 이용하여 3분간 2회 믹서하여 완전분쇄를 한 다음, 알카라제 효소(Alcalase enzyme, 2%, Novo Nordisk, Denmark) 1g을 첨가하여 60℃의 교반 배양기(shaking incubator)에서 반응을 시켰다. 상기 반응은 pH 조건을 pH 7 및 pH 9로 각각 구분하였고, 반응시간은 2시간 및 24시간으로 각각 구분하였다(I; pH 7 조건에서 2시간, II; pH 7 조건에서 24시간, III; pH 9 조건에서 2시간 및 IV; pH 9 조건에서 24시간).

상기 각각의 반응조건에 따라 반응시켜 수득한 분해액을 85℃에서 10분간 가열시켜 효소를 불활성화 시키고, 8000rpm으로 원심분리한 후, 여과과정을 통해 뼈 등의 불용물을 제거하고, 여과물을 동결건조하여 가수분해물을 수득하였다.

한편, 상기 꽁치를 완전분쇄한 후, 알카라제 효소를 첨가하기 전에 2N NaOH를 첨가하여 pH를 pH 11로 조정한 후, 8,000rpm으로 20분간 원심분리한 후, 상등액에 2N HCl을 첨가하여 pH를 pH 5.5FH 조정하고 다시 원심분리하여 기름을 제거한 후, 중성 pH로 조절하여 원심분리 후, 여과함으로써 꽁치 단백질만을 수득하고, 상기 수득한 꽁치 단백질에 상기와 같은 방법으로 알카라제 효소를 반응시켜 가수분해물을 제조하였다(F-I; pH 7 조건에서 2시간, F-II; pH 7 조건에서 24시간, F-III; pH 9 조건에서 2시간 및 F-IV; pH 9 조건에서 24시간).

상기 상등액을 다시 90℃에서 20분간 가열처리한 다음, 8520rpm으로 원심분리하여 위의 기름층을 제거하고 나머지 물층을 동결건조하여 꽁치 가수분해물을 수득하였다. 상기 수득한 꽁치 가수분해물은 사용시까지 급속 냉동 냉장고(deep freezer)에 보관하였다.

실시예 2. 꽁치 가수분해물의 항고혈압 활성 확인

상기 실시예 1에서 제조된 꽁치 가수분해물의 항고혈압 활성은 안지오텐신 전환효소(ACE)에 대한 저해능으로 확인하였다. 상기 ACE에 대한 저해능(ACE 저해활성)의 측정은 Cushman 등의 방법에 따라 다음과 같은 방법으로 수행하였다.

0.3 M NaCl을 함유한 0.1 M sodium borate buffer(pH 8.3)에 rabbit lung acetone powder(Sigma, USA)를 1g/10ml(w/v)의 농도로 4℃에서 24시간 동안 추출한 후, 40분간 4℃, 4000×g로 원심분리하여 ACE 조효소액을 얻었다. ACE 저해활성은 1% 농도의 시료 50 μl에 0.1 M sodium borate buffer(pH 8.3) 100 μl와 ACE 조효소액 50 μl를 가한 다음 37℃에서 5분간 예비반응시킨 후, 0.3 M NaCl이 함유된 0.1 M sodium borate buffer(pH 8.3) 5 ml에 HHL(hippuryl histidyl leucine) 25 mg을 첨가하여 만든 기질 50 μl를 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시켰다. 상기 반응 후 1 N HCl 250 μl를 가하여 반응을 정지시키고, ethyl acetate 1.5 ml을 가해 15초간 교반한 후 5분간 4℃ 및 3000×g의 조건으로 원심분리하여 상등액 1 ml을 얻었다. 상기 상등액을 120℃에서 30분간 완전히 건조시킨 후, 다시 증류수 3 ml을 넣고, 228 nm에서 흡광도를 측정하여 ACE 저해활성을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 대조구로서는 추출물 대신 추출용매 50 μl를 넣어 실험하였으며, ACE 저해활성효과는 다음 계산식을 이용하여 계산하였다.

[계산식]

종류	I	II	III	IV	F-I	F-II	F-III	F-IV
저해활성(%)	78.09	59.53	58.72	52.76	78.08	64.82	69.44	60.38

상기 표 1은 24.39/ml 의 농도로 측정한 결과로, 상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 다른 조건에서 가수분해반응을 수행한 것에 비하여 pH 7 조건에서 2시간 반응한 가수분해물의 저해 활성이 약 78%로 현저하게 우수한 것으로 확인되었다. 즉, 약 50% 대의 안지오텐신 전환효소 저해능을 나타낸 다른 가수분해효소에 비하여 약 150%의 안지오텐신 전환효소 저해능이 있는 것으로 확인되었다. 또한, 전체적인 경향에서 pH 9 보다는 pH 7에서 더 우수한 저해능이 나타났고, 24시간 반응시킨 것에 비하여 2시간 반응시킨 경우에 저해능이 뛰어난 것으로 확인되었다. 또한, 기름층을 제거하는 과정을 수행하는 경우, 최적 조건인 pH 7 조건에서 2시간 반응하는 경우를 제외하고는 전반적으로 가수분해 활성이 약 20% 가량 증가하는 것으로 확인되었다.

상기 결과로부터 꽁치 가수분해물은 항고혈압능이 우수한 것으로 확인되었고, 특히 pH 7의 조건에서 2시간 반응시킨 가수분해물이 더 우수한 활성을 나타내었으며, 대부분의 경우 기름층을 제거하고 꽁치 단백질만을 분리하여 가수분해한 경우에서 항고혈압능이 개선되는 것으로 확인되었다.

실시예 3. 꽁치 가수분해물의 혈압강하효과 확인

3-1. 실험동물의 사육

실험동물은 체중 150 내지 180g의 6주령 된 수컷 본태성 고혈압 쥐(Spontaneously Hypertensive , SHR) 40마리와 양성대조군(Normal)으로 동일 주령의 수컷 WKY(Wistar Kyoto) 5마리를 중앙실험동물(대한민국)에서 공급받아 사용하였으며, 실험군당 10마리씩 배치하여 7주간 사육하였다.

사육실은 오전 7시부터 오후 7시까지 빛을 가하는 일정한 명암주기, 22 내지 25 ℃의 온도 및 45~65%의 상대습도의 조건하에서 1주일간 적응시켰다.

매일 식이한 SHR 마우스의 사료는 통상적인 펠렛 건조사료(메디코아펙스, 대한민국)를 사용하였고, 제조한 꽁치 가수분해물은 SHR 마우스의 체중 kg당 각각 20 mg 및 50 mg씩 음용수에 혼합하여 경구투여하였으며, 사료와 물은 자유로이 섭취하도록 하였다. 상기 양성대조군인 WKY의 경우 Normal로 표시하였고, 상기 SHR 그룹 중 아무런 시료를 투여하지 않은 군은 음성대조군(Control)로 표시하였으며, 꽁치 가부분해물을 20 mg 투여한 군을 PSH-20 및 50 mg 투여한 군을 PSH-50으로 표시하였고, 기존 혈압 저하능을 가진 것으로 확인된 정어리 펩타이드를 40 mg 투여한 군을 JPP-40으로 표시하였다.

일일 사료 섭취량은 이틀 간격으로 조사하여 7주간의 평균치를 식이섭취량(g/day)을 산출하였으며, 체중은 1주일에 한번 측정하여 7주간의 평균치를 체중 증가량(g/day)으로 나타내었고, 7주간의 식이섭취량에 대한 체중 증가량을 식이효율(FER, %)로 나타내었고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

	Normal	Control	PSH-20	PSH-50	JPP-40
체중증가량(g/day)	3.29	2.53	2.49	2.30	2.50
식이섭취량(g/day)	22.53	20.11	20.21	20.07	20.34
FER	0.15	0.13	0.12	0.11	0.12

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 식이섭취량은 정상군이 22.53 g/day로 가장 높게 나타났고, 나머지 group은 큰 차이를 보이지 않았으며, 체중 증가량도 정상군이 3.29 g/day로 가장 높은 증가량을 보였고, 나머지 group은 별 차이를 보이지 않는 것으로 나타났다. 또한, 식이효율도 마찬가지로 정상군이 0.15로 나머지 group보다 약간 높게 나타났으나 큰 차이를 보이지는 않았다.

따라서, 항고혈압 효능과 관련된 본 발명의 꽁치 가수분해물이나 공지된 항고혈압 펩타이드인 정어리 펩타이드의 투여는 실험동물을 통하여 확인한 결과 체중 증가량, 식이섭취량 및 식이효율은 큰 영향을 주지 않는 것으로 나타났으며, 이러한 사실로부터 본 발명의 꽁치 가수분해물의 투여에 따른 부작용이나 위험성은 없는 것으로 예상되었다.

3-2. 실험동물의 혈압측정

혈압 측정은 실험동물의 꼬리 동맥에서 수축기 혈압을 간접 혈압 측정기(LE 5002, Panlab, Spain)로 3번 반복하여 7주간 수축기 혈압을 측정하는 방법으로 수행하였다. 상기 혈압 측정의 오차범위를 줄이기 위해 실험동물은 혈압측정기의 플라스틱 고정 장치에 일주일 동안 매일 30분씩 적응시키는 방법으로 적응기간을 둔 후, 혈압측정을 시작하였다. 상기 혈압측정 결과는 도 1에 나타내었다.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, SHR의 수축기 혈압은 측정 시점에서 약 180 mmHg이었으며, 시료를 섭취하지 않은 SHR의 경우 수축기 혈압이 감소하지 않고 점점 증가하는 경향을 나타내었다. 한편, 본 발명의 꽁치 가수분해물을 20 및 50 mg/kg으로 음용수에 용해시켜 투여한 결과 투여 후 1주차 때부터 급격하게 수축기 혈압이 유의적(p<0.05)으로 감소하는 경향을 보였으며, 혈압이 가장 많이 감소된 4주차에는 꽁치 가수분해물 50 mg/kg을 투여한 군에서 유의적(p<0.01)으로 수축기 혈압이 약 40 mmHg가 감소된 결과를 나타내었고, 꽁치 가수분해물 20 mg/kg을 투여한 경우에도 약 30 mmHg가 감소되는 결과를 확인하였다. 또한, 항고혈압제로 판매되고 있는 정어리 펩타이드 제품을 40 mg/kg으로 투여한 결과 꽁치 가수분해물과 마찬가지로 유의적(p<0.05)으로 감소하는 경향을 보였다.

상기 결과에 따르면 기존 항고혈압제로 시판되고 있는 공지의 정어리 펩타이드 제품과 비교하여, 가수분해물의 형태인 본 발명의 꽁치 가수분해물이 대등한 항고혈압 효능을 나타내어, 꽁치 가수분해물의 혈압강하능이 매우 우수한 것으로 확인되었고, 7주 동안 지속적으로 혈압이 강하되어 꽁치 가수분해물의 혈압강하 지속효과도 안정적인 것으로 나타났다.

실시예 4. 꽁치 가수분해물의 분획물의 항고혈압 활성 확인

상기 실시예 1에서 제조된 꽁치 가수분해물 중, 가장 효과가 우수한 꽁치 가수분해물인 pH 7의 조건에서 2시간 동안 가수분해시킨 꽁치 가수분해물(I)에 대하여 중압액체크로마토그래피(Middle Pressure Liquid Chromatography: MPLC)를 이용하여 분획을 실시하였다. 보다 구체적으로, 상기 분획과정은 Biotage-MPLC((주)바이오멕, 대한민국) 및 C18 컬럼(C18 column, 30mm X 300mm)을 이용하고, 물 및 에탄올이 혼합된 혼합용매로 전개하여 수행하였다. 상기 분획과정에서 분획물은 농도구배에 따라 에탄올 용매의 농도 별로 총 10개의 구간으로 구분하여 수득하였고, 상기 10개의 구간은 상기 혼합용매에 포함된 에탄올 용매의 함량을 기준으로 A구간(Fr A, 에탄올 용매의 농도가 0 내지 3%), B구간(Fr B, 에탄올 용매의 농도가 3% 내지 5%), C구간(Fr C, 에탄올 용매의 농도가 5% 내지 7%), D구간(Fr D, 에탄올 용매의 농도가 7% 내지 10%), E구간(Fr E, 에탄올 용매의 농도가 10% 내지 20%), F구간(Fr F, 에탄올 용매의 농도가 20% 내지 30%), G구간(Fr G, 에탄올 용매의 농도가 30% 내지 40%), H구간(Fr H, 에탄올 용매의 농도가 40% 내지 50%), I구간(Fr I, 에탄올 용매의 농도가 50% 내지 60%) 및 J구간(Fr J, 에탄올 용매의 농도가 60% 내지 70%)으로 구분하였다.

상기 분획을 수행한 결과, 총 10종의 분획물을 수득하였으며, 상기 각각의 분획물에 대해 분획물의 농도를 2.44 /ml으로 조정하여 실시예 2의 방법으로 254nm의 파장에서 흡광도를 측정하여 ACE 억제 활성을 측정하였고, 그 결과를 도 2 및 하기 표 3에 기재하였다.

종류	Fr A	Fr B	Fr C	Fr D	Fr E	Fr F	Fr G	Fr H	Fr I	Fr J
저해능(%)	18.59	10.85	15.77	25.34	22.49	14.73	49.02	24.41	30.26	57.78

상기 도 2 및 표 3에 나타낸 바와 같이, 분획물 중 상기 에탄올의 농도가 60% 내지 70%인 조건에서 수득한 분획물인 Fr J가 57.78%로 가장 우수한 안지오텐신 저해능이 있는 것으로 확인되었다. 또한, 에탄올의 농도가 30% 내지 40%인 조건 조건에서 수득한 분획물인 Fr G의 경우에도 49.02%로 우수한 안지오텐신 저해능이 확인되었다. 다른 조건에서 수득한 분획물이 주로 10% 정도 또는 20% 정도의 저해능을 나타낸 것에 비하면, 에탄올의 농도가 60% 내지 70%인 조건에서 수득한 분획물인 Fr J은 다른 분획물 저해능의 약 500% 내지 200% 정도의 저해능이 있는 것으로 확인되어, 상기 분획물 Fr J에 안지오텐신 저해능이 현저하게 우수한 것으로 확인되었다.

Claims (5)

1. 꽁치(Cololabis saira) 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 치료 또는 예방용 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 꽁치 가수분해물은 꽁치에 알카라제를 pH 6.7 내지 pH 7.5의 조건에서 1시간 30분 내지 3시간 동안 반응시켜 제조한 것인 심혈관계 질환 치료 또는 예방용 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 꽁치 가수분해물은 상기 꽁치 가수분해물에 대해 에탄올 및 물의 혼합용매를 이용하여 중압액체크로마토그래피(Middle Pressure Liquid Chromatography, MPLC)를 수행하고, 상기 혼합용매의 에탄올의 농도는 30% 내지 40% 또는 60% 내지 70%인 조건에서 분리된 분획물인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환 치료 또는 예방용 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 심혈관계 질환은 고혈압 또는 고혈압성 심장질환인 심혈관계 질환 치료 또는 예방용 조성물.
5. 꽁치(Coloabis saira) 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 개선 또는 예방용 식품 조성물.

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