KR101449804B1 - 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물 - Google Patents

홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게 본 발명은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물, 항고혈압 활성을 갖는 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물 제조방법 및 상기 가수분해물로부터 분리 및 정제한 항고혈압 활성을 갖는 신규 펩타이드의 용도에 관한 것이다.

Description

홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물{Antihypertensive composition comprising gelatin extract from skate skin and peptide isolated from the extract}
본 발명은 홍어 껍질로부터 추출한 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리 및 정제된 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물에 관한 것이다.
고혈압은 전 세계적으로 성인의 15~20%가 겪고 있는 질환으로 동맥경화, 뇌졸중, 심근경색 및 당뇨병 등 심각한 만성 질환을 야기시켜 사회적으로나 경제적으로 막대한 손실을 일으키고 있다. 이는 정상적인 혈압을 유지하는 세포 내 작용이 천천히 붕괴되어 발생하는 질환으로 순환기계 질환의 원인이 되기도 한다.
고혈압의 원인은 대부분 밝혀져 있지 않지만 혈압을 상승시킬 수 있는 여러 가지 요인들 가운데 레닌-안지오텐신-알도스테론(Renin-Angiotensin-Aldosterone) 고리는 생체 내에서 혈압과 체액량을 조절하는데 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 생체 중에 존재하고 있는 불활성화 데카펩티드(decapeptide)인 안지오텐신 Ⅰ(angiotensin Ⅰ)은 안지오텐신 Ⅰ 전환 효소 (angiotensin Ⅰ converting enzyme, ACE)에 의하여 C-말단의 His-Leu이 떨어져 나감으로써 혈관벽 수축 작용이 있는 옥타펩티드(octapeptide)인 안지오텐신 Ⅱ(angiotensin Ⅱ)로 전환되며, 이렇게 생성된 안지오텐신 Ⅱ는 직접적으로 혈관을 수축하고, 신장에서 알도스테론의 분비를 증가시켜 체액량을 증가시킴으로써 혈압을 상승시키는 작용을 한다. 따라서 ACE의 활성을 억제시키면 혈압상승의 원인이 되는 안지오텐신 Ⅱ의 생성을 저하시켜 혈압의 상승을 억제할 수 있게 되므로, 레닌-안지오텐신-알도스테론 고리의 작용을 효과적으로 조절하는 약물의 발견은 고혈압 치료제 연구에 있어서 중요한 것이라 할 수 있다.
현재 고혈압 치료제로 사용되는 대표적인 ACE 억제제로는 화학합성제인 에넬라프릴(enelapril)이나 캡토프릴(captopril) 등이 개발되어 이용되고 있지만, 마른기침, 두통, 안면홍조, 식욕부진, 미각이상, 발진, 백혈구 감소 등의 부작용이 많아 최근에는 부작용이 없는 새로운 ACE 억제제의 개발이 중요시되고 있다.
대한민국 등록특허 10-0618073
상기와 같은 종래기술의 문제점을 해소하기 위하여, 본 발명자들은 부작용에 적으며 치료 효과가 우수한 새로운 고혈압 치료제를 연구하던 중, 홍어 껍질로부터 추출한 젤라틴 추출물이 우수한 항고혈압 활성을 갖는다는 사실을 확인하였고, 나아가 상기 추출물로부터 항고혈압 활성을 가지는 펩아티드를 분리 및 동정함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물; 또는 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드;를 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명에 따른 젤라틴 추출물의 가수분해물 및 상기 본 발명의 펩타이드를 이용한 고혈압 치료 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 가수분해물은 젤라틴 추출물을 Alcalase로 1차 가수분해하고, 다시 Protease type X로 2차 가수분해하여 수득한 2차 가수분해물일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 젤라틴 추출물은 홍어 껍질을 1%의 Ca(OH)2 에 침지시킨 후, pH 6.0 및 60~70℃의 온도에서 6~7시간 동안 열수추출하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 2차 가수분해물은 아미노산 서열이 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)으로 이루어진 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 가수분해물은 10ug/ml~1500ug/ml의 농도로 상기 조성물에 함유되어 있는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 펩타이드는 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물로부터 유래한 것일 수 있다.
또한, 본 발명은,
홍어 껍질로부터 젤라틴 추출물을 수득하는 단계;
젤라틴 추출물에 Alcalase 효소를 첨가하여 1차 가수분해하는 단계; 및
1차 가수분해물에 Protease type X 효소를 첨가하여 2차 가수분해하는 단계를 포함하는 항고혈압 활성을 갖는 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 젤라틴 추출물은 홍어 껍질을 1%의 Ca(OH)2 에 침지시킨 후, pH 6.0 및 60~70℃의 온도에서 6~7시간 동안 열수추출하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 1차 가수분해는 효소(Protease type X) 대 기질(젤라틴 추출물)을 1:100의 비율(w:w)로 혼합하고 pH 7.0 및 45~55℃의 온도에서 1~2시간 동안 반응시켜 수행하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 2차 가수분해는 효소(Alcalase) 대 기질(젤라틴 추출물)을 1:100의 비율(w:w)로 혼합하고 pH 7.0 및 35~40℃의 온도에서 3~6시간 동안 반응시켜 수행하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 2차 가수분해를 통해 수득한 2차 가수분해물에는 분자량이 1kDa 이하인 펩타이드를 포함할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 펩타이드는 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드일 수 있다.
또한, 본 발명은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물; 또는 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드;를 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 가수분해물은 10ug/ml~1500ug/ml의 농도로 함유되어 있을 수 있다.
나아가 본 발명은, 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물; 또는 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드;를 인간을 제외한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 고혈압 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물에 관한 것으로서, 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물 및 상기 가수분해물로부터 분리 및 정제한 신규 펩타이드가 ACE를 저해하는 활성이 우수하다는 사실을 확인함으로써 상기 가수분해물 및 신규 펩타이드를 고혈압 치료를 위한 의약품 및 건강기능성 식품의 소재로 사용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일실시예에서 제조한 홍어 껍질 젤라틴 추출물, 상기 추출물의 1차 가수분해물, 상기 추출물의 2차 가수분해물에 함유된 단백질의 분자량 분포도를 MALDI-TOF 분석을 통해 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 홍어 껍질 젤라틴 추출물의 2차 가수분해물에 대한 처리 농도별 ACE 저해능을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 홍어 껍질 젤라틴 추출물의 2차 가수분해물을 고혈압 쥐 모델을 대상으로 농도별로 섭취하게 한 후, 시간에 따른 심장 박동수와 SBP(systolic blood pressure)를 측정한 결과를 나타낸 것이며, blank는 본 발명의 가수분해물을 처리하지 않은 군을 나타낸 것이고, P.Control은 양성대조군으로 항고혈압제인 캅토프릴을 섭취하게 한 군의 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 상기 도 3에서 실험한 동일한 군을 대상으로 평균 혈압과 이완기 혈압을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 고혈압 쥐와 고혈압 쥐에 홍어 껍질 젤라틴 추출물의 2차 가수분해물을 500mg/kg의 양으로 섭취하게 한 후 우심실의 무게를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일실시예에서 제조한 홍어 껍질 젤라틴 추출물의 2차 가수분해물로부터 분리 및 정제한 펩타이드를 대상으로 ACE 저해능을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.
한편, 홍어는 가오리 과에 속하는 연골 어류로서 우리나라의 흑산도 근해와 일본 중부이남 해역에 많이 분포하고 있으며, 홍어에는 세포막 안정화 작용, 콜레스테롤 조절 작용 및 성장 발달에 중요한 기능을 수행하는 타우린(taurine)과 혈청 콜레스테롤을 감소시켜주고 인지기능을 향상시켜주는 리놀레산, 리놀렌산, 아라키돈산 등의 필수지방산이 다량 함유되어 있다. 또한 두뇌 발달과 시각 강화 기능을 지닌 EPA, DHA가 다량 함유되어 있다. 또한, 홍어의 뼈에는 뮤코다당 단백질인 콘드로이틴이 다량 함유되어 있어 건강과 강장식품으로 사용되고 있으며, 항균성 효과의 기능도 알려져 있다. 따라서 이러한 유용 성분을 함유하고 있는 홍어는 각종 음식 소재, 항균 소재 등 널리 활용되고 있다.
그러나, 이렇게 유용 성분을 다양하게 또한 다량 함유하고 있는 홍어의 활용에 있어서 홍어의 껍질과 같은 부산물들은 그냥 버려지고 있다.
이에 본 발명자들은 사용되고 버려지는 홍어 껍질로부터 항고혈압 효과가 우수한 가수분해물을 수득하였고, 나아가 상기 가수분해물로부터 항고혈압 활성이 우수한 2개의 펩타이드를 분리 및 동정하였으며, 상기 가수분해물 및 펩타이드가 안지오텐신 전환효소(angiotensin converting enzyme, ACE)를 효과적으로 저해하는 활성이 있음을 규명하였다.
상기 안지오텐신 전환효소는 주로 폐모세혈관에 존재하고, 혈류에 있는 불활성상태의 안지오텐신 Ⅰ의 말단아미노산 2개를 분해함으로써 혈관 수축을 유도하고, 알도스테론(aldosterone) 분비를 항진시키고 체액을 증가시켜 혈압을 상승시킬 수 있는 안지오텐신 Ⅱ로 전환시켜, 최종적으로 혈압을 상승시키는 작용을 하는 효소이다.
따라서 현재 사용되고 있는 고혈압 치료제의 경우 이러한 안지오텐신 전환효소의 활성을 저해할 수 있는 활성을 갖는 물질로서 궁극적으로 혈관 확장 효과를 유도하여 고혈압을 예방 및 치료하는 기작을 갖는다.
이에 본 발명자들은 본 발명의 일실시예에서, 홍어 껍질로부터 젤라틴 추출물을 수득하고, 상기 추출물을 효소 가수분해시켜 가수분해물을 수득하였으며, 수득한 가수분해물의 ACE 저해활성을 측정한 결과, 종래 고혈압 치료로 사용되고 있는 캅포트릴과 거의 유사한 활성을 갖는다는 것을 확인할 수 있었다.
따라서 본 발명은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 항고혈압 활성을 갖는 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물을 제조하는 방법을 제공할 수 있는데, 바람직하게 상기 방법은, 홍어 껍질로부터 젤라틴 추출물을 수득하는 단계; 젤라틴 추출물에 Alcalase 효소를 첨가하여 1차 가수분해하는 단계; 및 1차 가수분해물에 Protease type X 효소를 첨가하여 2차 가수분해하는 단계를 포함한다.
이러한 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물의 제조 방법에 대해 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
먼저, 홍어 껍질에 존재하는 불순물을 제거하기 위해 물로 여러 차려 세척한다.
세척 이후, 홍어 껍질을 일정 간격으로 절단한 다음, 절단된 홍어 껍질을 1%의 Ca(OH)2 에 침지시킨 후, pH 6.0 및 60~70℃의 온도에서 6~7시간 동안 열수추출을 수행한다.
이때 상기 홍어 껍질을 1%의 Ca(OH)2 에 침지시키는 것은 홍어 껍질에 존재하는 피하지방 및 콜라겐 이외의 단백질 등 이물질을 제거하는 과정으로서 2~4일 동안 침지시킨다. 이후, 상기 기술된 방법과 같이 열수 추출을 수행하여 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 수득할 수 있는데, 앞서 기술한 pH, 온도 및 추출시간의 범위를 벗어나서 열수추출을 수행하는 경우 홍어 껍질에 존재하는 유효 성분이 활성을 잃거나 성질이 변형될 수 있기 때문에 상기 조건 하에서 열수 추출을 수행하는 것이 바람직하다.
본 발명에서 상기 “젤라틴 추출물”은 홍어 껍질을 열수추출하여 수득한 추출물을 의미하는 것으로서, 젤라틴은 어류 및 동물에 함유된 천연 단백질인 콜라겐을 열수 처리하는 경우 유도되는 단백질의 일종을 말한다.
상기와 같이 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 수득한 다음에는 상기 젤라틴 추출물에 Alcalase 효소를 첨가하여 1차 가수분해하는 단계를 수행한다.
여기서 상기 1차 가수분해는 효소(Alcalase) 대 기질(젤라틴 추출물)을 1:100의 비율(w:w)로 혼합하고 pH 7.0 및 45~55℃의 온도에서 1~2시간 동안 반응시켜 수행하는 것이 바람직한데, 상기 조건의 범위를 벗어나서 수행하는 경우, 효소의 최적 가수분해 효과를 얻을 수 없으며, 가수분해 반응에 의해 수득한 가수분해물이 본 발명에서 목적하는 효과(즉, 항고혈압 효과)를 도출할 수 없게 된다. 그러므로 1차 가수분해는 상기 기술된 조건 하에서 수행하는 것이 바람직하다.
1차 가수분해가 완료되면, 이후 2차 가수분해를 수행할 수 있는데, 상기 2차 가수분해는 효소(Protease type X) 대 기질(젤라틴 추출물)을 1:100의 비율(w:w)로 혼합하고 pH 7.0 및 35~40℃의 온도에서 3~6시간 동안 반응시켜 수행할 수 있고, 이러한 과정을 통해 2차 가수분해물을 수득할 수 있다.
본 발명에서는 이렇듯 홍어 껍질로부터 열수 추출을 통해 수득한 젤라틴 추출물을 2단계의 가수분해 과정을 수행하였는데, 이러한 순차적인 2번의 가수분해 반응은 홍어 껍질에 존재하는 유용 성분들의 분자량을 저분자량화 시켜 이들의 생체 내로의 흡수를 촉진시키도록 할 수 있고, 각종 의약품 및 식품의 적용에 보다 편리성을 줄 수 있다.
특히 본 발명의 일실시예에서는, 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 대상으로 효소 처리 하기 이전의 추출물, 1차 가수분해 처리한 추출물 및 2차 가수분해 처리한 추출물을 대상으로 상기 추출물에 함유된 성분(단백질)들의 분자량을 측정하였는데, 가수분해 과정을 수행하지 않은 추출물의 경우 분자량이 10kDa 이상인 고분자들이 다량 존재하는 것으로 나타났고, 1차 가수분해만 처리한 추출물에서는 가수분해 과정을 거치지 않은 추출물에 비해 작은 분자량의 분자들이 존재하는 것으로 확인되었으나, 2차 가수분해를 거친 추출물에 비해서는 고분자들이 다수 존재하는 것으로 나타났다. 반면, 2번의 가수분해를 거친 2차 가수분해물에서는 1kDa 이하의 작은 분자량을 갖는 분자들이 다수 존재하는 것으로 확인되었다. 따라서 이러한 결과를 통해 1kDa 이하의 저분자들을 함유하는 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 수득하기 위해서는 본 발명과 같은 방법으로 2번의 가수분해 과정을 거쳐야 한다는 것을 알 수 있었다.
또한, 본 발명자들은 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 가수분해한 2차 가수분해물을 대상으로 항고혈압 활성을 갖는 활성성분을 분리 및 정제하였는데, 그 결과, MVGSAPGVL(분자량: 829Da)와 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 2개의 펩타이드를 분리 및 정제하였다. 또한 이들 2개의 펩타이드들에 대한 항고혈압 활성을 측정하기 위해 ACE 저해능을 분석한 결과, 2개 펩타이드 모두 우수한 ACE 저해 활성을 가지고 있는 것으로 확인되었다.
따라서 본 발명은 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에서 제공하는 항고혈압 활성을 갖는 상기 펩타이드는 MVGSAPGVL 또는 LGPLGHQ의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 또는 이들의 산부가염일 수 있으며, 상기 펩타이드는 분리된(isolated) 형태 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재하는 것일 수 있으며, 바람직하게 본 발명의 펩타이드는 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물, 더욱 바람직하게는 2차 가수분해물로부터 분리 및 정제한 것일 수 있다.
상기 산 부가염이란 제약상 허용되는 산 부가염일 수 있고, 상기 제약상 허용되는 산 부가염이란 상기 펩타이드의 생물학적 활성을 유지하고 원하지 않는 독소 효과 등의 부작용을 최소화하는 염을 의미한다.
상기 산부가염은 제약상 허용되는 무기산 부가염 또는 유기산 부가염일 수 있고, 일 예로 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 질산염, 아세트산염, 벤조산염, 말레인산염, 푸말산염, 호박산염, 주석산염, 구연산염, 옥살산염, 메탄술폰산염, 톨루엔술폰산염, 아스파라긴산염 또는 글루타민산염 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은 염수, 완충 염수, 덱스트로스, 물, 글리세롤 및 에탄올에서 선택되는 약학적 희석제중 1종 이상 포함할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 조성물은 투여목적 및 질병에 따라 상이하게 적용될 수 있다. 실질적으로 투여되는 활성 성분의 양은 다양한 관련 요소, 즉 치료하고자 하는 질병, 환자상태의 정도, 다른 약제(예를 들어 주화성 약제)와 공동 투여여부, 환자의 나이 성별, 체중, 음식, 투여시간, 투여경로, 및 조성물의 투여비율(ratio)을 고려하여 결정하여야한다. 상기 조성물은 투여량 및 투여경로가 질병의 형태 및 심각성에 따라 조절될 수 있으며, 하루에 한번 또는 1 내지 3번 나누어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 경구 이외의 투여경로, 즉 직장, 정맥, 복막 및 근육, 동맥, 경피, 비강(nasal), 흡입, 안구, 및 피하를 통한 약제 투여를 의미한다.
상기 조성물은 경구 투여 형태, 주입 가능한 용액 또는 국소제제와 같은 어떠한 형태로도 제제화될 수 있다.
제제화는 경구 및 주입 가능한 투여(진용액(true solution), 현탁액 또는 에멀젼)에 적합하도록 제조되는 것이 바람직하며, 정제, 캡슐, 연질캡슐, 수성 약제, 환제, 과립 등과 같은 경구 형태로 제조되는 것이 가장 바람직하다.
상기 제제화에서 본 발명의 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물 또는 상기 가수분해물로부터 분리 및 정제한 펩타이드는 부형제(excipient)없이 연질 캡슐에 충전될 수 있고, 담지체와 혼합되거나 희석된 후에 적당한 제제로 만들어질 수도 있다. 적합한 담지체의 예로는 전분, 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 등이 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 조성물은 고혈압을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 약학 조성물 또는 식품 조성물로 응용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하며, 소화나 배설 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하고, 바람직하게는 척추동물, 더욱 바람직하게는 포유류일 수 있다. 상기 포유류는 인간, 돼지, 소 또는 염소 등일 수 있으며, 바람직하게는 인간일 수 있다.
또한, 상기 약학 조성물은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물 또는 상기 가수분해물로부터 분리 및 정제한 펩타이드를 유효성분으로 단독으로 포함할 수 있고, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.
보다 상세하게, 상기 약학 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제,글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다.
또한, 상기 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 본 발명의 가수분해물을10ug/ml~1500ug/ml의 농도로 포함할 수 있으며, 상기 펩타이드는 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 99 중량%, 더욱 바람직하게는 1중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.
또한, 상기 약학 조성물은 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용 할 수 있다.
구체적으로 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.
더 나아가 본 발명의 약학 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일예로, 본 발명의 약학 조성물은 본 발명에 따른 상기 가수분해물 또는 상기 펩타이드를 기준으로 할 때, 0.000001 mg/kg/day 내지 1000 mg/kg/day로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
나아가 본 발명에서 제공하는 고혈압 치료제의 유효성분인 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물 및 상기 가수분해물로부터 분리한 펩타이드는 화학적 합성이 아닌 천연 유래의 물질이므로, 체내 안정하다는 특징이 있다.
따라서 상기 본 발명에서 제공하는 조성물은 고혈압을 예방 및 치료할 수 있는 식품 조성물로 사용될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물의 예로는 식품, 식품첨가제, 음료 또는 음료첨가제를 들 수 있으며, 유효성분 이외에도 그 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 명세서에서 “식품”이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이며, 바람직하게는 껌 또는 캔디일 수 있다.
본 발명에서 적용할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 캔디, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류, 음료, 두유류, 발효음료류, 아이스크림류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등), 비타민 복합제, 알코올 음료, 주류 및 그 밖의 건강보조식품류를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
본 발명에서 “기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 바람직하게는 본 발명의 기능성 식품은 고혈압을 예방 및 개선할 수 있는 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명에서 “음료”란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분인 본 발명의 가수분해물 또는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 5 내지 12g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 기능성 음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.
이외에도 본 발명은 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물; 또는 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드;를 인간을 제외한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 고혈압 치료 방법을 제공할 수 있다.
이상, 본 발명에서 제공하는 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물; 및 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드는 고혈압의 예방, 치료, 개선 효과를 가지는 유효성분으로서 이를 이용한 고혈압 치료제, 건강기능식품의 제조에 사용할 수 있는 특징이 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
< 실시예 1>
홍어 껍질로부터 젤라틴 추출물의 제조
영산홍어(주)로부터 홍어(Okamejei kenojei) 껍질을 구입하여 어피의 불순물을 제거하기 위하여 물로 수세하고, 가위를 이용하여 3cm x 1cm의 간격으로 자른 후, 피하지방 및 콜라겐 이외의 단백질과 같은 이물질을 제거하기 위하여 3 일 동안 1% Ca(OH)2에 침지하였다. 이후, 간단히 세척한 후, 자른 홍어껍질 부피의 4배에 해당하는 물을 water bath에 첨가하고, pH 6.0, 65℃의 온도에서 6.5 시간 동안 열수추출을 수행하였고, 이후 12,000 x g의 속도로 10분 동안 원심분리를 수행하여 추출물을 수득하였고, 이를 다시 탈염 처리하여 홍어 껍질로부터 젤라틴 추출물을 수득하였고, 건조시켜 분말화하였다.
< 실시예 2>
홍어 껍질의 젤라틴 추출물로부터 가수분해물의 제조
상기 실시예 1에서 수득한 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 다음과 같이 가수분해 하였다. 즉, 젤라틴을 가수분해하기 위해 2개의 효소를 순차적으로 사용하여 가수분해를 수행하였는데, 먼저 Alcalase 효소(시그마 구입)를 사용하여 50℃ 및 pH 7 조건으로 1시간 동안 반응시켰고, 이때 효소(Alcalase) 대 기질(분말화된 젤라틴 추출물)의 비율은 1:100(w/w)의 비율로 혼합하여 1차 가수분해하였다.
이후 상기 반응물에 다른 효소인 Protease type X(시그마 구입)를 사용하여 2차 가수분해를 수행하였는데, 37℃ 및 pH 7 조건으로 4시간 동안 반응시켰고, 이때, 효소(Protease type X) 대 기질(분말화된 젤라틴 추출물)의 비율은 1:100(w/w)의 비율로 혼합하여 수행하였다. 이후, 가수분해 반응이 완료된 다음, 열수조에서 10분 동안 가열하여 효소를 불활성화시켰고, 효소 불활성화 후 효소로부터 가수분해물을 분리한 후 동결 건조시켰다. 동결 건조된 가수분해물은 사용 전까지 -80℃에서 보관하였으며, 이상 기술한 본 발명의 가수분해 실험 조건을 요약하여 하기 표 1에 나타내었다.
가수분해 처리 조건
가수분해 조건
가수분해 단계 기질 농도(%) 효소 : 기질 혼합비율(w:w) 반응 조건
1차 가수분해
(Alcalase 효소 처리)		 2 1:100 50℃,pH 7,1시간
2차 가수분해
(Protease type X 효소 처리)		 1.8 1:100 37℃,pH 7,4시간
또한, 상기 가수분해 과정에서 가수분해 반응 전의 추출물, 1차 가수분해물 및 2차 가수분해물 각각을 대상으로 MALDI-TOF를 수행하여 각 추출물의 분자량 분포도를 측정하였고, 각 분자량에 따른 한외여과막(molecular weight cut-off(MWCO) 10,000, 5,000, 3,000, 1,000Da)을 이용하여 >10kDa의 분자량을 갖는 홍어 젤라틴 추출물, <3kDa의 분자량을 갖는 홍어 젤라틴 추출물 및 <1kDa의 분자량을 갖는 홍어 젤라틴 추출물을 각각 분리하였다.
상기와 같은 처리 및 MALDI-TOF 분석 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 가수분해 반응 전의 추출물은 >10kDa 이상의 분자량을 갖는 피크들이 다수 존재하는 것으로 확인되었고, Alcalase 처리에 따른 1차 가수분해물은 <3kDa의 분자량을 갖는 피크들이 주로 존재하는 것으로 관찰되었으며, Protease type X를 처리한 2차 가수분해물은 <1kDa의 분자량을 갖는 피크들이 주로 존재하는 것으로 관찰되었다.
< 실시예 3>
홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물에 대한 ACE 저해 활성 측정
본 발명자들은 체내 흡수가 빠르고 효과가 우수한 새로운 고혈압 치료제를 개발하기 위해 상기 실시예에서 수득한 홍어 껍질의 젤라틴 추출물 중에서 특히 작은 분자량을 함유한 2차 가수분해물을 대상으로 처리 농도에 따른 ACE 저해 활성 정도를 측정하였으며, 상기 측정은 안지오텐신 전환효소 저해능 측정방법에 따라 안지오텐신 전환효소를 50% 저해할 수 있는 농도인 IC50을 측정하는 방법으로 수행하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 추출물의 처리농도에 비례하여 안지오텐신 전환효소 저해능이 증가하는 것으로 나타났고, 특히 IC 50의 농도는 13.87 ug/ml인 것으로 확인됨에 따라 상기 홍어 껍질 유래의 젤라틴 추출물을 대상으로 한 2차 가수분해물은 매우 적은 농도에서도 ACE 저해 활성을 가지며, 따라서 매우 우수한 항고혈압 활성을 가질 수 있음을 알 수 있었다.
< 실시예 4>
고혈압 동물모델을 대상으로 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물에 대한 항고혈압 효과 분석
하기 실험을 수행하기 위해 선청성 고혈압 쥐(SHR)를 건국대학교 동물실험연구센터로부터 얻었다. 고혈압 쥐를 대상으로 상기 실시예에서 수득한 2차 가수분해물을 500mg/kg 및 1000mg/kg의 양으로 20일 동안 쥐에게 먹였으며, 대조군으로는 상기 2차 가수분해물을 먹이지 않은 군을 사용하였고, 양성대조군으로는 항고혈압제(안지오텐신 변환효소저해제)로 알려진 캅토프릴(captopril)를 투여한 군을 사용하였다. 이후, 2시간, 24시간, 72시간, 10일 및 20일째 각 군의 심장박동수를 측정하였고, SBP(systolic blood pressure)를 측정하였는데, 쥐의 꼬리동맥의 혈압은 tail cuff 방법에 의해 하였다. 또한, 안정된 조건에서 혈압을 측정하기 위해 SHR쥐 모델을 보정틀에 넣은 다음 최소 5회 이상 반복 측정하여 가장 높은 값과 가장 낮은 값을 제외한 평균값으로 기록하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 심장박동수는 시험전과 비교하여 큰 차이를 나타내지 않았으나, 2차 가수분해물을 1000mg/kg의 양으로 섭취하게 하였을 경우에는 수축기혈압의 변화가 양성대조군인 캅토프릴 처리 군과 거의 유사한 결과를 나타낸다는 것을 알 수 있었다.
또한, 본 발명자들은 상기 실험 동물군을 대상으로 평균 및 이완기 혈압을 측정하였는데, 꼬리동맥의 혈압을 tail cuff 방법으로 측정하였다. 또한, 안정된 조건에서 혈압을 측정하기 위해 SHR쥐 모델을 보정틀에 넣은 다음 최소 5회 이상 반복 측정하여 가장 높은 값과 가장 낮은 값을 제외한 평균값으로 기록하였다. 그 결과, 2차 가수분해물을 500mg/kg의 양으로 섭취하게 한 군은 평균 및 이완기 혈압 변화가 미비한 것으로 나타났으나, 2차 가수분해물을 1000mg/kg의 양으로 섭취하게 한 군은 평균 및 이완기 혈압이 양성대조군인 캅토프릴 처리 군과 거의 유사한 결과를 나타낸다는 것을 알 수 있었다. 또한, 일반적으로 고혈압의 기준이 SBP>140mmHg/ DBP>90mmHg 인 것과 비교하였을 때, 본 발명에 따른 2차 가수분해물을 섭취하게 한 후 3일 이후부터 수축기 및 이완기 혈압이 정상치의 수준으로 회복된다는 것을 알 수 있었다.
따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 홍어 껍질의 젤라틴 추출물을 가수분해한 분해물(보다 정확하게는 2차 가수분해물)이 종래 사용되고 있는 화학성분으로 이루어진 항고혈압제인 캅토프릴과 거의 유사한 약리학적 효과를 보인다는 사실을 확인함으로써, 캅토프릴를 대체할 수 있는 천연 유래의 고혈압 치료제로 본 발명의 홍어 껍질 젤라틴 추출물의 가수분해물을 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
나아가 본 발명자들은 상기 실험에서 사용된 쥐를 치사시키고, 쥐의 우심실을 적출하여 우심실의 무게를 측정하였는데, 그 결과, 고혈압에 의해 비대해진 SHR의 우심실이 본 발명에 따른 2차 가수분해물의 투여로 인해 무게가 감소한 것으로 나타났다(도 5 참조).
< 실시예 5>
항고혈압 활성을 갖는 펩타이드의 정제
본 발명자들은 상기 홍어 껍질로부터 수득한 젤라틴 추출물의 2차 가수분해물에 함유된 항고혈압 활성을 갖는 기능성 펩타이드를 분리하기 위해 2차 가수분해물을 대상으로 FPLC(Fast protein liquid chromatography)를 이용하여 gel filteration 컬럼을 통해 활성펩타이드 2개를 분리하였으며, 이들 펩타이드의 염기서열을 분석한 결과, 아래와 같은 염기서열을 갖는 펩타이드인 것으로 확인되었다. 또한, 이들 펩타이드를 대상으로 항고혈압 활성이 있는지 확인하기 위해 앞서 수행한 방법으로 ACE 저해능(IC50)을 조사하였다.
또한, 이때 상기 펩타이드의 서열 결정은 다음과 같은 실험을 통해 분석하였다. 상기 컬럼을 통해 수득한 분획물을 Micro-Centvac에서 완전히 건조시켰다. 건조한 시료를 20 uL의 0.1% TFA를 포함한 증류수에 용해시키고 시료 중의 염을 제거하기 위해 50% 아세토나이트릴로 활성화시켜 0.1% TFA를 포함하는 증류수로 평행시킨 ZipTip C18(Pierce #87782)에 로딩하였다. 0.1% TFA를 포함하는 증류수로 2-3회 세척하고 ZipTip C18에 결합된 펩타이드를 0.1% TFA를 포함하는 70% 아세토나이트릴 용액을 용출하였다. 용출한 펩타이드 용액을 biobrene(AB Systems Co., U.S.A.)이 전처리된 마이크로필터에 10 uL를 로딩하고 아르곤 가스로 건조시켰다. 건조가 끝난 필터를 카트리지에 장착하여 아미노산 자동 서열기(ABI492 automated protein sequencer, Applied Biosystem, Foster, CA, U.S.A.)의 pulsed-liquid 법을 통해 아미노산 서열을 결정하였다.
그리고 전기분무 이온화(ESI)법을 이용하여 질량분석기로 분자량 오온 및 분해된 이온을 검출하여 정제된 펩타이드 분자량을 확인하였다. 질량스펙트럼은 Q-TOF2(Micromass, U.K.) 질량분석기에 Nano-ESI interface를 이용하여 data dependant MS/MS 방법으로 얻었다.
그 결과, 분리한 2개의 펩타이드는 각각 SP1(활성 펩타이드 1)= MVGSAPGVL(829Da), SP2(활성 펩타이드 2)= LGPLGHQ(720Da)인 것으로 확인되었으며, 도 6에 나타낸 바와 같이 이들 2개의 펩타이드는 모두 ACE 저해능을 갖는 것으로 나타났으며, 특히 SP1(활성 펩타이드 1) 펩타이드가 SP2(활성 펩타이드 2)에 비해 더 우수한 항고혈압 활성을 갖는 것을 알 수 있었다.
따라서 본 발명자들은 이와 같은 실험을 통해 본 발명에 따른 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 2차 가수분해물과 상기 가수분해물로부터 분리 및 정제한 MVGSAPGVL 및 LGPLGHQ 2개의 펩타이드를 고혈압 치료를 위한 의약품 및 기능성 건강 식품의 소재로 사용할 수 있다는 것을 알 수 있었다.
< 제제예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 2차 가수분해물 또는 펩타이드 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 2차 가수분해물 또는 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 2차 가수분해물 또는 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
본 발명의 2차 가수분해물 또는 펩타이드 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
< 제제예 2> 식품의 제조
건강식품을 하기와 같이 제조하였다.
<2-1> 드링크의 제조
꿀 522 ㎎
치옥토산아미드 5 ㎎
니코틴산아미드 10 ㎎
염산리보플라빈나트륨 3 ㎎
염산피리독신 2 ㎎
이노시톨 30 ㎎
오르트산 50 ㎎
본 발명의 2차 가수분해물 또는 펩타이드 1.28 ㎎
물 200 ㎖
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
<2-2> 캔디의 제조
설탕 50 60 중량부
물엿 39.26 ~ 49.66 중량부
본 발명의 2차 가수분해물 또는 펩타이드 0.24 ~ 0.64 중량부
오렌지향 0.1 중량부
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (16)

  1. 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물로, 상기 가수분해물은 젤라틴 추출물을 알칼라제(Alcalase)로 1차 가수분해하고, 다시 프로테아제 타입 X(Protease type X)로 2차 가수분해하여 수득한 2차 가수분해물인 것을 특징으로 하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 2차 가수분해물은 아미노산 서열이 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)으로 이루어진 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 삭제
  6. MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 펩타이드는 홍어 껍질로부터 분리한 젤라틴 추출물의 가수분해물로부터 분리한 것을 특징으로 하는 고혈압 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  8. 홍어 껍질로부터 젤라틴 추출물을 수득하는 단계;
    젤라틴 추출물에 Alcalase 효소를 첨가하여 1차 가수분해하는 단계; 및
    1차 가수분해물에 Protease type X 효소를 첨가하여 2차 가수분해하는 단계를 포함하는 항고혈압 활성을 갖는 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물의 가수분해물을 제조하는 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 젤라틴 추출물은 홍어 껍질을 1%의 Ca(OH)2 에 침지시킨 후, pH 6.0 및 60~70℃의 온도에서 6~7시간 동안 열수추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 1차 가수분해는 효소(Alcalase) 대 기질(젤라틴 추출물)을 1:100의 비율(w:w)로 혼합하고 pH 7.0 및 45~55℃의 온도에서 1~2시간 동안 반응시켜 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제8항에 있어서,
    상기 2차 가수분해는 효소(Protease type X) 대 기질(젤라틴 추출물)을 1:100의 비율(w:w)로 혼합하고 pH 7.0 및 35~40℃의 온도에서 3~6시간 동안 반응시켜 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제8항에 있어서,
    2차 가수분해를 통해 수득한 2차 가수분해물에는 분자량이 1kDa 이하인 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 펩타이드는 MVGSAPGVL(분자량: 829Da) 또는 LGPLGHQ(분자량: 720Da)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
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