TWI235177B - L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid - Google Patents

L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid Download PDF

Info

Publication number
TWI235177B
TWI235177B TW088104257A TW88104257A TWI235177B TW I235177 B TWI235177 B TW I235177B TW 088104257 A TW088104257 A TW 088104257A TW 88104257 A TW88104257 A TW 88104257A TW I235177 B TWI235177 B TW I235177B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
gene
glutamic acid
val
leu
ala
Prior art date
Application number
TW088104257A
Other languages
English (en)
Inventor
Mika Moriya
Hiroshi Izui
Eiji Ono
Kazuhiko Matsui
Hisao Ito
Original Assignee
Ajinomoto Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Kk filed Critical Ajinomoto Kk
Application granted granted Critical
Publication of TWI235177B publication Critical patent/TWI235177B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0014—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
    • C12N9/0016—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with NAD or NADP as acceptor (1.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/18—Erwinia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/22—Klebsiella
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/847—Erwinia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/852—Klebsiella

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

1235177 A/ B7 五、發明說明（！） 本發明的背景 本發明關於一種新穎之生產L 一麩胺酸的細菌及利用 此種細菌：以發酵法生產L 一麩胺酸的方法。L 一麩胺酸是 一種可做爲食物、藥物及此類物的重要胺基酸。 傳統上一直是利用一種稱爲棒狀桿菌之生產麩胺酸的 細菌藉著發酵法來生產L -麩胺酸，此種細菌主要是屬於 短桿菌屬、棒狀桿菌屬及微桿菌屬或其變種（ > 胺基酸發 酵〃，嘉凱蘇潘中心，pp · 195 — 215，1986 )。至於利用其它菌屬藉著發酵法來生產L-麩胺酸的方 法，目前已知的有：利用桿菌屬、鏈黴菌屬、青黴菌屬及 此類微生物來生產的方法（美國專利號 3 ’ 220 ，929)利用假單胞菌屬、節桿菌屬、沙雷 菌屬、念珠菌屬及此類微生物來生產的方法（美國專利號 3 ’ 563 ，857)，利用大腸桿菌之變種及此類菌（ 曰本專利公開公報）號5 — 2 4 4 9 7 0 ( 1 9 9 3 )) 和此類微生物來生產的方法。 雖然，L -麩胺酸的生產可經由培養上述之微生物或 上述之製造方法的改良而獲得大大的改進，但事實上仍需 要發展出一套更經濟且更有效的方法來生產L 一麩胺酸以 符合對胺基酸之大量增加的需求。 本發明的總論 本發明的目的是尋找一種新穎之生產L 一麩胺酸的細 菌’此種細菌生產L -麩胺酸的能力很強，因此，可藉著 了、紙張H迂丐中國國家標違（CNS)A4規格（210 X 297公g ) . (請先rats背面之注意事項再
E — — — — — — — ^ ·11111111 頁) :;一一$一：\::>- V4r: · V.IV 二 4 货合^ii·,:;:.·.. 1235177 A： _B7__ 五、發明說明（8) 具有的性質也可能是經由培養而加入或加強的能力。屬於 克雷伯氏菌，歐文氏菌或潘朵菌屬且具有生產L -麩胺酸 之能力的:微生物的實施例。包括，如：其用來催化L -麩 胺酸之生物合成反應之酶的活性增加者以及其用來催化自 麩胺酸之生物合成途徑所分支之反應及生產除了 L -麩胺 酸外之化合物的酶的活性降低或缺乏者。該微生物的實施 例還包括那些如下述之微生物：其用來催化L -麩胺酸之 生物合成反應的酶的活性正在增加，及其用來催化自麩胺 酸之生物合成途徑所分支的反應和生產除了 L -麩胺酸外 之化合物的酶活性正在降低或正失去。 可微生物中催化L -麩胺酸生物合成反應的酶的實施 例有：GDH，麩胺合成酶，麩胺酸合成酶，異檸檬酸脫 氫酶，烏頭酸水合酶，CS，PEPC，丙酮酸脫氫酶， 丙酮酸激酶，烯醇化酶，磷酸甘油變位酶，磷酸甘油酸激 酶，磷酸-.3 -甘油醛脫氫酶，磷酸丙糖異構酶，雙磷酸 果糖醛縮酶，磷酸果糖激酶，磷酸葡糖異構酶及此類酶。 在這些酶中，CS ，PEPC及GDH三者中之或二種或 三種爲較佳的酶。做爲本發明的微生物，更佳的爲那些三 種酶（C S，P E P C及G D Η )的活性都增加的微生物 。一種微生物其a標的酶"的活性是否增加可以藉著測量 細菌細胞萃取物或純化的分液中酶活性並將它與野生種或 . 母菌種進行比較來測知。 ^ 屬於克雷伯氏菌，歐文氏菌或潘朵菌屬之本發明的微 生物，且其催化L -麩胺酸之生物合成反應的酶的活性增 請先Μ讀背面之注意事項再 ϋ ϋ ·1 ϋ ϋ i-i ϋ^eJV ϋ A— ft— ϋ ϋ ^ · 頁)
-11 - I1235177 A7 __B7 五、發明說明（9) ;ί、 加者’可藉下述步驟來取得，例如：在上述任一種用來做 爲起始母菌種的微生物中，將編碼該種酶的基因進行基因 重組’或:者，在編碼該酶的基因中發生了突變因而產生了 變種。 例如：爲了加強CS，PEPC或GDH的活性，可 將編碼CS，PEPC或GDH的基因植入一種合適的質 體中’而前述之做爲宿主的起始母菌種可以用所產生之質 體進行轉形。這種方法可增加各個編碼C S，P E P C及 GDH之基因（以下各縮寫爲、gitA基因"，" P P c基因"及dhA"基因）的複製數目而使得 CS ’ PEPC及GDH的活性增加。 將任何組合之一或二或三種選自 > 純系〃的g 1 t A 基因’ ppc基因，及gdhA基因引入上述之起始母菌 種中。當引入二或三種基因時，該二種基因或者是三種基 因便被 ''選殖〃在一種質體中，此質體再被引入宿主中， 或者是它們各自 > 被選殖〃在二或三種質體中（這些質體 可存在於同一種宿主中）然後再將它們引入宿主中。 只要質體能在一種屬於克雷伯氏菌屬，歐文氏菌屬或 潘朵菌屬的微生物中自動進行複製，該質體的種類就不特 別侷限在那些種類中。質體的實施例包括，例如： PUC19，pUC18，PBR322， PHSG299，PHSG298，PHSG399， pHSG398，RSFl〇l〇，pMW119 ， pMWl 1 8，pMW2 1 9，pMW2 1 8 及此類物。
諫 先 閱 諫 背 面 之 注1 意！ · 事祖 項I 再_ 填 寫 本· 頁 I w I
I 訂 參
用中S國家標準（CNS)A4規恪（210 X 297公g ) -12- -i 1235177 A7 B7 五、發明說明（β 除了這些質體外，也可使用噬菌體DNA媒介。 轉形可經由，例如，D · Μ ·莫里生的方法（酶學的 方法68:、，326 (1979))來進行，此方法是以氯 化鈣增加受體細胞對DN Α的滲透性來進行（曼德爾， M·及海嘉，A·，分子生物學期刊，53，159 ( 1 9 7 0))或者也可依類似方法進行。 CS，PEPC及GDH的活性也可藉著將存在於起 始母菌種（做爲宿主）的染色體DNA上的g 1 t A基因 ，P P c基因及/或g d h基因經過多次複製而增加。爲 了將g 1 t A基因，ρ p c基因及/或g d hA基因之多 次複製體引入屬於克雷伯氏菌屬，歐文氏菌屬或潘朵菌屬 之微生物的染色體DNA中，可以利用染色體DNA上之 多次複製的序列，如：重覆的D N A及存在於轉位因子尾 端上的逆轉重覆體來進行。或者是，該基因的多次複製體 也可利用帶著g 1 t A基因，p p c基因或g d hA基因 的轉位子經轉位而引入一個染色體D N A中。這些技術可 使轉化株細胞中之g 1 tA基因，ppc基因及gdhA 基因的複製數目增加，因而增加了 CS，PEPC及 G D Η的活性。 任何有機體只要是具有CS，PEPC及GDH的活 性，此有機體便可用來做爲增加複製數目用之g 1 t A基 因、ppc基因柔gdhA基因的來源。在這類有機體中 ，細菌（即：原核生物），如：那些屬於腸桿菌屬、克雷 伯氏菌屬，歐文氏菌屬，潘朵菌屬，沙雷菌屬，埃希氏菌 孓绝乐又用中S 0家標準（CNS)..\4規格（210 X 297 ) (請先W讀背面之注意事項再 I I I I! I 訂-11! — 1·綠 頁) r·:一孓 f .ϋ1-ν;±ΐ,，.、；η、丄..-lf^^ii-lh-:: -13 - 1235177 A7 B7 五、發明說明（ο 屬，棒狀桿菌屬，短桿菌屬及芽胞桿菌屬的菌種是較佳者 。大腸桿菌可爲一種特殊實施例。g 1 tA基因’ PPC 基因及g:d hA基因可以從上述之微生物的染色體d n a 中取得。 g 1 tA基因，ppc基因及gdhA基因可藉著下 述方法各自從前述之任何一種微生物的染色體D ΝΑ中取 得：將一種缺少CS，PEPC或GDH活性的營養缺陷 型變種菌種的互補DN Α片段分離出。或者，由於埃希氏 菌或棒狀桿菌類的這些基因的核苷酸序列爲已知序列（生 化，第22冊，524 3〜5 2 49頁，1983 ;生物 化學期刊，第95冊，909〜916頁，1984 ;基 因，第27冊，193〜199頁，1984;微生物系 ，第14〇冊，1817〜1828頁，1994;分子 基因遺傳學，第2 18冊，330〜339頁，1989 ;及分子微生物，第6冊，317〜326頁，1992 )，這些基因也可利用根據各個已知之核苷酸序列所合成 的引物以染色體D N A爲模板，經由P C R的方法來取得 〇 除了上述之基因擴增的方法外，CS、 PEPC或 GDH的活性也可藉著加強g 1 tA基因、pp c基因或 g d hA基因的表現而增加。例如：可以另一種較強之啓 動基因來代替g1tA基因、ppc基因、或gdhA基 因的啓動基團以加強這些基因的表現。這類強力的啓動基 因的實施例包括，如·· λ噬菌體的1 a c起動基因、 了乂气乐义iiS用中S國家標進（CNS)A4規格（210 X 297公餐） <請先閱讀背面之注意事項再 — — — — — — — 訂·！ ！结 頁)
r.:.r;r4r^:lvniJ11J':-j、二.0f 厶「作吐:-:-:: -14- 1235177 Δ„ A' B7 五、發明說明（θ t rp啓動基因，t r c起動基因，t a c起動基因，Pr 起動基因及P L起動基因及此類物。其啓動基因已經經過取 代之g l:tA基因，ppc基因，或gdhA基因被選殖 λ質體後可利用一段重複的DNA，逆轉重覆體轉位子或 此類物引入一種宿主微生物或宿主微生物之染色體D N A 中〇 CS，PEPC或GDH的活性也可藉著置換染色體 上之gltA基因、ppc基因，或gdhA基因的啓動 基團，以另一種更強之啓動基因來取代（見W0 8 7 / 03006 ，及日本專利公開公報申請書（ΚΟΚΑ I ) 61-268183 (1986))，或是在各個基因編 碼序列的上流插入一個強力的啓動基因。（見基因，2 9 ’ ΡΡ · 231-241 ，1984)。特別是，這些是 經由在gl tA基因、ppc基因或gdhA基因之間的 同源重組而取得的，這些基因的啓動基因被染色體上之一 種較強的啓動基因或者是含有它們中之一部分的D N A及 相對應的基因所取代。 屬於克雷伯氏菌屬，歐文氏菌屬或潘朵菌屬，且其 C S，P E P C或GDH活性有增加之微生物的特殊實施 例包括，如：棲植物克雷伯氏菌A T J 1 3 3 9 9 / RSFCPG，棲草歐文氏菌1AM 1595/ R S F C P G。 可催化從L -麩胺酸生物合成途徑分支出來的反應及 4 4 製造除了 L -麩胺酸以外之化合物的反應的酶包括，如： 本用中舀國家標車（CNShVI規格（210x297公坌） -I I I I! I 訂·！I!-结 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) f
-15· 1235177 A/ B7 五、發明說明（β a KGDH，異檸檬酸裂解_，碟酸轉乙酷酶，醋酸激酶 ，乙醯羥基酸合成酶，乙醯乳酸合成酶，甲酸轉乙醯酶， 請， 先 閱 背 面 之 注 意 事 項 再 填Mb I零 頁I I I I I I I 訂 乳酸脫氫:酶麩胺酸脫羧酶，1 一吡咯啉脫氫酶及此類物。 在這些酶之中，aKGDH是較佳者。 爲了得到屬於克雷伯氏菌，歐文氏菌或潘朵菌屬，且 其中所含之上述的酶活性降低或缺乏的微生物，可以利用 傳統的產生突變的技術或基因工程技術來將一種可引起酶 活性降低或缺乏的突變引入編碼該種酶的基因中。 產生突變的技術的實施例包括，如：利用X光或紫外 線照射的方法，以一種產生突變的試劑（如：N —甲基-Ν’一硝基一 N —亞硝基胍及此類物）來處理的方法。引入 突變的基因部位可以是編碼一種酶蛋 一種表現的調節區，如：啓動基因。 基因工程技術的實施例包括，如 移細胞融合及此類方法。例如：可將 個標的基因中以製造一種功能上未被 因）。然後，此缺損基因被引入一個 文氏菌或潘朵菌屬的微生物細胞中， $ 基因再經由同源重組法（基因破損） 白質的編碼區域或是 ▲ ά·-·Γΐρ^:ι>:ί:-·1.-'·';3、二.^φ合：i』:r-;ir:; :基因重組，基因轉 一種抗藥基因嵌入一 活化的基因（缺損基 屬於克雷伯氏菌，歐 而在染色體上的標的 由該缺損基因所取代 無論微生物之標的酶的活性是降低了或是缺乏，此活 ‘性的降低程度可以藉著測量推薦菌種之細菌細胞萃取物或 純化分液的酶活性並將它與野生種或母菌種的活性進行比 較後來決定。α K G D Η的酶活性可以利用，如：|利得 用中S國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公餐） -16 I1235177 A7 B7 ;S、 f 么、 五、 發明說明（ 1合 從 這 些 事 實 來看， 除 了 在 實 施 例 中 說明 過 的 外 其. 它 屬 於 克 雷 伯 氏 菌，歐 文 氏 菌 赘 潘 朵 菌 t 埃希 氏 菌 j 腸 桿 菌 或 沙 雷 :菌 屬 的 細胞， 我 們 也 可 很 容 易 地 預期 具 有 下 述 性 質 的 菌 種 可 生 產 L 一· 胺 酸 ·· ① 其 a K G D Η 的 活 性 降 低 或 正 消 失 者 J ② 其P E P C y G D Η 及 C S的 活 性 增 加 者 〇 如 實 施 例 中 所 證實的 將 a K G D Η 活 性去 除 以 使 棲 植 物 克 雷 伯 氏 菌 A J 1 3 3 9 9 得 到 生 產 L -麩 胺 酸 的 能 力 的 事 實 也 可 應 用 於其它 克 雷 伯 氏 菌 歐 文 氏菌 或 潘 朵 菌 種 的 細 # 园 上 〇 經 由 下 述 方 法可生 產 L 一 麩 胺 酸 ： 將 屬於 克 雷 伯 氏 菌 ΓαΑτ Ε5λ 文 氏 菌 或 潘 朵菌屬 且 具 有 生 產 L — 麩 胺酸 之 能 力 的 微 生 物 在 — 種 液 體 培養介 質 中 培 養 j 以 在 介 質中 累 積 L — 麩 胺 酸 ， 並 白 培 養 介質中J 枚集它 0 培 養 介 質 可 以是一 種 依 需 要 而 含 有 碳 來源 氮 來 源 及 Μ ^ \ \ \ 機 鹽 類 Λ 有 機微量 營 養 素 如 ； 胺 基 酸、 維 他 命 及 此 類 物 的 普 通 介 質 。它可 以 是 一 種 合 成 的 或 天然 的 介 質 0 任 何 碳 來 源 及 氮 來 源都可 用 於 培 養 介 質 中 j 只要 它 們 可 被 所 要 培 養 之 微 生 物所利用 〇 碳 來 源 可 以 是一種 糖 j 如 : 葡 萄 糖 % 甘油 \ 果 糖 蔗 糖 麥 糖 甘 露糖及 此 類 物 0 還 有 有 機酸 j 如 醋 酸 檸 檬 酸 ， 可 以 單獨使) 毛或與其它碳來源- -同使 [用 卜 氮 來 源 可 以 是氣、 銨 鹽 ( 如 ： 硫 酸 銨 、碳 酸 銨 氯 化 錢 \ 磷 酸 銨 及 醋 酸銨、硝酸銨和此類物） 〇 關 於 有 機 微 量營養 素 胺 基 酸 維 他 命、 脂 肪 酸 核 以氏5 m用中S 1家標道（CNShVl規格（210 x 297公餐） 先 w 讀 背 面 S ! I i
項I 再 I
-19 ·
二'· T^^4,rrrrJ 1235177 A7 _ B7 五、發明說明（θ 酸等可使用含有這些東西的物質，如：腺，卡斯胺基酸（ casamino acid )，酵母萃取物，和黃豆類蛋白質的分解產 物以及此、、類物，且當使用的是一種需要某種胺基酸或此類 物的營養缺陷型變種時，一定要補充該介質所需之營養。 關於無機鹽，磷酸鹽、鎂鹽、鈣鹽、鐵鹽、錳鹽及此 類物都可使用。 關於培養條件，培養可在2 0至4 2 °C，pH値是4 至8的有氧條件下進行。培養可在液體培養液中持續培養 1 0小時至4天，以在液體培養介質中累積相當量的L - 麩胺酸。 培養完成後，在培養介質中累積的L 一麩胺酸可以用 已知方法來收集。例如，可以下述方法來分離：在移除細 胞後，將介質加以濃縮，使產物結晶化，進行離子交換層 析法或此類技術。 實施例 本發明將以下列實施例爲參考資料解釋得更爲淸楚。 (1)建構具有g 1 tA基因，ppc基因和gdhA基 因的質體 建構帶有一個git基因、ppc基因和gdhA基 因的質體的步驟可以經由第1，2及3圖來解釋。 將從大腸桿菌衍生而來之帶有g d h A基因的質體 pBRGDH (日本專利公開公報（KOKAI )第7 — τ、圪張< i这用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 20- --------訂· — n βϋ I 1 n ϋ I 繞 詩先閱tt背面之注意事項再本頁)
1235177 A. A/ B7 五、發明說明（1合 203980 號（1995))以 Hindi I I 和 SphI分解後再以T4 DNA聚合酶處理切斷二端。然 後，將此:含有g d hA基因的DNA片斷加以純化、收集 。另一方面，從大腸桿菌衍生而來之帶有g 1 t A基因和 ppc基因的質體pMWCP(W〇 97/08294) 以Xb a I分解後，再以T 4 DNA聚合酶處理切斷二端 。將所得之質體與上述經純化後所得之帶有g d h A基因 的片段混合，再以T 4接合酶進行接合以得到質體 pMWC P G，這種質體爲進一步帶有g d hA基因的質 體pMWCP (第1圖）。 將以Hi nd I I I和Sa 1 I分解pBRGDH後 所得的帶有gdhA基因的DNA片段加以純化、收集後 ，再將它引入質體p M W G 2 1 9 (從 > 塔卡拉舒如〃( TakaraShuzo )買得的）的 H i n d I I I — S a 1 I—* 端，如此便可得到質體p M W G (第2圖）。還有，以 Hindi I I及EcoRI分解衍生自大腸桿菌之具有 g 1 tA基因的質體pTWVC (W0 97/ 08294)，並將所產生之具有gltA基因的DNA 片段加以純化，收集再將它引入質體pMW2 1 9的 Hindi I I — EcoRI部位以得到質體pMWC ( 第3圖）。 同時以Not I分解帶有、廣一宿主一範圍"的質體 RSF 1 〇 1 〇之複製源的質體pV I C40 (日本專利 公開公報第8 — 0 4 7 3 9號（1 9 9 6 ))，所得之產 衣纸用中3國家標準（c\’S)A4規格（210x297公餐) 7" -- 請， 先 閱 讀-背 面 之 注 意 事 項 再 頁I w I I I 雇 I I 訂
1235177 A7 B7 :‘ί·::ρ )Jκ-· -vw 二 d 货合^:-'irvv 五、發明說明（ 物再以T4 DNA聚合酶處理，並以pstl分解；另外 ，以 Eco T141 分解 pBR322，再以 T4DNA 聚合酶處:理並以P s t I分解而得到另一種產物。然後’ 將上述二種產物混合，並且以丁4接合酶進行接合而得到， RSF — Te t質體。這種質體具有RSF10 10的複 製源和一種對四環素有抗性的基因（第4圖）。 接下來，用EcoRI和Ps t I來分解 p M W C P G，然後再純化、收集此帶有g 1 t A基因、 pp c基因和gdhA基因的DNA片段。類似地’先以 Ec oRI和Ps t I將RSF — Te t進行分解。然後 ，將上述D N A片段混合，以T 4接合酶進行接合，可得到 由含有g 1 t Α基因，ppc基因和gdhA基因的 RSF - Tet所組成的RSFCPG質體（第5圖）。 經上述方法所製得的質體R S F C P G所表現出的 g 1 tA基因，ppc基因和gdhA基因，可以藉由缺 乏g 1 tA基因，ppc基因或者gdhA基因的大腸桿 菌種之營養缺陷型的互補作用，以及各種酶之活性測量來 確認。類似地，由P M W G或p M W C所表現之g d h A 基因或g 1 t A基因可以根據缺乏g d hA基因或 g 1 t A基因之大腸桿菌營養缺陷型的互補作用及各種酶 活性之測量來確認。 (2)將RSFCPG PMWCB和pMWG引入克雷伯 氏菌屬或歐文氏菌屬，（潘朵）菌屬中並評估L一麩胺酸 <請先閱讀背面之注意事項再 n ϋ l_i β— ϋ 1 一：0，· ϋ ·1 1 ·_1 1 · 頁) 结
夂纸張尸、tiS闬中3國家標準（C\’SM4規格（210 χ 297公餐） •22·
Ά·::·--τ.,,·1ϋ-'ν·.θ 丄，.>·]货合作吐 D 1235177
Ai B7 五、發明說明（2d 的產量。 以RSFCPG，pMWC和pMWG藉著電穿孔法 將棲草歐客氏菌I AM1 5 9 5 (聚團潘朵菌 A J 2 6 6 6 )及棲植物克雷伯氏菌a J 1 3 3 9 9進行 轉形而得到具四環素抗性的變體（米勒j . Η ·:細菌基 因學的簡短課程；手冊、冷泉港實驗室出版，U SA， 1 9 9 2 )° 將所得到的變形菌種和母菌種種入容積爲5 〇毫升的 大型試管內。試管內有5毫升的培養介質，此介質中含有 :40克/升葡萄糖，20克/升硫酸銨，〇 · 5克/升 硫酸鎂七水合物，2克/升磷酸二氫鉀，〇 · 5克/升氯 化鈉，0 · 2 5克/升氯化鈣七水合物，〇 · 〇 2克/升 硫酸鐵七水合物，0 · 0 2克/升硫酸鎂四水合物， 〇· 7 2毫克/升硫酸鋅二水合物，〇 . 6 4毫克/升硫 酸銅五水合物’ 0 · 7 2毫克/升氯化銘六水合物， 0 · 4毫克/升硼酸，1 · 2毫克/升鉬酸鈉二水合物， 2克/升酵母萃取物和3 0克/升碳酸鈣。將菌種在 3 7 C下，一邊搖動一邊培養直到培養介質內的葡萄糖完 全殆盡爲止10 在變體的培養介質中加入2 5毫克/升的四環素。當 培養完畢後，測量在培養介質中所素積的L 一麩胺酸。結 果顯不於表1中。 孓又闬中國國家揉準（CNShVJ規格（210 X 297公餐） -I I I I I I I ^ ·11111111 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 太
•23- 1235177 Α· A/ B7 五、發明說明（2》 表1 : L -麩胺酸的累積量 細菌菌種 L -麩胺酸的累穑量 IAM 1 595 v； 〇·〇克/升 IAM 1 595/RSFCPG 5.0 AJ 1 3399 0.0 AJ13399/RSFCPG 3.1 AJ 1 3399/pMWC 2.5 AJ 1 3399/pMWG 0.8 只有培養介質 0.2 棲草歐文氏菌I AM1 5 9 5及棲植物克雷伯氏菌 AJ 1 3 399都沒有累積L 一麩胺酸，而引入 R S F C P G來加強C S，P E P C和G D Η活性的這些 菌種則各累積了 5 · 0克/升，3 · 1克/升的L 一麩胺 酸。僅加強C S活性之A J 1 3 3 9 9菌種可以累積 2 · 5克/升的L 一麩胺酸。僅加強GDH活性的菌種也 累積了0·8克/升的L一麩胺酸。 (3 )帶有棲植物克雷伯氏菌a J 1 3 3 9 9之部分 a KGDH基因的片段的選殖工作 以P C R的方式來進行選殖工作。所選殖的片段是帶 有棲植物克雷伯氏菌A J 1 3 3 9 9之部分aKGDH基 因的片段，《而所使用的寡核苷酸所各帶有的一段核苷酸序 列是屬於那些已知其核苷酸序列之生物的α K G D Η基因 了乂气炽p、至遣用中國國家標隼規格（210 X 297公餐） (請先閱讀背面之注意事 — i 項再本頁 ------訂---------綉 -24· 1235177 A7 B7 五、發明說明（2$ 同源區域的核苷酸序列。其核苷酸序列爲已知的細菌有： 維湼蘭德固氮菌，枯草芽胞桿菌’大腸桿菌’魅胺酸棒桿 菌，流感:嗜血菌’人類和啤酒酵母菌（歐洲生物化學期刊 ，187冊，235〜239頁，1990 ;分子基因遺 傳學，234冊，285〜296頁’ 1992 ;歐洲生 物化學期刊’第141冊’ 351〜359頁’ 1984 ;微生物，第 142 冊，3347 〜3354，1996 ;科學，269冊，496〜512頁，1995 ;國家 科學院會議，U. S ·Α. 89冊，1963〜19 67 頁.，1992 ;及分子細胞生物學，第9頁，2695〜 27〇5頁，1989)，並以EcoRI點爲引物。 確切地說，下列各項可做爲引物。 (引物1 ) 5’ CCGGGAATTCGGTGACGTNAARTAYCA 31 (SEQ ID NO: 1) (引物2 ) 5' GGCGAATTCGGGAACGGGTASAGYTGYTC 3 * (SEQ ID NO: 2) 用來做爲P c R模板之棲植物克雷伯氏菌 A J 1 3 3 9 9的染色體DNA是利用傳統用來萃取大腸 桿菌之染色體DNA的方法分離出來的（塞布茲（Seibutsu )，高嘉古（Kogaku )，吉肯一秀（Jikken-sho )(生物 工程實驗課本）’由發酵及生物工程學會編輯，曰本， *4 9 7 〜9 8 頁，Baifukan，1 9 9 2 )。 先 閱 tt 背 面 之 注 意 事 項 再 填 寫 頁I w I I I I I I 訂 線
-25- <ί'::一 ：,,ϋϋί.;θ 二 J 费合^;r:*:--.( 1235177 A7 B7 五、發明說明（ PCR的進行步驟如下：一個循環是由：94°C，1 分鐘，50°C 1分鐘及73 °C ’ 3分鐘所組成的。重覆 操作3 0 :次後，以E c 0 R 1分解所產生的D N A片段並 將它插入一個媒介質體PT7KB 1 u ，再以 E c o R I分解以得到重組的質體P T 7 K P。所使用的 媒介質體pT7B 1 u e (抗氨苄青黴素是 > 諾瓦基〃的 產品。所選殖的片段的D N A核苷酸序列及由此序列所編 碼的胺基酸序列顯示於S E Q I D N 〇 : 3。相同的 胺基酸序列單獨地顯示於SEQ ID No : 4。此序 列顯示出與大腸桿菌之α K G D Η - E 1次單位基因（以 下稱爲、s u cA基因〃有82 · 3%的同源性，且它很 淸楚地被鑑定出是屬於棲植物克雷伯氏菌A J 1 3 3 9 9 之sucA基因的一部分。在SEQ ID No :3中 所顯示的核苷酸序列中，核苷酸數1 8〜1 6 5 9是衍生 自s U c A基因，而核苷酸數0〜1 7及1 6 6 0〜 1 6 7 9是衍生自引物。 (4)衍生自棲植物克雷伯氏菌A J 1 3 3 9 9之缺 少aKGDH菌種的取得 依上述方法取得帶有棲植物克雷伯氏菌之部分 s u c A基因的片段，再利用此片段進行同源重組以取得 缺乏α K G D Η活性的棲植物克雷伯氏菌種。 首先，以Bs tEI I分解ρΤ7ΚΡ，然後，將抗 康納黴素基因片段（此片段是從質體p N E 0，藉由 4 4 PCR的方法進行選殖並將b s t E I I點引入其二端， ϋ气ims闬中舀國家標渠（(：·\Ί\·1規格（210 X 297公爱） ---------------------訂---- itf先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 綠«·1 I235177 a_ --- B7 1、發明說明（ 請 先 閲 讀· 背 面 之 注 意 事 項 再 填 寫 本 頁 Ρ ΝΕΟ是購自”法摩西亞（Pharmacia )公司）引入該分 裂點以取得質體pT7KPKm。在此質體中，抗康納黴 素基因是:插入棲植物克雷伯氏菌的s u c A基因之中心部 分。 用來選殖抗康納黴素基因的引物如下。 (引物3 ) 5' TACTGGGTCACCTGACAGCTTATCATCGAT 3» (SEQ ID NO: 5) (引物4 ) 5' CGTTCGGTGACCACCAAAGCGGCCATCGTG 3 * (SEQ ID NO： 6) r·:一.-Γ7.二一；，ί-;θ 二 d f 一 ο-:、 然後，以Κρη I切開？丁71^?1^111。將_段抗 四環素基因片段（此片段是從質體PBR3 2 2藉由 PCR的方法進行選殖，並且將Κρη I點引入其二端， 而PBR322是由Μ荅卡拉·舒如〃公司購得〃）引入 該分裂點以取得質體pT7KPKmTc。在此 P T7KPKmT c質體中，抗康納黴素基因是插入樓植 物克雷伯氏囷之s u c A基因的中心部位’與插入之伺j翼 抗四環素基因一起。 用於選殖抗四環素基因之引物如下。 (引物5 ) 5* GGGGTACCCAAATAGGCGTATCACGAG 3* (SEQ ID NO: 7) (引物6 ) 4¾¾ H迂丐中舀國家標準（C\S) AJ規格（210 χ 297公餐） -27- 1235177 A-
Ai B7 五、發明說明（2会 5· GGGGTACCCGCGATGGATATGTTCTG 31 (SEQ ID NO: 8) 接著：、，以s a c I及X b a I分解質體
pT7KPKmT c以切下一段DNA片段。此段DNA 片段帶有抗康納黴素基因（該基因是插入棲植物克雷伯氏 菌之s u c A基因的中心部位）及插入的側翼抗四環素基 因。然後，將此片段插入一個以Sac I及Xba ι 分解之質體媒介p G P 7 0 4中，以得到質體 pUTONOTK，而該質體媒介PGP704爲一種有 革蘭氏陰性細菌染色體插入的質體媒介（馬它希瑞洛等人 著’細菌學期刊，1990，172，6557〜 6 5 6 7 頁）。 :¾.tl 將棲植物克雷伯氏菌A J 1 3 3 9 9以電穿孔法，利 用依上述法所得之細菌p U Τ Ο N〇T K進行轉形，再根 據對四環素的抗性和對康納黴素的抗性選出一種菌種，此 菌種中之質體pUTONOTK是利用s u cA基因片段 的同源重組法插入染色體中。由此種菌種可進一步根據對 四環素的敏感性和對康納黴素的抗性得到一種缺乏 s u cA的棲植物克雷伯氏菌Aj 1 34 1 0，其中之染 色體上的s u c A基因被其中央部位插有抗康納黴素基因 的S u c A基因所取代。 爲了確保依上述說明所得到之A J 1 3 4 1 0菌種確 實缺少α K G D Η活性，其酶活性是以、利得〃的方法（ ·· L · J ·利得及β · β ·慕克吉，酶學的方法1 969， -28- 先 閱 背 之 注 意 事 項 再 轉 頁ι w I I I I I I 訂
F、1:¾用中g國家標準規格（210 X 297公餐） 1235177 A7 B7 五、發明說明（2自 13 ’ 55〜61頁）測量。結果，在AJ13410菌 種中無法測量到α K G D Η活性，結果顯示於表2中。因 此，可確:定此爲所需要之缺少s u c Α的菌種。 表2 : aKGDH的活性 __ 細菌菌種 a KDGH活性 (△ ABS/分/毫克蛋白質） AJ13399 0.101 AJ13410 <0.002 (5 )缺乏aKGDH活性之棲植物克雷伯氏菌種L -鞋 胺酸生產量的評估 將A J 13399及AJ 13410菌種各種入一個 5〇0毫升大的三角錐瓶中，此三角錐瓶內含有2 0毫升 之培養介質，介質內含有：40克/升葡萄糖，20克/ 升硫酸銨，·0· 5克/升硫酸鎂七水合物，2克/升磷酸 二氫鉀，0 · 5克/升氯化鈉，〇 · 25克/升氯化鈣七 水合物，0 · 02克/升硫酸鐵七水合物，〇 · 〇2克/ 升硫酸鎂四水合物，0 · 7 2毫克/升硫酸鋅二水合物， 〇· 64毫克/升硫酸銅五水合物，〇 · 72毫克/升氯 化鈷六水合物，0 · 4毫克/升硼酸，1 · 2毫克/升鉬 酸鈉二水合物，2克/升酵母萃取物，3 0克/升碳酸鈣 ，200毫克/升一鹽酸L 一賴胺酸，200毫克/升L -蛋胺酸及〜2 0 0毫克/升DL - a，ε —二胺基庚二酸 (DAP)。將此錐瓶在3 7 °C下培養並且一邊搖動直至 Γ請先閱讀背面之注意事項再本頁) 臂
ϋ Mm§ ϋ ϋ —Hi Βϋ 」fJ· I ϋ i ft— I 訂· 综··· •29· 1235177 A7 B7 五、發明說明（2) 培養介質中所含的葡萄糖消耗完畢。當培養完成後，測量 培養介質中所累積的L -魅胺酸及（2 -氧代戊二酸（以下 縮寫爲'α K G ")。結果顯示於表3。 表3 : L -麩胺酸及aKG的累積量 細菌菌種 L-麩胺酸的累積量 KG的累積量 AJ13399 AJ13410 0.0克/升 12.8 0.0g/L 1.5 缺乏aKGDH活性之A J 1 3 4 1 〇菌種累積了 1 2 · 8克/升之L 一麩胺酸並同時累積了 1 · 5克/升 之 α K G。 (6 )將R S F C P G引入缺少α K G D Η活性之棲植物 克雷伯氏菌種中並評估L -麩胺酸的產量 將AJ 134 10菌種以115?0?〇進行轉形，並 將所產生之AJ13410 /RSF-CPG菌種種入 一個5 0 0毫升大小的三角錐瓶內，其中含有2 〇毫升之 培養介質’而介質中含有40克/升葡萄糖、2〇克/升 硫酸錢’ 0 · 5克/升硫酸鎂七水合物，2克/升磷酸二 氫鉀’ 0 · 5克/升氯化鈉，〇 · 25克/升氯化鈣七水 合物，0 · 02克/升硫酸鐵七水合物，〇 · 〇2克/升 硫酸鎂四水合物，〇 · 7 2毫克/升硫酸鋅二水合物， 0 · 6 4毫〜克/升硫酸銅五水合物，〇 · 72毫克/升氯 化銘六水合物，0 · 4毫克/升硼酸，1 · 2毫克/升鉬 用甲國國豕標单（CNS):V]規格（210 X 297 (請先W讀背面之注意事項 I --- 再本頁) I ! 11 訂·！ •線 30- 1235177 A7 B7 五、發明說明（y Γ請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 酸鈉二水合物，2克/升酵母萃取物，2 5毫克/升四環 素’ 3 0克/升碳酸鈴’ 2 0 〇毫克/升一鹽酸l 一賴胺 酸，20:0毫克/升L 一蛋胺酸及2 0 0毫克/升DL -α，ε - DAP。將此錐瓶在3 7 °C下培養並且一邊搖動 直至培養介質中所含有的葡萄糖被用盡。當培養完成後， 測量在培養介質中所累積的L 一麩胺酸及α K G。結果顯 示於表4。 表4 : L 一麩胺酸及α KG的累積量 細菌菌種 L·麩胺酸的累積量 a KG的累積量 AJ13410 12.8g/L 1.5g/L AJ13410/RSFCPG 24.2 0.0 在經由引入RSFCPG後使其CS ，PEPC及G D Η活性放大的菌種內，其中所累積的α κ G量降低但L -麩胺酸的累積量則增加了。 圖形之簡單說明 第1圖顯示出一種具g 1 tA基因，PPC基因和g d hA基因的質體PMWC P G的構造。 第2圖顯示一種具g d hA基因的質體pMWG的構 造。 第3圖顯示一種具g1tA基因的質體pMWG的構 造。 第4圖顯示一種質體RSF — 丁 e t的構造，此質體 -31 · 1235177 A/ _____B7_五、發明說明（2会 具有廣一宿主一範圍質體RSF-1〇10和四環素抗藥 基因之複製源。 第5.圖顯示一種質體R S F C P G的構造，該質體帶 有廣一宿主一範圔質體RSF — 1 〇 1 〇，四環素抗藥基 因，g 1 t基因，PPC基因和gdhA基因的複製源。 (，請先閱讀背面之注意事項再
E ϋ ϋ I ϋ ϋ ϋ ϋ 一： ο- · ϋ H 1 1 ϋ ϋ X 頁) •镍 vrl;二一：，ifnv:i>MV。--.3 二：U.货合作ci一 b-;.( 用甲3國家標規格（210x 297公餐） 32 1235177 A/ B7 五、發明說明（30 序列表 <110>艾吉諾馬托公司 <120>生@ L-麩胺酸的細菌以及生產L·麩胺酸的方法 <130> <150>JP 10-69106 <151〉 1998-03-18 <150〉 JP 10-224909 <151〉 1998-08-07 <160> 8 <170> Patentln Ver. 2.0 <210〉 1 <211> 27 <212> DNA <213〉人工合成序列 <220〉 <22 1 > misc^feature <222> (19) <223> n-a or c or g or t <220> <22 3>人工合成序列的說明：引物 <400> 1 ccgggaattc ggtgacgtna artayca 豕纸張又lii用中國國家標準（CNSM·!規烙（210x297么、g ) <,請先閱讀背面之注意事項再 ·.1 ϋ ϋ n #1 1_1 ϋ^6Jβ 1 ϋ ϋ ϋ 1 a— - 頁) 線 rvr;^fli:i」^i A 4二.^骨合作^^;.、.( -33 - 1235177 A/ B7 五、發明說明（3》 <210> 2 <211> 29
<212〉DRA <213>人工合成序列 <220〉 <223>人工合成序列的說明：引物 <400> 2 ggcgaattcg ggaacgggta sagytgytc
<210〉 3 <211> 1679 <212> DNA <2 13>棲植物克雷伯氏菌 <220>
<221> CDS <222〉（1)…（ 1 679) <400〉 3 ggt gac gtg aaa tat cac atg ggc ttc tct tct gac atg gaa acc gaa 48 Gly Asp Val Lys Tyr His Met Gly Phe Ser Ser Asp Met Glu Thr Glu 15 10 15 ggc ggc ctg gtg cac ctg gcg ctg gcg ttt aac ccg tea cac etc gaa 96 本呔張泛iiS闬中國國家標準（CNS)‘,\4規格（210 X 29：•公餐） ts-先flaii背面之注意事項再 — — — — — —— · I I I I I I . 本頁) •镍 1,3二一：二：「：二.-1>:.5-3、_1..“-;货合^·;;,:.';·. -34- 1235177 A7 B7 五、發明說明（3) er;:,一一；ii-ii>3ί*·1Η(ίν 二.^货合^让3-:〔
Gly Gly ate gtc lie Val etc gac Leu Asp 50 gac gee Asp Ala 65 tee aag Ser Lys aac aac Asn Asn aeg cca Thr Pro cac gtg His Val 130 geg ctg Ala Leu 145 gtg tgc Val Cys aeg cag Thr Gin aaa ate Lys He gat geg Asp Ala 210 gaa tgc Glu Cys 225 tgg tea Trp Ser gtc gag Val Glu
Leu Val His Leu 20 age cc9 gtg gtt Ser Pro Val Val '35 gag ccg age age Glu Pro Ser Ser
Ala Leu Ala Phe Asn Pro 25 teg gtt ege geg Ser Val Arg Ala gca gtg Ala Val geg cgt Ala Arg cag gtg Gin Val 100 tac tgc Tyr Cys 115 aac geg Asn Ala gat ttc Asp Phe tac ege Tyr Arg ccg ctg Pro Leu 180 tac gee Tyr Ala 195 acc gaa Thr Glu aeg ggt Thr Gly 70 ggc tac Gly Tyr 85 ggc ttc Gly Phe acc gat Thr Asp gac gat Asp Asp cgt aat Arg Asn 150 cgt cac Arg His 165 atg tat Met Tyr gac aaa Asp Lys ctg gtt Leu Val gtg gtt gag gaa Val Val Glu Glu 230 ccg tac etc aac Pro Tyr Leu Asn 245 at^aaa cgt ctg Met Lys Arg Leu 260 ate ggg lie Gly 40 aat aaa Asn Lys 55 cag ggc Gin Gly gaa gtg Glu Val act acc Thr Thr ate ggt lie Gly 120 ccg gaa Pro Glu 135 acc ttc Thr Phe ggc cat Gly His cag aaa Gin Lys ett gag Leu Glu 200 aac etc Asn Leu 215 tgg cgt Trp Arg cac gag His Glu cag gag Gin Glu gtg ctg Val Leu 9tg gtt Val Val ggc gga Gly Gly 90 teg aac Ser Asn 105 aaa atg Lys Met gee gtt Ala Val aaa ege Lys Arg aac gaa Asn Glu 170 ate aaa lie Lys 185 cag gac Gin Asp tat cgt Tyr Arg ccg atg Pro Met tgg gat Trp Asp 250 ctg get Leu Ala 265 ccg att Pro lie 60 cag gaa Gin Glu 75 acc gta Thr Val ccg ctg Pro Leu gtt cag Val Gin get ttc Ala Phe 140 gat gtc Asp Val 155 gee gac Ala Asp aaa cat Lys His aaa gtg Lys Val gat geg Asp Ala 220 aac ctg Asn Leu 235 gag age Glu Ser aaa ege Lys Arg
Ser His Leu Glu 30 cgt etc gat cgt 144 Arg Leu Asp Arg 45 act ate cac ggc 192 Thr He His Gly acc ctg aac Thr Leu Asn cgt ate gtt Arg lie Val 95 gat geg ege Asp Ala Arg 110 geg ccg ate Ala Pro lie 125 gtt acc ege Val Thr Arg ttc ate gac Phe lie Asp gag ccg age Glu Pro Ser 175 ccg acc ccg Pro Thr Pro 190 teg acc ctg Ser Thr Leu 205 ctg gat gee Leu Asp Ala atg 240 Met 80 ate 288 lie tee 336 Ser ttc 384 Phe ctg 432 Leu ctg 480 Leu 160 gca 528 Ala ege 576 Arg gaa 624 Glu ggc 672 Gly cac tee ttt acc 720 His Ser Phe Thr 240 tac ccg agt aaa 768 Tyr Pro Ser Lys 255 att age act gtg 816 lie Ser Thr Val 270 (海先閱讀背面之注意事項再3本頁) 訂---------線 t 方、用中國國家標单（CNShVJ規格（210 x 297公餐） 35- 1235177 A7 B7 五、發明說明（d ccg gac age att gaa atg cag tet ege gtg geg aag att tat ggc gat Pro Asp Ser lie Glu Met Gin Ser Arg Val Ala Lys lie Tyr Gly Asp 275 280 285 ege cag geg atg gee gee ggc gag aag ctg ttc gac tgg ggg 9卬 9cg A「g Gin Ala Met Ala Ala Gly Glu Lys Leu Phe Asp T卬 Gly Ala Ala 290 295 300 gaa aac ctg get tac gee aeg ctg gtt gat gaa ggg att ccg att ege Glu Asn Leu Ala Tyr Ala Thr Leu Val Asp Glu Gly He Pro lie Arg 305 310 315 320 ctg tee ggt gaa gac tee ggt ege ggt aeg ttc ttc cac ege cat tee Leu Ser Gly Glu Asp Ser Gly A「g Gly Th「 Phe Phe His Arg His Se「 325 330 335 gtg att cat aac cag gtg aac ggt teg acc tac aeg ccg ctg cag cat Val He His Asn Gin Val Asn Gly Ser Thr Tyr Thr Pro Leu Gin His 340 345 350 gtg cat aac ggc cag gag cat ttc aaa gtc tgg gac tee gtg ett tet Val His Asn Gly Gin Glu His Phe Lys Val Trp Asp Ser Val Leu Se「 355 360 365 gaa gaa geg gtg ctg geg ttc gaa tac ggc tac gee act geg gaa ccg Glu Glu Ala Val Leu Ala Phe Glu Tyr Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Pro 370 375 380 ege acc ctg act ate tgg gaa geg cag ttc ggt gac ttt get aac ggc Arg Thr Leu Thr He Trp Glu Ala Gin Phe Gly Asp Phe Ala Asn Gly 385 390 395 400 get caa gtg gtg ate gat cag ttc ate age tee ggc gag cag aag tgg Ala Gin Val Val lie Asp Gin Phe lie Ser Ser Gly Glu Gin Lys Trp 405 410 415 ggc egg atg tgt ggc ctg gtc atg ctg ctg ccg cac ggc tac gaa ggc Gly Arg Met Cys Gly Leu Val Met Leu Leu Pro His Gly Tyr Glu Gly 420 425 430 cag ggc ccg gag cac tee tee geg cgt ctg gaa ege tat ctg cag ctg Gin Gly Pro Glu His Ser Ser Ala Arg Leu Glu Arg Tyr Leu Gin Leu 435 440 445 tgt get gaa cag aat atg cag gtt tgt gtg cca teg act ccg get cag Cys Ala Glu Gin Asn Met Gin Val Cys Val Pro Ser Thr Pro Ala Gin 450 455 460 gtt tac cac atg ctg cgt cgt cag geg ctg ege ggt atg cgt cgt ccg Val Tyr His Met Leu Arg Arg Gin Ala Leu Arg Gly Met Arg Arg Pro 465 470 475 480 ctg gtg gtg atg teg ccg aaa tet ctg ctg ege cat ccg ctg geg gtc Leu Val Val Met Ser Pro Lys Ser Leu Leu Arg His Pro Leu Ala Val 485 490 495 tee age ctg gac gag ctg geg aac ggc acc ttc ctg ccg gee ate ggt Ser Ser Leu Asp Glu Leu Ala Asn Gly Thr Phe Leu Pro Ala lie Gly 5J30 ' 505 510 gaa ate gat gac etc gac ccg aaa geg gtg aag cgt gtt gtc ctg tgc Glu He Asp Asp Leu Asp Pro Lys Ala Val Lys Arg Val Val Leu Cys 864 912 960 1008 1056 1104 1152 1200 1248 1296 1344 1392 1440 1488 1536 1584 -I I I I I I I « — — — — — — I— Tt#先閱讀背面之注意事項再9本頁) 5¾¾泛闬中國國家標進（CNShVJ規格（210 x 297么、莛） -36 1235177 A7 ______B7___—· 五、發明說明（ 515 520 525 tct ggt aag gtt tat tac gat ctg ctg gaa caa cgc cgt aag aac gac 1632 Ser Gly Lys Val Tyr Tyr Asp Leu Leu Glu Gin Arg Arg Lys Asn Asp 530 535 540 caa aaa gat gtc get ate gtg cgt ata gaa caa ctg tac ccg ttc cc 1679 Gin Lys Asp Val Ala lie Val Arg lie Glu Gin Leu Tyr Pro Phe 545 550 555 <210〉 4 <211> 559 <212〉 PRT <2 13>棲植物克雷伯氏菌 <400〉 4 Gly Asp Val Lys Tyr His t 费 合
Gly Gly Leu Val His Leu 20 lie Val Ser Pro Val Val 35 Leu Asp Glu Pro Ser Ser • 50 Asp Ala Ala Val Thr Gly 65 70 Ser Lys Ala Arg Gly Tyr 85 Asn Asn Gin Val Gly Phe 100 Thr Pro Tyr Cys Thr Asp 115 His Val Asn Ala Asp Asp 130 Ala Leu Asp Phe Arg Asn 145 150 Val Cys Tyr Arg Arg His • 165 Th「 Gin Pro Leu Met Tyr 180 Lys lie Tyr Ala Asp Lys 195 Asp Ala Thr GJu Leu Val 210 ^
Met Gly Phe Ser Ser Asp Met Glu Thr Glu 10 15 Ala Leu Ala Phe Asn Pro Ser His Leu Glu 25 30 He Gly Ser Val Arg Ala Arg Leu Asp Arg 40 45 Asn Lys Val Leu Pro lie Thr lie His Gly 55 60 Gin Gly Val Val Gin Glu Thr Leu Asn Met 75 80 Glu Val Gly Gly Thr Val Arg lie Val He 90 95 Thr Thr Ser Asn Pro Leu Asp Ala Arg Ser 105 110 lie Gly Lys Met Val Gin Ala Pro He Phe 120 125 Pro Glu Ala Val Ala Phe Val Thr Arg Leu 135 140 Thr Phe Lys Arg Asp Val Phe lie Asp Leu 155 160 Gly His Asn Glu Ala Asp Glu Pro Ser Ala 170 175 Gin Lys He Lys Lys His Pro Thr Pro Arg 185 190 Leu Glu Gin Asp Lys Val Ser Thr Leu Glu 200 205 Asn Leu Tyr Arg Asp Ala Leu Asp Ala Gly 215 220 ---------------------訂. Γ請先wti背面之注意事項再填寫本頁) 線«li- 本纸張用中國國家標準（CNShVl規格（210 X 297么、餐） -37- 1235177 A： B7 五、發明說明（3含
Glu Cys Val Val Glu Glu Trp A「g Pro Met Asn Leu His Se「Phe Th「 225 230 235 240
Trp Ser Pro Tyr Leu Asn His Glu Trp Asp Glu Ser Tyr Pro Ser Lys 245 250 255
Val Glu Met Lys Arg Leu Gin Glu Leu Ala Lys Arg lie Ser Thr Val 260 265 270
Pro Asp Ser lie Glu Met Gin Ser Arg Val Ala Lys lie Tyr Gly Asp 275 280 285
Arg Gin Ala Met Ala Ala Gly Glu Lys Leu Phe Asp Trp Gly Ala Ala 290 295 300
Glu Asn Leu Ala Tyr Ala Thr Leu Val Asp Glu Gly lie Pro lie Arg 305 310 315 320
Leu Ser Gly Glu Asp Ser Gly Arg Gly Thr Phe Phe His Arg His Ser 325 330 335
Val He His Asn Gin Val Asn Gly Ser Thr Tyr Thr Pro Leu Gin His 340 345 350
Val His Asn Gly Gin Glu His Phe Lys Val Trp Asp Ser Val Leu Ser 355 360 365
Glu Glu Ala Val Leu Ala Phe Glu Tyr Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Pro 370 375 380
Arg Thr Leu Thr He Trp Glu Ala Gin Phe Gly Asp Phe Ala Asn Gly 385 390 395 400
Ala Gin Val Val lie Asp Gin Phe He Ser Ser Gly Glu Gin Lys Trp 405 410 415
Gly Arg Met Cys Gly Leu Val Met Leu Leu Pro His Gly Tyr Glu Gly 420 425 430
Gin Gly Pro Glu His Ser Ser Ala Arg Leu Glu Arg Tyr Leu Gin Leu 435 440 445
Cys Ala Glu Gin Asn Met Gin Val Cys Val Pro Ser Thr Pro Ala Gin 450 455 460
Val Tyr His Met Leu Arg Arg Gin Ala Leu Arg Gly Met Arg Arg Pro 465 470 475 480
Leu Val Val Met Ser Pro Lys Ser Leu Leu Arg His Pro Leu Ala Val r.' :η、 485 490 495
Ser Ser Leu Asp Glu Leu Ala Asn Gly Thr Phe Leu Pro Ala lie Gly 500 505 510
Glu He Asp Asp Leu Asp Pro Lys Ala Val Lys Arg Val Val Leu Cys 515 520 525
Ser Gly Lys Val Tyr Tyr Asp Leu Leu Glu Gin Arg Arg Lys Asn Asp 530 535 540
Gin Lys Asp Val Ala He Val Arg lie Glu Gin Leu Tyr Pro Phe J45 550 555 合 又1迓用中S國家標退（CNSh.Vl規fM210 x 297公莛） -38- 1235177 A/ B7 ^潘^.11^^4马*^二^费合作以,:'·-; 五、發明說明（3合 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213>人工合成序列 <220> <223>人工合成序列的說明：引物 <400> 5 tactgggtca cctgacagct tatcatcgat <210> 6 <21 1〉30 <212〉DNA <213>人工合成序列 <22〇> <223>人工合成序列的說明：引物 <400> 6 cgttcggtga ccaccaaagc ggccatcgtg <210> 7 <211> 27 <212〉DNA <213>人工合成序列 <220> <223>人工合成序列的說明：引物 <400> 7 -H ·1 ϋ 1_1 ϋ ϋ 一dJ· 1 I ϋ ϋ ϋ ϋ < Γ請先閱‘讀背面之注意事項再填寫本頁) #
;纸張又12甲中S國家標車（C\S)A4規格（210 x 297公莛） -39- 1235177 __B7五、發明說明（3分 ggggtaccca aataggctgta tcacgag <210〉8 :、 <211> 26 <212〉DNA <213>人工合成序列 <220> <223>人工合成序列的說明：引物 <400〉 8 螓 ggggtacccg cgatggatat gttctg
-rG ^:-1二， 二.n.費合作吐 -40-

Claims (1)

1235177 Α8 Β8 C8 D8 申請專利範圍 ϋ 8. i':;條正 年戶 !曰 補无 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 公告本: 第88 1 04257號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國93年8月16日修正 1 ·〜種衍生自棲植物克雷伯氏菌（Klebsiella planticola)或聚團潘朵菌（Pantoea agglomerans)之微生物， 其具有產製L -麩胺酸之能力且其經修飾以增加至少一種 選自檸檬酸合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧基酶或麩胺酸脫氫 酶之酶的活性。 2 •一種衍生自棲植物克雷伯氏菌（Klebsiella plantic〇la)之微生物，其具有產製L-麩胺酸之能力且其經 修飾以增加至少一種選自檸檬酸合成酶、磷酸烯醇丙酮 酸羧基酶或麩胺酸脫氫酶之酶的活性且降低或缺乏α -酮 基戊二酸脫氫酶之活性。 3 .一種衍生自棲植物克雷伯氏菌（Klebsiella plan tic oU)之微生物，其具有產製L 一麩胺酸之能力且其 經修飾以降低或缺之α -酮基戊二酸脫氫酶之活性。 4 . 一種產製L -麩胺酸之方法，其包含於液態培養 基中培養申請專利範圍第1至3項中任一項之微生物以產 製並於該培養基中累積L -麩胺酸，及自該培養基收集麩 胺酸。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
TW088104257A 1998-03-18 1999-03-18 L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid TWI235177B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP6910698 1998-03-18
JP22490998 1998-08-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TWI235177B true TWI235177B (en) 2005-07-01

Family

ID=26410290

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW088104257A TWI235177B (en) 1998-03-18 1999-03-18 L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid

Country Status (14)

Country Link
US (2) US6197559B1 (zh)
EP (1) EP0955368B1 (zh)
KR (1) KR100638497B1 (zh)
CN (2) CN1238515C (zh)
AU (1) AU746542B2 (zh)
BR (1) BR9901174B1 (zh)
DE (1) DE69941756D1 (zh)
ES (1) ES2334592T3 (zh)
ID (1) ID22267A (zh)
MY (1) MY124660A (zh)
PE (1) PE20000355A1 (zh)
PL (1) PL194140B1 (zh)
RU (1) RU2188236C2 (zh)
TW (1) TWI235177B (zh)

Families Citing this family (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU756507B2 (en) * 1998-03-18 2003-01-16 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid
US7247459B1 (en) * 1998-10-19 2007-07-24 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid producing bacterium and process for producing L-glutamic acid
JP2003159065A (ja) * 1999-07-19 2003-06-03 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
JP4427878B2 (ja) 1999-08-20 2010-03-10 味の素株式会社 析出を伴う発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
DE19958160A1 (de) * 1999-12-02 2001-06-07 Degussa Neue für das gpm-Gen codierende Nukleotidsequenzen
US20030017554A1 (en) * 2000-11-15 2003-01-23 Mechthild Rieping Process for the fermentative preparation of L-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
JP4599726B2 (ja) 2001-02-20 2010-12-15 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸の製造法
JP4292724B2 (ja) * 2001-02-20 2009-07-08 味の素株式会社 有機態窒素含有組成物及びそれを含む肥料
DE10116518A1 (de) * 2001-04-03 2002-10-17 Degussa Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
US7052883B2 (en) 2001-04-03 2006-05-30 Degussa Ag Process for the production of L-amino acids using strains of the family Enterobacteriaceae that contain an attenuated fruR gene
US20030059903A1 (en) * 2001-04-03 2003-03-27 Degussa Ag Process for the production of L-amino acids using strains of the family enterobacteriaceae that contain an attenuated aceA gene
JP2005510999A (ja) 2001-04-04 2005-04-28 ジェネンコー・インターナショナル・インク 宿主細胞における生成物の生産方法
US7241587B2 (en) * 2001-04-04 2007-07-10 Genencor International, Inc. Method of uncoupling the catabolic pathway of glycolysis from the oxidative membrane bound pathway of glucose conversion
DE10213365A1 (de) 2002-03-26 2003-10-09 Geka Brush Gmbh Haarfärbe-oder Kosmetik-Einheit
CN100383252C (zh) * 2003-05-07 2008-04-23 味之素株式会社 生产l-谷氨酸的方法
CN100510092C (zh) * 2003-06-10 2009-07-08 味之素株式会社 生产l-谷氨酸的方法
JP2006230202A (ja) * 2003-06-23 2006-09-07 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸の製造法
US7344874B2 (en) 2004-03-04 2008-03-18 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid
US7501282B2 (en) * 2005-02-25 2009-03-10 Ajinomoto Co., Inc. Plasmid autonomously replicable in Enterobacteriaceae family
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
WO2007119574A2 (en) 2006-03-23 2007-10-25 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using bacterium of the enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small rna
EP2007873B1 (en) 2006-04-18 2015-11-18 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE sfmACDFH-fimZ CLUSTER OR THE fimZ GENE
JP2009165355A (ja) 2006-04-28 2009-07-30 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
EP2054500B1 (en) 2006-08-18 2016-11-23 Ajinomoto Co., Inc. An l-glutamic acid producing bacterium and a method for producing l-glutamic acid
JP2010017082A (ja) 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2006143864A (ru) 2006-12-12 2008-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
CN101627110B (zh) 2007-01-22 2014-08-13 味之素株式会社 生产l-氨基酸的微生物和l-氨基酸的生产方法
JP2010088301A (ja) 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010110216A (ja) 2007-02-20 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法
JP2010110217A (ja) * 2007-02-22 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
JP2010130899A (ja) 2007-03-14 2010-06-17 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
EP2149608A4 (en) 2007-04-16 2013-02-20 Ajinomoto Kk PROCESS FOR PRODUCING AN ORGANIC ACID
WO2008133161A1 (ja) 2007-04-17 2008-11-06 Ajinomoto Co., Inc. カルボキシル基を有する酸性物質の製造法
CN101939412B (zh) 2007-09-04 2016-01-20 味之素株式会社 生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法
WO2009072562A1 (ja) 2007-12-06 2009-06-11 Ajinomoto Co., Inc. 有機酸の製造方法
JP2011067095A (ja) 2008-01-10 2011-04-07 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
EP2248906A4 (en) 2008-01-23 2012-07-11 Ajinomoto Kk PROCESS FOR THE PREPARATION OF L-AMINO ACID
RU2008105793A (ru) 2008-02-19 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена
EP2343371B1 (en) 2008-09-05 2015-10-21 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid
EP2336347B1 (en) 2008-09-08 2017-03-15 Ajinomoto Co., Inc. An l-amino acid-producing microorganism and a method for producing an l-amino acid
RU2411289C2 (ru) * 2008-09-30 2011-02-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Бактерия, принадлежащая к роду pantoea, - продуцент l-аспартата или метаболита, являющегося производным l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболита, являющегося производным l-аспартата
BRPI1007069A2 (pt) 2009-01-23 2015-08-25 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido.
JPWO2011013707A1 (ja) 2009-07-29 2013-01-10 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2460793C2 (ru) 2010-01-15 2012-09-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
JP2013074795A (ja) 2010-02-08 2013-04-25 Ajinomoto Co Inc 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法
RU2471868C2 (ru) 2010-02-18 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот
RU2501858C2 (ru) 2010-07-21 2013-12-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
RU2482188C2 (ru) 2010-07-21 2013-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE
CN103547671A (zh) * 2010-11-22 2014-01-29 美国佛罗里达大学研究基金会公司 制造d型乳酸的耐热凝结芽孢杆菌的基因工程
JP2014036576A (ja) 2010-12-10 2014-02-27 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2496867C2 (ru) 2011-04-25 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии
RU2011134436A (ru) 2011-08-18 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности
CN103930557A (zh) 2011-11-11 2014-07-16 味之素株式会社 利用发酵法制造目标物质的方法
CN103205390A (zh) * 2013-04-12 2013-07-17 北京轻发生物技术中心 一种l-谷氨酸基因工程菌及其应用
RU2013118637A (ru) 2013-04-23 2014-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK
JP2016165225A (ja) 2013-07-09 2016-09-15 味の素株式会社 有用物質の製造方法
CN103397006A (zh) * 2013-08-14 2013-11-20 中国科学院天津工业生物技术研究所 来源于产酸克雷伯氏菌的核糖醇脱氢酶（rdh）及其编码基因与应用
RU2013140115A (ru) 2013-08-30 2015-03-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB
JP2016192903A (ja) 2013-09-17 2016-11-17 味の素株式会社 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法
JP5958653B2 (ja) 2013-10-02 2016-08-02 味の素株式会社 アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法
RU2013144250A (ru) 2013-10-02 2015-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР
JP6459962B2 (ja) 2013-10-21 2019-01-30 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2014105547A (ru) 2014-02-14 2015-08-20 Адзиномото Ко., Инк. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL
RU2015120052A (ru) 2015-05-28 2016-12-20 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA
BR112018017227A2 (pt) 2016-02-25 2019-02-05 Ajinomoto Kk método para produzir um l-aminoácido
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
KR102008673B1 (ko) 2017-12-07 2019-08-09 대상 주식회사 락토바실러스 퍼멘텀 c-7a 균주 및 이의 용도
BR112020004575B1 (pt) 2018-03-09 2023-03-14 Cj Cheiljedang Corporation Polinucleotídeo, vetor, microrganismo do gênero corynebacterium, métodos para produção de substância-alvo e para preparar uma composição fermentada.
EP3778901A4 (en) 2018-03-27 2021-12-22 CJ Cheiljedang Corporation NEW PROMOTER AND PROCESS FOR THE PRODUCTION OF L-AMINO ACID USING THE PROMOTER
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
BR112021014194A2 (pt) 2019-02-22 2021-12-28 Ajinomoto Kk Método para a produção de um l-aminoácido
BR112021017870A2 (pt) 2019-04-05 2021-12-07 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido
JP2022550084A (ja) 2019-09-25 2022-11-30 味の素株式会社 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法
CN110951766B (zh) * 2019-12-23 2023-02-24 江西农业大学 利用重组谷氨酸棒杆菌代谢甘露醇合成l-鸟氨酸的方法
WO2022055094A1 (ko) 2020-09-09 2022-03-17 씨제이제일제당 (주) L-글루탐산 생산 재조합 미생물 및 이를 이용한 l-글루탐산의 제조방법
KR102339271B1 (ko) 2021-05-07 2021-12-14 씨제이제일제당 주식회사 신규 프로모터 및 이의 용도
KR102339264B1 (ko) 2021-05-07 2021-12-14 씨제이제일제당 주식회사 신규 프로모터 및 이의 용도
EP4105332A4 (en) * 2021-05-07 2022-12-28 CJ Cheiljedang Corporation NOVEL PROMOTER AND USE THEREOF
KR102665227B1 (ko) 2021-06-30 2024-05-10 씨제이제일제당 주식회사 고농도 l-글루탐산을 생산하기 위한 균주 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산방법
KR20230042953A (ko) 2021-09-23 2023-03-30 씨제이제일제당 (주) 고농도 l-글루탐산을 생산하기 위한 균주 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산방법
US20240117393A1 (en) 2022-09-30 2024-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid
CN116731950A (zh) * 2023-08-10 2023-09-12 中国科学院天津工业生物技术研究所 谷氨酸棒杆菌抗逆工程菌及其在生产酸性生物基化学品中应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2490495A1 (fr) * 1980-09-19 1982-03-26 Roussel Uclaf Nouvelles glycoproteines hydrosolubles immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant
JPS61268183A (ja) 1985-05-24 1986-11-27 Wakamoto Pharmaceut Co Ltd Ｄｎａ，組換体ｄｎａおよびそれらを含む微生物
IL80510A0 (en) 1985-11-08 1987-02-27 Genetics Inst Improved yeast strains
JPH06825A (ja) 1992-06-09 1994-01-11 Minnesota Mining & Mfg Co <3M> 樹脂中空製品の金属中子の溶融除去方法
JP3880636B2 (ja) * 1994-01-10 2007-02-14 味の素株式会社 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
WO1997008294A1 (fr) * 1995-08-23 1997-03-06 Ajinomoto Co., Inc. Procede de production d'acide l-glutamique par fermentation
JPH09285294A (ja) 1996-04-23 1997-11-04 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
US6280986B1 (en) * 1997-12-01 2001-08-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Stabilization of pet operon plasmids and ethanol production in bacterial strains lacking lactate dehydrogenase and pyruvate formate lyase activities

Also Published As

Publication number Publication date
US6682912B2 (en) 2004-01-27
MY124660A (en) 2006-06-30
PL194140B1 (pl) 2007-04-30
DE69941756D1 (de) 2010-01-21
EP0955368B1 (en) 2009-12-09
BR9901174B1 (pt) 2011-10-04
CN1233661A (zh) 1999-11-03
CN1238515C (zh) 2006-01-25
PE20000355A1 (es) 2000-04-24
AU746542B2 (en) 2002-05-02
EP0955368A3 (en) 2001-09-19
US6197559B1 (en) 2001-03-06
EP0955368A2 (en) 1999-11-10
AU2122499A (en) 1999-09-30
PL332071A1 (en) 1999-09-27
KR100638497B1 (ko) 2006-10-26
RU2188236C2 (ru) 2002-08-27
ES2334592T3 (es) 2010-03-12
CN1626667A (zh) 2005-06-15
BR9901174A (pt) 2000-03-28
US20020004231A1 (en) 2002-01-10
CN1291026C (zh) 2006-12-20
KR19990077974A (ko) 1999-10-25
ID22267A (id) 1999-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI235177B (en) L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid
TWI235179B (en) L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid
TWI716841B (zh) 新穎啟動子及使用該啟動子製造l-胺基酸的方法
Mitsuhashi Current topics in the biotechnological production of essential amino acids, functional amino acids, and dipeptides
TWI250211B (en) Method for producing l-glutamic acid by fermentation accompanied by precipitation
CN100529094C (zh) L-氨基酸的生产方法
KR102223521B1 (ko) 안트라닐산 메틸 생성능을 가지는 재조합 미생물 및 이를 이용한 안트라닐산 메틸의 제조방법
JP2001037494A (ja) 変異型イソプロピルマレートシンターゼをコードするｄｎａ、ｌ−ロイシン生産性微生物、および、ｌ−ロイシンの製造法
JPH09285294A (ja) 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
CN101960005B (zh) 5’-鸟苷酸的生产方法
FR2844277A1 (fr) Bacterie produisant un l-aminoacide et procede de production de ce l-aminoacide
KR100815041B1 (ko) 아미노산 생산의 대사 공학
CN112888776B (zh) 生产目标物质的方法
CN109370967B (zh) 一种工程菌及其在酪醇生产中的应用
CN100510092C (zh) 生产l-谷氨酸的方法
JP3921866B2 (ja) Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造法
WO2018077159A1 (zh) 氨基酸衰减子的改造方法及其在生产中的应用
CN101993904A (zh) 5’-鸟苷酸的生产方法
CN101952418B (zh) 生产(2s，3r，4s)-4-羟基-l-异亮氨酸的方法
JP4144098B2 (ja) Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造法
JPS59156292A (ja) トリプトフアンの製造法
JPH01187093A (ja) 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法
JPS59192096A (ja) 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法
JPS5971697A (ja) 発酵法によるｌ−チロシンの製造法
JPS61128897A (ja) 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees