JPS5971697A - 発酵法によるｌ−チロシンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−チロシンの製造法Info
- Publication number
- JPS5971697A JPS5971697A JP18098382A JP18098382A JPS5971697A JP S5971697 A JPS5971697 A JP S5971697A JP 18098382 A JP18098382 A JP 18098382A JP 18098382 A JP18098382 A JP 18098382A JP S5971697 A JPS5971697 A JP S5971697A
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- Japan
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- tyrosine
- producing
- mutant
- genus
- phenylalanine
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるし一チロンノ（以下、単にチｐ
シ／と記す）の製造法に関する。
シ／と記す）の製造法に関する。
発酵法によるＬ−チロジノの製造法としては、ミクロフ
ッカス属のＬ−フェニルアラニン要求性変異株を使用す
る方法、（特公昭３８−１４３９５号公報）、ブレビバ
クテリウム属、キャンディダ属、ハチ／ｌ／ ス属に属
しメタフルオルフェニルアラニンに耐性な有する変異株
￥使用する方法（特公昭４！Ｉｆ−３８８３７及び特開
昭４８−６７４８９ ）等が知られている。
ッカス属のＬ−フェニルアラニン要求性変異株を使用す
る方法、（特公昭３８−１４３９５号公報）、ブレビバ
クテリウム属、キャンディダ属、ハチ／ｌ／ ス属に属
しメタフルオルフェニルアラニンに耐性な有する変異株
￥使用する方法（特公昭４！Ｉｆ−３８８３７及び特開
昭４８−６７４８９ ）等が知られている。
本発明者らはバチルス属の微生物を用いて更に糖類等の
炭素源からチロジノを直接発酵法により安価ｔこ製造す
る方法な開発すべく研究な行った結果、バチルス属の上
記のようなアナログ耐性の他Ｉｃ 更ニＬ−フェニルア
ラニ／要求性を有スる微生物の中に、従来知られている
ものより更ｔこ大量のチロジノを垂産する能力を有する
菌株があることを見い出した。この発明はこの知見なこ
基づいて更に研究の結果完成されたものである。即ち、
本発明はバチルス属に属し、チロノンアナログ耐性及び
Ｌ−フェニルアラニン要求性を有し、かつＬ−チロシフ
生産能を有する微生物を液体培地中て好気的に培養し、
培養液中にＬ−チロジノを生成、蓄積せしめ、これを採
取するこ七を特徴とする発酵法によるＬ−チロジノの製
造法に係るものである。
炭素源からチロジノを直接発酵法により安価ｔこ製造す
る方法な開発すべく研究な行った結果、バチルス属の上
記のようなアナログ耐性の他Ｉｃ 更ニＬ−フェニルア
ラニ／要求性を有スる微生物の中に、従来知られている
ものより更ｔこ大量のチロジノを垂産する能力を有する
菌株があることを見い出した。この発明はこの知見なこ
基づいて更に研究の結果完成されたものである。即ち、
本発明はバチルス属に属し、チロノンアナログ耐性及び
Ｌ−フェニルアラニン要求性を有し、かつＬ−チロシフ
生産能を有する微生物を液体培地中て好気的に培養し、
培養液中にＬ−チロジノを生成、蓄積せしめ、これを採
取するこ七を特徴とする発酵法によるＬ−チロジノの製
造法に係るものである。
本発明でいうチロシンアナログとしてはメターフルオロ
フェニルアラニ／、メターフルオロチロ７ン、バラ−フ
ルオルフェニルアラニン、メターアミノフエニ／レアラ
ニ／、ベーターフェニルセリ、ノ、パラクロルフェニル
アラニン等が挙げられる。
フェニルアラニ／、メターフルオロチロ７ン、バラ−フ
ルオルフェニルアラニン、メターアミノフエニ／レアラ
ニ／、ベーターフェニルセリ、ノ、パラクロルフェニル
アラニン等が挙げられる。
本発明の方法で使用される変異株は、バチルス属に属し
チロシンアナログ耐性及びＬ−フェニルアラニア要求性
を有し、かつチロシンを生産スる能力な有する微生物で
あり、例えば、次のような変異株が使用される。
チロシンアナログ耐性及びＬ−フェニルアラニア要求性
を有し、かつチロシンを生産スる能力な有する微生物で
あり、例えば、次のような変異株が使用される。
バチルス・ズブチリス ＡＪ １１９６５ ＦＥＲＭ
−Ｐ ６７５７（ｍ−Ｆ−Ｔｙｒｒ、 ｐｈｅ”−） バチルス・ズブチリス ＡＪｌ １９６８ ＦＥＲＭ
−Ｐ ６７５Ｂ（ｍ−Ｆ−ｐｈｅ ｒ、 ｐｈｅ ）
（注）ｍ−Ｆ−Ｔｙｒｒ：メターフルオローチｐシ／耐
性ｍ−Ｆ−ｐｈｅｒ：メターフルオローフェニルアラニ
ア耐性ｐｈｅ −： Ｌ−７エニルアラニノ要求性これ
ら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリプト
ファン７すｐグ耐性のトリプトファ／生産菌、例えばバ
チルス・ズブチリスＡＪ３２５７ＦＥＲＭ−Ｐ４６４
（特公昭４９−３８８３７号）） 等を親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えハ、紫
外線照射或はＮ−メチル−Ｎ１−ニトロ−Ｎ−ニトロソ
グアニジ／（以下、ＮＧと略す。）亜硝酸等の化学薬剤
処理を施し、変異処理した菌株からレプリカ法による常
法に従い生育にＬ−フェールアラ＝７を要求する菌株な
分離することによって得られる。
−Ｐ ６７５７（ｍ−Ｆ−Ｔｙｒｒ、 ｐｈｅ”−） バチルス・ズブチリス ＡＪｌ １９６８ ＦＥＲＭ
−Ｐ ６７５Ｂ（ｍ−Ｆ−ｐｈｅ ｒ、 ｐｈｅ ）
（注）ｍ−Ｆ−Ｔｙｒｒ：メターフルオローチｐシ／耐
性ｍ−Ｆ−ｐｈｅｒ：メターフルオローフェニルアラニ
ア耐性ｐｈｅ −： Ｌ−７エニルアラニノ要求性これ
ら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリプト
ファン７すｐグ耐性のトリプトファ／生産菌、例えばバ
チルス・ズブチリスＡＪ３２５７ＦＥＲＭ−Ｐ４６４
（特公昭４９−３８８３７号）） 等を親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えハ、紫
外線照射或はＮ−メチル−Ｎ１−ニトロ−Ｎ−ニトロソ
グアニジ／（以下、ＮＧと略す。）亜硝酸等の化学薬剤
処理を施し、変異処理した菌株からレプリカ法による常
法に従い生育にＬ−フェールアラ＝７を要求する菌株な
分離することによって得られる。
その他、本発明の変異株はバチルス属の野生株を親株と
し、これにＬ−，７エ＝ （Ｖアラニン宇鬼比−一１−
票＝２付与した後トリプトファノアナｐグ耐性な付与す
ることによっても誘導することができる。
し、これにＬ−，７エ＝ （Ｖアラニン宇鬼比−一１−
票＝２付与した後トリプトファノアナｐグ耐性な付与す
ることによっても誘導することができる。
Ｕ、下の実験例にて本発明のバチルス・ズブチリスＡＪ
１１９．６５のメターフルオローチロジノに対する耐性
度及びＬ−フェニルアラニア要求性をボす。
１１９．６５のメターフルオローチロジノに対する耐性
度及びＬ−フェニルアラニア要求性をボす。
実施例
第１表に示す組成の最少培地な直径１６．５Ｗ＃の試験
管に４．Ｏｍｅ宛分注し、１１０℃で１０分間加熱した
。これ？こ別途フィルターで濾過（除菌）シたメタ−フ
ルオロチロジノ溶液’ｘ、第２表に示す濃度となるよう
に加えて点体培地を調製した。
管に４．Ｏｍｅ宛分注し、１１０℃で１０分間加熱した
。これ？こ別途フィルターで濾過（除菌）シたメタ−フ
ルオロチロジノ溶液’ｘ、第２表に示す濃度となるよう
に加えて点体培地を調製した。
上記培地にメターフルオロチロジノを含まない最少培地
で２４時間培養して得られたバチルス・ズブチリスＡＪ
１１９６５及びその親株であるＡＪ１１７０８の培養液
を夫々各０．１ｍｆｆ宛接種し、３０℃で４８時間振盪
培養を行い、培養液の５７０ｎｍ の吸光度を測定した
。その結果を第２表に示す。
で２４時間培養して得られたバチルス・ズブチリスＡＪ
１１９６５及びその親株であるＡＪ１１７０８の培養液
を夫々各０．１ｍｆｆ宛接種し、３０℃で４８時間振盪
培養を行い、培養液の５７０ｎｍ の吸光度を測定した
。その結果を第２表に示す。
グルツース ２０ ｆ／／を硫酸ア
／モニウム １０〃 ＫＨ２ＰＯ４１〃 ＭｇＳＯ４・７８２０ ０．４＃ＦｅＳＯ４
・７Ｈ７Ｎ２Ｏ１０／ｌ ＭｎＳＯ４・４ Ｎ２０ １０ ＃第２表
耐性株の生嘔度 濃度（７，／ｍｅ） ＡＪ１１９６５ ＡＪ１
１７０８０ １’ＯＯ１００１０
００１０２５５ ２０００１００１０ ３０００１０１０ ４０００９５０ ５０００８００ 次に、同様の方法でＬ−フェニルアラニ／要求性を第３
表に示す。
／モニウム １０〃 ＫＨ２ＰＯ４１〃 ＭｇＳＯ４・７８２０ ０．４＃ＦｅＳＯ４
・７Ｈ７Ｎ２Ｏ１０／ｌ ＭｎＳＯ４・４ Ｎ２０ １０ ＃第２表
耐性株の生嘔度 濃度（７，／ｍｅ） ＡＪ１１９６５ ＡＪ１
１７０８０ １’ＯＯ１００１０
００１０２５５ ２０００１００１０ ３０００１０１０ ４０００９５０ ５０００８００ 次に、同様の方法でＬ−フェニルアラニ／要求性を第３
表に示す。
Ｌ−フェニルアラニア 菌
株濃度（ｍｇ／ｄｅ） ＡＪ１１７０８１１
９６５１１９６８０ ’ １
００ ０ ０５
１０２ ９０ ９２１
０ １００ １００
１０１２０ １０２
１０５ １００３’０
１００ １００ １００本発
明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、Ｌ−フ
ェニルアラニノ、その他必要ンコ応してアミノ酸、ビタ
ミン等の有機微量栄養素な含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、ンユークロース
、マルトース、澱粉氷解物、糖蜜等が使用され、その他
エタノール酢酸、クエン酸等も単独或は上記他の炭素源
と併用して用いられる。窒素源としては硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、９ノ酸ア／モニウム等のアンモ
ニウム塩、硝酸塩、尿素、ペプトノ等有機或は無機の窒
素源が使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、
ビタミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有６す
るペプト／、カザミノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物
等が使用され、生育ｔこ他のアミノ酸等？要求する栄養
要求性変異株を使用する場合には要求さ、ｆする栄養素
を補添することが必要である。無機塩類としてはジノ酸
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マノガノ塩
等が使用される。
株濃度（ｍｇ／ｄｅ） ＡＪ１１７０８１１
９６５１１９６８０ ’ １
００ ０ ０５
１０２ ９０ ９２１
０ １００ １００
１０１２０ １０２
１０５ １００３’０
１００ １００ １００本発
明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、Ｌ−フ
ェニルアラニノ、その他必要ンコ応してアミノ酸、ビタ
ミン等の有機微量栄養素な含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、ンユークロース
、マルトース、澱粉氷解物、糖蜜等が使用され、その他
エタノール酢酸、クエン酸等も単独或は上記他の炭素源
と併用して用いられる。窒素源としては硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、９ノ酸ア／モニウム等のアンモ
ニウム塩、硝酸塩、尿素、ペプトノ等有機或は無機の窒
素源が使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、
ビタミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有６す
るペプト／、カザミノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物
等が使用され、生育ｔこ他のアミノ酸等？要求する栄養
要求性変異株を使用する場合には要求さ、ｆする栄養素
を補添することが必要である。無機塩類としてはジノ酸
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マノガノ塩
等が使用される。
培養は通常の培養条件下で行えば良く、ｐＨを５ないし
９、温度を２０ないし４０℃に制御しつつ１〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養することにより培養液中に著量
のチロジノが蓄積される。
９、温度を２０ないし４０℃に制御しつつ１〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養することにより培養液中に著量
のチロジノが蓄積される。
培養中にｐＨが下がる場合？こば、炭素力ルンウムを別
殺菌して加えるか又はアノモニア水、アンモニアガス等
のアルノ）ｌ）て中和する。又、有１５を酸＝ａ；炭素
源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸又は有機酸て中和する
。
殺菌して加えるか又はアノモニア水、アンモニアガス等
のアルノ）ｌ）て中和する。又、有１５を酸＝ａ；炭素
源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸又は有機酸て中和する
。
培養液からチロン／を採取する方法は、公知のチロフッ
回収方法に従って行えば良く、培養液から菌体を除去し
た後濃縮晶析する方法或はイオノ交換クロマトグラフィ
ー等によって採取される。
回収方法に従って行えば良く、培養液から菌体を除去し
た後濃縮晶析する方法或はイオノ交換クロマトグラフィ
ー等によって採取される。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第４表に示した組成のチロソノ生産用培地２０ ｍ
ｌを５００ ｍｌ容フラスコに分注し、１１０℃で１０
分間加熱した後、第７表に示す微生物をそれぞれ晃スラ
ット量植えつけ３０℃で９６時間振盪培養した。それぞ
れの培養液中のチロンン生成量は第５表の如くであった
。
ｌを５００ ｍｌ容フラスコに分注し、１１０℃で１０
分間加熱した後、第７表に示す微生物をそれぞれ晃スラ
ット量植えつけ３０℃で９６時間振盪培養した。それぞ
れの培養液中のチロンン生成量は第５表の如くであった
。
グルコース Ｂｎ ｙ７を塩化アン
モニウム １０ ＩＴＫＨ２ＰＯ４１’ ＫＣＩ ２ ’Ｍｎ Ｓ
０４ ・７ Ｈ２０１０Ｔｎ９／ ｌＦｅ５０． ｅ
４Ｈ２０１０” カザミノ酸 ４ ｔ／ｌＭｇＳＯ４
・７Ｈ２００，４ｌＩ ※Ｃａ ＣＯ２４０〃 Ｌ ７ｘ＝１Ｌ−アラ＝７２０ ｍ９７ｄｅ（※ 別
途加熱殺菌） 第５表 チロツノの蓄積量 菌 株 （＋ｎｇ ／ ｍｅ ）Ａ
Ｊ１１７０８ ｎＡＪ１１９
６５ ７．５ ＡＪ３２５７ ０．２ＡＪ１
１９６８ ７．０特許出願人
味の素株式会社
モニウム １０ ＩＴＫＨ２ＰＯ４１’ ＫＣＩ ２ ’Ｍｎ Ｓ
０４ ・７ Ｈ２０１０Ｔｎ９／ ｌＦｅ５０． ｅ
４Ｈ２０１０” カザミノ酸 ４ ｔ／ｌＭｇＳＯ４
・７Ｈ２００，４ｌＩ ※Ｃａ ＣＯ２４０〃 Ｌ ７ｘ＝１Ｌ−アラ＝７２０ ｍ９７ｄｅ（※ 別
途加熱殺菌） 第５表 チロツノの蓄積量 菌 株 （＋ｎｇ ／ ｍｅ ）Ａ
Ｊ１１７０８ ｎＡＪ１１９
６５ ７．５ ＡＪ３２５７ ０．２ＡＪ１
１９６８ ７．０特許出願人
味の素株式会社
Claims (1)
- バチルス属に属し、チロノンアナログ耐性及びＬ−フェ
ニルアラニア要求性を有し、がっＬ−チロジノ生産能を
有する微生物を液体培地て好気的に培養し、培養液中ｔ
こＬ−チロジノな生成蓄積せしめ、これを採取すること
を特徴とするＬ−チロジノの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18098382A JPS5971697A (ja) | 1982-10-15 | 1982-10-15 | 発酵法によるｌ−チロシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18098382A JPS5971697A (ja) | 1982-10-15 | 1982-10-15 | 発酵法によるｌ−チロシンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5971697A true JPS5971697A (ja) | 1984-04-23 |
Family
ID=16092689
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18098382A Pending JPS5971697A (ja) | 1982-10-15 | 1982-10-15 | 発酵法によるｌ−チロシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5971697A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110950769A (zh) * | 2019-12-17 | 2020-04-03 | 天津科技大学 | 一种从发酵液中离心提取酪氨酸的方法 |
| CN111018733A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-04-17 | 天津科技大学 | 一种从发酵液中带菌结晶提取酪氨酸的工艺方法 |
-
1982
- 1982-10-15 JP JP18098382A patent/JPS5971697A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111018733A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-04-17 | 天津科技大学 | 一种从发酵液中带菌结晶提取酪氨酸的工艺方法 |
| CN110950769A (zh) * | 2019-12-17 | 2020-04-03 | 天津科技大学 | 一种从发酵液中离心提取酪氨酸的方法 |
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