JPS6098991A - 発酵法によるｌ―フェニルアラニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ―フェニルアラニンの製造法Info
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- JPS6098991A JPS6098991A JP20726583A JP20726583A JPS6098991A JP S6098991 A JPS6098991 A JP S6098991A JP 20726583 A JP20726583 A JP 20726583A JP 20726583 A JP20726583 A JP 20726583A JP S6098991 A JPS6098991 A JP S6098991A
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- Japan
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- phenylalanine
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるし一フェニルアラニン（以下単に
フェニルアラニンという。）の製造法の製造法としては
ブレビバクテリウム属又はミクロコツカス属細菌のチロ
シン要求菌を使用する方法（特公昭３７−６３４５）、
生育にチロシンを要求しカ１つ５−メチルトリブトファ
ンに耐性を有する変異株を使用する方法（特公昭５ｌ−
２１０７９）、フェニルアラニンアナログに耐性を有す
る変異株を使用する方法（特公昭５ｌ−２８７１２）、
更にはデコイエン感受性変異株を使用する方法（特公昭
５６−６４７９３）等が知られている。
フェニルアラニンという。）の製造法の製造法としては
ブレビバクテリウム属又はミクロコツカス属細菌のチロ
シン要求菌を使用する方法（特公昭３７−６３４５）、
生育にチロシンを要求しカ１つ５−メチルトリブトファ
ンに耐性を有する変異株を使用する方法（特公昭５ｌ−
２１０７９）、フェニルアラニンアナログに耐性を有す
る変異株を使用する方法（特公昭５ｌ−２８７１２）、
更にはデコイエン感受性変異株を使用する方法（特公昭
５６−６４７９３）等が知られている。
本発明者等は更に効率良くフェニルアラニンを発酵生産
する方法を開発することを目的として研究を重ねた結果
、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属等の
コリネ型細菌のフェニルアラニン生産菌に唯一の炭素源
としてグロトカテク酸では生育できるがキナ酸では生育
できない変異株の中によシ多量のフェニルアラニンを生
成、蓄積する菌株が存在することを見い出した。
する方法を開発することを目的として研究を重ねた結果
、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属等の
コリネ型細菌のフェニルアラニン生産菌に唯一の炭素源
としてグロトカテク酸では生育できるがキナ酸では生育
できない変異株の中によシ多量のフェニルアラニンを生
成、蓄積する菌株が存在することを見い出した。
本発明はこの知見に基づいて完成されたものであス、
本発明において、フェニルアラニン生産能を有する微生
物はブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属等
のコリネ型細菌に属し、フェニルアラニン生産に必要な
性質、例えばＬ−チロシン要求性又はフェニルアラニン
アナログ耐性、もしくはＬ−チロシン要求性でかつトリ
シトファンアナログ又はフェニルアラニンアナログ耐性
を有する微生物である。
物はブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属等
のコリネ型細菌に属し、フェニルアラニン生産に必要な
性質、例えばＬ−チロシン要求性又はフェニルアラニン
アナログ耐性、もしくはＬ−チロシン要求性でかつトリ
シトファンアナログ又はフェニルアラニンアナログ耐性
を有する微生物である。
本発明において使用される変異株はブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属等のコリネ型細菌に属し、
上記フェニルアラニン生産能を示す性質を持ち、かつ唯
一の炭素源としてグロトカテク酸では生育できるが、キ
ナ酸では生育できない性質ヲ有する微生物である。この
ような性質を有する微生物はフェニルアラニン生産能の
他に、Ｌ−）リプトファン生産能およびＬ−チロシン生
産能を有する。
属又はコリネバクテリウム属等のコリネ型細菌に属し、
上記フェニルアラニン生産能を示す性質を持ち、かつ唯
一の炭素源としてグロトカテク酸では生育できるが、キ
ナ酸では生育できない性質ヲ有する微生物である。この
ような性質を有する微生物はフェニルアラニン生産能の
他に、Ｌ−）リプトファン生産能およびＬ−チロシン生
産能を有する。
Ｔｙｒ−＝ Ｌ−チロシン要求性
５−ＭＴｒ＝ ５−メチルトリシトファン耐性ｐＦＰｒ
＝ｐ−フルオロフェニルアラニン耐性ＤＳＤＴａｇ＠＝
デヒドロシキミ酸デヒドラターゼ欠損これら本発明の変
異株は、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム
属のフェニルアラニン生産菌を親株として、これに通常
の変異誘導操作、例えば紫外線、Ｘ線照射あるいはＮ−
メチル−Ｎ／−ニトロ−Ｎ−ニトロングアニジノ（ＮＴ
Ｇと略ｆ）。
＝ｐ−フルオロフェニルアラニン耐性ＤＳＤＴａｇ＠＝
デヒドロシキミ酸デヒドラターゼ欠損これら本発明の変
異株は、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム
属のフェニルアラニン生産菌を親株として、これに通常
の変異誘導操作、例えば紫外線、Ｘ線照射あるいはＮ−
メチル−Ｎ／−ニトロ−Ｎ−ニトロングアニジノ（ＮＴ
Ｇと略ｆ）。
亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処理した菌体を唯
一の炭素源としてグロトカテク酸では生育できるが、キ
ナ酸では生育できないようなコロニーを分離することに
よって得られる。上記ブレビバクテリウム属又はコリネ
バクテリウム属等のコリネ型細菌のフェニルアラニン生
産菌は公知のものを使用すれば良いが、具体例としては
次のような変異株が使用される。
一の炭素源としてグロトカテク酸では生育できるが、キ
ナ酸では生育できないようなコロニーを分離することに
よって得られる。上記ブレビバクテリウム属又はコリネ
バクテリウム属等のコリネ型細菌のフェニルアラニン生
産菌は公知のものを使用すれば良いが、具体例としては
次のような変異株が使用される。
親株としてはこの他、ブレビバクｆ’）ラム属又はコリ
ネバクテリウム属のコリネ型細菌特にグルタミン酸生産
性細菌として知られている微生物を使用し、唯一の炭素
源としてグロトカテク酸では生育できるがキナ酸では生
育できない（デヒドロシキミ酸デヒドラターゼ欠損）性
質、及びフェニルアラニン生産性を付与することによっ
て誘導することができる。このような親株の例としては
、ブレビバクテリウム・デパリヵタムＡＴＣＣ１４０２
０゜ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣ
Ｃ１３８６９、ブレビバクテリウム・ロゼラムＡＴＣＣ
１４０６６、コリネバクテリウム・アセトアシドフィラ
ムＡＴＣＣ１３８７０、コリネバクテリウム・アセトグ
ルタミクムＡＴＣＣ１５８０６、コリネバクテリウム・
グルタミクムＡＴ（’！（’！１１１Ｑ？毎−１’＋（
イー１’＋１次に本発明で使用する変異株の変異誘導法
及び薬剤に対する耐性度を以下の実験例にて示す。
ネバクテリウム属のコリネ型細菌特にグルタミン酸生産
性細菌として知られている微生物を使用し、唯一の炭素
源としてグロトカテク酸では生育できるがキナ酸では生
育できない（デヒドロシキミ酸デヒドラターゼ欠損）性
質、及びフェニルアラニン生産性を付与することによっ
て誘導することができる。このような親株の例としては
、ブレビバクテリウム・デパリヵタムＡＴＣＣ１４０２
０゜ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣ
Ｃ１３８６９、ブレビバクテリウム・ロゼラムＡＴＣＣ
１４０６６、コリネバクテリウム・アセトアシドフィラ
ムＡＴＣＣ１３８７０、コリネバクテリウム・アセトグ
ルタミクムＡＴＣＣ１５８０６、コリネバクテリウム・
グルタミクムＡＴ（’！（’！１１１Ｑ？毎−１’＋（
イー１’＋１次に本発明で使用する変異株の変異誘導法
及び薬剤に対する耐性度を以下の実験例にて示す。
実験例１
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１
３８６９よシ誘導したチロシン要求性で５−ＭＴ ｒの
フェニルアラニン生産菌ＡＪ ３４３２ ＦＩＲＭ Ｐ
−１８４４をイーストブイヨン寒天斜面培地で培養し、
生育した菌体を集めて１１５０ＭＩＪン酸緩衝液（Ｐ’
（７，０）に懸濁しく１０８〜１０９個／ ｍｌの菌体
を含む）、これにＮＧを加え（ＮＧ濃度は２００μｍ１
／ｍｌ）、室温で３０分間保持した。このようにしてＮ
Ｇ処理した菌体を同リン酸緩衝液で充分洗浄した後、菌
液を適当に希釈して、完全培地を含む寒天平板上でコロ
ニー数が２００コ位になるように塗布する。
３８６９よシ誘導したチロシン要求性で５−ＭＴ ｒの
フェニルアラニン生産菌ＡＪ ３４３２ ＦＩＲＭ Ｐ
−１８４４をイーストブイヨン寒天斜面培地で培養し、
生育した菌体を集めて１１５０ＭＩＪン酸緩衝液（Ｐ’
（７，０）に懸濁しく１０８〜１０９個／ ｍｌの菌体
を含む）、これにＮＧを加え（ＮＧ濃度は２００μｍ１
／ｍｌ）、室温で３０分間保持した。このようにしてＮ
Ｇ処理した菌体を同リン酸緩衝液で充分洗浄した後、菌
液を適当に希釈して、完全培地を含む寒天平板上でコロ
ニー数が２００コ位になるように塗布する。
そして次に唯一の炭素源としてプロトカテク酸及びキナ
酸を各々含む第１表に示す最少寒天平板培地上にレプリ
カし、キナ酸では生育できないが、プロトカテク酸では
生育できるコロニーを分離する・このようにして得られ
たコロニーの内には親株よりフェニルアラニン生産能の
優れたものが多〈見い出された。
酸を各々含む第１表に示す最少寒天平板培地上にレプリ
カし、キナ酸では生育できないが、プロトカテク酸では
生育できるコロニーを分離する・このようにして得られ
たコロニーの内には親株よりフェニルアラニン生産能の
優れたものが多〈見い出された。
グルコース １０１１／１
（又はグロトカテク酸、キナ酸 ０．４％）硫酸アンモ
ニウム ５ 〃 尿素 ２〃 ＫＨ２ＰＯ４１ｔｔ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０１＃ Ｆｅ＋＋ｅ Ｍｎ”＋イオン ２ ｐｐｍビオチン ５
０μ、９／ｌ サイアミン塩酸塩 ２００ ＃ ＤＬ−メチオニ７ ２００Ｔｎ９／Ｉ Ｌ−チロシン １００／／ この内生産能の最も高い菌株ＡＪ １２１０３を選んだ
。
ニウム ５ 〃 尿素 ２〃 ＫＨ２ＰＯ４１ｔｔ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０１＃ Ｆｅ＋＋ｅ Ｍｎ”＋イオン ２ ｐｐｍビオチン ５
０μ、９／ｌ サイアミン塩酸塩 ２００ ＃ ＤＬ−メチオニ７ ２００Ｔｎ９／Ｉ Ｌ−チロシン １００／／ この内生産能の最も高い菌株ＡＪ １２１０３を選んだ
。
同様の変異操作によシ、ブレビバクテリウム・ラクトフ
ェルメンタムＡＪ ３４３５ を親株として同様の方法
によりＡＪ １２１０２ ｆ、選んだ。
ェルメンタムＡＪ ３４３５ を親株として同様の方法
によりＡＪ １２１０２ ｆ、選んだ。
全く同様の方法でコリネバクテリウム・アセトアシドフ
ィラムＡＪ ３２４４を親株としてＡＪ １２１０４を
誘導した。
ィラムＡＪ ３２４４を親株としてＡＪ １２１０４を
誘導した。
次にこのよう圧して得々変異株のグルコース及びキナ酸
、グロトカテク酸を各々唯一の炭素源とした場合の生育
の結果を第２表に示す。
、グロトカテク酸を各々唯一の炭素源とした場合の生育
の結果を第２表に示す。
実験方法は、各変異株の菌体を第−表の最少培地で良く
洗浄した後、小型試験管に入れた第２表に示す所定量の
炭素源を含む最少培地（４１１１１）Ｋ一定量接種し、
３１．５℃で２４時間振盪培養を行い、培養液の５６０
ｎｍに於る吸光度を測定して生育度をめた。第２表に
はその相対生育値を示した。
洗浄した後、小型試験管に入れた第２表に示す所定量の
炭素源を含む最少培地（４１１１１）Ｋ一定量接種し、
３１．５℃で２４時間振盪培養を行い、培養液の５６０
ｎｍに於る吸光度を測定して生育度をめた。第２表に
はその相対生育値を示した。
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、そ
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン、核酸等の有機微
量栄養素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素
源としては使用する変異株の利用可能なものであれば良
く、例えばグルコース、フラクトース、シュークロース
、マルトース、澱粉分解物糖蜜等の糖類が使用され、そ
の他、エタノール、ソロノやノール等ノアルコール類、
酢酸、クエン酸等の有機酸類、更に菌株によってはノル
マル・ぞラフイン等も単独あるいは他の炭素源と併用し
て使用される。
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン、核酸等の有機微
量栄養素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素
源としては使用する変異株の利用可能なものであれば良
く、例えばグルコース、フラクトース、シュークロース
、マルトース、澱粉分解物糖蜜等の糖類が使用され、そ
の他、エタノール、ソロノやノール等ノアルコール類、
酢酸、クエン酸等の有機酸類、更に菌株によってはノル
マル・ぞラフイン等も単独あるいは他の炭素源と併用し
て使用される。
窒素源として祉硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、アンモニア、肉エキス等無機あるいは有機の窒素源が
使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミ
ン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有するペプト
ン、カザミノ酸、酵母エキス、蛋白分解物等が使用され
、生育にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用
する場合には要求される栄養素を補添することが必要で
ある。
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、アンモニア、肉エキス等無機あるいは有機の窒素源が
使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミ
ン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有するペプト
ン、カザミノ酸、酵母エキス、蛋白分解物等が使用され
、生育にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用
する場合には要求される栄養素を補添することが必要で
ある。
培養は好気的条件で行うことが望ましく、培養期間中培
地のＰＨを５ないし９、温度を２０℃ないし４０℃に制
御しつつ１日ないし４日間振盪培養又は通気攪拌培養す
ることにょジフェニルアラニンが多量培養液中に蓄積さ
れる。培養液からフェニルアラニンを採取する方法は公
知の方法に従って行えば良く、培養液から菌体を分離除
去した後、濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を
用いる方法等によシ採取される。
地のＰＨを５ないし９、温度を２０℃ないし４０℃に制
御しつつ１日ないし４日間振盪培養又は通気攪拌培養す
ることにょジフェニルアラニンが多量培養液中に蓄積さ
れる。培養液からフェニルアラニンを採取する方法は公
知の方法に従って行えば良く、培養液から菌体を分離除
去した後、濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を
用いる方法等によシ採取される。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表に示すフェニルアラニン生産用培地を調製し
、５００Ｔｎｌ容振盪フラスコに２０ｄ宛分注し、１２
０℃で１０分間加熱滅菌した。これに別途加熱殺菌した
炭酸カルシウム粉末１．０Ｆｔ補添した。
、５００Ｔｎｌ容振盪フラスコに２０ｄ宛分注し、１２
０℃で１０分間加熱滅菌した。これに別途加熱殺菌した
炭酸カルシウム粉末１．０Ｆｔ補添した。
グルコース １３ｊ） ｇ／ｄＡ’ Ｍ ｎ Ｓ Ｏ４
・４ Ｈ２０１Ｄ ｍ９／ｄＪ硫酸アンモニウム １Ω
〃 Ｌ−チロシン ４０ Ｉ／ＫＨ２ＰＯ４１５／／
ＤＬ−メチオニン ４０ １ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０４／／ 大豆蛋白分解液 ３７） ｍＶｄ１ビオチ
ン ５．０１４ＡＩ フマール酸 １．２．９／ｄＪサ
イアミン塩酸塩 ２０〃 酢 酸 ０．３〃ＦｓＳＯ４
’７Ｈ２０１Ｄｍ９／ｄｌ この培地に第４表に示すフェニルアラニン生産菌を１白
金耳接種し、３０℃で７２時間振盪培養した。培養液中
のフェニルアラニン生成量を測定し、その結果を第４表
に示した。
・４ Ｈ２０１Ｄ ｍ９／ｄＪ硫酸アンモニウム １Ω
〃 Ｌ−チロシン ４０ Ｉ／ＫＨ２ＰＯ４１５／／
ＤＬ−メチオニン ４０ １ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０４／／ 大豆蛋白分解液 ３７） ｍＶｄ１ビオチ
ン ５．０１４ＡＩ フマール酸 １．２．９／ｄＪサ
イアミン塩酸塩 ２０〃 酢 酸 ０．３〃ＦｓＳＯ４
’７Ｈ２０１Ｄｍ９／ｄｌ この培地に第４表に示すフェニルアラニン生産菌を１白
金耳接種し、３０℃で７２時間振盪培養した。培養液中
のフェニルアラニン生成量を測定し、その結果を第４表
に示した。
第４表 フェニルアラニンの蓄積量
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）ブレビバクテリウム属又はプリネパクテ゛リウム属
に属し、唯一の炭素源としてグロトカテク酸では生育で
きるがキナ酸では生育できない変異株でかつＬ−フェニ
ルアラニン生産能を有する微生物を培養して、Ｌ−フェ
ニルアラニンを培地中に生成、蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする発酵法によるＬ−フェニルアラニ
ンの製造法。 ２）ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に
属し、唯一の炭素源としてグロトカテク酸では生育でき
るがキナ酸では生育できない変異株０
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20726583A JPS6098991A (ja) | 1983-11-04 | 1983-11-04 | 発酵法によるｌ―フェニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20726583A JPS6098991A (ja) | 1983-11-04 | 1983-11-04 | 発酵法によるｌ―フェニルアラニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6098991A true JPS6098991A (ja) | 1985-06-01 |
| JPH0456598B2 JPH0456598B2 (ja) | 1992-09-08 |
Family
ID=16536925
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20726583A Granted JPS6098991A (ja) | 1983-11-04 | 1983-11-04 | 発酵法によるｌ―フェニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6098991A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10407818B2 (en) | 2011-09-19 | 2019-09-10 | Electrolux Home Products Corporation N.V. | Washer-dryer with at least one condenser |
-
1983
- 1983-11-04 JP JP20726583A patent/JPS6098991A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10407818B2 (en) | 2011-09-19 | 2019-09-10 | Electrolux Home Products Corporation N.V. | Washer-dryer with at least one condenser |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0456598B2 (ja) | 1992-09-08 |
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