JPH0594A - 発酵法によるアントラニル酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるアントラニル酸の製造法Info
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- JPH0594A JPH0594A JP17909291A JP17909291A JPH0594A JP H0594 A JPH0594 A JP H0594A JP 17909291 A JP17909291 A JP 17909291A JP 17909291 A JP17909291 A JP 17909291A JP H0594 A JPH0594 A JP H0594A
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- fermentation
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ブレビバクテリウム属またはコリネバクテ
リウム属に属し、フェニルアラニンアナログ耐性でかつ
チロシンを生育に要求し、アントラニル酸生産能を有す
る変異株を用いた発酵法によるアントラニル酸の製造
法。 【効果】 本発明で使用する菌株は、アントラニル酸
の生産性に優れており、従来法より安価かつ効率的にア
ントラニル酸を発酵生産することができる。
リウム属に属し、フェニルアラニンアナログ耐性でかつ
チロシンを生育に要求し、アントラニル酸生産能を有す
る変異株を用いた発酵法によるアントラニル酸の製造
法。 【効果】 本発明で使用する菌株は、アントラニル酸
の生産性に優れており、従来法より安価かつ効率的にア
ントラニル酸を発酵生産することができる。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は発酵法によるアントラニ
ル酸の製造法に関する。アントラニル酸は香料等の合成
中間体となる有用な物質である。
ル酸の製造法に関する。アントラニル酸は香料等の合成
中間体となる有用な物質である。
【0002】
【従来の技術】従来、発酵法によるアントラニル酸の製
造法としては、ストレプトミセス・シオヤエンシスのト
リプトファン要求性株(特開昭48−39692号公
報)、ブレビバクテリウム・フラバムのトリプトファン
アナログ耐性株(Agric.Biol.Chem.第
39巻、627〜635頁、1975年)、ブレビバク
テリウム・フラバムのトリプトファン要求性株(J.B
iochem.第81巻、823〜833頁、1977
年)、あるいはブレビバクテリウム・フラバムのチロシ
ン、フェニルアラニン複要求性株(Agric.Bio
l.Chem.第47巻、2295−2305頁、19
83年)を培養し、培養液中に生成蓄積されたアントラ
ニル酸を採取する方法が知られている。しかしながら、
これらの方法においては、培養液中に生成蓄積されるア
ントラニル酸の量は高々5g/lと少なく、実用面でよ
り生産性の優れた菌株を用いた発酵法によるアントラニ
ル酸の製造法の開発が望まれていた。
造法としては、ストレプトミセス・シオヤエンシスのト
リプトファン要求性株(特開昭48−39692号公
報)、ブレビバクテリウム・フラバムのトリプトファン
アナログ耐性株(Agric.Biol.Chem.第
39巻、627〜635頁、1975年)、ブレビバク
テリウム・フラバムのトリプトファン要求性株(J.B
iochem.第81巻、823〜833頁、1977
年)、あるいはブレビバクテリウム・フラバムのチロシ
ン、フェニルアラニン複要求性株(Agric.Bio
l.Chem.第47巻、2295−2305頁、19
83年)を培養し、培養液中に生成蓄積されたアントラ
ニル酸を採取する方法が知られている。しかしながら、
これらの方法においては、培養液中に生成蓄積されるア
ントラニル酸の量は高々5g/lと少なく、実用面でよ
り生産性の優れた菌株を用いた発酵法によるアントラニ
ル酸の製造法の開発が望まれていた。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
法より安価かつ効率的な発酵法によるアントラニル酸の
製造法を提供することである。
法より安価かつ効率的な発酵法によるアントラニル酸の
製造法を提供することである。
【0004】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、アントラ
ニル酸を効率よく発酵生産する方法を開発するために鋭
意研究を重ねた結果、ブレビバクテリウム属またはコリ
ネバクテリウム属に属し、フェニルアラニンアナログ耐
性でかつチロシンを生育に要求し、アントラニル酸生産
能を有する変異株の使用がその目的に適合しうることを
見い出し、この知見に基づいて本発明を完成させるに至
った。
ニル酸を効率よく発酵生産する方法を開発するために鋭
意研究を重ねた結果、ブレビバクテリウム属またはコリ
ネバクテリウム属に属し、フェニルアラニンアナログ耐
性でかつチロシンを生育に要求し、アントラニル酸生産
能を有する変異株の使用がその目的に適合しうることを
見い出し、この知見に基づいて本発明を完成させるに至
った。
【0005】すなわち、本発明は、ブレビバクテリウム
属またはコリネバクテリウム属に属し、フェニルアラニ
ンアナログ耐性でかつチロシンを生育に要求し、アント
ラニル酸生産能を有する変異株を培養し、培養液中にア
ントラニル酸を生成蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とする発酵法によるアントラニル酸の製造法を提供
するものである。
属またはコリネバクテリウム属に属し、フェニルアラニ
ンアナログ耐性でかつチロシンを生育に要求し、アント
ラニル酸生産能を有する変異株を培養し、培養液中にア
ントラニル酸を生成蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とする発酵法によるアントラニル酸の製造法を提供
するものである。
【0006】本発明において使用されるフェニルアラニ
ンアナログとは、親株の生育を阻害し、その阻害がフェ
ニルアラニンの添加によって特異的に回復されるような
フェニルアラニンの構造アナログのことであり、例とし
ては、メタフロロフェニルアラニン、パラフロロフェニ
ルアラニン、フェニルアラニンハイドロキサメート、D
−フェニルアラニン等が挙げられる。
ンアナログとは、親株の生育を阻害し、その阻害がフェ
ニルアラニンの添加によって特異的に回復されるような
フェニルアラニンの構造アナログのことであり、例とし
ては、メタフロロフェニルアラニン、パラフロロフェニ
ルアラニン、フェニルアラニンハイドロキサメート、D
−フェニルアラニン等が挙げられる。
【0007】本発明において使用する変異株は、ブレビ
バクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属し、親
株の生育を阻害する濃度のフェニルアラニンアナログの
存在下で生育可能で、かつチロシンを生育に要求し、ア
ントラニル酸生産能を有する変異株である。具体的に例
示すれば、以下のものがある。
バクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属し、親
株の生育を阻害する濃度のフェニルアラニンアナログの
存在下で生育可能で、かつチロシンを生育に要求し、ア
ントラニル酸生産能を有する変異株である。具体的に例
示すれば、以下のものがある。
【0008】
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム AJ12612
(FERM P−12122)
コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム AJ12613
(FERM P−12123)
【0009】また、フェニルアラニンアナログ耐性及び
チロシン要求性の他に、トリプトファンアナログ耐性、
トリプトファン要求性、フェニルアラニン要求性等、ア
ントラニル酸の生産性を高めることが知られている性質
を付与することにより、更に生産性の高い変異株を得る
こともできる。
チロシン要求性の他に、トリプトファンアナログ耐性、
トリプトファン要求性、フェニルアラニン要求性等、ア
ントラニル酸の生産性を高めることが知られている性質
を付与することにより、更に生産性の高い変異株を得る
こともできる。
【0010】この様な変異株を得る際に使用される親株
としては、ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
ウム属に属する菌株が用いられる。さらに以下に例示す
るような野生株も親株として使用できる。
としては、ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
ウム属に属する菌株が用いられる。さらに以下に例示す
るような野生株も親株として使用できる。
【0011】
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ATCC13869
ブレビバクテリウム・フラバム ATCC14077
コリネバクテリウム・アセトアシドドフィラム ATCC13870
コリネバクテリウム・グルタミカム ATCC13032
【0012】これらの親株に、先にフェニルアラニンア
ナログ耐性を付与した後チロシン要求性を付与してもよ
いし、先にチロシン要求性を付与した後フェニルアラニ
ンアナログ耐性を付与してもよい。
ナログ耐性を付与した後チロシン要求性を付与してもよ
いし、先にチロシン要求性を付与した後フェニルアラニ
ンアナログ耐性を付与してもよい。
【0013】これらの親株を変異処理する方法は、例え
ばX線や紫外線の照射、あるいはN−メチル−N’−ニ
トロ−N−ニトロソグアニジン(以下、NGと記す)等
の変異誘導剤に接触せしめる等の通常の方法が適用でき
る。本発明の変異株の取得のより具体的な実験例を以下
に示す。
ばX線や紫外線の照射、あるいはN−メチル−N’−ニ
トロ−N−ニトロソグアニジン(以下、NGと記す)等
の変異誘導剤に接触せしめる等の通常の方法が適用でき
る。本発明の変異株の取得のより具体的な実験例を以下
に示す。
【0014】ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタ
ム ATCC13869の菌体を、0.02Mリン酸緩
衝液(pH7.0)に1.1x109個/mlになるよ
うに懸濁し、これに200μg/mlの濃度になるよう
にNGを加え、室温で30分間保持した後、0.02M
リン酸緩衝液で洗浄した。得られた菌体を同緩衝液で希
釈し、表1に示す組成の完全寒天平板培地に100〜5
00個/プレートのコロニーが出現するように塗布し、
31.5℃で3日間培養した。
ム ATCC13869の菌体を、0.02Mリン酸緩
衝液(pH7.0)に1.1x109個/mlになるよ
うに懸濁し、これに200μg/mlの濃度になるよう
にNGを加え、室温で30分間保持した後、0.02M
リン酸緩衝液で洗浄した。得られた菌体を同緩衝液で希
釈し、表1に示す組成の完全寒天平板培地に100〜5
00個/プレートのコロニーが出現するように塗布し、
31.5℃で3日間培養した。
【表1】
【0015】これをマスタープレートとして、常法によ
り表2に示す組成の最少寒天平板培地とそれにL−チロ
シン100mg/lを添加した寒天平板培地にそれぞれ
レプリカし、前者の培地で生育せず、後者の培地で生育
するチロシン要求性変異株を採取した。
り表2に示す組成の最少寒天平板培地とそれにL−チロ
シン100mg/lを添加した寒天平板培地にそれぞれ
レプリカし、前者の培地で生育せず、後者の培地で生育
するチロシン要求性変異株を採取した。
【表2】
【0016】次に、ブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタム ATCC13869が生育できない濃度のD
L−メタフロロフェニルアラニンを含有する培地とし
て、表3に示す組成の培地を設定した。上記チロシン要
求性株を、上と同様の操作でNGにて変異処理した後表
3の培地に植え、31.5℃で5日間培養して生育した
株、すなわちメタフロロフェニルアラニン耐性でかつチ
ロシンを生育に要求する変異株を得た。
メンタム ATCC13869が生育できない濃度のD
L−メタフロロフェニルアラニンを含有する培地とし
て、表3に示す組成の培地を設定した。上記チロシン要
求性株を、上と同様の操作でNGにて変異処理した後表
3の培地に植え、31.5℃で5日間培養して生育した
株、すなわちメタフロロフェニルアラニン耐性でかつチ
ロシンを生育に要求する変異株を得た。
【表3】
【0017】得られた菌株を、試験管に3ml宛入れた
表4に示す組成の培地に植え、31.5℃で72時間振
盪培養し、アントラニル酸を大量に生産する菌株を選択
した。こうしてメタフロロフェニルアラニン耐性でかつ
チロシンを生育に要求し、高いアントラニル酸生産能を
有する変異株として、ブレビバクテリウム・ラクトフェ
ルメンタム AJ12612を得た。
表4に示す組成の培地に植え、31.5℃で72時間振
盪培養し、アントラニル酸を大量に生産する菌株を選択
した。こうしてメタフロロフェニルアラニン耐性でかつ
チロシンを生育に要求し、高いアントラニル酸生産能を
有する変異株として、ブレビバクテリウム・ラクトフェ
ルメンタム AJ12612を得た。
【表4】
【0018】また、コリネバクテリウム・アセトアシド
フィラム ATCC13870を親株として、同様な操
作により、パラフロロフェニルアラニン耐性でかつチロ
シンを生育に要求し、高いアントラニル酸生産能を有す
る変異株として、コリネバクテリウム・アセトアシドフ
ィラム AJ12613を取得することができた。
フィラム ATCC13870を親株として、同様な操
作により、パラフロロフェニルアラニン耐性でかつチロ
シンを生育に要求し、高いアントラニル酸生産能を有す
る変異株として、コリネバクテリウム・アセトアシドフ
ィラム AJ12613を取得することができた。
【0019】これらの変異株を用いてアントラニル酸を
生産せしめるには、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因
子及び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する通
常の栄養培地を用いて常法により行なうことができる。
炭素源としては、グルコース、シュクロース、糖蜜、デ
ンプン加水分解液等、窒素源としては、硫安、尿素、ア
ンモニア等が利用できる。
生産せしめるには、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因
子及び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する通
常の栄養培地を用いて常法により行なうことができる。
炭素源としては、グルコース、シュクロース、糖蜜、デ
ンプン加水分解液等、窒素源としては、硫安、尿素、ア
ンモニア等が利用できる。
【0020】培養方法は、発酵温度25〜40℃、好ま
しくは30〜34℃で通気培養を行なう。培養開始時及
び培養中のpHは5.0〜9.0、好ましくは6.0〜
7.5が良く、pHの調整には無機あるいは有機の酸性
あるいはアルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウ
ム、アンモニアガスなどを使用することができる。
しくは30〜34℃で通気培養を行なう。培養開始時及
び培養中のpHは5.0〜9.0、好ましくは6.0〜
7.5が良く、pHの調整には無機あるいは有機の酸性
あるいはアルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウ
ム、アンモニアガスなどを使用することができる。
【0021】培養終了後の発酵液からのアントラニル酸
の採取は、イオン交換樹脂法、晶析法等の従来からの公
知の方法及びその組合せにより行うことができる。
の採取は、イオン交換樹脂法、晶析法等の従来からの公
知の方法及びその組合せにより行うことができる。
【0022】
【実施例】次に、実施例によって本発明をさらに詳細に
説明する。
説明する。
【0023】
【実施例1】表5に示す組成の培地を500ml振とう
フラスコに20mlずつ分注した。115℃で10分間
加熱殺菌後、予め180℃で2時間乾熱滅菌した炭酸カ
ルシウム1gを加えた。この培地にブレビバクテリウム
・ラクトフェルメンタム AJ12612とその親株A
TCC13869をそれぞれ接種し、31.5℃で72
時間振とう培養した。培養液中に生成蓄積したアントラ
ニル酸を高速液体クロマトグラフィー(カラム:三菱化
成工業製CPK−08、φ2.6×500mm、溶媒:
0.2Mリン酸バッファー、検出:UV210nm)に
より定量した。その結果、ATCC13869ではアン
トラニル酸は全く蓄積しなかったの対し、AJ1261
2では8.5g/lのアントラニル酸が生成蓄積してい
た。
フラスコに20mlずつ分注した。115℃で10分間
加熱殺菌後、予め180℃で2時間乾熱滅菌した炭酸カ
ルシウム1gを加えた。この培地にブレビバクテリウム
・ラクトフェルメンタム AJ12612とその親株A
TCC13869をそれぞれ接種し、31.5℃で72
時間振とう培養した。培養液中に生成蓄積したアントラ
ニル酸を高速液体クロマトグラフィー(カラム:三菱化
成工業製CPK−08、φ2.6×500mm、溶媒:
0.2Mリン酸バッファー、検出:UV210nm)に
より定量した。その結果、ATCC13869ではアン
トラニル酸は全く蓄積しなかったの対し、AJ1261
2では8.5g/lのアントラニル酸が生成蓄積してい
た。
【表5】
【0024】次に、AJ12612の培養液135ml
を、陽イオン交換樹脂(三菱化成工業製ダイヤイオンS
K−1B)を充填したカラムに吸着、溶出させ、濃縮及
び中和晶析によってアントラニル酸を採取した。得られ
たアントラニル酸は0.73gであった。
を、陽イオン交換樹脂(三菱化成工業製ダイヤイオンS
K−1B)を充填したカラムに吸着、溶出させ、濃縮及
び中和晶析によってアントラニル酸を採取した。得られ
たアントラニル酸は0.73gであった。
【0025】
【実施例2】実施例1と同様の方法により、コリネバク
テリウム・アセトアシドフィラムAJ12613とその
親株ATCC13870のアントラニル酸の生産能を測
定した。親株ATCC13870ではアントラニル酸は
全く蓄積しなかったのに対し、AJ12613を用いた
場合、7.2g/lのアントラニル酸が生成蓄積した。
テリウム・アセトアシドフィラムAJ12613とその
親株ATCC13870のアントラニル酸の生産能を測
定した。親株ATCC13870ではアントラニル酸は
全く蓄積しなかったのに対し、AJ12613を用いた
場合、7.2g/lのアントラニル酸が生成蓄積した。
【0026】
【発明の効果】本発明で使用する変異株は、アントラニ
ル酸の生産性に優れており、従来知られている菌株より
大量のアントラニル酸を培養液中に生成蓄積させること
ができるため、本発明の方法は安価かつ効率的な発酵法
によるアントラニル酸の製造法として好適である。
ル酸の生産性に優れており、従来知られている菌株より
大量のアントラニル酸を培養液中に生成蓄積させること
ができるため、本発明の方法は安価かつ効率的な発酵法
によるアントラニル酸の製造法として好適である。
Claims (2)
- 【請求項1】 ブレビバクテリウム属またはコリネバ
クテリウム属に属し、フェニルアラニンアナログ耐性で
かつチロシンを生育に要求し、アントラニル酸生産能を
有する変異株を培養し、培養液中にアントラニル酸を生
成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法
によるアントラニル酸の製造法。 - 【請求項2】 フェニルアラニンアナログがメタフロ
ロフェニルアラニンまたはパラフロロフェニルアラニン
である請求項1記載の発酵法によるアントラニル酸の製
造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17909291A JPH0594A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | 発酵法によるアントラニル酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17909291A JPH0594A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | 発酵法によるアントラニル酸の製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0594A true JPH0594A (ja) | 1993-01-08 |
Family
ID=16059923
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP17909291A Pending JPH0594A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | 発酵法によるアントラニル酸の製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0594A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015124687A1 (en) * | 2014-02-20 | 2015-08-27 | Bayer Materialscience Ag | Recombinant strain producing o-aminobenzoate and fermentative production of aniline from renewable resources via 2-aminobenzoic acid |
CN105992824A (zh) * | 2014-02-20 | 2016-10-05 | 科思创德国股份有限公司 | 经由邻氨基苯甲酸盐生产苯胺 |
US11168341B2 (en) * | 2015-11-20 | 2021-11-09 | Covestro Deutschland Ag | Method for producing aminobenzoic acid or an aminobenzoic acid derivative |
-
1991
- 1991-04-19 JP JP17909291A patent/JPH0594A/ja active Pending
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015124687A1 (en) * | 2014-02-20 | 2015-08-27 | Bayer Materialscience Ag | Recombinant strain producing o-aminobenzoate and fermentative production of aniline from renewable resources via 2-aminobenzoic acid |
CN105992824A (zh) * | 2014-02-20 | 2016-10-05 | 科思创德国股份有限公司 | 经由邻氨基苯甲酸盐生产苯胺 |
US10731187B2 (en) | 2014-02-20 | 2020-08-04 | Covestro Deutschland Ag | Recombinant strain producing O-aminobenzoate and fermentative production of aniline from renewable resources via 2-aminobenzoic acid |
US11168341B2 (en) * | 2015-11-20 | 2021-11-09 | Covestro Deutschland Ag | Method for producing aminobenzoic acid or an aminobenzoic acid derivative |
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