JP2817228B2 - Ｌ―グルタミン酸の製造法 - Google Patents
Ｌ―グルタミン酸の製造法Info
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- JP2817228B2 JP2817228B2 JP1186282A JP18628289A JP2817228B2 JP 2817228 B2 JP2817228 B2 JP 2817228B2 JP 1186282 A JP1186282 A JP 1186282A JP 18628289 A JP18628289 A JP 18628289A JP 2817228 B2 JP2817228 B2 JP 2817228B2
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- glutamic acid
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- sugar
- ferm
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ−グルタミン酸は調味料及びアミノ酸輸液の原料と
して重要なアミノ酸であり、本発明はこのＬ−グルタミ
ン酸を発酵法で製造する方法を改良するものである。
して重要なアミノ酸であり、本発明はこのＬ−グルタミ
ン酸を発酵法で製造する方法を改良するものである。
ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属の
野性株又はグルタミン酸アナログ耐性株、ケトマロン酸
及びフルオロ酢酸等の呼吸阻害剤耐性株、エスクレチン
耐性株等を使用する方法が知られている。
野性株又はグルタミン酸アナログ耐性株、ケトマロン酸
及びフルオロ酢酸等の呼吸阻害剤耐性株、エスクレチン
耐性株等を使用する方法が知られている。
Ｌ−グルタミン酸の製造コストを低下させるために発
酵収率を向上させることにある。
酵収率を向上させることにある。
本発明は上記課題を解決するためになされたものであ
り、従来よりＬ−グルタミン酸の生産菌として知られる
ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属
する微生物に、プルマイシンまたはその誘導体に耐性を
有する変異株を育種すると、Ｌ−グルタミン酸の収率が
向上する事を見出した。プルマイシンは、バチルス属細
菌が産生する抗生物質として知られている。
り、従来よりＬ−グルタミン酸の生産菌として知られる
ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属
する微生物に、プルマイシンまたはその誘導体に耐性を
有する変異株を育種すると、Ｌ−グルタミン酸の収率が
向上する事を見出した。プルマイシンは、バチルス属細
菌が産生する抗生物質として知られている。
本発明に使用するブレビバクテリウム属またはコリネ
バクテリウム属のプルマイシンまたはその誘導体に耐性
を有する菌株は、例えば以下の菌株がある。
バクテリウム属のプルマイシンまたはその誘導体に耐性
を有する菌株は、例えば以下の菌株がある。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム AJ 12475（FERM P −10827,FERM BP−2922） ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム AJ 12476（FERM P −10828,FERM BP−2923） ブレビバクテリウム・フラバム AJ 12477（FERM P −10829,FERM BP−2924） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ 12478（FERM P −10830,FERM BP−2925） これらの菌株は、それぞれブレビバクテリウム・ラクト
フェルメンタムATCC 13869、ブレビバクテリウム・フラ
バムATCC 14067およびコリネバクテリウム・グルタミク
ムATCC 13032を親株として変異誘導したものである。
フェルメンタムATCC 13869、ブレビバクテリウム・フラ
バムATCC 14067およびコリネバクテリウム・グルタミク
ムATCC 13032を親株として変異誘導したものである。
上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照射、放
射線照射変異誘導起剤処理等の通常の方法が用いられ、
例えば2000μg/mlのニトロソグアニジンで０℃,20分間
処理する方法等がある。
射線照射変異誘導起剤処理等の通常の方法が用いられ、
例えば2000μg/mlのニトロソグアニジンで０℃,20分間
処理する方法等がある。
上記例示の菌株の各薬剤耐性に関する実験結果を第１
表に示す。
表に示す。
これらの菌株を用いてＬ−グルタミン酸を生産するに
は次のような方法が用いられる。培地としては、甘蔗、
甜菜からの糖汁あるいは廃糖密、澱粉質原料加水分解物
質等の糖質原料、酢酸、エチルアルコール、パラフィン
等の非糖質原料を含有する液体培地を用い、培養を行
う。窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に用い
られるアンモニウム塩、アンモニア水、尿素の他CSL
（コーン・スチープ・リカー）、蛋白質分解アミノ酸等
が用いられる。その他、リン酸塩、マグネシウム塩等の
無機塩、サイアミン、ビオチン等の微量栄養素等が適宜
使用される。また必要によりポリオキシソルビタンモノ
パルミテート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質が
培地に添加される。培養は好気的条件下で行うのがよ
く、培養温度は24〜37℃、培養中のpHは６〜９に制御す
るのがよくpHの調整には無機あるいは有機の酸性あるい
はアルカリ性物質、さらには尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガス等を使用することが出来る。発酵液からの
Ｌ−グルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他の
公知の方法を組合せることにより行われる。
は次のような方法が用いられる。培地としては、甘蔗、
甜菜からの糖汁あるいは廃糖密、澱粉質原料加水分解物
質等の糖質原料、酢酸、エチルアルコール、パラフィン
等の非糖質原料を含有する液体培地を用い、培養を行
う。窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に用い
られるアンモニウム塩、アンモニア水、尿素の他CSL
（コーン・スチープ・リカー）、蛋白質分解アミノ酸等
が用いられる。その他、リン酸塩、マグネシウム塩等の
無機塩、サイアミン、ビオチン等の微量栄養素等が適宜
使用される。また必要によりポリオキシソルビタンモノ
パルミテート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質が
培地に添加される。培養は好気的条件下で行うのがよ
く、培養温度は24〜37℃、培養中のpHは６〜９に制御す
るのがよくpHの調整には無機あるいは有機の酸性あるい
はアルカリ性物質、さらには尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガス等を使用することが出来る。発酵液からの
Ｌ−グルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他の
公知の方法を組合せることにより行われる。
第１表の各菌株の生育度は次のようにして検定した。
グルコース0.5g/dl、尿素0.15g/dl、硫安0.15g/dl、KH2
PO40.3g/dl、K2HPO40.1g/dl、MgSO4・7H2O 0.01g/dl、C
aCl22H2O 0.1mg/dl、サイアミン塩酸塩10γ/dl、ビオチ
ン３γ/dl、Na2B4O7・10H2O 0.44mg/dl、FeCl2・6H2O
4.85mg/dl、CuSO4・5H2O 1.95mg/dl、（NH4）6Mo7O24・
4H2O 0.185mg/dl、ZnSO4・7H2O 44mg/dl、MnCl2・4H2O
0.36mg/dlおよび第１表に示す量のプルマイシンを含みp
H7.0に調整した培地に、天然培地（ペプトン1g/dl、酵
母エキス1g/dl、NaCl0.5g/dl、pH7.0）スラントで24時
間培養した菌を無菌水で懸濁して接種し、24時間培養し
て生育値を懸濁で測定した。
グルコース0.5g/dl、尿素0.15g/dl、硫安0.15g/dl、KH2
PO40.3g/dl、K2HPO40.1g/dl、MgSO4・7H2O 0.01g/dl、C
aCl22H2O 0.1mg/dl、サイアミン塩酸塩10γ/dl、ビオチ
ン３γ/dl、Na2B4O7・10H2O 0.44mg/dl、FeCl2・6H2O
4.85mg/dl、CuSO4・5H2O 1.95mg/dl、（NH4）6Mo7O24・
4H2O 0.185mg/dl、ZnSO4・7H2O 44mg/dl、MnCl2・4H2O
0.36mg/dlおよび第１表に示す量のプルマイシンを含みp
H7.0に調整した培地に、天然培地（ペプトン1g/dl、酵
母エキス1g/dl、NaCl0.5g/dl、pH7.0）スラントで24時
間培養した菌を無菌水で懸濁して接種し、24時間培養し
て生育値を懸濁で測定した。
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１ グルコース10g/dl、KH2PO40.1g/dl、MgSO4・7H2O 0.1
g/dl、サイアミン塩酸塩20γ/dl、大豆分解濃縮液36mg/
dl（トータル窒素濃度として）、硫安2.0g/dl、FeSO4・
7H2O 1mg/dl、MnSO4・4H2O 1mg/dlおよびビオチン30γ/
dl（pH7.0）の組成を有する培地を調製し、その20mlづ
つを500ml容振盪フラスコに入れ115℃で10分間加熱殺菌
した。この培地にそれぞれの菌を接種し往復振盪培養機
により31.5℃で培養を行った なお、培養中は培養液をpH6.5〜8.0に保つため、5g/d
lの炭酸カルシウムを添加した。また24時間目に2.5g/dl
の硫安を添加し46時間で発酵終了し、発酵液中に蓄積し
たＬ−グルタミン酸の対糖収率を求めた。
g/dl、サイアミン塩酸塩20γ/dl、大豆分解濃縮液36mg/
dl（トータル窒素濃度として）、硫安2.0g/dl、FeSO4・
7H2O 1mg/dl、MnSO4・4H2O 1mg/dlおよびビオチン30γ/
dl（pH7.0）の組成を有する培地を調製し、その20mlづ
つを500ml容振盪フラスコに入れ115℃で10分間加熱殺菌
した。この培地にそれぞれの菌を接種し往復振盪培養機
により31.5℃で培養を行った なお、培養中は培養液をpH6.5〜8.0に保つため、5g/d
lの炭酸カルシウムを添加した。また24時間目に2.5g/dl
の硫安を添加し46時間で発酵終了し、発酵液中に蓄積し
たＬ−グルタミン酸の対糖収率を求めた。
結果を第２表に示す。
実施例−２ ビートモラセスを還元糖として100mg/ml、KH2PO41mg/
ml（pH7.0）の組成を有する培地を調整し、その30mlづ
つを500ml容振盪フラスコに分注し、115℃で10分加熱殺
菌した。この培地にそれぞれの菌を接種し、往復振盪培
養機により31.5℃で培養を行った。なお培養中は培養液
をpH6.5〜8.0に保つため、400mg/mlの尿素水を適宜添加
した。菌接種後所定の生育に到達時にポリオキシソルビ
タンモノパルミティトを4mg/mlの濃度になるよう添加し
て30時間で発酵を終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グル
タミン酸の対糖収率を求めた。
ml（pH7.0）の組成を有する培地を調整し、その30mlづ
つを500ml容振盪フラスコに分注し、115℃で10分加熱殺
菌した。この培地にそれぞれの菌を接種し、往復振盪培
養機により31.5℃で培養を行った。なお培養中は培養液
をpH6.5〜8.0に保つため、400mg/mlの尿素水を適宜添加
した。菌接種後所定の生育に到達時にポリオキシソルビ
タンモノパルミティトを4mg/mlの濃度になるよう添加し
て30時間で発酵を終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グル
タミン酸の対糖収率を求めた。
結果を第３表に示す。
〔発明の効果〕 以上述べた如く、従来のブレビバクテリウム属または
コリネバクテリウム属に属するＬ−グルタミン酸生産菌
に、プルマイシンまたはその誘導体耐性を付与すること
により、従来菌よりも高いＬ−グルタミン酸発酵収率を
獲得することができる。これにより、変動費の削減がで
きることから工業レベルでの本発明の技術導入が期待さ
れる。
コリネバクテリウム属に属するＬ−グルタミン酸生産菌
に、プルマイシンまたはその誘導体耐性を付与すること
により、従来菌よりも高いＬ−グルタミン酸発酵収率を
獲得することができる。これにより、変動費の削減がで
きることから工業レベルでの本発明の技術導入が期待さ
れる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 江井 仁 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１―１ 味 の素株式会社川崎工場内 審査官 村上 騎見高 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 13/00 - 13/24 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】ブレビバクテリウム属もしくはコリネバク
テリウム属に属し、プルマイシンまたはその誘導体に耐
性を有し、Ｌ−グルタミン酸生産能を有する微生物を培
養し、培養液中に生成蓄積したＬ−グルタミン酸を採取
することを特徴とするＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1186282A JP2817228B2 (ja) | 1989-07-19 | 1989-07-19 | Ｌ―グルタミン酸の製造法 |
| AU58745/90A AU628598B2 (en) | 1989-07-19 | 1990-07-06 | Process for producing l-glutamic acid |
| KR1019900010782A KR970009156B1 (ko) | 1989-07-19 | 1990-07-16 | L-글루타민산의 제조방법 |
| MYPI90001193A MY105945A (en) | 1989-07-19 | 1990-07-17 | Process for producing l-glutamic acid. |
| BR909003459A BR9003459A (pt) | 1989-07-19 | 1990-07-17 | Processo para a producao de acido l-glutamico |
| PE1990172305A PE33790A1 (es) | 1989-07-19 | 1990-07-17 | Procedimiento para producir acido l-glutamico |
| FR9009249A FR2649993B1 (fr) | 1989-07-19 | 1990-07-19 | Procede pour la fabrication d'acide l-glutamique |
| US07/830,530 US5272067A (en) | 1989-07-19 | 1992-02-04 | Process for producing L-glutamic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1186282A JP2817228B2 (ja) | 1989-07-19 | 1989-07-19 | Ｌ―グルタミン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0349690A JPH0349690A (ja) | 1991-03-04 |
| JP2817228B2 true JP2817228B2 (ja) | 1998-10-30 |
Family
ID=16185579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1186282A Expired - Lifetime JP2817228B2 (ja) | 1989-07-19 | 1989-07-19 | Ｌ―グルタミン酸の製造法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2817228B2 (ja) |
| KR (1) | KR970009156B1 (ja) |
| AU (1) | AU628598B2 (ja) |
| BR (1) | BR9003459A (ja) |
| FR (1) | FR2649993B1 (ja) |
| MY (1) | MY105945A (ja) |
| PE (1) | PE33790A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110923275B (zh) * | 2019-12-24 | 2024-01-12 | 内蒙古阜丰生物科技有限公司 | 谷氨酸的发酵和提取工艺 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3096252A (en) * | 1960-04-23 | 1963-07-02 | Ajinomoto Kk | Process for producing l-glutamic acid |
-
1989
- 1989-07-19 JP JP1186282A patent/JP2817228B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-07-06 AU AU58745/90A patent/AU628598B2/en not_active Ceased
- 1990-07-16 KR KR1019900010782A patent/KR970009156B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-07-17 BR BR909003459A patent/BR9003459A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-07-17 MY MYPI90001193A patent/MY105945A/en unknown
- 1990-07-17 PE PE1990172305A patent/PE33790A1/es not_active IP Right Cessation
- 1990-07-19 FR FR9009249A patent/FR2649993B1/fr not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR970009156B1 (ko) | 1997-06-07 |
| BR9003459A (pt) | 1991-08-27 |
| PE33790A1 (es) | 1991-01-16 |
| JPH0349690A (ja) | 1991-03-04 |
| FR2649993B1 (fr) | 1993-10-01 |
| FR2649993A1 (fr) | 1991-01-25 |
| AU5874590A (en) | 1991-03-28 |
| MY105945A (en) | 1995-02-28 |
| KR910003108A (ko) | 1991-02-26 |
| AU628598B2 (en) | 1992-09-17 |
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| JPS6236675B2 (ja) | ||
| JPH0211236B2 (ja) |
Legal Events
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