JP2578463B2 - 発酵法によるl−リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるl−リジンの製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は発酵法によるL−リジンの製造法に関する。
L−リジンは飼料,医薬品,食品など広い分野で種々
の用途を有する。
の用途を有する。
従来の技術 従来、コリネ型グルタミン酸生産菌の各種栄養要求性
株や、各種薬剤耐性株,各種薬剤感受性株などによるL
−リジンの製造法が知られている。また抗生物質耐性株
を用いる方法(U.S.P 3687810)や、バチルス属細菌の
生産する抗菌性物質に耐性を有する菌株を用いる方法
(特開昭59−169497)も知られている。
株や、各種薬剤耐性株,各種薬剤感受性株などによるL
−リジンの製造法が知られている。また抗生物質耐性株
を用いる方法(U.S.P 3687810)や、バチルス属細菌の
生産する抗菌性物質に耐性を有する菌株を用いる方法
(特開昭59−169497)も知られている。
しかしながら、イツリン類縁物質に対して耐性を有す
る菌株についての報告はない。また、特開昭59−16949
7)に記載されたバチルス属細菌の生産する抗菌性物質
に耐性を有する菌株を用いる方法において、その目的と
するところはバチルス属細菌の混入によるリジン生産菌
の生育阻害の防止であり、リジン生産菌のリジン生産能
向上を目的とするものではない。
る菌株についての報告はない。また、特開昭59−16949
7)に記載されたバチルス属細菌の生産する抗菌性物質
に耐性を有する菌株を用いる方法において、その目的と
するところはバチルス属細菌の混入によるリジン生産菌
の生育阻害の防止であり、リジン生産菌のリジン生産能
向上を目的とするものではない。
発明が解決しようとする課題 飼料,医薬品,食品またはその原料など広い分野で種
々の用途を有するL−リジンを工業的に安価に製造する
方法の開発が望まれている。
々の用途を有するL−リジンを工業的に安価に製造する
方法の開発が望まれている。
課題を解決するための手段 本発明者は、L−リジンを工業的に安価に製造するた
めに、発酵法によるL−リジンの製造法について鋭意検
討を行った。その結果、L−リジン生産菌の生産能が、
イツリン類縁物質に対する耐性を付与することにより向
上することを見出し本発明を完成した。
めに、発酵法によるL−リジンの製造法について鋭意検
討を行った。その結果、L−リジン生産菌の生産能が、
イツリン類縁物質に対する耐性を付与することにより向
上することを見出し本発明を完成した。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明は、コリネ型グルタミン酸生産菌に属し、イツ
リン類縁物質に耐性を有し、かつL−リジン生産能を有
する微生物を培地に培養し、培養物中にL−リジンを生
成蓄積させ、該培養物よりL−リジンを採取することを
特徴とする発酵法によるL−リジンの製造法を提供す
る。
リン類縁物質に耐性を有し、かつL−リジン生産能を有
する微生物を培地に培養し、培養物中にL−リジンを生
成蓄積させ、該培養物よりL−リジンを採取することを
特徴とする発酵法によるL−リジンの製造法を提供す
る。
本発明でいうイツリン類縁物質とは、バチルス属細菌
の生産する抗生物質であり、イツリン−A,イツリン−C,
マイコスチリン,バシロマイシン−Lなどが例示される
〔バイオキミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ(Biochi
m.Biophys.Acta)684,207〜211(1982)〕。
の生産する抗生物質であり、イツリン−A,イツリン−C,
マイコスチリン,バシロマイシン−Lなどが例示される
〔バイオキミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ(Biochi
m.Biophys.Acta)684,207〜211(1982)〕。
本発明の変異株の親株としては、コリネバクテリウム
属またはブレビバクテリウム属などのコリネ型グルタミ
ン酸生産菌に属し、リジン生産能を有する菌株ならいず
れでもよい。具体的にはコリネバクテリウム・グルタミ
クムH−3149(微工研条寄第158号)およびコリネバク
テリウム・グルタミクムH−4412(微工研条寄第1069
号)などが挙げられる。
属またはブレビバクテリウム属などのコリネ型グルタミ
ン酸生産菌に属し、リジン生産能を有する菌株ならいず
れでもよい。具体的にはコリネバクテリウム・グルタミ
クムH−3149(微工研条寄第158号)およびコリネバク
テリウム・グルタミクムH−4412(微工研条寄第1069
号)などが挙げられる。
本発明における変異株の誘導は、例えば上記親株をN
−メチル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン250
μg/mlで30℃、30分処理し、親株が生育阻害を示す濃度
のイツリン類縁物質を含む最少培地寒天平板上に生育す
る変異株を取得することにより行うことができる。この
ようにして取得したイツリン類縁物質に対する耐性変異
株を培養し、L−リジン生産能を調べることによりL−
リジン生産能が向上した変異株を分離することができ
る。
−メチル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン250
μg/mlで30℃、30分処理し、親株が生育阻害を示す濃度
のイツリン類縁物質を含む最少培地寒天平板上に生育す
る変異株を取得することにより行うことができる。この
ようにして取得したイツリン類縁物質に対する耐性変異
株を培養し、L−リジン生産能を調べることによりL−
リジン生産能が向上した変異株を分離することができ
る。
以下に親株および親株より誘導したイツリン類縁物質
(イツリンAおよびイツリンCの1:1混合物)耐性変異
株の例を示す。
(イツリンAおよびイツリンCの1:1混合物)耐性変異
株の例を示す。
親 株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−3149
(FERM BP−158) チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性 耐性株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4933 チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,イツリン類縁物質耐性 親 株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4412
(FERM BP−1069) チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,β−ナフトキノリン耐
性 耐性株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4934 チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,β−ナフトキノリン耐
性,イツリン類縁物質耐性 得られたイツリン類縁物質耐性変異株であるコリネバク
テリウム・グルタミクムH−4934株は、昭和63年1月14
日付で工業技術院微生物工業技術研究所(微工研)にFE
RM BP−1655として寄託されている。
(FERM BP−158) チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性 耐性株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4933 チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,イツリン類縁物質耐性 親 株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4412
(FERM BP−1069) チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,β−ナフトキノリン耐
性 耐性株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4934 チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,β−ナフトキノリン耐
性,イツリン類縁物質耐性 得られたイツリン類縁物質耐性変異株であるコリネバク
テリウム・グルタミクムH−4934株は、昭和63年1月14
日付で工業技術院微生物工業技術研究所(微工研)にFE
RM BP−1655として寄託されている。
上記各菌株をイツリン(イツリンAおよびイツリンC
の1:1混合物)200μg/mlを含む最少寒天平板〔グルコ−
ス10g/l,塩化アンモニウム1g/l,尿素2g/l,KH2PO41g/l,K
2HPO43g/l,MgCl2・2H2O0.4g/l,FeSO4・7H2O10mg/l,MnS
O4・4H2O10mg/l,ZnSO4・7H2O1mg/l,CuSO4・5H2O1mg/
l,(NH4)6Mo7O24・4H2O1mg/l,ビオチン50μg/l,寒天2
0g/l,pH7.2〕上で24時間培養したときの生育度を第1表
に示す。
の1:1混合物)200μg/mlを含む最少寒天平板〔グルコ−
ス10g/l,塩化アンモニウム1g/l,尿素2g/l,KH2PO41g/l,K
2HPO43g/l,MgCl2・2H2O0.4g/l,FeSO4・7H2O10mg/l,MnS
O4・4H2O10mg/l,ZnSO4・7H2O1mg/l,CuSO4・5H2O1mg/
l,(NH4)6Mo7O24・4H2O1mg/l,ビオチン50μg/l,寒天2
0g/l,pH7.2〕上で24時間培養したときの生育度を第1表
に示す。
本発明の方法において用いられる菌の培養に際して
は、一般にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が使用
される。すなわち菌が資化しうる炭素源,窒素源,無機
塩類,成育因子などを含有する合成培地または天然培地
が適宜用いられる。
は、一般にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が使用
される。すなわち菌が資化しうる炭素源,窒素源,無機
塩類,成育因子などを含有する合成培地または天然培地
が適宜用いられる。
炭素源としては、グルコース,フラクトース,シュク
ロース,糖蜜,澱粉加水分解物などの糖類の他,酢酸,
フマール酸,クエン酸などの各種有機酸,エタノール,
グリセロール,マンノースなどのアルコール類などが使
用できる。
ロース,糖蜜,澱粉加水分解物などの糖類の他,酢酸,
フマール酸,クエン酸などの各種有機酸,エタノール,
グリセロール,マンノースなどのアルコール類などが使
用できる。
窒素源としては、アンモニア,塩化アンモニウム,硫
酸アンモニウム,酢酸アンモニウム,燐酸アンモニウム
などの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム塩,アミン
類,その他含窒素化合物ならびにペプトン,肉エキス,
コーン・スティープ・リカー,カゼイン加水分解物,大
豆粕加水分解物,各種発酵菌体およびその消化物などが
用いられる。
酸アンモニウム,酢酸アンモニウム,燐酸アンモニウム
などの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム塩,アミン
類,その他含窒素化合物ならびにペプトン,肉エキス,
コーン・スティープ・リカー,カゼイン加水分解物,大
豆粕加水分解物,各種発酵菌体およびその消化物などが
用いられる。
無機物としては、燐酸第一カリウム,燐酸第二カリウ
ム,燐酸マグネシウム,硫酸マグネシウム,塩化ナトリ
ウム,硫酸第一鉄,硫酸マンガン,硫酸銅,炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
ム,燐酸マグネシウム,硫酸マグネシウム,塩化ナトリ
ウム,硫酸第一鉄,硫酸マンガン,硫酸銅,炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
その他、ビオチン,チアミン,ニコチン酸,β−アラ
ニン,パントテン酸などのビタミン類や、ロイシン,バ
リン,アスパラギン酸,グルタミン酸などのアミノ酸
類,ストレプトマイシンなどの各種抗生物質を添加する
場合がある。
ニン,パントテン酸などのビタミン類や、ロイシン,バ
リン,アスパラギン酸,グルタミン酸などのアミノ酸
類,ストレプトマイシンなどの各種抗生物質を添加する
場合がある。
培養は振盪培養または深部通気撹拌培養などの好気的
条件下で行う。培養温度は20〜40℃、好ましくは25〜38
℃の範囲である。培地のpHは5〜9の範囲で、好ましく
は中性付近に保持する。培地のpH調整は炭酸カルシウ
ム,無機または有機の酸,アルカリ溶液,アンモニア,p
H緩衝液などによって行う。
条件下で行う。培養温度は20〜40℃、好ましくは25〜38
℃の範囲である。培地のpHは5〜9の範囲で、好ましく
は中性付近に保持する。培地のpH調整は炭酸カルシウ
ム,無機または有機の酸,アルカリ溶液,アンモニア,p
H緩衝液などによって行う。
培養期間は通常1〜7日間で、培養液中にL−リジン
が生成蓄積する。
が生成蓄積する。
培養終了後、培養液から菌体などの沈澱物を除去し、
イオン交換処理法,濃縮法,塩析法,等電点沈澱法など
を併用することにより、培養液からL−リジンを回収す
ることができる。
イオン交換処理法,濃縮法,塩析法,等電点沈澱法など
を併用することにより、培養液からL−リジンを回収す
ることができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例1 コリネバクテリウム・グルタミクムH−3149,H−441
2,H−4933,H−4934を下記の種培地20ml(300ml容三角フ
ラスコ)に植菌し、30℃にて24時間振盪培養(220rpm)
した。この種培養液2mlを下記の生産培地20ml(300ml容
三角フラスコ)に植菌し、30℃にて72時間振盪培養(22
0rpm)した。培養終了後、L−リジンの生成量を酸性銅
ニンヒドリンを用いる比色法によって測定した。その結
果、培養液中のL−リジン生成量は塩酸塩として、各々
44mg/ml,52mg/ml,53mg/ml,54mg/mlであった。H−4933
株を用いて得た培養液1000mlを遠心分離し、得られた上
清液を硫酸でpH1.5に調整した後、強酸性イオン交換樹
脂ダイヤイオンSK−1B(H+型,三菱化成工業社製)のカ
ラムに通し、L−リジンを吸着させ、カラムを水洗後、
2規定のアンモニア水で溶出して、L−リジン画分を集
めた。集めた画分を濃縮し、濃縮液を塩酸でpH2.0に調
整した後、エタノールを添加しながら冷却することによ
り、L−リジン塩酸塩を晶出させ、結晶42gを得た。
2,H−4933,H−4934を下記の種培地20ml(300ml容三角フ
ラスコ)に植菌し、30℃にて24時間振盪培養(220rpm)
した。この種培養液2mlを下記の生産培地20ml(300ml容
三角フラスコ)に植菌し、30℃にて72時間振盪培養(22
0rpm)した。培養終了後、L−リジンの生成量を酸性銅
ニンヒドリンを用いる比色法によって測定した。その結
果、培養液中のL−リジン生成量は塩酸塩として、各々
44mg/ml,52mg/ml,53mg/ml,54mg/mlであった。H−4933
株を用いて得た培養液1000mlを遠心分離し、得られた上
清液を硫酸でpH1.5に調整した後、強酸性イオン交換樹
脂ダイヤイオンSK−1B(H+型,三菱化成工業社製)のカ
ラムに通し、L−リジンを吸着させ、カラムを水洗後、
2規定のアンモニア水で溶出して、L−リジン画分を集
めた。集めた画分を濃縮し、濃縮液を塩酸でpH2.0に調
整した後、エタノールを添加しながら冷却することによ
り、L−リジン塩酸塩を晶出させ、結晶42gを得た。
発明の効果 本発明によりL−リジンを工業的に安価に供給するこ
とができる。
とができる。
Claims (1)
- 【請求項1】コリネ型グルタミン酸生産菌に属し、イツ
リン類縁物質に耐性を有し、かつL−リジン生産能を有
する微生物を培地に培養し、培養物中にL−リジンを生
成蓄積させ、該培養物よりL−リジンを採取することを
特徴とする発酵法によるL−リジンの製造法。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63023542A JP2578463B2 (ja) | 1988-02-03 | 1988-02-03 | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
EP89101720A EP0327945A3 (en) | 1988-02-03 | 1989-02-01 | Process for producing l-lysine |
KR1019890001230A KR920007402B1 (ko) | 1988-02-03 | 1989-02-02 | L-리신의 제조방법 |
HU89525A HU203788B (en) | 1988-02-03 | 1989-02-02 | Process for producing 1-lysine with fermentation |
CN89100614A CN1037927A (zh) | 1988-02-03 | 1989-02-02 | 生产l-赖氨酸的方法 |
MX014772A MX173009B (ja) | 1988-02-03 | 1989-02-03 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63023542A JP2578463B2 (ja) | 1988-02-03 | 1988-02-03 | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01199589A JPH01199589A (ja) | 1989-08-10 |
JP2578463B2 true JP2578463B2 (ja) | 1997-02-05 |
Family
ID=12113357
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63023542A Expired - Lifetime JP2578463B2 (ja) | 1988-02-03 | 1988-02-03 | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
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JP (1) | JP2578463B2 (ja) |
KR (1) | KR920007402B1 (ja) |
CN (1) | CN1037927A (ja) |
HU (1) | HU203788B (ja) |
MX (1) | MX173009B (ja) |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP3006939B2 (ja) * | 1991-10-21 | 2000-02-07 | 協和醗酵工業株式会社 | L−リジンの製造法 |
WO1996006180A1 (fr) * | 1994-08-19 | 1996-02-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede de production de l-lysine et d'acide l-glutamique par fermentation |
DE102005056668A1 (de) * | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Ag | Fermentative Herstellung organischer Verbindungen |
WO2011111073A2 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Anand Bhadalakar | PROCESS FOR BIOGENESIS OF L-LYSINE FROM ε-CAPROLACTAM OR ε-CAPROLACTAM DEGRADATION OR RELATED INTERMEDIATES |
CN108943479A (zh) * | 2016-01-30 | 2018-12-07 | 陈美娜 | 高效制备树脂颗粒的化工设备 |
CN110092729B (zh) * | 2019-05-31 | 2022-06-28 | 上海泰坦科技股份有限公司 | 一种l-赖氨酸盐酸盐的结晶方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES514806A0 (es) * | 1981-08-10 | 1983-08-16 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Un procedimiento para la produccion de l-lisina. |
-
1988
- 1988-02-03 JP JP63023542A patent/JP2578463B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-02-01 EP EP89101720A patent/EP0327945A3/en not_active Withdrawn
- 1989-02-02 KR KR1019890001230A patent/KR920007402B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-02-02 HU HU89525A patent/HU203788B/hu unknown
- 1989-02-02 CN CN89100614A patent/CN1037927A/zh active Pending
- 1989-02-03 MX MX014772A patent/MX173009B/es unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR920007402B1 (ko) | 1992-08-31 |
JPH01199589A (ja) | 1989-08-10 |
HU203788B (en) | 1991-09-30 |
EP0327945A3 (en) | 1990-07-25 |
EP0327945A2 (en) | 1989-08-16 |
CN1037927A (zh) | 1989-12-13 |
KR890013190A (ko) | 1989-09-21 |
MX173009B (ja) | 1994-01-28 |
HUT50216A (en) | 1989-12-28 |
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