JPS5988094A - 発酵法によるl−リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるl−リジンの製造法Info
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- JPS5988094A JPS5988094A JP19709682A JP19709682A JPS5988094A JP S5988094 A JPS5988094 A JP S5988094A JP 19709682 A JP19709682 A JP 19709682A JP 19709682 A JP19709682 A JP 19709682A JP S5988094 A JPS5988094 A JP S5988094A
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- Japan
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- lysine
- resistance
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- brevibacterium
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるし一リジンの製造法に関する。さ
らに詳しくは2本発明はコリネバクテリウム属またはブ
レビバクテリウム属に属し、1.−リジン生産能を有し
、かつ6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモウラシ
ル抵抗性を有する菌株を栄養培地に培養し、生成蓄積し
たL−リジンを該培養物から採取することを特徴とする
発酵法によるL−リジンの製造法に関する。
らに詳しくは2本発明はコリネバクテリウム属またはブ
レビバクテリウム属に属し、1.−リジン生産能を有し
、かつ6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモウラシ
ル抵抗性を有する菌株を栄養培地に培養し、生成蓄積し
たL−リジンを該培養物から採取することを特徴とする
発酵法によるL−リジンの製造法に関する。
その目的とするところは必須アミノ酸の1つであり、医
薬品あるいは飼料′や食品への添加剤として需要の大き
いし一リジンを工業的安価に製造する方法を提供するこ
とにある。
薬品あるいは飼料′や食品への添加剤として需要の大き
いし一リジンを工業的安価に製造する方法を提供するこ
とにある。
従来6発酵法によるし一リジンの製造法に関してはコリ
ネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、アースロパ
クター属、バチルス属の細菌やその他の微生物のホモセ
リン(またはメチオニンとスレオニン)要求性変異株(
特公昭36−6499号。
ネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、アースロパ
クター属、バチルス属の細菌やその他の微生物のホモセ
リン(またはメチオニンとスレオニン)要求性変異株(
特公昭36−6499号。
U S P 2.979.439)やその他要求性変異
株〔特公昭4.8−28677号、同51−21078
号。
株〔特公昭4.8−28677号、同51−21078
号。
同51’−34’477号(USP 3.825.47
2) 、同55−104 [)号、特開昭56−869
2号、同55’−9’7’84号〕を用いる方法、また
各種薬剤抵抗性変異株〔特公昭48−28078号(U
SP3.7(17,441> 、同53−1833号、
同53−43591号、特開昭53−86089号、同
53−9394号、同55−9785号(U’SP3.
687.1310 > )などを用いる方法、あるいは
これらの組合せの性質を有する微生物を用いる方法など
が知られている。
2) 、同55−104 [)号、特開昭56−869
2号、同55’−9’7’84号〕を用いる方法、また
各種薬剤抵抗性変異株〔特公昭48−28078号(U
SP3.7(17,441> 、同53−1833号、
同53−43591号、特開昭53−86089号、同
53−9394号、同55−9785号(U’SP3.
687.1310 > )などを用いる方法、あるいは
これらの組合せの性質を有する微生物を用いる方法など
が知られている。
本発明者らは、L−リジンの生産性の改良された菌株を
得るため種々研究を重ねた結果、コリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属するL−リジン生産菌
株に、さらに6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモ
ウラシル抵抗性を付与した菌株はL−リジン生産能が飛
躍的に向上することを見い出し本発明を完成するに至っ
た。
得るため種々研究を重ねた結果、コリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属するL−リジン生産菌
株に、さらに6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモ
ウラシル抵抗性を付与した菌株はL−リジン生産能が飛
躍的に向上することを見い出し本発明を完成するに至っ
た。
以下5本発明の詳細な説明する。
本発明方法では、コリネバクテリウム属またはブレビバ
クテリウム属に属し、6−メチルプリン抵抗性または5
−ブロモウラシル抵抗性を有するし一リジン生産菌株で
あればいかなる菌株をも用いることができる。すなわち
1本発明ではコリネバクテリウム属またはブレビバクテ
リウム属に属し、L−リジン生産能を既に有する菌株に
6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモウラシル抵抗
性を付与せしめた菌株を用いてもよいし、コリネバクテ
リウム属またはブレビバクテリウム属に属し、6−メチ
ルプリン抵抗性または5−ブロモウラシル抵抗性を有す
る菌株にL−リジン生産能を付与せしめた菌株を用いて
もよい。たとえば、コリネバクテリウム属またはブレビ
バクテリウム属に属するし一リジン生産能を有する菌株
としては。
クテリウム属に属し、6−メチルプリン抵抗性または5
−ブロモウラシル抵抗性を有するし一リジン生産菌株で
あればいかなる菌株をも用いることができる。すなわち
1本発明ではコリネバクテリウム属またはブレビバクテ
リウム属に属し、L−リジン生産能を既に有する菌株に
6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモウラシル抵抗
性を付与せしめた菌株を用いてもよいし、コリネバクテ
リウム属またはブレビバクテリウム属に属し、6−メチ
ルプリン抵抗性または5−ブロモウラシル抵抗性を有す
る菌株にL−リジン生産能を付与せしめた菌株を用いて
もよい。たとえば、コリネバクテリウム属またはブレビ
バクテリウム属に属するし一リジン生産能を有する菌株
としては。
各種の栄#(例えばホモセリン、メチオニン、スレオニ
ン、ヒスチジン、プロリン、アラニン、ロイシン、イソ
ロイシン、バリン、セリン、グルタミン酸、パントテン
酸、ニコチン酸アミド、酢酸。
ン、ヒスチジン、プロリン、アラニン、ロイシン、イソ
ロイシン、バリン、セリン、グルタミン酸、パントテン
酸、ニコチン酸アミド、酢酸。
アデニン、ヒボキサンチン、イノシトールおよびこれら
の組合せ)要求性、各種のアミノ酸アナログ(例えばリ
ジン、スレオニン、メチオニン、口(3) イシン、インロイシン、バリン、アスパラギン酸。
の組合せ)要求性、各種のアミノ酸アナログ(例えばリ
ジン、スレオニン、メチオニン、口(3) イシン、インロイシン、バリン、アスパラギン酸。
トリプトファンあるいはヒスチジンのアナログおよびこ
れらの組合せ)抵抗性、その他の薬剤(例えば各種抗生
物質、サルファ剤、各種有機酸、キノン化合物、キノリ
ン化合物およびこれらの組合せ)抵抗性の1つあるいは
これらの8.]1合せの性質を有するL−リシン生産菌
株が挙げられる。
れらの組合せ)抵抗性、その他の薬剤(例えば各種抗生
物質、サルファ剤、各種有機酸、キノン化合物、キノリ
ン化合物およびこれらの組合せ)抵抗性の1つあるいは
これらの8.]1合せの性質を有するL−リシン生産菌
株が挙げられる。
本発明の変異株を誘導する際に用いられる親株は、従来
、L−グルタミン酸生産菌として知られているコリネバ
クテリウム属またはブレビバクテリウム属に属する微生
物であり1例えば、コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC13032゜コリネバクテリウム・アセトアシ
ドフィラムATCC13870,ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタムATCCI 3869. ブレ
ビバクチリウム・フラバムATCC14067などがあ
る。
、L−グルタミン酸生産菌として知られているコリネバ
クテリウム属またはブレビバクテリウム属に属する微生
物であり1例えば、コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC13032゜コリネバクテリウム・アセトアシ
ドフィラムATCC13870,ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタムATCCI 3869. ブレ
ビバクチリウム・フラバムATCC14067などがあ
る。
本発明に使用する微生物のうち、6−メチルプリン抵抗
性株としては、コリネバクテリウム・グルタミクムH−
3290(微工研条寄第156号)。
性株としては、コリネバクテリウム・グルタミクムH−
3290(微工研条寄第156号)。
5−ブロモウラシル抵抗性株としては、コリネバクテリ
ウム・グルタミクムH−3289(微工研条寄第157
号)、ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムH−
3291(微工研条寄第155号)などがあげられる。
ウム・グルタミクムH−3289(微工研条寄第157
号)、ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムH−
3291(微工研条寄第155号)などがあげられる。
これらのうち、H−(4)
3290およびH−3289の菌株は、リジン生産能を
有するコリネバクテリウム・グルタミクムFERM−P
3634 (NRRL−B−8183)(ホモセリン
要求性、ロイシン要求性、チアリジン抵抗性、サルファ
メサジン抵抗性)の細胞を0.1規定トリス・マレイン
酸緩衝液(pH6,0)中に】0θ cells/ml
の濃度に懸濁し、ここにN−メチル−N′−ニトロ−N
−ニトロソグアニジンを最終濃度0.2 w/ m+に
なるように添加し、室温で30分間静置した後、6−メ
チルプリン(200μg/ml)を含む下記のごとき組
成を有する最少培地寒天平板培地と、5−ブロモウラシ
ル(1000μg/ml)を含む同様の最少培地寒天平
板培地にそれぞれ塗抹し、生育するコロニーの中から選
択された変異株であり、それぞれ6−メチルプリン抵抗
性または5−ブロモウラシル抵抗性を有する点で1表−
1に示すように親株のF E R,M −P 3634
と明らかに区別できる。またH−3291の菌株は、リ
ジン生産能を有するブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタムH−,3056(S −LysR。
有するコリネバクテリウム・グルタミクムFERM−P
3634 (NRRL−B−8183)(ホモセリン
要求性、ロイシン要求性、チアリジン抵抗性、サルファ
メサジン抵抗性)の細胞を0.1規定トリス・マレイン
酸緩衝液(pH6,0)中に】0θ cells/ml
の濃度に懸濁し、ここにN−メチル−N′−ニトロ−N
−ニトロソグアニジンを最終濃度0.2 w/ m+に
なるように添加し、室温で30分間静置した後、6−メ
チルプリン(200μg/ml)を含む下記のごとき組
成を有する最少培地寒天平板培地と、5−ブロモウラシ
ル(1000μg/ml)を含む同様の最少培地寒天平
板培地にそれぞれ塗抹し、生育するコロニーの中から選
択された変異株であり、それぞれ6−メチルプリン抵抗
性または5−ブロモウラシル抵抗性を有する点で1表−
1に示すように親株のF E R,M −P 3634
と明らかに区別できる。またH−3291の菌株は、リ
ジン生産能を有するブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタムH−,3056(S −LysR。
Leu−、llomsefln’ ) (微工研条寄
第154号)から同様の変異処理によって5−ブロモウ
ラシル抵抗性株として選択された変異株であり表−1に
示すように親株と明らかに区別できる。
第154号)から同様の変異処理によって5−ブロモウ
ラシル抵抗性株として選択された変異株であり表−1に
示すように親株と明らかに区別できる。
表 −1
ル
つ
(什:充分な生育、+:成る程度の生育、−:生育せず
)上記最少培地寒天平板培地の組成ニゲルコース10g
/l、塩化アンモニウム4 g/R,KH2PO41g
/l、に2HPO43g/11MgSO4・7H200
,4g/It、FeSO4H7H200,01g/j!
、MnSO4・4H200,01g/j2 、尿素2
g / 14 、 ビオチン50μg/14.寒天
20g/4、pH7,2゜ 本発明に使用する培地組成としては使用菌株の利用しう
る炭素源、無機物その他の必要な栄養素を程良く含有す
るものであれば合成培地、天然培地のいずれも使用でき
る。
)上記最少培地寒天平板培地の組成ニゲルコース10g
/l、塩化アンモニウム4 g/R,KH2PO41g
/l、に2HPO43g/11MgSO4・7H200
,4g/It、FeSO4H7H200,01g/j!
、MnSO4・4H200,01g/j2 、尿素2
g / 14 、 ビオチン50μg/14.寒天
20g/4、pH7,2゜ 本発明に使用する培地組成としては使用菌株の利用しう
る炭素源、無機物その他の必要な栄養素を程良く含有す
るものであれば合成培地、天然培地のいずれも使用でき
る。
すなわち炭氷源としてはグルコース、フラクトースツル
ブト−ル、グリセロール、 蔗糖、mn。
ブト−ル、グリセロール、 蔗糖、mn。
澱粉加水分解物、糖蜜、果汁などの各種炭水化物。
酢酸、フマール酸、乳酸、コハク酸などの有機酸。
さらにエタノール、メタノールなどのアルこl−ル類も
使用できる。
使用できる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、[6
アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
等の各種無機酸のアンモニウノ、塩。
アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
等の各種無機酸のアンモニウノ、塩。
尿素、アミン類、その信金窒素化合物、ならびにペプト
ン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・リカー
、カゼイン加水分解物、大豆粕酸加水分解物、各種発酵
菌体およびその消化物などが使用できる。
ン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・リカー
、カゼイン加水分解物、大豆粕酸加水分解物、各種発酵
菌体およびその消化物などが使用できる。
さらに無機物としては、リン酸第−カリウJ・。
リンrIII第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸
マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第1鉄、硫酸マン
ガン、炭酸カルシウムなどを使用する。勿論1本発明に
使用する微生物が生育のために特定の栄養素を必要とす
る場合には、その栄養素を適当量培地中に存在させなけ
ればならないが、これらの物質は窒素源として例示した
天然物に含まれて添加される場合がある。また培地中に
各種の添加物2例えば各種抗生物質、αアミノ酪酸、シ
スティン、ロイシン、ロイシン発酵液あるいはアスパラ
ギン酸、グルタミン酸などを添加することによりL−リ
ジン生産量を増加させうる場合がある。
マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第1鉄、硫酸マン
ガン、炭酸カルシウムなどを使用する。勿論1本発明に
使用する微生物が生育のために特定の栄養素を必要とす
る場合には、その栄養素を適当量培地中に存在させなけ
ればならないが、これらの物質は窒素源として例示した
天然物に含まれて添加される場合がある。また培地中に
各種の添加物2例えば各種抗生物質、αアミノ酪酸、シ
スティン、ロイシン、ロイシン発酵液あるいはアスパラ
ギン酸、グルタミン酸などを添加することによりL−リ
ジン生産量を増加させうる場合がある。
培養は振盪培養あるいは深部通気攪拌培養など(7)
の好気的条件下で行う。培養温度は通常20〜40℃の
範囲で、培地のp Hは3〜9の範囲で、好ましくは中
性付近に保持することが望ましいが、これ以外の条件下
でも使用菌株が生育すれば実施できる。培地のp H調
節は炭酸カルシウム、酸あるいはアルカリ溶液、pH緩
衝剤などによって行う。
範囲で、培地のp Hは3〜9の範囲で、好ましくは中
性付近に保持することが望ましいが、これ以外の条件下
でも使用菌株が生育すれば実施できる。培地のp H調
節は炭酸カルシウム、酸あるいはアルカリ溶液、pH緩
衝剤などによって行う。
培養時間は通常1〜6日間で培養液中にL−リジンが生
成蓄積する。
成蓄積する。
培II終了後、培養液より菌体などの沈澱物を除去し、
公知のイオン交換処理法、濃縮法、吸着法。
公知のイオン交換処理法、濃縮法、吸着法。
塩析法などを併用することにより、培養液からL−リジ
ンを回収することができる。
ンを回収することができる。
以下、実施例をあげて本発明を具体的に示す。
実施例1゜
種菌としてコリネバクテリウム・グルタミクムH−32
89(微工研条寄第157号;5−ブロモウラシル抵抗
性)を用いた。
89(微工研条寄第157号;5−ブロモウラシル抵抗
性)を用いた。
この菌株をグルコース40 g/C尿素3g/j!、K
H2PO41,5g/j!、に2HPO40,5g/β
、MgS○4・7 H200,5g/l、 ビオチン
50μg/β、ペプトン20 g/l、酵母エキス5
g / j!からなる種培地(pH7,2)20mlを
含む300m1容三角フラスコに接種し、30°Cで2
4時間培養した。この培養液2mlを廃糖蜜90(8) g/It (グルコース換算)、大豆粕酸加水分解物2
0g/β (大豆粕重量換算)、硫安5 g / I2
゜尿素3g/L MgSO4・7 H200,5g/
1 。
H2PO41,5g/j!、に2HPO40,5g/β
、MgS○4・7 H200,5g/l、 ビオチン
50μg/β、ペプトン20 g/l、酵母エキス5
g / j!からなる種培地(pH7,2)20mlを
含む300m1容三角フラスコに接種し、30°Cで2
4時間培養した。この培養液2mlを廃糖蜜90(8) g/It (グルコース換算)、大豆粕酸加水分解物2
0g/β (大豆粕重量換算)、硫安5 g / I2
゜尿素3g/L MgSO4・7 H200,5g/
1 。
K2HPO40,7g/7!、CaCO330g/Aか
らなる発酵培地(pH7,2)20mlを含む300m
1容三角フラスコに接種し、30°Cで3日間振盪培養
を行った。この時培養液中にL−リジン(−塩酸塩とし
て、以下同様)が36 g/Il生成蓄積していた。対
照として同一の条件で同時に培養した親株であるFER
M−P3634は34g/βであった。
らなる発酵培地(pH7,2)20mlを含む300m
1容三角フラスコに接種し、30°Cで3日間振盪培養
を行った。この時培養液中にL−リジン(−塩酸塩とし
て、以下同様)が36 g/Il生成蓄積していた。対
照として同一の条件で同時に培養した親株であるFER
M−P3634は34g/βであった。
培養終了後9本発明菌株の培養液11を遠心分離して得
た上清液を硫酸でp H1,5に調整した後ダイヤイオ
ン5K−IB(H+型1強酸性イオン交換樹脂の商品名
、三菱化成社製)のカラムクロマI・に通塔してL−リ
ジンを吸着させ、カラムを水洗後、稀アンモニア水で溶
出してL−リジンを含む両分を集めて濃縮した。濃縮液
を塩酸でp H2に調整した後、エタノールを添加しな
がら冷却することによりL−リジンを晶出させ、L−リ
ジン塩酸塩の結晶35.0 gを得た。
た上清液を硫酸でp H1,5に調整した後ダイヤイオ
ン5K−IB(H+型1強酸性イオン交換樹脂の商品名
、三菱化成社製)のカラムクロマI・に通塔してL−リ
ジンを吸着させ、カラムを水洗後、稀アンモニア水で溶
出してL−リジンを含む両分を集めて濃縮した。濃縮液
を塩酸でp H2に調整した後、エタノールを添加しな
がら冷却することによりL−リジンを晶出させ、L−リ
ジン塩酸塩の結晶35.0 gを得た。
実施例2゜
表−2に示す菌株を実施例1に示した種培地にそれぞれ
接種し30℃で24時間培養した。この培養液2mlを
、グルコース90g/C大豆粕酸加水分解物20g/A
(大豆粕重量換算)、硫安5g/L 尿素3 g /
n 、 M g S O4・7H200,5g/7!、
KH2PO41g/j!、 ビオチン501tg/1
2.”)イアミy −HCA 200 、c/ g/m
l。
接種し30℃で24時間培養した。この培養液2mlを
、グルコース90g/C大豆粕酸加水分解物20g/A
(大豆粕重量換算)、硫安5g/L 尿素3 g /
n 、 M g S O4・7H200,5g/7!、
KH2PO41g/j!、 ビオチン501tg/1
2.”)イアミy −HCA 200 、c/ g/m
l。
Fe2O2・7H2010mg/j!、MnSO4H4
H2O10w/7!、CaCO320g/jl!からな
る発酵培地(p H7,2) 20mlを含む300
m1容三角フラスコに接種し、30°Cで3日間振盪培
養を行った。このとき、培地中におけるし一リジン蓄積
量を表−2に示した。
H2O10w/7!、CaCO320g/jl!からな
る発酵培地(p H7,2) 20mlを含む300
m1容三角フラスコに接種し、30°Cで3日間振盪培
養を行った。このとき、培地中におけるし一リジン蓄積
量を表−2に示した。
表 −2
Claims (1)
- コリネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属
し、6−メチルプリン抵抗性または5−ブロモウラシル
抵抗性を有するし一リジン生産株を栄養培地に培養し、
培養物中にL−リジンを生成蓄積せしめ、該培養物から
し一リジンを採取することを特徴とする発酵法によるL
−リジンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19709682A JPS5988094A (ja) | 1982-11-10 | 1982-11-10 | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19709682A JPS5988094A (ja) | 1982-11-10 | 1982-11-10 | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5988094A true JPS5988094A (ja) | 1984-05-21 |
Family
ID=16368653
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP19709682A Pending JPS5988094A (ja) | 1982-11-10 | 1982-11-10 | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5988094A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5362636A (en) * | 1990-10-29 | 1994-11-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing L-lysine by fermentation with a bacteria having selenalysine resistance |
US6893848B1 (en) | 1999-04-19 | 2005-05-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Desensitized aspartokinase |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5828292A (ja) * | 1981-08-10 | 1983-02-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
-
1982
- 1982-11-10 JP JP19709682A patent/JPS5988094A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5362636A (en) * | 1990-10-29 | 1994-11-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing L-lysine by fermentation with a bacteria having selenalysine resistance |
US6893848B1 (en) | 1999-04-19 | 2005-05-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Desensitized aspartokinase |
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