JP2574786B2 - L−スレオニンの製造法 - Google Patents
L−スレオニンの製造法Info
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- JP2574786B2 JP2574786B2 JP62033693A JP3369387A JP2574786B2 JP 2574786 B2 JP2574786 B2 JP 2574786B2 JP 62033693 A JP62033693 A JP 62033693A JP 3369387 A JP3369387 A JP 3369387A JP 2574786 B2 JP2574786 B2 JP 2574786B2
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はL−スレオニンの製造法に関する。L−スレ
オニンはアミノ酸製剤などの医薬品、飼料添加物として
有用なアミノ酸である。
オニンはアミノ酸製剤などの医薬品、飼料添加物として
有用なアミノ酸である。
従来の技術 従来、発酵法によるL−スレオニンの製造法として
は、エッシェリヒア属に属し、ボレリジン感受性を示す
微生物を用いる方法(特公昭51−6752号公報)、エッシ
ェリヒア属に属し、ジアミノピメリン酸とメチオニンの
要求性を示し、かつスレオニン生合成系がスレオニンの
フィードバック阻害に対して抵抗性を示す微生物を用い
る方法(特公昭56−10037号公報)、セラチア属に属
し、スレオニン脱水素酵素が欠損し、かつスレオニン代
謝拮抗物質に耐性を示す微生物を用いる方法(特公昭52
−48195号公報)、コリネバクテリウム属に属し、α−
アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸およびS−(2−アミノ
エチル)−L−システインに耐性で、かつメチオニンの
要求性を有する微生物を用いる方法(特開昭47−19087
号公報)、ブレビバクテリウム属に属し、α−アミノ−
β−ヒドロキシ吉草酸およびS−(2−アミノエチル)
−L−システインに耐性で、かつロイシンの要求性を有
する微生物を用いる方法(特開昭50−31093号公報)、
ブレビバクテリウム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロ
キシ吉草酸およびS−(2−アミノエチル)−L−シス
テインに耐性で、かつL−イソロイシンおよびL−リジ
ンの要求性を有する微生物を用いる方法(特開昭58−22
4684号公報)などが知られている。
は、エッシェリヒア属に属し、ボレリジン感受性を示す
微生物を用いる方法(特公昭51−6752号公報)、エッシ
ェリヒア属に属し、ジアミノピメリン酸とメチオニンの
要求性を示し、かつスレオニン生合成系がスレオニンの
フィードバック阻害に対して抵抗性を示す微生物を用い
る方法(特公昭56−10037号公報)、セラチア属に属
し、スレオニン脱水素酵素が欠損し、かつスレオニン代
謝拮抗物質に耐性を示す微生物を用いる方法(特公昭52
−48195号公報)、コリネバクテリウム属に属し、α−
アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸およびS−(2−アミノ
エチル)−L−システインに耐性で、かつメチオニンの
要求性を有する微生物を用いる方法(特開昭47−19087
号公報)、ブレビバクテリウム属に属し、α−アミノ−
β−ヒドロキシ吉草酸およびS−(2−アミノエチル)
−L−システインに耐性で、かつロイシンの要求性を有
する微生物を用いる方法(特開昭50−31093号公報)、
ブレビバクテリウム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロ
キシ吉草酸およびS−(2−アミノエチル)−L−シス
テインに耐性で、かつL−イソロイシンおよびL−リジ
ンの要求性を有する微生物を用いる方法(特開昭58−22
4684号公報)などが知られている。
発明が解決しようとする問題点 アミノ酸製剤飼料添加物等として有用なL−スレオニ
ンを、より収率よく安価に製造する方法が求められてい
る。
ンを、より収率よく安価に製造する方法が求められてい
る。
問題点を解決するための手段 本発明方法によると、エッシェリヒア属に属し、L−
スレオニン生産能を有し、かつリファンピシン、リジ
ン、メチオニン、アスパラギン酸およびホモセリンの少
なくとも1種に耐性を有するか、またはL−スレオニン
の分解能の低下した微生物を用いることにより高収率で
L−スレオニンを得ることができる。
スレオニン生産能を有し、かつリファンピシン、リジ
ン、メチオニン、アスパラギン酸およびホモセリンの少
なくとも1種に耐性を有するか、またはL−スレオニン
の分解能の低下した微生物を用いることにより高収率で
L−スレオニンを得ることができる。
本発明に使用する微生物としては、エッシェリヒア属
に属し、L−スレオニン生産能を有し、かつリファンピ
シン、リジン、メチオニン、アスパラギン酸およびホモ
セリンの少なくとも1種に耐性を有するか、またはL−
スレオニンの分解能の低下した微生物であればいずれも
用いられる。
に属し、L−スレオニン生産能を有し、かつリファンピ
シン、リジン、メチオニン、アスパラギン酸およびホモ
セリンの少なくとも1種に耐性を有するか、またはL−
スレオニンの分解能の低下した微生物であればいずれも
用いられる。
リファンピシンに耐性の菌株は、エッシェリヒア属の
L−スレオニン生産菌を通常の変異手段により変異さ
せ、リファンピシン20γ/ml以上含有する培地上で生育
してくる菌として得ることができる。好適な例として
は、リファンピシン耐性を有するエッシェリヒア・コリ
(Escherichia coli)H−4258(FERM BP−985)(以
下、H−4258と称す)をあげることができる。
L−スレオニン生産菌を通常の変異手段により変異さ
せ、リファンピシン20γ/ml以上含有する培地上で生育
してくる菌として得ることができる。好適な例として
は、リファンピシン耐性を有するエッシェリヒア・コリ
(Escherichia coli)H−4258(FERM BP−985)(以
下、H−4258と称す)をあげることができる。
リジン、メチオニン、アスパラギン酸またはホモセリ
ンに耐性を示す菌株はエッシェリヒア属のL−スレオニ
ン生産菌を通常の変異手段により変異させ、リジン、メ
チオニン、アスパラギン酸またはホモセリン10g/以上
含有する最少培地上で生育してくる菌として得ることが
できる。
ンに耐性を示す菌株はエッシェリヒア属のL−スレオニ
ン生産菌を通常の変異手段により変異させ、リジン、メ
チオニン、アスパラギン酸またはホモセリン10g/以上
含有する最少培地上で生育してくる菌として得ることが
できる。
好適な例としては、リジン耐性を有するエッシェリヒ
ア・コリH−4435(FERM BP−1094)(以下、H−4435
と称す)、メチオニン耐性を有するH−4436(FERM BP
−1095)(以下、H−4436と称す)、アスパラギン酸耐
性を有するエッシェリヒア・コリH−4225(FERM BP−1
236)(以下、H−4225と称す)およびホモセリン耐性
を有するH−4226(FERM BP−1237)(以下、H−4226
と称す)をあげることができる。
ア・コリH−4435(FERM BP−1094)(以下、H−4435
と称す)、メチオニン耐性を有するH−4436(FERM BP
−1095)(以下、H−4436と称す)、アスパラギン酸耐
性を有するエッシェリヒア・コリH−4225(FERM BP−1
236)(以下、H−4225と称す)およびホモセリン耐性
を有するH−4226(FERM BP−1237)(以下、H−4226
と称す)をあげることができる。
L−スレオニンの分解能の低下した微生物とは、L−
スレオニンからグリシンへの分解能が低下した微生物を
意味する。L−スレオニン生産能を有するエッシェリヒ
ア属菌株のL−スレオニンの分解経路がグリシンを経る
ことは、後記参考例1に示すとおりである。
スレオニンからグリシンへの分解能が低下した微生物を
意味する。L−スレオニン生産能を有するエッシェリヒ
ア属菌株のL−スレオニンの分解経路がグリシンを経る
ことは、後記参考例1に示すとおりである。
L−スレオニンの分解能の低下した微生物は、L−ス
レオニン生産性菌株を通常の変異手段を用いて変異し、
L−スレオニンからグリシンへの分解活性の低下した変
異株を選び、そのL−スレオニン生産能を調べることに
より得ることができる。L−スレオニンからグリシンへ
の分解活性は、後記参考例1に示した方法でL−スレオ
ニンの分解反応を行い、ペーパークロマトグラフィー、
高速液体クロマトグラフィーなどにより、L−スレオニ
ンの残存量を調べることによりわかる。つまりL−スレ
オニンの残存量が多いほど、L−スレオニンからグリシ
ンへの分解活性が低い。
レオニン生産性菌株を通常の変異手段を用いて変異し、
L−スレオニンからグリシンへの分解活性の低下した変
異株を選び、そのL−スレオニン生産能を調べることに
より得ることができる。L−スレオニンからグリシンへ
の分解活性は、後記参考例1に示した方法でL−スレオ
ニンの分解反応を行い、ペーパークロマトグラフィー、
高速液体クロマトグラフィーなどにより、L−スレオニ
ンの残存量を調べることによりわかる。つまりL−スレ
オニンの残存量が多いほど、L−スレオニンからグリシ
ンへの分解活性が低い。
本発明では、L−スレオニンの分解反応を行い、親株
よりも分解活性が50%以上低下した微生物、つまり、L
−スレオニンの残存量が親株の残存量の2倍以上の微生
物を、L−スレオニンの分解活性が低下した微生物とし
て用いることができる。
よりも分解活性が50%以上低下した微生物、つまり、L
−スレオニンの残存量が親株の残存量の2倍以上の微生
物を、L−スレオニンの分解活性が低下した微生物とし
て用いることができる。
好適な例としてエッシェリヒア・コリH−4257(FERM
BP−984)(以下、H−4257と称す)があげられる。
BP−984)(以下、H−4257と称す)があげられる。
以下に前記各好適な菌株の取得方法を説明する。
(1) H−4258株の取得方法 エッシェリヒア・コリATCC 21530(ジアミノピメリン
酸要求性、メチオニン要求性、α−アミノ−β−ヒドロ
キシ吉草酸耐性)(以下、ATCC 21530と称す)にN−メ
チル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン(以下、
NTGと称す)による常法の変異処理(200γ/ml、30℃、3
0分間)を行った後、100γ/mlのリファンピシンを含む
イースト・ブイヨン寒天培地(肉エキス5g、ペプトン10
g、酵母エキス5g、NaCl2.5g、ジアミノピメリン酸0.1
g、寒天20gを水1に含む培地、pH7.2)に塗布する。3
0℃で2〜6日培養し、生育してくるリファンピシンの
耐性株のコロニーを取得する。リファンピシンの耐性変
異株50株を釣菌し、実施例1に示すL−スレオニン生産
試験にかけ、親株よりL−スレオニン生産能が向上した
菌株を選んだ。そのうちの1株がH−4258である。本菌
株は昭和61年2月13日付で工業技術院微生物工業技術研
究所(以下微工研と称す)にFERM BP−985として寄託さ
れている。
酸要求性、メチオニン要求性、α−アミノ−β−ヒドロ
キシ吉草酸耐性)(以下、ATCC 21530と称す)にN−メ
チル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン(以下、
NTGと称す)による常法の変異処理(200γ/ml、30℃、3
0分間)を行った後、100γ/mlのリファンピシンを含む
イースト・ブイヨン寒天培地(肉エキス5g、ペプトン10
g、酵母エキス5g、NaCl2.5g、ジアミノピメリン酸0.1
g、寒天20gを水1に含む培地、pH7.2)に塗布する。3
0℃で2〜6日培養し、生育してくるリファンピシンの
耐性株のコロニーを取得する。リファンピシンの耐性変
異株50株を釣菌し、実施例1に示すL−スレオニン生産
試験にかけ、親株よりL−スレオニン生産能が向上した
菌株を選んだ。そのうちの1株がH−4258である。本菌
株は昭和61年2月13日付で工業技術院微生物工業技術研
究所(以下微工研と称す)にFERM BP−985として寄託さ
れている。
(2) H−4435及びH−4436株の取得方法 ATCC 21530にNTGによる常法の変異処理(200γ/ml、3
0℃、30分間)を行った後、15g/のリジンまたはメチ
オニンを含む最少培地〔グルコース0.5%、(NH4)2SO4
0.1%、K2HPO4 0.7%、KH2PO4 0.2%、MgSO4・7H2O 0.
1g/、Fe2(SO4)3 20mg/、ジアミノピメリン酸50mg
/、メチオニン50mg/、寒天2%(pH7.2)〕に塗布
する。30℃で2〜6日培養し、生育してくるリジンまた
はメチオニンの耐性株のコロニーを取得する。リジンお
よびメチオニンの耐性変異株各50株を釣菌し、実施例1
に示すL−スレオニン生産試験にかけ、親株よりL−ス
レオニン生産能が向上した菌株を選んだ。そのうち、リ
ジン耐性株として取得された菌株がH−4435であり、メ
チオニン耐性株として取得された菌株がH−4436であ
る。これらの菌株は昭和61年6月28日付で微工研にそれ
ぞれFERM BP−1094およびFERM BP−1095として寄託され
ている。
0℃、30分間)を行った後、15g/のリジンまたはメチ
オニンを含む最少培地〔グルコース0.5%、(NH4)2SO4
0.1%、K2HPO4 0.7%、KH2PO4 0.2%、MgSO4・7H2O 0.
1g/、Fe2(SO4)3 20mg/、ジアミノピメリン酸50mg
/、メチオニン50mg/、寒天2%(pH7.2)〕に塗布
する。30℃で2〜6日培養し、生育してくるリジンまた
はメチオニンの耐性株のコロニーを取得する。リジンお
よびメチオニンの耐性変異株各50株を釣菌し、実施例1
に示すL−スレオニン生産試験にかけ、親株よりL−ス
レオニン生産能が向上した菌株を選んだ。そのうち、リ
ジン耐性株として取得された菌株がH−4435であり、メ
チオニン耐性株として取得された菌株がH−4436であ
る。これらの菌株は昭和61年6月28日付で微工研にそれ
ぞれFERM BP−1094およびFERM BP−1095として寄託され
ている。
(3) H−4225及びH−4226株の取得方法 前記(2)項の取得方法において15g/のリジンまた
はメチオニンの代わりに15g/のアスパラギン酸または
ホモセリンを用いた以外は(2)項と同様に行い、アス
パラギン酸耐性株としてH−4225を、ホモセリン耐性株
としてH−4226を得た。
はメチオニンの代わりに15g/のアスパラギン酸または
ホモセリンを用いた以外は(2)項と同様に行い、アス
パラギン酸耐性株としてH−4225を、ホモセリン耐性株
としてH−4226を得た。
これらの菌株は昭和61年12月17日付で微工研にそれぞ
れFERM BP−1236およびFERM BP−1237として寄託されて
いる。
れFERM BP−1236およびFERM BP−1237として寄託されて
いる。
(4) H−4257株の取得方法 親株としてATCC 21530を用い、NTGによる通常の変異
処理(200γ/ml、30℃、30分間)を行い、最少培地〔グ
ルコース0.5%、(NH4)2SO4 0.1%、K2HPO4 0.7%、KH
2PO4 0.2%、MgSO4・7H2O 0.1g/、Fe2(SO4)3 20mg/
、ジアミノピメリン酸50mg/、メチオニン50mg/〕
では十分な生育を示し、L−スレオニンを唯一の窒素源
とする培地〔上記最少培地において(NH4)2SO4 0.1%
の代わりにL−スレオニン0.2%を使用〕においては生
育が著しく悪い菌株200株を釣菌した。
処理(200γ/ml、30℃、30分間)を行い、最少培地〔グ
ルコース0.5%、(NH4)2SO4 0.1%、K2HPO4 0.7%、KH
2PO4 0.2%、MgSO4・7H2O 0.1g/、Fe2(SO4)3 20mg/
、ジアミノピメリン酸50mg/、メチオニン50mg/〕
では十分な生育を示し、L−スレオニンを唯一の窒素源
とする培地〔上記最少培地において(NH4)2SO4 0.1%
の代わりにL−スレオニン0.2%を使用〕においては生
育が著しく悪い菌株200株を釣菌した。
これらの菌株を用いて参考例1に示したのと同様にし
てL−スレオニン分解反応を行ったところほとんどの菌
株は親株と比較しL−スレオニンからグリシンへの分解
活性は低下していた。分解活性の低下が著しい30株を選
択し、実施例1のL−スレオニン生産試験にかけ、親株
よりL−スレオニンの生産能が著しく向上した菌株を選
んだ。そのうちの1株がH−4257である。
てL−スレオニン分解反応を行ったところほとんどの菌
株は親株と比較しL−スレオニンからグリシンへの分解
活性は低下していた。分解活性の低下が著しい30株を選
択し、実施例1のL−スレオニン生産試験にかけ、親株
よりL−スレオニンの生産能が著しく向上した菌株を選
んだ。そのうちの1株がH−4257である。
本菌株は、昭和61年2月13日付で微工研にFERM BP−9
84として寄託されている。
84として寄託されている。
本発明で用いられる培地としては、炭素源、窒素源、
無機物、生育因子などを含有するものであれば合成培地
または天然培地のいずれも用いられる。
無機物、生育因子などを含有するものであれば合成培地
または天然培地のいずれも用いられる。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、糖蜜、
デンプン加水分解物などの炭水化物、酢酸、プロピオン
酸、ギ酸、フマール酸、リンゴ酸などの有機酸が用いら
れる。
デンプン加水分解物などの炭水化物、酢酸、プロピオン
酸、ギ酸、フマール酸、リンゴ酸などの有機酸が用いら
れる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチー
プ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕酸加水分解
物、各種発酵菌体およびその消化物などが用いられる。
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチー
プ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕酸加水分解
物、各種発酵菌体およびその消化物などが用いられる。
無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カ
リウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化
ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸
カルシウムなどが用いられる。
リウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化
ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸
カルシウムなどが用いられる。
生育因子としてはアミノ酸(DL−メチオンなど)、ジ
アミノピメリン酸などが用いられる。
アミノピメリン酸などが用いられる。
培養は振とう培養、深部通気攪拌培養などの好気的条
件下で行う。培養温度は20〜40℃、好ましくは25〜35℃
の範囲である。培地のpHは5〜9の範囲で、好ましくは
中性付近に保持する。培地のpH調整は炭酸カルシウム、
無機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、pH緩
衝剤などによって行う。
件下で行う。培養温度は20〜40℃、好ましくは25〜35℃
の範囲である。培地のpHは5〜9の範囲で、好ましくは
中性付近に保持する。培地のpH調整は炭酸カルシウム、
無機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、pH緩
衝剤などによって行う。
培養期間は、通常2〜7日間で培養物中にL−スレオ
ニンが生成蓄積する。
ニンが生成蓄積する。
培養終了後、培養液から菌体などの沈殿物を遠心分離
などにより除去した後、イオン交換処理法、濃縮法、吸
着法、塩析法などを併用することにより、培養液からL
−スレオニンを回収することができる。
などにより除去した後、イオン交換処理法、濃縮法、吸
着法、塩析法などを併用することにより、培養液からL
−スレオニンを回収することができる。
以下に実施例および参考例を示す。
実施例1 種菌としてH−4258株を用いL−スレオニン生産試験
を行った。H−4258株をグルコース2%、ペプトン1
%、酵母エキス1%、NaCl 0.25%、ジアミノピメリン
酸0.1g/の組成の種培地(pH7.4)で30℃、16時間振と
う培養した。得られた種培養液2mlを20mlの下記発酵培
地を含む250mlの三角フラスコに植菌し、30℃で72時間
振とう培養した。そのときのL−スレオニン生成量は、
18.6g/であった。対照として親株ATCC 21530株を用い
て同様に培養した結果、L−スレオニン生成量は、15.8
g/であった。
を行った。H−4258株をグルコース2%、ペプトン1
%、酵母エキス1%、NaCl 0.25%、ジアミノピメリン
酸0.1g/の組成の種培地(pH7.4)で30℃、16時間振と
う培養した。得られた種培養液2mlを20mlの下記発酵培
地を含む250mlの三角フラスコに植菌し、30℃で72時間
振とう培養した。そのときのL−スレオニン生成量は、
18.6g/であった。対照として親株ATCC 21530株を用い
て同様に培養した結果、L−スレオニン生成量は、15.8
g/であった。
発酵培地の組成は次のとおりである。
グルコース7%、(NH4)2SO4 1.4%、KH2PO4 0.2
%、MgSO4・7H2O 0.1%、ジアミノピメリン酸300γ/m
l、DL−メチオニン100γ/ml、コーン・スチープ・リカ
ー0.2%、CaCO3 3%(pH7.4) H−4258株を用いて得たL−スレオニン含有培養液20
0mlを遠心分離(3,000rpm、10分)し、菌体その他の不
純物を除去した。得られた上澄液を強酸性陽イオン交換
樹脂ダイヤイオンSKI(H+型)(三菱化成工業社製)の
カラムに通し、L−スレオニンを吸着させ、水洗後0.5
規定のアンモニア水で溶出して、L−スレオニン画分を
集めた。集めた画分を濃縮し、エタノールを加えて冷却
下で保存することにより、L−スレオニン2.1gを得た。
%、MgSO4・7H2O 0.1%、ジアミノピメリン酸300γ/m
l、DL−メチオニン100γ/ml、コーン・スチープ・リカ
ー0.2%、CaCO3 3%(pH7.4) H−4258株を用いて得たL−スレオニン含有培養液20
0mlを遠心分離(3,000rpm、10分)し、菌体その他の不
純物を除去した。得られた上澄液を強酸性陽イオン交換
樹脂ダイヤイオンSKI(H+型)(三菱化成工業社製)の
カラムに通し、L−スレオニンを吸着させ、水洗後0.5
規定のアンモニア水で溶出して、L−スレオニン画分を
集めた。集めた画分を濃縮し、エタノールを加えて冷却
下で保存することにより、L−スレオニン2.1gを得た。
実施例2 種菌としてH−4258株の代わりにH−4435,H−4436お
よびATCC 21530株を用いる以外は実施例1と同様に培養
して第1表の結果を得た。
よびATCC 21530株を用いる以外は実施例1と同様に培養
して第1表の結果を得た。
ついで、H−4435株を用い実施例1と同様に処理して
L−スレオニン2.1gを得た。
L−スレオニン2.1gを得た。
実施例3 種菌としてH−4258株の代わりにH−4225,H−4226お
よびATCC 21530株を用いる以外は実施例1と同様に培養
して第2表の結果を得た。
よびATCC 21530株を用いる以外は実施例1と同様に培養
して第2表の結果を得た。
ついで、H−4226株を用い実施例1と同様に処理して
L−スレオニン2.1gを得た。
L−スレオニン2.1gを得た。
実施例4 種菌としてH−4258株の代わりにH−4257およびATCC
21530株を用いる以外は実施例1と同様に培養して培養
液中にL−スレオニン17.3g/および15.8g/をそれぞ
れ得た。
21530株を用いる以外は実施例1と同様に培養して培養
液中にL−スレオニン17.3g/および15.8g/をそれぞ
れ得た。
ついで、H−4257株を用い実施例1と同様に処理して
L−スレオニン1.9gを得た。
L−スレオニン1.9gを得た。
実施例5 種菌としてH−4257株を用いた。H−4257株をグルコ
ース2%、ペプトン1%、酵母エキス1%、NaCl 0.25
%、ジアミノピメリン酸0.1g/の組成の種培地(pH7.
4)で30℃で16時間振とう培養した。得られた種培養液2
00mlを遠心分離して集菌洗浄後、L−スレオニン10g/
および硫酸マグネシウム1g/を含む、0.1Mリン酸緩衝
液(pH6.7)20mlに懸濁し、300ml容三角フラスコにて、
30℃、220rpmで8時間振とう反応を行った。反応後、残
存したL−スレオニンの濃度は7.2g/であった。対照
として親株ATCC 21530株を用いて同様に試験した結果、
残存したL−スレオニン濃度は0.5g/であった。
ース2%、ペプトン1%、酵母エキス1%、NaCl 0.25
%、ジアミノピメリン酸0.1g/の組成の種培地(pH7.
4)で30℃で16時間振とう培養した。得られた種培養液2
00mlを遠心分離して集菌洗浄後、L−スレオニン10g/
および硫酸マグネシウム1g/を含む、0.1Mリン酸緩衝
液(pH6.7)20mlに懸濁し、300ml容三角フラスコにて、
30℃、220rpmで8時間振とう反応を行った。反応後、残
存したL−スレオニンの濃度は7.2g/であった。対照
として親株ATCC 21530株を用いて同様に試験した結果、
残存したL−スレオニン濃度は0.5g/であった。
参考例1 ATCC 21530株におけるL−スレオニンの分解経路を調
べるために生理食塩水で洗浄した菌株をL−スレオニン
1%を含む、リン酸バッファー(pH6.7)20mlに懸濁
し、300ml容フラスコにて220rpmにて振とう反応を行っ
た。その結果、第1図に示したようにL−スレオニンは
8時間でほぼ完全に分解され、著量のグリシンの蓄積が
認められた(第1図実線)。また同様の条件においてL
−スレオニンのかわりにグリシン、L−イソロイシンを
それぞれ1%ずつ含む反応液を用いた場合、グリシンは
約34%分解され(第1図点線)L−イソロイシンはまっ
たく分解されなかった(第1図1点破線)。
べるために生理食塩水で洗浄した菌株をL−スレオニン
1%を含む、リン酸バッファー(pH6.7)20mlに懸濁
し、300ml容フラスコにて220rpmにて振とう反応を行っ
た。その結果、第1図に示したようにL−スレオニンは
8時間でほぼ完全に分解され、著量のグリシンの蓄積が
認められた(第1図実線)。また同様の条件においてL
−スレオニンのかわりにグリシン、L−イソロイシンを
それぞれ1%ずつ含む反応液を用いた場合、グリシンは
約34%分解され(第1図点線)L−イソロイシンはまっ
たく分解されなかった(第1図1点破線)。
これらの知見から、ATCC 21530株におけるL−スレオ
ニンの分解の主な経路はグリシンを経る経路であること
が明らかとなった。従って、L−スレオニンからグリシ
ンへの分解能が低下したL−スレオニン生産菌を用いる
ことによりL−スレオニンを高収率で得ることができ
る。
ニンの分解の主な経路はグリシンを経る経路であること
が明らかとなった。従って、L−スレオニンからグリシ
ンへの分解能が低下したL−スレオニン生産菌を用いる
ことによりL−スレオニンを高収率で得ることができ
る。
発明の効果 本発明方法により、収率よくL−スレオニンを得るこ
とができる。
とができる。
第1図は、ATCC 21530株のスレオニン、グリシンおよび
イソロイシンの分解反応におけるスレオニン、グリシン
およびイソロイシンの相対モル濃度を示す。 図中 はスレオニン(Thr)、 はスレオニン分解反応より生成されたグリシン(Gl
y)、 はグリシン(Gly)、 はイソロイシン(Ile)の相対モル濃度を示す。
イソロイシンの分解反応におけるスレオニン、グリシン
およびイソロイシンの相対モル濃度を示す。 図中 はスレオニン(Thr)、 はスレオニン分解反応より生成されたグリシン(Gl
y)、 はグリシン(Gly)、 はイソロイシン(Ile)の相対モル濃度を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き 微生物の受託番号 FERM BP−984 微生物の受託番号 FERM BP−985 微生物の受託番号 FERM BP−1094 微生物の受託番号 FERM BP−1095 微生物の受託番号 FERM BP−1236 微生物の受託番号 FERM BP−1237
Claims (1)
- 【請求項1】エッシェリヒア属に属し、L−スレオニン
生産能を有し、かつリファンピシン、リジン、メチオニ
ン、アスパラギン酸およびホモセリンの少なくとも1種
に耐性を有するか、またはL−スレオニンからグリシン
への分解能の低下した微生物を培地に培養し、培養物中
にL−スレオニンを生成蓄積させ、該培養物よりL−ス
レオニンを採取することを特徴とするL−スレオニンの
製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62033693A JP2574786B2 (ja) | 1986-02-20 | 1987-02-17 | L−スレオニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3616486 | 1986-02-20 | ||
JP61-36165 | 1986-02-20 | ||
JP61-36164 | 1986-02-20 | ||
JP3616586 | 1986-02-20 | ||
JP16256986 | 1986-07-10 | ||
JP61-162569 | 1986-07-10 | ||
JP61-303138 | 1986-12-19 | ||
JP30313886 | 1986-12-19 | ||
JP62033693A JP2574786B2 (ja) | 1986-02-20 | 1987-02-17 | L−スレオニンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63273487A JPS63273487A (ja) | 1988-11-10 |
JP2574786B2 true JP2574786B2 (ja) | 1997-01-22 |
Family
ID=27521547
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62033693A Expired - Lifetime JP2574786B2 (ja) | 1986-02-20 | 1987-02-17 | L−スレオニンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2574786B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3151073B2 (ja) * | 1992-02-25 | 2001-04-03 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
JP3966583B2 (ja) * | 1997-06-23 | 2007-08-29 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるl−アミノ酸の製造法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6051338B2 (ja) * | 1979-06-30 | 1985-11-13 | 株式会社東芝 | 電力調整装置 |
-
1987
- 1987-02-17 JP JP62033693A patent/JP2574786B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS63273487A (ja) | 1988-11-10 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EXPY | Cancellation because of completion of term |