JP2810739B2 - 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ―スレオニンの製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、バリンアナログに耐性を有し、かつＬ−ス
レオニン生産能を有するエシェリヒア属に属する微生物
を用いるＬ−スレオニンの製造法に関する。
レオニン生産能を有するエシェリヒア属に属する微生物
を用いるＬ−スレオニンの製造法に関する。
Ｌ−スレオニンは、アミノ酸製剤などの医薬品として
有用であるだけでなく、飼料添加用としても利用できる
アミノ酸である。
有用であるだけでなく、飼料添加用としても利用できる
アミノ酸である。
従来の技術 従来、発酵法によるＬ−スレオニンの製造法として
は、エシェリヒア属に属し、ポレリジン感受性を示す微
生物を用いる方法（特公昭51−6752）、エシェリヒア属
に属し、ジアミノピメリン酸とメチオニンの要求性を示
し、かつスレオニンの生合成系がスレオニンのフィード
バック阻害に対して抵抗性を示す微生物が用いる方法
（特公昭56−10037）、セラチア属に属し、スレオニン
脱水素酵素が欠損し、かつスレオニン代謝拮抗物質に耐
性を示す微生物を用いる方法（特公昭52−48195）、コ
リネバクテリウム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロキ
チ吉草酸およびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システ
インに耐性で、かつメチオニンの要求性を有する微生物
を用いる方法（特開昭47−19087）、ブレビバクテリウ
ム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸および
Ｓ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに耐性で、
かつロイシンの要求性を有する微生物を用いる方法（特
開昭50−31093）、ブレビバクテリウム属に属し、α−
アミノ−β−ヒドロキチ吉草酸およびＳ−（２−アミノ
エチル）−Ｌ−システインに耐性で、かつＬ−イソロイ
シンおよびリジンの要求性を有する微生物を用いる方法
（特開昭58−224684）、エシェリヒア属に属し、リファ
ンピシン、リジン、メチオニン、アスパラギン酸および
ホモセリンの少なくとも１種に耐性を有するか、または
Ｌ−スレオニンの分解能の低下した微生物を用いる方法
（特開昭63−273487）などが知られている。
は、エシェリヒア属に属し、ポレリジン感受性を示す微
生物を用いる方法（特公昭51−6752）、エシェリヒア属
に属し、ジアミノピメリン酸とメチオニンの要求性を示
し、かつスレオニンの生合成系がスレオニンのフィード
バック阻害に対して抵抗性を示す微生物が用いる方法
（特公昭56−10037）、セラチア属に属し、スレオニン
脱水素酵素が欠損し、かつスレオニン代謝拮抗物質に耐
性を示す微生物を用いる方法（特公昭52−48195）、コ
リネバクテリウム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロキ
チ吉草酸およびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システ
インに耐性で、かつメチオニンの要求性を有する微生物
を用いる方法（特開昭47−19087）、ブレビバクテリウ
ム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸および
Ｓ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに耐性で、
かつロイシンの要求性を有する微生物を用いる方法（特
開昭50−31093）、ブレビバクテリウム属に属し、α−
アミノ−β−ヒドロキチ吉草酸およびＳ−（２−アミノ
エチル）−Ｌ−システインに耐性で、かつＬ−イソロイ
シンおよびリジンの要求性を有する微生物を用いる方法
（特開昭58−224684）、エシェリヒア属に属し、リファ
ンピシン、リジン、メチオニン、アスパラギン酸および
ホモセリンの少なくとも１種に耐性を有するか、または
Ｌ−スレオニンの分解能の低下した微生物を用いる方法
（特開昭63−273487）などが知られている。
発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、アミノ酸製剤や飼料添加物として有
用なＬ−スレオニンを、より収率よく安価に製造する方
法を提供することにある。
用なＬ−スレオニンを、より収率よく安価に製造する方
法を提供することにある。
課題を解決するための手段 本発明によれば、エシェリヒア属に属し、バリンアナ
ログに耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する
微生物を、培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンを
生成蓄積させ、該培養物よりＬ−スレオニンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−スレオニンの製造法
を提供することができる。
ログに耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する
微生物を、培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンを
生成蓄積させ、該培養物よりＬ−スレオニンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−スレオニンの製造法
を提供することができる。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に使用する微生物としては、エシェリヒア属に
属し、Ｌ−スレオニン生産能を有する微生物であればい
ずれも用いることができる。
属し、Ｌ−スレオニン生産能を有する微生物であればい
ずれも用いることができる。
バリンのアナログとしては、バリン、バリンヒドロキ
サメート、Ｎ−メチルバリン、α−アミノ酪酸、２−チ
アゾールアラニンなどが知られておりいずれのアナログ
も使用できる。
サメート、Ｎ−メチルバリン、α−アミノ酪酸、２−チ
アゾールアラニンなどが知られておりいずれのアナログ
も使用できる。
バリンアナログに対する耐性変異株は、エシェリヒア
属に属するＬ−スレオニン生産菌を通常の変異手段によ
り変異させ、上記の性質を付与することにより取得でき
る。好適な菌株としてはエシェリヒア・コリＨ−7538や
Ｈ−7600をあげることができる。エシェリヒア属に属す
るスレオニン生産菌には、副生のアミノ酸が少ないとい
う利点がある。
属に属するＬ−スレオニン生産菌を通常の変異手段によ
り変異させ、上記の性質を付与することにより取得でき
る。好適な菌株としてはエシェリヒア・コリＨ−7538や
Ｈ−7600をあげることができる。エシェリヒア属に属す
るスレオニン生産菌には、副生のアミノ酸が少ないとい
う利点がある。
以下に本発明の耐性変異株の取得方法を具体的に説明
する。
する。
エシェリヒア・コリＨ−4258（FERM BP−985、ジアミ
ノピメリン酸要求性、メチオニン要求性、α−アミノ−
β−ヒドロキシ吉草酸耐性、リファンピシン耐性）にＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（NT
G）を用いて常法の変異処理（0.2mg/ml、30℃、30分
間）を施す。バリンヒドロキサメート（1g/）を含む
最少培地（グルコース5g/、NH4Cl 2g/、KH2PO42g/
、MgSO4・7H2O0.1g/、Fe2（SO4）320mg/、ジアミ
ノピメリン酸50mg/、DL−メチオニン50mg/、寒天20
g/ pH7.2）に塗布する。30℃で２〜６日間培養し、
生育してくる耐性株のコロニーを取得する。バリンヒド
ロキサメート耐性変異株50株を釣菌し、Ｌ−スレオニン
生産試験にかけ、親株よりＬ−スレオニン生産能が向上
した菌株を選ぶ（本菌株をエシェリヒア・コリＨ−7538
という。）。また、バリンヒドロキサメートのかわりに
α−アミノ酪酸を2g/用いる以外は上記と同様の操作
をおこないα−アミノ酪酸耐性変異体を取得する（本菌
株をエシェリヒア・コリＨ−7600という。）。これらの
菌株はブタペスト条約にもとづいて平成１年12月21日付
で工業技術院微生物工業技術研究所にそれぞれFERM BP
−2696、FERM BP−2698として寄託されている。
ノピメリン酸要求性、メチオニン要求性、α−アミノ−
β−ヒドロキシ吉草酸耐性、リファンピシン耐性）にＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（NT
G）を用いて常法の変異処理（0.2mg/ml、30℃、30分
間）を施す。バリンヒドロキサメート（1g/）を含む
最少培地（グルコース5g/、NH4Cl 2g/、KH2PO42g/
、MgSO4・7H2O0.1g/、Fe2（SO4）320mg/、ジアミ
ノピメリン酸50mg/、DL−メチオニン50mg/、寒天20
g/ pH7.2）に塗布する。30℃で２〜６日間培養し、
生育してくる耐性株のコロニーを取得する。バリンヒド
ロキサメート耐性変異株50株を釣菌し、Ｌ−スレオニン
生産試験にかけ、親株よりＬ−スレオニン生産能が向上
した菌株を選ぶ（本菌株をエシェリヒア・コリＨ−7538
という。）。また、バリンヒドロキサメートのかわりに
α−アミノ酪酸を2g/用いる以外は上記と同様の操作
をおこないα−アミノ酪酸耐性変異体を取得する（本菌
株をエシェリヒア・コリＨ−7600という。）。これらの
菌株はブタペスト条約にもとづいて平成１年12月21日付
で工業技術院微生物工業技術研究所にそれぞれFERM BP
−2696、FERM BP−2698として寄託されている。
なお、本発明で用いられた変異株と、親株（Ｈ−4258
株）を、バリンヒドロキサメートあるいはα−アミノ酪
酸を含む最少寒天培地上で、30℃、24時間培養したとき
の生育の程度を比較した結果を第１表で示す。
株）を、バリンヒドロキサメートあるいはα−アミノ酪
酸を含む最少寒天培地上で、30℃、24時間培養したとき
の生育の程度を比較した結果を第１表で示す。
本発明の微生物によるＬ−スレオニンの生産は、通常
の培養法にて実施可能である。使用培地としては、炭素
源、窒素源、無機物そのほか使用菌株の必要とする微量
の栄養素を程よく含有する培地ならば、合成培地または
天然培地いずれも使用可能である。
の培養法にて実施可能である。使用培地としては、炭素
源、窒素源、無機物そのほか使用菌株の必要とする微量
の栄養素を程よく含有する培地ならば、合成培地または
天然培地いずれも使用可能である。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、ラクト
ース、糖蜜、澱粉または粗糖の加水分解物などの炭水化
物、ピルピン酸、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール
酸、リンゴ酸などの有機酸などが用いられる。さらに微
生物の資化性によっては、グリセリン、エタノールなど
のアルコールなども用いられる。
ース、糖蜜、澱粉または粗糖の加水分解物などの炭水化
物、ピルピン酸、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール
酸、リンゴ酸などの有機酸などが用いられる。さらに微
生物の資化性によっては、グリセリン、エタノールなど
のアルコールなども用いられる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム
などの各種無機酸もしくは有機酸のアンモニウム塩、ア
ミン類、そのほか含窒素化合物、ならびにペプトン、肉
エキス、コーン・スティープ・リカー、カゼイン加水分
解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化
物などが用いられる。
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム
などの各種無機酸もしくは有機酸のアンモニウム塩、ア
ミン類、そのほか含窒素化合物、ならびにペプトン、肉
エキス、コーン・スティープ・リカー、カゼイン加水分
解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化
物などが用いられる。
無機物としては、燐酸第一カリウム、燐酸第二カリウ
ム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
ム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
培養は振盪培養または深部通気撹拌培養などの好気的
条件下、温度20〜40℃、好ましくは25〜35℃、pH5〜
９、好ましくは中性付近に保持しておこなわれ、通常２
〜７日で完了する。培地のpH調整は炭酸カルシウム、無
機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、pH緩衝
液などによっておこなわれる。
条件下、温度20〜40℃、好ましくは25〜35℃、pH5〜
９、好ましくは中性付近に保持しておこなわれ、通常２
〜７日で完了する。培地のpH調整は炭酸カルシウム、無
機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、pH緩衝
液などによっておこなわれる。
培養終了後、培養液から菌体などの沈殿物を除去し、
イオン交換処理法、濃縮法、塩析法などを併用すること
により、培養液からＬ−スレオニンを回収することがで
きる。
イオン交換処理法、濃縮法、塩析法などを併用すること
により、培養液からＬ−スレオニンを回収することがで
きる。
以下に本発明の実施例を説明する。
実施例１ エシェリヒア・コリＨ−7538、Ｈ−7600および親株で
あるＨ−4258を、グルコース20g/、ペプトン10g/、
酵母エキス10g/、NaCl2.5g/、ジアミノピメリン酸
0.5g/の組成からなる種培地（pH7.4）で、30℃、16時
間振盪培養した。得られた種培養液100mlを１の下記
発酵培地を含む２の発酵槽に植菌し、温度30℃、撹拌
数800rpm、通気量１/min.にて培養した。培養中のpH
調整および窒素源の供給はアンモニア水でおこない、pH
は約6.5に維持した。グリコースを適宜供給しつつ、80
時間培養をおこなった。その際のＬ−スレオニンの生産
量を高速液体クロマトグラフィー法により定量し、結果
を第２表にまとめた。
あるＨ−4258を、グルコース20g/、ペプトン10g/、
酵母エキス10g/、NaCl2.5g/、ジアミノピメリン酸
0.5g/の組成からなる種培地（pH7.4）で、30℃、16時
間振盪培養した。得られた種培養液100mlを１の下記
発酵培地を含む２の発酵槽に植菌し、温度30℃、撹拌
数800rpm、通気量１/min.にて培養した。培養中のpH
調整および窒素源の供給はアンモニア水でおこない、pH
は約6.5に維持した。グリコースを適宜供給しつつ、80
時間培養をおこなった。その際のＬ−スレオニンの生産
量を高速液体クロマトグラフィー法により定量し、結果
を第２表にまとめた。
発酵培地の組成は以下の通りである。
グルコース40g/、（NH4）2SO412g/、KH2PO42g/
、MgSO4・7H2O 1g/、ジアミノピメリン酸0.9g/、
DL−メチオニン0.3g/、コーン・スティープ、リカー5
g/（pH7.4） Ｈ−7538株を用いて得たＬ−スレオニン含有培養物１
を遠心分離（3,000rpm,10分）にかけ菌体その他の不
純物を除去した。得られた上澄液を強酸性陽イオン交換
樹脂ダイヤイオンSKI（Ｈ型）のカラムに通し、Ｌ−ス
レオニンを吸着させ、水洗後0.5規定のアンモニア水で
溶出して、Ｌ−スレオニン画分を集めた。集めた画分を
濃縮し、エタノールを加えて冷却下で保存することによ
り、純度98％以上のＬ−スレオニンの結晶が30g得られ
た。
、MgSO4・7H2O 1g/、ジアミノピメリン酸0.9g/、
DL−メチオニン0.3g/、コーン・スティープ、リカー5
g/（pH7.4） Ｈ−7538株を用いて得たＬ−スレオニン含有培養物１
を遠心分離（3,000rpm,10分）にかけ菌体その他の不
純物を除去した。得られた上澄液を強酸性陽イオン交換
樹脂ダイヤイオンSKI（Ｈ型）のカラムに通し、Ｌ−ス
レオニンを吸着させ、水洗後0.5規定のアンモニア水で
溶出して、Ｌ−スレオニン画分を集めた。集めた画分を
濃縮し、エタノールを加えて冷却下で保存することによ
り、純度98％以上のＬ−スレオニンの結晶が30g得られ
た。
発明の効果 本発明によれば、アミノ酸製剤や飼料添加物として有
用なＬ−スレオニンを、収率よく安価に製造することが
できる。
用なＬ−スレオニンを、収率よく安価に製造することが
できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 13/00 - 13/24 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】エシェリヒア属に属し、バリンアナログに
耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物
を培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンを生成蓄積
させ、該培養物よりＬ−スレオニンを採取することを特
徴とする発酵法によるＬ−スレオニンの製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33893789A JP2810739B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 |
| HU845290A HU207536B (en) | 1989-12-27 | 1990-12-22 | Process for producing 1-threonine with fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33893789A JP2810739B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03198786A JPH03198786A (ja) | 1991-08-29 |
| JP2810739B2 true JP2810739B2 (ja) | 1998-10-15 |
Family
ID=18322730
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33893789A Expired - Lifetime JP2810739B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2810739B2 (ja) |
| HU (1) | HU207536B (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116334155A (zh) * | 2023-05-31 | 2023-06-27 | 齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司 | 一种低含量l-苏氨酸的清洁生产方法 |
-
1989
- 1989-12-27 JP JP33893789A patent/JP2810739B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-12-22 HU HU845290A patent/HU207536B/hu unknown
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３９（１１），２１９３−２１９８，１９７５ |
| Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３９（６），１３１９−１３２２，１９７５ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU908452D0 (en) | 1991-07-29 |
| HU207536B (en) | 1993-04-28 |
| JPH03198786A (ja) | 1991-08-29 |
| HUT60329A (en) | 1992-08-28 |
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