JP2817155B2 - 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法Info
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- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/10—Citrulline; Arginine; Ornithine
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ−アルギニンは肝機能促進薬、アミノ酸輪液及び総
合アミノ酸製剤等の重要な成分である。本発明はこのＬ
−アルギニンを発酵法で製造する方法を改良するもので
ある。
合アミノ酸製剤等の重要な成分である。本発明はこのＬ
−アルギニンを発酵法で製造する方法を改良するもので
ある。
ブレビバクテリウム属及びコリネバクテリウム属の微
生物がＬ−アルギニン生産能を有するためには、２−チ
アゾールアラニン（以下２−TAと略す。）、アルギニン
ヒドロキサメート等への耐性を付与せしめれば良いこと
がわかっている。更に、前記薬剤耐性に加えてサルファ
剤、アルギノール耐性又は８−アザグアニンα−アミノ
−β−ヒドロキシ吉草酸等の薬剤に耐性を付与するこ
と、及びＬ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−スレオニ
ン、Ｌ−トリプトファン又はＬ−リジン等のアミノ酸に
対する要求性を不与することによりＬ−アルギニンの生
産能が向上することは知られている。
生物がＬ−アルギニン生産能を有するためには、２−チ
アゾールアラニン（以下２−TAと略す。）、アルギニン
ヒドロキサメート等への耐性を付与せしめれば良いこと
がわかっている。更に、前記薬剤耐性に加えてサルファ
剤、アルギノール耐性又は８−アザグアニンα−アミノ
−β−ヒドロキシ吉草酸等の薬剤に耐性を付与するこ
と、及びＬ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−スレオニ
ン、Ｌ−トリプトファン又はＬ−リジン等のアミノ酸に
対する要求性を不与することによりＬ−アルギニンの生
産能が向上することは知られている。
Ｌ−アルギニンの製造コストを低下させるために発酵
収率を向上させることは重要な問題である。
収率を向上させることは重要な問題である。
本発明は上記問題点を解決するためになされたもので
あり、従来より知られているブレビバクテリウム属及び
コリネバクテリウム属に属するＬ−アルギニン生産能を
有する微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を
見いだすべく研究した結果、Ｘ−グアニジン（Ｘは脂肪
鎖又は脂肪鎖の誘導体）（以下、Ｘ−GNと略す。）に耐
性を付与した菌株の中に、従来のＬ−アルギニン生産菌
よりも高収率でＬ−アルギニンを生産する菌株が存在す
ることを発見した。
あり、従来より知られているブレビバクテリウム属及び
コリネバクテリウム属に属するＬ−アルギニン生産能を
有する微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を
見いだすべく研究した結果、Ｘ−グアニジン（Ｘは脂肪
鎖又は脂肪鎖の誘導体）（以下、Ｘ−GNと略す。）に耐
性を付与した菌株の中に、従来のＬ−アルギニン生産菌
よりも高収率でＬ−アルギニンを生産する菌株が存在す
ることを発見した。
即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリネバク
テリウム属に属し、Ｘ−GN耐性を有し、且つＬ−アルギ
ニン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地
中に生成・蓄積したＬ−アルギニンを採取することを特
徴とするＬ−アルギニンの製造法に関する。
テリウム属に属し、Ｘ−GN耐性を有し、且つＬ−アルギ
ニン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地
中に生成・蓄積したＬ−アルギニンを採取することを特
徴とするＬ−アルギニンの製造法に関する。
本発明において用いられる微生物はブレビバクテリウ
ム属及びコリネバクテリウム属に属し、Ｘ−GN耐性を有
し、かつＬ−アルギニン生産能を有する変異株である。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に、先にＬ−
アルギニン生産能を付与し、次いでＸ−GN耐性を付与し
ても良いし、又先にＸ−GN耐性を付与し、次いでＬ−ア
ルギニン生産能を付与しても良い。
ム属及びコリネバクテリウム属に属し、Ｘ−GN耐性を有
し、かつＬ−アルギニン生産能を有する変異株である。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に、先にＬ−
アルギニン生産能を付与し、次いでＸ−GN耐性を付与し
ても良いし、又先にＸ−GN耐性を付与し、次いでＬ−ア
ルギニン生産能を付与しても良い。
Ｘ−GNとしては、ブテニルグアニジン、ヘキシルグル
アニジン、オクチルグアニジン等の脂肪鎖グアニジン及
び４−メチル−３−ブテニルグアニジン等の脂肪鎖グア
ニジン誘導体があり、これらは何れもエネルギー転移阻
害剤として知られている。
アニジン、オクチルグアニジン等の脂肪鎖グアニジン及
び４−メチル−３−ブテニルグアニジン等の脂肪鎖グア
ニジン誘導体があり、これらは何れもエネルギー転移阻
害剤として知られている。
本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属の特にコリネホルムＬ−グ
ルタミン酸生産性細菌として知られているものであり、
例えば、以下のものがある。
属又はコリネバクテリウム属の特にコリネホルムＬ−グ
ルタミン酸生産性細菌として知られているものであり、
例えば、以下のものがある。
ブレビバクテリウム・デイバリカタム ATCC 14020 ブレビバクテリウム・フラバム ATCC 14067 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ATCC 13869 ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ATCC 14066 コリネバクテリウム・アセトアシドフイルム ATCC 13870 コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC 13032 これらの親株より本発明の変異株を変異誘導する方法
は、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ンに接触せしめる等の通常の変異誘導方法が適宜適用で
きる。変異処理した菌株から本発明の変異株を分離する
方法は、Ｘ−GNを含有する培地で生育するような菌株を
採取することによって行われる。
は、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ンに接触せしめる等の通常の変異誘導方法が適宜適用で
きる。変異処理した菌株から本発明の変異株を分離する
方法は、Ｘ−GNを含有する培地で生育するような菌株を
採取することによって行われる。
本発明の変異株の具体的な変異誘導方法とＸ−GNの１
種としてのオクチルグアニジン（以下、Ｏ−GNと略す）
濃度と菌株の生育度の関係を以下に示す。
種としてのオクチルグアニジン（以下、Ｏ−GNと略す）
濃度と菌株の生育度の関係を以下に示す。
ブイヨン寒天スラント上に30℃で24時間生育させたブ
レビバクテリウム・フラバムAJ11169,FERM−P4161（ATC
C14067より誘導した２−TA耐性株）及びコリネバクテリ
ウム・グルタミクムAJ12092,FERM−P7273（ATCC13032よ
り誘導した２−TA耐性株）の菌体をM/30リン酸緩衝液に
懸濁し菌体濃度108〜109/mlの菌体懸濁液に500μg/mlの
Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを
加え30℃に20分間保持した。ついで遠心分離して菌体を
集め、M/30リン酸緩衝液で良く洗滌した後、下記組成の
培地に接種し、31.5℃で４〜10日間培養した。
レビバクテリウム・フラバムAJ11169,FERM−P4161（ATC
C14067より誘導した２−TA耐性株）及びコリネバクテリ
ウム・グルタミクムAJ12092,FERM−P7273（ATCC13032よ
り誘導した２−TA耐性株）の菌体をM/30リン酸緩衝液に
懸濁し菌体濃度108〜109/mlの菌体懸濁液に500μg/mlの
Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを
加え30℃に20分間保持した。ついで遠心分離して菌体を
集め、M/30リン酸緩衝液で良く洗滌した後、下記組成の
培地に接種し、31.5℃で４〜10日間培養した。
寒天培地に生育した菌株の中から、Ｌ−アルギニン生
産能の高い菌株としてブレビバクテリウム・フラバム
AJ 12429 FERM BP−2227 （２−TA耐性、Ｏ−GN耐性）及びコリネバクテリウム・
グルタミクム AJ 12430 FERM BP−2228 （２−TA耐性、Ｏ−GN耐性）を得た。
産能の高い菌株としてブレビバクテリウム・フラバム
AJ 12429 FERM BP−2227 （２−TA耐性、Ｏ−GN耐性）及びコリネバクテリウム・
グルタミクム AJ 12430 FERM BP−2228 （２−TA耐性、Ｏ−GN耐性）を得た。
このようにして得られた変異株のＯ−GN耐性度を親株
と比較した。
と比較した。
グルコース0.5g/dl、尿素0.15g/dl、硫安0.15g/dl、K
H2PO40.3g/dl、K2HPO40.1g/dl、MgSO4・7H2O 0.01g/d
l、CaCl2・2H2O 0.1mg/dl、ビオチン100Mg/、サイア
ミン塩酸塩100μg/、FeSO4・7H2O 0.002g/dl、MnSO4
・7H2O 0.002g/dlおよび表に示す量のＯ−GNを含み、pH
7.0に調節した培地に、天然培地（ペプトン1g/dl、酵母
エキス1g/dl、NaCl 0.5g/dl、pH7.0）スラントで24時
間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、24時間培養
して生育度を濁度で測定した。
H2PO40.3g/dl、K2HPO40.1g/dl、MgSO4・7H2O 0.01g/d
l、CaCl2・2H2O 0.1mg/dl、ビオチン100Mg/、サイア
ミン塩酸塩100μg/、FeSO4・7H2O 0.002g/dl、MnSO4
・7H2O 0.002g/dlおよび表に示す量のＯ−GNを含み、pH
7.0に調節した培地に、天然培地（ペプトン1g/dl、酵母
エキス1g/dl、NaCl 0.5g/dl、pH7.0）スラントで24時
間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、24時間培養
して生育度を濁度で測定した。
上述の変異株にサルファグアニジン耐性、アルギニノ
ール耐性、８−アザグアニン耐性のようにすでにＬ−ア
ルギニンの生産性を向上せしめることが知られている性
質を更に付加することにより収率が向上する場合が多
い。
ール耐性、８−アザグアニン耐性のようにすでにＬ−ア
ルギニンの生産性を向上せしめることが知られている性
質を更に付加することにより収率が向上する場合が多
い。
このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭素
源、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき
物質及び必要に応じビタミン等のその他の有機微量栄養
素を含有する通常の培地である。
源、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき
物質及び必要に応じビタミン等のその他の有機微量栄養
素を含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シュクロース等の炭水化
物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア
水、アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。
無機イオンとしてはカリイオン、ナトリウムイオン、マ
グネシウムイオン、リン酸イオンその他が必要に応じ適
宜培地に添加される。
物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア
水、アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。
無機イオンとしてはカリイオン、ナトリウムイオン、マ
グネシウムイオン、リン酸イオンその他が必要に応じ適
宜培地に添加される。
培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地のpHを４
ないし８に温度を25℃ないし37℃に調節しつつ行なえば
より好ましい結果が得られる。かくして１ないし７日間
も培養すれば培地中に著量のＬ−アルギニンが生成蓄積
される。
ないし８に温度を25℃ないし37℃に調節しつつ行なえば
より好ましい結果が得られる。かくして１ないし７日間
も培養すれば培地中に著量のＬ−アルギニンが生成蓄積
される。
培養液よりＬ−アルギニンを採取する方法は、イオン
交換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
交換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
以下実施例にて説明する。
実施例 グルコース10g/dl、（NH4）2SO47g/dl、KH2PO40.1g/d
l、MgSO4・7H2O 0.04g/dl、FeSO4・7H2O 1mg/dl、MnSO4
・4H2O 1mg/dl、サイアミン・HCl100μg/、ビオチン
100μg/、大豆蛋白酸加水分解液60mg/dl（全窒素と
して）炭酸カルシウム5g/dl（別殺菌）を含む培地をpH
7.0に調節し、その20mlを500ml容肩付フラスコに入れ加
熱殺菌した。これに第１表に示す菌株を一白金耳接種
し、31.5℃に保ちつつ４日間振盪した。各菌株の培養液
中には第２表に示す量のＬ−アルギニンがそれぞれ生成
蓄積していた。
l、MgSO4・7H2O 0.04g/dl、FeSO4・7H2O 1mg/dl、MnSO4
・4H2O 1mg/dl、サイアミン・HCl100μg/、ビオチン
100μg/、大豆蛋白酸加水分解液60mg/dl（全窒素と
して）炭酸カルシウム5g/dl（別殺菌）を含む培地をpH
7.0に調節し、その20mlを500ml容肩付フラスコに入れ加
熱殺菌した。これに第１表に示す菌株を一白金耳接種
し、31.5℃に保ちつつ４日間振盪した。各菌株の培養液
中には第２表に示す量のＬ−アルギニンがそれぞれ生成
蓄積していた。
AJ12429を上記の方法で培養して培養液１を得、こ
れにより遠心分離にて菌体他を除き、上清を弱酸性イオ
ン交換樹脂「アンバーライト」Ｃ−50（NH4 +型）に通過
させた。樹脂を水洗後、2N NH4OHにてＬ−アルギニンを
溶出し、ついで溶出液を濃縮し、これよりＬ−アルギニ
ンの粗結晶19.5gを得た。
れにより遠心分離にて菌体他を除き、上清を弱酸性イオ
ン交換樹脂「アンバーライト」Ｃ−50（NH4 +型）に通過
させた。樹脂を水洗後、2N NH4OHにてＬ−アルギニンを
溶出し、ついで溶出液を濃縮し、これよりＬ−アルギニ
ンの粗結晶19.5gを得た。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 13/00 - 13/24 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属に属しＸ−グアニジン（Ｘは脂肪鎖又は脂肪鎖の
誘導体）に耐性を有し、且つＬ−アルギニン生産能を有
する微生物を液体培地中で培養し、培地中に生成・蓄積
したＬ−アルギニンを採取することを特徴とするＬ−ア
ルギニンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP577089A JP2817155B2 (ja) | 1989-01-12 | 1989-01-12 | 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 |
| EP19900100548 EP0378223B1 (en) | 1989-01-12 | 1990-01-11 | Process for producing L-arginine by fermentation |
| DE1990607800 DE69007800T2 (de) | 1989-01-12 | 1990-01-11 | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Arginin. |
| US08/051,433 US5284757A (en) | 1989-01-12 | 1993-04-23 | Process for producing l-arginine by fermentation with brevibacterium or corynebacterium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP577089A JP2817155B2 (ja) | 1989-01-12 | 1989-01-12 | 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02186995A JPH02186995A (ja) | 1990-07-23 |
| JP2817155B2 true JP2817155B2 (ja) | 1998-10-27 |
Family
ID=11620358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP577089A Expired - Lifetime JP2817155B2 (ja) | 1989-01-12 | 1989-01-12 | 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0378223B1 (ja) |
| JP (1) | JP2817155B2 (ja) |
| DE (1) | DE69007800T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012147989A1 (en) | 2011-04-25 | 2012-11-01 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid belonging to the glutamate family, using a coryneform bacterium |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3617091B2 (ja) | 1994-11-30 | 2005-02-02 | 味の素株式会社 | 塩基性アミノ酸の精製方法 |
| EP2818556B1 (en) | 2004-10-07 | 2023-05-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
| WO2007105790A1 (ja) * | 2006-03-15 | 2007-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | アミノ酸の精製方法 |
| KR100791659B1 (ko) * | 2006-07-13 | 2008-01-03 | 씨제이 주식회사 | 알지닌을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 엘-알지닌의제조방법 |
| JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010130899A (ja) | 2007-03-14 | 2010-06-17 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| JP5247120B2 (ja) * | 2007-11-02 | 2013-07-24 | 雪印メグミルク株式会社 | Ｌ−オルニチン含有物の製造方法 |
| JP2012223091A (ja) | 2009-08-25 | 2012-11-15 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| CN102220390A (zh) * | 2010-04-15 | 2011-10-19 | 上海聚瑞生物技术有限公司 | 精氨酸发酵联合酶转化制备瓜氨酸的方法 |
| WO2013069634A1 (ja) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | 味の素株式会社 | 発酵法による目的物質の製造法 |
| KR101773755B1 (ko) | 2013-05-13 | 2017-09-01 | 아지노모토 가부시키가이샤 | Ｌ-아미노산의 제조법 |
| JP2016165225A (ja) | 2013-07-09 | 2016-09-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法 |
| WO2015050234A1 (ja) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
| BR112016008830B1 (pt) | 2013-10-23 | 2023-02-23 | Ajinomoto Co., Inc | Método para produzir uma substância alvo |
| JP6623690B2 (ja) | 2015-10-30 | 2019-12-25 | 味の素株式会社 | グルタミン酸系ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP3861109A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
| JPWO2022092018A1 (ja) | 2020-10-28 | 2022-05-05 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2084566B (en) * | 1980-09-29 | 1984-06-06 | Ajinomoto Kk | Production of l-arginine by fermentation |
-
1989
- 1989-01-12 JP JP577089A patent/JP2817155B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-01-11 DE DE1990607800 patent/DE69007800T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-11 EP EP19900100548 patent/EP0378223B1/en not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012147989A1 (en) | 2011-04-25 | 2012-11-01 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid belonging to the glutamate family, using a coryneform bacterium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02186995A (ja) | 1990-07-23 |
| DE69007800D1 (de) | 1994-05-11 |
| EP0378223A1 (en) | 1990-07-18 |
| EP0378223B1 (en) | 1994-04-06 |
| DE69007800T2 (de) | 1994-07-28 |
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