JPS6241000B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は発酵法によるＬ―グルタミン酸の製造
方法に関する。 本発明者等は発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造方法を改良すベく鋭意研究した結果、ブレビ
バクテリウム（Brevibacterium）属またはコリ
ネバクテリウム（Corynebacterium）属のＬ―グ
ルタミン酸生産菌より誘導したフオルマイシン、
コルジセピン、ツバサイジン、デコイニン、サイ
コフラニン、トヨカマイシン又はサンギバマイシ
ンに耐性を有する変異株の中から、Ｌ―グルタミ
ン酸の生産能が優れた菌株を分離育成することに
成功し、本発明を完成するにいたつた。 すなわち、本発明の要旨はブレビバクテリウム
属またはコリネバクテリウム属に属し、これら薬
剤に耐性を有し、かつＬ―グルタミン酸生成能を
有する変異株を培養して、培養液中にＬ―グルタ
ミン酸を生成蓄積させて、これを採取することを
特徴とする発酵法によるＬ―グルタミン酸の製造
方法である。以下本発明をさらに詳細に説明す
る。 本発明に使用するこれら薬剤に耐性を有する菌
株は、例えば以下の菌株がある。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11635（FERM―P5809）（フオルマイシン耐
性） ブレビバクテリウム・フラバムAJ11636
（FERM―P5810）（コルジセピン耐性） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11637（FERM―P5811）（ツバサイジン耐性） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11638（FERM―P5812）（デコイニン耐性） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11639（FERM―P5813）（サイコフラニン耐
性） ブレビバクテリウム・フラバムAJ11640
（FERM―P5814）（トヨカマイシン耐性） ブレビバクテリウム・フラバムAJ11641
（FERM―P5815）（サンギバマイシン耐性） コリネバクテリウム・グルタミクムAJ11642
（FERM―P5816）（フオルマイシン耐性） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
AJ11643（FERM―P5817）（コルジセピン耐性） コリネバクテリウム・グルタミクムAJ11644
（FERM―P5818）（ツバサイジン耐性） コリネバクテリウム・グルタミクムAJ11645
（FERM―P5819）（デコイニン耐性） コリネバクテリウム・グルタミクムAJ11646
（FERM―P5820）（サイコフラニン耐性） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
AJ11647（FERM―P5821）（トヨカマイシン耐
性） コリネバクテリウム・アセトアジドフイラム
AJ11648（FERM―P5822）（サンギバマイシン耐
性） これらの菌株は、それぞれブレビバクテリウ
ム・ラクトフエルメンタムATCC13869、ブレビ
バクテリウム・フラバムATCC14067、コリネバ
クテリウム・グルタミクムATCC13032、コリネ
バクテリウム・アセトアシドフイラム
ATCC13870を親株として変異誘導したものであ
る。 この他例えばブレビバクテリウム・デイバリカ
タム（Brevibacterium divaricatum）
ATCC14020、及びブレビバクテリウム・サツカ
ロリテイカム（Brevibacterium
saccharoliticum）ATCC14066等を親株として用
いても同様に変異株をつくることができる。 本発明の変異株が、更に、従来Ｌ―グルタミン
酸の生産性を高めることが知られている性質、例
えばフルオロクエン酸耐性、ケトマロン酸耐性、
リゾチーム感受性、フルオロマロン酸耐性、２，
６―ピリジンジカルボン酸耐性、Ｎ―グルタミル
パルミチン酸感受性、グアニジン耐性等を併有す
ればよりＬ―グルタミン酸の収率が向上する。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、Ｘ線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の
通常の方法が用いられ、例えば250μｇ/mlのＮ―
ニトロ―N′―メチル―Ｎ―ニトロソグアニジン
により30℃で20分間処理する方法等がある。 上記例示菌株の薬剤耐性度合に関する実験結果
を第１表に示す。 実験方法 下記のGM培地に、第１表に示す薬剤を第１表
に示す量添加し、４ml宛を小型試験管に入れ殺菌
した。一方予め培養しておいた第１表に示す菌株
を、26倍希釈液の562mμの吸光度が0.1になるよ
うにGM培地にけん濁し、このけん濁液の0.1mlを
上記４mlの培地に接種した。培養は30℃で24時間
振とうしつつ行い、培養24時間後の培養液につい
て、26倍希釈液の562mμにおける吸光度を測定
して生育度とした。 GM培地 グルコース 0.5ｇ/dl （NH₄）₂SO₄ 0.15ｇ/dcm K₂HPO₄ 0.1ｇ/dl CaC_２・2H₂O 0.1mg/dl FeC_３・6H₂O 4.85mg/dl （NH₄）₆M₀₇O₂₄・4H₂O 0.185mg/dl MnC_２・4H₂O 0.36mg/dl ビオチン ３μｇ/dl 尿 素 0.15ｇ/dl KH₂PO₄ 0.3ｇ/dl MgSO₄・7H₂O 0.01ｇ/dl Na₂B₄O₇・10H₂O 0.44mg/dl CuSO₄・5H₂O 1.95mg/dl ZnSO₄・7H₂O 44 mg/dl サイアミン・HC 10 μｇ/dl PH 7.0（KOH）。

【表】 上記本発明の変異株を用いてＬ―グルタミン酸
を生成蓄積させるには、Ｌ―グルタミン酸発酵に
通常用いられる方法が使用できる。 すなわち、培地としては、炭素源、窒素源、無
機イオン及び必要あれば有機微量栄養素を含有す
る通常の培地が用いられる。炭素源としては例え
ば、糖類（グルコース、シユクロース等及びこれ
らを含有するサトウキビ、甜菜からの糖汁あるい
は廃糖蜜、澱粉加水分解物等）、有機酸（酢酸
等）及びアルコール（エタノール等）が好適であ
る。 窒素源としては通常のＬ―グルタミン酸発酵に
用いられる例えばアンモニウム塩、アンモニア
水、アンモニアガス、尿素等が用いられる。その
他リン酸イオン、マグネシウムイオン等の無機イ
オンが必要に応じて適宜培地に添加される。ビオ
チン又はビオチン活性物質は、生育の適量以下の
制限量含有するように培地が調製され、廃糖蜜等
の多量のビオチンを含有する原料を炭素源として
使用するときは、ペニシリン類、パルミチン酸等
の高級脂肪酸、ポリオキシエチレンソルビタン―
モノパルミテート等の界面活性等が、ビオチン抑
制剤として培地に添加される。 培養は、好気的条件下で温度30〜38℃の範囲、
PH６から８の範囲に調節しつつ行えば、より好ま
しい結果が得られる。 かくして20ないし80時間も培養すれば培地中に
は著量のＬ―グルタミン酸が生成蓄積される。 培地中に蓄積されたＬ―グルタミン酸を採取す
る方法は、通常の方法が使用できる。 実施例 １ グルコース36mg/ml、尿素２mg/ml、KH₂PO₄1
mg/ml、MgSO₄・7aq 0.4mg/ml、FeSO₄・7H₂O
10μｇ/ml、MnSO₄・4H₂O ８μｇ/ml、大豆蛋
白酸加水分解物（「味液」）５μ/ml、サイアミ
ン塩酸塩10.0μｇ/dl及びビオチン0.25μｇ/dlを
含有する培地を調製しその20mlずつを500ml容の
振とうフラスコに入れ115℃で10分間加熱殺菌し
た。この培地に次に示す菌株を接種し、振とうし
つつ31.5℃にて培養を行つた。 培養中、培養液をPH6.5ないし8.0に保つように
450mg/mlの濃度の尿素溶液を少量ずつ添加した。 30時間で培養を終了し、培養液中に蓄積したＬ
―グルタミン酸の対糖収率を測定した。その結果
を第２表に示す。

【表】 実施例 ２ 甘蔗糖蜜を、糖として100mg/ml、KH₂PO₄ １
mg/ml、MgSO₄・7H₂O １mg/ml及びサイアミン
塩酸塩10.0μｇ/dlを含有する培地を調製し（PH
7.0）、その30mlずつを500ml振とうフラスコに入
れ、加熱殺菌した。この培地に第２表に示す菌株
を接種し、往復振とう機により31.5℃で培養を行
つた。 培養中、培養液をPH6.5〜8.0に保つように400
mg/mlの濃度の尿素溶液を少量ずつ添加した。培
地の26倍希釈液の562mμの吸光度が0.30に到達
した時にポリオキシエチレンソルビタンモノパル
ミテートを添加した。 36時間で発酵を終了し、発酵液中に蓄積したＬ
―グルタミン酸の対糖収率を測定した。その結果
を第３表に示す。

【表】

【表】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
   ウム属に属し、フオルマイシン、コルジセピン、
   ツバサイジン、デコイニン、サイコフラニン、ト
   ヨカマイシン、又はサンギバマイシンに耐性を有
   し、かつＬ―グルタミン酸生成能を有する変異株
   を培養して、培養液中にＬ―グルタミン酸を生成
   蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発
   酵法によるＬ―グルタミン酸の製造方法。