JPS6236679B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6236679B2 JPS6236679B2 JP7595480A JP7595480A JPS6236679B2 JP S6236679 B2 JPS6236679 B2 JP S6236679B2 JP 7595480 A JP7595480 A JP 7595480A JP 7595480 A JP7595480 A JP 7595480A JP S6236679 B2 JPS6236679 B2 JP S6236679B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- strain
- proline
- corynebacterium
- activity
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims description 12
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 11
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 claims description 8
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 102000006732 Citrate synthase Human genes 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 108010030844 2-methylcitrate synthase Proteins 0.000 claims 1
- 108010071536 Citrate (Si)-synthase Proteins 0.000 claims 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N fluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)CF QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- RBCXEDQEZDUMHD-UHFFFAOYSA-N 2-fluoropropanedioic acid Chemical compound OC(=O)C(F)C(O)=O RBCXEDQEZDUMHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- BQQVEASFNMRTBA-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(3-aminopropyl)piperazin-1-yl]ethanol Chemical compound NCCCN1CCN(CCO)CC1 BQQVEASFNMRTBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 3
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 monofluoroacetic acid ketomalonic acid Chemical compound 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 3
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OMGHIGVFLOPEHJ-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydro-1h-pyrrol-1-ium-2-carboxylate Chemical compound OC(=O)C1NCC=C1 OMGHIGVFLOPEHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 2
- 241001485655 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 Species 0.000 description 2
- 241000807905 Corynebacterium glutamicum ATCC 14067 Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBJHBAHKTGYVGT-ZXFLCMHBSA-N 5-[(3ar,4r,6as)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@H]2[C@@H](CCCCC(=O)O)SC[C@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZXFLCMHBSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 108700038781 Citrate synthases Proteins 0.000 description 1
- 241001517047 Corynebacterium acetoacidophilum Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Natural products CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- IWMZNIWZCJGUJQ-UHFFFAOYSA-N [S].NC(N)=N Chemical compound [S].NC(N)=N IWMZNIWZCJGUJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 1
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- BRBKOPJOKNSWSG-UHFFFAOYSA-N sulfaguanidine Chemical compound NC(=N)NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BRBKOPJOKNSWSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004257 sulfaguanidine Drugs 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Description
この発明は発酵法によるＬ−プロリンの製造法
に関する。従来発酵法によるＬ−プロリンの製造
法については、ブレビバクテリウム属又はコリネ
バクテリウム属のイソロイシン要求株又はアルギ
ニン要求株を使用する方法（特公昭43−11751
号）、同じくサルフアーグアニジン耐性株を用い
る方法（特公昭51−40158号）、ＤＬ−３・４−デ
ヒドロプロリン耐性株を用いる方法（特開昭54−
105293）、及びバチルス属、エシエリヒヤ属のヒ
スチジン、メチオニン要求株を用いる方法（特公
昭44−1198号）等が知られている。 本発明者らは、プレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属のクエン酸合成酵素（Ｅ．
C.4.1.3.7.Citrate oxaloacetate−lyase以下CSと
記す）活性が親株の1.4倍以上の活性を有する変
異株のうちより、高い頻度でＬ−プロリンの生産
能が親株より高い菌株を得た。 本発明において使用される変異株はブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属し、
ＣＳ活性が親株のそれより1.4倍以上高くなつてい
て、更に従来のＬ−プロリン生産性付与の為に有
益又は必要な性質、（例えばイソロイシン要求
性、アルギニン要求性、２・４デヒドロプロリン
耐性、サルフア剤耐性等）即ちＬ−プロリン生産
能を有しているものである。 具体的に例示すれば以下のものがある ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ11512 ＦＥＲＭ−Ｐ5332 ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ11513 ＦＥＲＭ−Ｐ5333 ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ11514 ＦＥＲＭ−Ｐ5334 コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＪ11522 ＦＥＲＭ−Ｐ5342 コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＪ11523 ＦＥＲＭ−Ｐ5343 この様な変位株を得る際に使用される親株とし
ては、すでにＬ−プロリンを生産する事が知られ
ているブレビバクテリウム属及びコリネバクテリ
ウム属の変異株が用いられる。 更に下記に例示したブレビバクテリウム属及び
コリネバクテリウム属の野性株も本親株として使
用できる。 ブレビバクテリウム・デイバリカタム ＡＴＣＣ
14020 ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ 14067 ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
ＡＴＣＣ 13869 ブレビバクテリウム・ロゼウム ＡＴＣＣ 13825 コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ
13032 コリネバクテリウム・アセトアシドフイルム
ＡＴＣＣ 13870 コリネバクテリウム・アセトグルタミクム
ＡＴＣＣ 15806 これらの親株を変異処理する方法は、Ｎ−メチ
ル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンに接
触せしめる等の通常の方法が適用できる。 変異処理した菌株よりＣＳ活性の高い菌株を得
るには、本発明者らの知見によればモノフロロ酢
酸ケトマロン酸又はフロロマロン酸に耐性を有す
る変異株を選択すれば高い頻度でＣＳ活性が強化
された菌株が得られる。 従つて先ずモノフロロ酢酸、ケトマロン酸又は
フロロマロン酸耐性を有する変異株を選択したの
ち選択されたそれぞれの菌株についてＣＳ活性を
測定し、ＣＳ活性が望ましい程度にまで強化され
た菌株を選べばよい。 モノフロロ酢酸等の薬剤に耐性を有する変異株
の選別方法は通常の方法でよい。ＣＳ活性の測定
方法は、P.A.Srereの方法（Biochim.Biophys.
Acta、77、Ｐ693（1963））を用いて行つた。 上記例示の変異株のモノフロロ酢酸、ケトマロ
ン酸及びフロロマロン酸に対する耐性度を第１表
にＣＳ活性を第２表に、それぞれ親株と比較して
示す。
に関する。従来発酵法によるＬ−プロリンの製造
法については、ブレビバクテリウム属又はコリネ
バクテリウム属のイソロイシン要求株又はアルギ
ニン要求株を使用する方法（特公昭43−11751
号）、同じくサルフアーグアニジン耐性株を用い
る方法（特公昭51−40158号）、ＤＬ−３・４−デ
ヒドロプロリン耐性株を用いる方法（特開昭54−
105293）、及びバチルス属、エシエリヒヤ属のヒ
スチジン、メチオニン要求株を用いる方法（特公
昭44−1198号）等が知られている。 本発明者らは、プレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属のクエン酸合成酵素（Ｅ．
C.4.1.3.7.Citrate oxaloacetate−lyase以下CSと
記す）活性が親株の1.4倍以上の活性を有する変
異株のうちより、高い頻度でＬ−プロリンの生産
能が親株より高い菌株を得た。 本発明において使用される変異株はブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属し、
ＣＳ活性が親株のそれより1.4倍以上高くなつてい
て、更に従来のＬ−プロリン生産性付与の為に有
益又は必要な性質、（例えばイソロイシン要求
性、アルギニン要求性、２・４デヒドロプロリン
耐性、サルフア剤耐性等）即ちＬ−プロリン生産
能を有しているものである。 具体的に例示すれば以下のものがある ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ11512 ＦＥＲＭ−Ｐ5332 ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ11513 ＦＥＲＭ−Ｐ5333 ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ11514 ＦＥＲＭ−Ｐ5334 コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＪ11522 ＦＥＲＭ−Ｐ5342 コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＪ11523 ＦＥＲＭ−Ｐ5343 この様な変位株を得る際に使用される親株とし
ては、すでにＬ−プロリンを生産する事が知られ
ているブレビバクテリウム属及びコリネバクテリ
ウム属の変異株が用いられる。 更に下記に例示したブレビバクテリウム属及び
コリネバクテリウム属の野性株も本親株として使
用できる。 ブレビバクテリウム・デイバリカタム ＡＴＣＣ
14020 ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ 14067 ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
ＡＴＣＣ 13869 ブレビバクテリウム・ロゼウム ＡＴＣＣ 13825 コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ
13032 コリネバクテリウム・アセトアシドフイルム
ＡＴＣＣ 13870 コリネバクテリウム・アセトグルタミクム
ＡＴＣＣ 15806 これらの親株を変異処理する方法は、Ｎ−メチ
ル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンに接
触せしめる等の通常の方法が適用できる。 変異処理した菌株よりＣＳ活性の高い菌株を得
るには、本発明者らの知見によればモノフロロ酢
酸ケトマロン酸又はフロロマロン酸に耐性を有す
る変異株を選択すれば高い頻度でＣＳ活性が強化
された菌株が得られる。 従つて先ずモノフロロ酢酸、ケトマロン酸又は
フロロマロン酸耐性を有する変異株を選択したの
ち選択されたそれぞれの菌株についてＣＳ活性を
測定し、ＣＳ活性が望ましい程度にまで強化され
た菌株を選べばよい。 モノフロロ酢酸等の薬剤に耐性を有する変異株
の選別方法は通常の方法でよい。ＣＳ活性の測定
方法は、P.A.Srereの方法（Biochim.Biophys.
Acta、77、Ｐ693（1963））を用いて行つた。 上記例示の変異株のモノフロロ酢酸、ケトマロ
ン酸及びフロロマロン酸に対する耐性度を第１表
にＣＳ活性を第２表に、それぞれ親株と比較して
示す。
【表】
【表】
AJ3416は、AJ11512、AJ11513及びAJ11514の
親株であり、ブレビバクテリウム・フラバム
ＡＴＣＣ14067より誘導したＬ−イソロイシン要求
性及びサルフアグアニジン耐性変異株である。 又、ＡＪ11521は、ＡＪ11522及びＡＪ11523の親株
であり、コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ13032より誘導したＬ−イソロイシン要求
性変異株である。 実験方法 下記の組成の倍地に各々ケトマロン酸、フルオ
ロマロン酸又はモノフルオロ酢酸を添加し、その
４mlを小型試験管に分注し殺菌後、試験菌株を接
種して31℃で48時間振盪培養した。吸光度を測定
して相対生育度を算出し、各菌株の耐性度を調べ
た。 培地組成 グルコース 2.0ｇ／dl （NH4)2SO4 1.0ｇ／dl KH2PO4 0.1ｇ／dl MgSO4・7H2O 40mg／dl FeSO4・7H2O 1.0mg／dl MnSO4・4H2O 1.0mg／dl ビオチン 5.0μｇ／dl サイアミン塩酸塩 20μｇ／dl Ｌ−イソロイシン 0.01ｇ／dl pH 7.0
親株であり、ブレビバクテリウム・フラバム
ＡＴＣＣ14067より誘導したＬ−イソロイシン要求
性及びサルフアグアニジン耐性変異株である。 又、ＡＪ11521は、ＡＪ11522及びＡＪ11523の親株
であり、コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ13032より誘導したＬ−イソロイシン要求
性変異株である。 実験方法 下記の組成の倍地に各々ケトマロン酸、フルオ
ロマロン酸又はモノフルオロ酢酸を添加し、その
４mlを小型試験管に分注し殺菌後、試験菌株を接
種して31℃で48時間振盪培養した。吸光度を測定
して相対生育度を算出し、各菌株の耐性度を調べ
た。 培地組成 グルコース 2.0ｇ／dl （NH4)2SO4 1.0ｇ／dl KH2PO4 0.1ｇ／dl MgSO4・7H2O 40mg／dl FeSO4・7H2O 1.0mg／dl MnSO4・4H2O 1.0mg／dl ビオチン 5.0μｇ／dl サイアミン塩酸塩 20μｇ／dl Ｌ−イソロイシン 0.01ｇ／dl pH 7.0
【表】
実験方法は：Biochim.Biophys、Acta、77、693
に記載の方法に準じて行つた。 酵素標品は次のように調整した。グルコース10
ｇ／dl、硫酸アンモニウム4.5ｇ／dl、
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.04ｇ／dl、
FeSO4・7H2O1.0mg／dl、MnSO4・4H2O1.0mg／
dl、ビオチン500μｇ／、サイアミン塩酸塩200
μｇ／、大豆タンパク塩酸加水分解液濃縮物
（総窒素７％）1.5ml／dl、及び炭酸カルシウム
（別殺菌添加）５ｇ／dlを含みpH8.0に調節した培
地を用いて31℃、48時間振盪培養後集菌した。ト
リス・塩酸塩バツフアー（pH7.5、0.56M）で２
間洗浄し、超音波破砕（10ＫＣ、５分間）後
12000rpm-30分遠沈し、破砕物を除いた。上清
は「セフアデツクスＧ−10」を用い、低分子物質
を除き、ゲル濾過した液を酵素標品として用い
た。 上記変異株を培養する培地は炭素源、窒素源、
無機イオン、更に必要に応じてアミノ酸、ビタミ
ン等の有機微量栄養素を含有する通常の培地が用
いられる。 炭素源としては、例えば澱粉、澱粉含有原料、
澱粉糖化液、甘蔗、甜菜等の糖汁、庶糖、葡萄
糖、果糖、麦芽糖、これらの含有原料、甘蔗糖
蜜、ビート糖蜜、ハイテスト蜜、グリセリン等の
糖質原料、酢酸等の有機酸、エチルアルコール等
のアルコール等が用いられる。 窒素源としては、例えばアンモニウム塩、アン
モニア水、アンモニアガス、尿素、硝酸塩類、そ
の他補助的に使用される有機窒素源、例えば油粕
類、味液（大豆蛋白加水分解液）その他のアミノ
酸類、コーンステイープリカー、酵母又はイース
トエキス、ペプトン等のペプタイド類等が使用さ
れる。 以上の炭素源、窒素源の他の無機物質として、
りん酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄イ
オン、マンガンイオン等の微量イオンを適宜添加
する。 培養は通常pH4〜10、温度20〜40℃で好気条件
下で20〜100時間程度行えば培養液中に著量のＬ
−プロリンが生成蓄積するにいたる。培溶液中の
Ｌ−プロリンを採取する方法は、例えばイオン交
換樹脂に吸着せしめ、アンモニア水で溶離し、こ
れを濃縮、結晶化して行う等、通常の方法で実施
する。 実施例 １ グルコース10ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、
MgSO40.04ｇ／dl、MnSO4・7H2O1mg／dl、
FeSO4・7H2O1mg／dl、ビオチン250μｇ／、
サイアミン塩酸塩500μｇ／、大豆蛋白分解液
（総窒素量2.4％）３ml／dl、イソロイシン15mg／
dl、炭酸カルシウム５ｇ／dl（別殺菌添加）を含
みpH7.0に調節した培地を調整しその20mlを500ml
肩付フラスコに分注した。殺菌後あらかじめブイ
ヨンスラント上で生育させた第３表に示す菌株を
接種し31℃にて72時間振盪培養した。Ｌ−プロリ
ンの蓄積量は第３表に示す通りであつた。
に記載の方法に準じて行つた。 酵素標品は次のように調整した。グルコース10
ｇ／dl、硫酸アンモニウム4.5ｇ／dl、
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.04ｇ／dl、
FeSO4・7H2O1.0mg／dl、MnSO4・4H2O1.0mg／
dl、ビオチン500μｇ／、サイアミン塩酸塩200
μｇ／、大豆タンパク塩酸加水分解液濃縮物
（総窒素７％）1.5ml／dl、及び炭酸カルシウム
（別殺菌添加）５ｇ／dlを含みpH8.0に調節した培
地を用いて31℃、48時間振盪培養後集菌した。ト
リス・塩酸塩バツフアー（pH7.5、0.56M）で２
間洗浄し、超音波破砕（10ＫＣ、５分間）後
12000rpm-30分遠沈し、破砕物を除いた。上清
は「セフアデツクスＧ−10」を用い、低分子物質
を除き、ゲル濾過した液を酵素標品として用い
た。 上記変異株を培養する培地は炭素源、窒素源、
無機イオン、更に必要に応じてアミノ酸、ビタミ
ン等の有機微量栄養素を含有する通常の培地が用
いられる。 炭素源としては、例えば澱粉、澱粉含有原料、
澱粉糖化液、甘蔗、甜菜等の糖汁、庶糖、葡萄
糖、果糖、麦芽糖、これらの含有原料、甘蔗糖
蜜、ビート糖蜜、ハイテスト蜜、グリセリン等の
糖質原料、酢酸等の有機酸、エチルアルコール等
のアルコール等が用いられる。 窒素源としては、例えばアンモニウム塩、アン
モニア水、アンモニアガス、尿素、硝酸塩類、そ
の他補助的に使用される有機窒素源、例えば油粕
類、味液（大豆蛋白加水分解液）その他のアミノ
酸類、コーンステイープリカー、酵母又はイース
トエキス、ペプトン等のペプタイド類等が使用さ
れる。 以上の炭素源、窒素源の他の無機物質として、
りん酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄イ
オン、マンガンイオン等の微量イオンを適宜添加
する。 培養は通常pH4〜10、温度20〜40℃で好気条件
下で20〜100時間程度行えば培養液中に著量のＬ
−プロリンが生成蓄積するにいたる。培溶液中の
Ｌ−プロリンを採取する方法は、例えばイオン交
換樹脂に吸着せしめ、アンモニア水で溶離し、こ
れを濃縮、結晶化して行う等、通常の方法で実施
する。 実施例 １ グルコース10ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、
MgSO40.04ｇ／dl、MnSO4・7H2O1mg／dl、
FeSO4・7H2O1mg／dl、ビオチン250μｇ／、
サイアミン塩酸塩500μｇ／、大豆蛋白分解液
（総窒素量2.4％）３ml／dl、イソロイシン15mg／
dl、炭酸カルシウム５ｇ／dl（別殺菌添加）を含
みpH7.0に調節した培地を調整しその20mlを500ml
肩付フラスコに分注した。殺菌後あらかじめブイ
ヨンスラント上で生育させた第３表に示す菌株を
接種し31℃にて72時間振盪培養した。Ｌ−プロリ
ンの蓄積量は第３表に示す通りであつた。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属に属し、クエン酸合成酵素（Ｅ．Ｃ．4.1.3.7.
Citrate oxaloacetate−lyase）活性がその親株の
1.4倍以上の活性を有し、Ｌ−プロリン生産能を
有する変異株を培養し、培地中に生成蓄積された
Ｌ−プロリンを採取する事を特徴とするＬ−プロ
リンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7595480A JPS572691A (en) | 1980-06-05 | 1980-06-05 | Preparation of l-proline by fermentation method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7595480A JPS572691A (en) | 1980-06-05 | 1980-06-05 | Preparation of l-proline by fermentation method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS572691A JPS572691A (en) | 1982-01-08 |
| JPS6236679B2 true JPS6236679B2 (ja) | 1987-08-07 |
Family
ID=13591116
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7595480A Granted JPS572691A (en) | 1980-06-05 | 1980-06-05 | Preparation of l-proline by fermentation method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS572691A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2013069634A1 (ja) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | 味の素株式会社 | 発酵法による目的物質の製造法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2665686T3 (es) * | 2004-02-26 | 2018-04-26 | Ajinomoto Co., Inc | Fertilizante/revitalizante para plantas |
-
1980
- 1980-06-05 JP JP7595480A patent/JPS572691A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2013069634A1 (ja) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | 味の素株式会社 | 発酵法による目的物質の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS572691A (en) | 1982-01-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3106714B2 (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| KR920007405B1 (ko) | 아미노산의 제조방법 | |
| JPS6236673B2 (ja) | ||
| US5484714A (en) | Method of producing trehalose by microorganisms which can produce tremalose with sucrose or maltose as main carbon source | |
| JPS6236676B2 (ja) | ||
| JP2817157B2 (ja) | 発酵法によるｌ‐アミノ酸の製造法 | |
| JPH02186995A (ja) | 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 | |
| JP2810697B2 (ja) | 芳香族アミノ酸の製造法 | |
| JPH0362394B2 (ja) | ||
| JPH0362395B2 (ja) | ||
| JPS6257315B2 (ja) | ||
| JPS6224074B2 (ja) | ||
| US5188947A (en) | Process and microorganism for producing l-ornithine by corynebacterium, brevibacterium, or athrobacter | |
| JPS6236679B2 (ja) | ||
| JP2600750B2 (ja) | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 | |
| JP2817172B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製法 | |
| JPS6236672B2 (ja) | ||
| JPS6362199B2 (ja) | ||
| AU5706899A (en) | Process for the fermentative production of L-amino acids | |
| JPH0665314B2 (ja) | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 | |
| JPH0638743B2 (ja) | Ｌ―リジンを生産する微生物およびこれを用いたｌ―リジンの製造方法 | |
| KR910008636B1 (ko) | L-아르기닌의 제조방법 | |
| JPH0561914B2 (ja) | ||
| JPS63248392A (ja) | 発酵法によるｌ−ロイシンの製造法 | |
| US3582471A (en) | Method of producing threonine by fermentation |