KR920007405B1 - 아미노산의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음.

Description

아미노산의 제조방법
본 발명은 발효법에 의한 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌의 제조방법에 관한 것이다. L-트립토판은 의약, 식품, 동물 사료용 첨가제로서 유용한 아미노산이며 ; L-티로신은 특히 의약으로서 유용한 아미노산이고, L-페닐알라닌은 제약 및 식품 산업에서 유용한 아미노산이다.
지금까지, 코리네형 글루탐산-생산 세균을 이용하는 발효법에 의한 L-트립토판의 각종 제조방법이 공지되어 있다 ; 예를들면, L-티로신 및 L-페닐알라닌 요구성이며 티로신 유사체 및 페닐알라닌 유사체중 적어도 하나에 대해 내성인, 코리네박테리움(Corynebacterium)속에 속하는 미생물을 이용하는 방법(일본국 특허 공고 제19037/1976호) ; 5-메틸트립토판 같은 트립토판 유사체에 대해 내성인 미생물을 이용하는 방법(일본국 특허 공고 제 18828/1973호, 38795/1976호, 39517/1978호) ; 히스티딘 요구성 미생물을 이용하는 방법(일본국 특허 공고 제 4505/1972호) ; 및 피루베이트 키나제 활성이 감소 또는 결손된 브레비박테리움(Brevibacterium)균주를 이용하는 방법(일본국 특허 공개 제 253391/1987호).
덧붙여, 코리네형 글루탐산-생산 세균을 이용하는 발효법에 의해 L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 재조하는 각층 방법이 공지되어 있다 ; 예를들면, 아미노산을 요구하는 영양 요구성 변이주, 아미노산 유사체에 대해 내성인 변이주, 피루베이토 키나제 활성이 감소 또는 결손된 변이주, 또는 이러한 특성을 동시에 갗는 균주를 이용하는 방법[Nippon Nogeikagaku Kaishi. 50(1)p.R79(1979) ; 일본국 특허 공개 제 128897/-1986호.
한편, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 생산할 수 있는 미생물이 제조합 DNA 기술에 의해 제작되었었다. L-티로신-생산 미생물의 예로는, 3-데옥시-D-아라비노-헵투로소네이토-7-포스페이트 신타제(이후에는 DS로 표기한다)를 코딩하는 유전자, 코리스메이트 뮤타제(이후에는 CM으로 표기한다)를 코딩하는 유전자 및 프레페네이트 데히드로케나제 또는 프레티로신 아미노트랜스퍼라제를 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합 DNA를 보유하는 균주가 공지되어 있다(일본국 특허 공개 제 34197/1985호). L-폐닐알라닌-생산 미생물의 예로는, DS를 코딩하는 유전자 또는 CM 및 프레페네이트 데히드라타제(이후에는 PD로 표기한다)를 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합 DNA를 보유하는 균주가 공지되어 있다(일본국 특허 공개제 24192/1985호, 260892/1986호 및 124375/1986호).
L-트립토판, L-티로신 및 L-페닐알라닌에 대한 최근의 수요 증가와 함께, 이들을 공업적으로 생산하는 개선 방법이 요구되고 있다.
보다 높은 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌 생산성을 갖는 새로운 균주를 얻기 위해 예의 연구한 결과로서, 본 발명자들은 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 생산할 수 있는 코리네형글루탐산-생산 세균 균주를 포스포에놀 피루베트 카르복실라제(EC 4.1.1.31) (이후에는 PC로 표기한다) 활성이 감소 또는 결손 되도록 변이 시키면 이들이 상기 아미노산의 높은 생산성을 획득할 수 있음을 발견 하였다.
본 발명은 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 생산할 수 있고 PC활성이 감소 또는 결손된 코리네형 글루탐산-생산 세균을 배지에서 배양하고, 배양 브로쓰중에 축적된 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 회수함을 특징으로 하는 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌의 제조 방법을 제공한다.
본 명세서에 언급된 코리네형 글루탐산-생산 세균은 고리네박테리움 또는 브레비박테리움 속에 속하는 미생물이다.
본 발명의 변이주로서는, L-트럽토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 생산할 수 있고 PC활성이 감소 또는 결손되어 있는 코리네형 글루탐산-생산 세균을 모두 사용할수 있다.
본 발명의 변이주는 어떠한 코리네형 글루탐산-생산 세균으로 부터 유래될 수 있다. 적절한 모균주의 예는 다음과 같다.
코리네박테리움 글루타미쿰 : (Corynebacterinum gluatmicum)ATCC13032
코리네박테리움 아세토아시도필름 : (Corynebacterinum acetoacidophilum) ATCC13870
코리네박테리움 헤르쿨리스 : (Corynebacterinum herculis) ATCC13868
코리네박테리움 릴리움 : (Corynebacterinum lilium) ATCC15990
브레비박테리움 플라붐 : (Brevlbacterium flavum) ATCC14067
브레비박테리움 락토페로멘툼 : (Brevibacterium lactofermentum) ATCC13869
브레비박테리움 디바리카툼 : (Brevibacterium divaricatum) ATCC14020
브레비박테리움 티오게니탈리스 : (Brevibacterium thiogenitalis) ATCC19240
L-트립토판-생산균주는 티로신 및 페닐알라닌 요구성 및/또는 5-메틸토립토판 같은 트립토판 유사체에 내한 내성을 부여함으로써 상기 코리네형 글루탐산-생산 세균으로 부터 유도될수 있다. L-트립토판-생산균주의 한 예는 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC21851이다.
L-티로신-생산 균주는 L-페닐알라닌 요구성 및/또는 아미노산 유사체에 대한 내성을 부여함으로써, 또는 DS, CM 및 프레페네이트 데히드로게나제 또는 프레티로신 아미노트랜스퍼라제를 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합 DNA를 도입 시킴으로써(일본국 특허 공개 제34197/1985호)코리네형 글루탐산-생산 균주로 부터 유도될 수 있다. 덧붙여, L-티로신-생산균주는, DS 및 CM 같은, L-티로신의 생합성에 참여하는 효소의 유전 정보에 관련되어 있는 DNA 단편을 함유하는 재조합 DNA를 L-트립토판-생산 미생물에 도입시켜 L-트립토판-생산 미생물을 L-페닐알라닌-생산균주로 전환시킴으로써 얻을 수도 있다(일본국 특허 공개 제 94985/1988호).
L-페닐알라닌-생산 균주는 L-티로신 요구성 및/또는 아미노산 유사체에 대한 내성을 부여하거나, 또는 DS, CM 및 PD를 코딩하는 유전자를 함유하는 제조합 DNA를 도입함으로써(일본국 특허 공개 제24192/1985호, 260892/1986호 및 124375/1986호) 코리네형 글루탐산-생산 세균으로 부터 유도할 수 있다. 나아가, L-페닐알라닌-생산균주는, DS, CM 및 PD의 합성에 참여하는 유전 정보에 관련되어 있는 DNA 단편을 포함하는 재조합 DNA를 L-트립토판-생산 미생물에 도입시켜 L-트립토판-생산 미생물을 L-페닐알라닌-생산균주로 전환시킴으로써 얻을 수도 있다(일본국 특허 공개 제 105688/1988호).
PC 활성이 감소 또는 결손된, L-트립토판-, L-티로신-또는 L-페닐알라닌-생산 미생물은 이러한 PC 활성의 변화를 일으키는 돌연변이를 통해 공지의 L-트립토판-, L-티로신-또는 L-페닐알라닌-생산균주로부터 얻을 수 있다. 한편, 본 발명의 미생물은 PC활성이 감소 또는 결손된 변이주에 영양 요구성 및/또는 아미노산 유사체에 대한 내성을 부여함으로써 얻을 수도 있다.
PC 활성이 감소 또는 결손된 미생물은 공지의 방법, 예를들면 자외선 조사 및 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘(이후에는 NTG로 표기한다)및 아질산 같은 화학 변이 유발소에 의한 처리에 의해 세포를 변이시킨 후, L-글루탐산 요구성 균주를 분리함으로써 얻을 수 있다. PC 활성이 감소된 변이주는 효소의 친화성 표식 시약(affinity labeling reagent)에 대해 보다 민감한 균주로서, 또는 PC 활성이 결손된 L-글루탐산-요구성 균주의 원영양요구성 복귀 세포로서 분리할 수도 있다. 활성 부위-지향성 불가역 억제제라고도 불리우는 친화성 표시 시약은 효소의 활성 중심에 특이적으로 결합하여 촉매 활성을 불활성화 할수 있는 화합물이다.
PC활성이 감소 또는 결손된 균주의 예는 L-트립토판을 생산할 수 있는 코리네박테리움 클루타미쿰 BPS-13, L-티로신을 생산할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 K77 및 L-페닐알라닌을 생산할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 K78이다.
본 발명의 미생물에 의한 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌의 제조방법은 아미노산 생산을 위해 사용되는 공지의 방법으로 행할 수 있다. 탄소원, 질소원, 무기물질, 성장인자등을 포함하는 한 합성배지 또는 천연 배지 어는 것이든 사용할 수 있다.
탄소원으로는, 글루코스, 글리세롤, 프룩토스, 수크로스, 말토스, 만노스, 전분, 전분 가수분해물 및 당밀 같은 탄수화물 ; 폴리알콜 ; 및 피루브산, 푸마르산, 락트산 및 아세트산 같은 각종 유기산을 사용할 수 있다. 이용되는 미생물의 동화능력에 따라 탄화수소 및 알콜도 사용할 수 있다. 이중에서, 사탕수수 당밀이 바람직하게 사용된다.
질소원으로, 암모니아 ; 염화암모늄, 황산 암모늄, 탄산 암모늄 및 아세트산암모늄 같은 각종 유기 및 무기 암모늄염 ; 우레아 및 다른 질소-함유 화합물 ; 및 펩톤, NZ-아민, 육즙, 효모 추출액, 옥수수 침지액, 카제인 가수분해물, 어육 또는 그의 소화 생성물 같은 질소-함유 화합물이 적절하다.
무기 화합물로는, 인산일수소칼륨 인산이수소칼륨, 황산암모늄, 염화암모늄, 황산마그네슘, 염화나트륨, 황산 제1철, 호아산 망간 및 탄산 칼슘이 언급된다.
배양은 진탕 배양, 통기 교반 등에 의해 호기성 조건하에서 행한다. 바람직한 배양온도는 일반적으로 20∼40℃이다. 배지의 pH는 중성 근처로 유지한다. 배양 시간은 일반적으로 1∼5일이다. 여과 또는 원심분리에 의해 미생물 세포를 제거하고, 농축 결정화, 활성탄 처리 및 이온교환 수지 처리 같은 공지 방법에 따라 여액 또는 상층액으로부터 아미노산을 회수함으로써 L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 배양물로 부터 분리할 수 있다.
하기예는 본 발명을 더 설명한다.
[실시예 1]
[PC 활성이 감소된 변이주의 분리]
(1) L-트립토판-생산균주
L-트립토판을 생산할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC 21851을 모균주로 사용한다. 이 균주를 30℃에서 16시간 동안 완전배지(물에 용해시킨 20g/ℓ의 부용 분말 및 5g/ℓ의 효모 추출액을 함유하는 배지 ; pH7.2)에서 배양한다. 수집된 세포를 0.05M 인산 완충용액(pH7.2)으로 세척하고, 상기 완충용액에 109세포의 농도로 현탁시킨다. 이 현탁액에 NTG를 500㎍/㎖의 최종농도로 가하고, 혼합물을 30℃에서 20분간 유지한다. 이렇게 처리한 세포를 상술한 완충용액으로 세척하고, 표 1에 나타낸 조성을 갖고, PC용 친화성 표식 시약으로 알려진 화합물인 3-브로모피루브산(이후에는 3BP로 표기한다)[J. Biochem., 86, 1251∼1257(1979)]0.5㎍/㎖를 더 함유하는 최소 한천 배지상에 펴바른다.
[표 1 최소 한천 배지의 조성]
Figure kpo00001
30℃에서 5내지 10일간 배양을 행하고, 판 배지상에서 자라는 콜로니 중에서 보다 작은 콜로니를 골라낸다. 모 균주보다 더 3BP에 민감한 균주를 선택하고, 3BP에 민감한 변이주로 부터 PC 활성이 감소된 균주인 코리네박테리움 글루타미쿰 BPS-13을 최종적으로 분리한다.
이 균주는 1988년 3월 2일자로 일본국 통상 산업성 공업 기술원 미생물 공업 기술 연구소(FRI)에 FERMBP-1777의 기탁번호로 기탁되어 있다.
모 균주 ATCC21851 및 변이주 BPS-13의 3BP에 대한 만감성, 및 그들의 PC 및 피루베이트 키나제(이하에는 PK로 표기한다) 활성을 표 2에 나타내었다. 표 1에 나타낸 조성을 갖고 서로 다른 농도의 3BP를더 함유하는 최소 한천 배지상에 두 균주를 각각 펴바르고, 30℃에서 4일간 균주를 배양하고, 성장도를 관찰함으로써 3BP 민감도를 평가한다. PC 활성 및 PK 활성은 조 세포 추출액을 이용하여, 문헌 [J. Biochem., 66(3),297∼311(1969) 및 Agric.Bio1.Chem,.48(5),1189∼1197(1984)]에 기술된 방법에 의해 측정한다. 조 세포 추출액은 후술한 방법에 따라 제조한다. 각 균주를 30g/ℓ글루코스, 0.5g/ℓ MgSO4.7H2O, 10㎎/ℓFeSo4.7H2O, 1g/ℓKH2PO4, 1㎎/ℓMnSO4.4H2O, 4g/ℓ황산암모늄, 4g/ℓ우레아, 50㎍/ℓ 비오틴, 2.5㎎/ℓ p-아미노벤조산, 1㎎/ℓ 염화나트륨, 50㎎/ℓL-티로신 및 50㎎/ℓ L-페닐 알라닌을 함유하는 배지 (pH 7.2)에 접종하고, 30℃에서 24시간동안 진탕 배양한다. 성장세포를 수집하고, 0.2% 염화칼슘 수용액으로 2회 세척하고, 0.1M 트리스-HCl 완충용액(pH 7.5)에 현탁시키고 초음파로 분쇄한다. 생성된 혼합물을 원심분리하고, 상층액을 상술한 완충액에 대해 밤새 투석하여 조 세포 추출액을 수득한다. 조 추출액에 함유되어 있는 단백질의 단위량에 대한 비활성을 계산하고, 모 균주의 비활성을 100으로 정의했을 때의 상대값을 구함으로써 표 2에 나타낸 값을 얻는다.
[표 2]
Figure kpo00002
(2) L-티로신-생산 균주,
L-트립토판을 생산할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC 21851을 일본국 특허 공개 제 94985/1988호에 기술된, DS 및 CM 유전자를 함유하는 재조합 플라스미드 pCDS-CM1으로 형질전환 시키고, L-티로신을 생산할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 T6 균주 (ATCC21851/pCDS-CMl)를 상기와 동일한 특허출원에 기재된 방법에 따라 분리한다. 즉, ATCC21851 균주를 NB 배지(물에 용해시킨 20g/ℓ부용 분말 및 5g/ℓ의 효모 추출액을 함유하는 배지 ; pH 7.2)에서 배양한다. 이렇게 해서 얻어진 종 배양물 4ml를 100㎍/㎖ 씩의 L-티로신 및 L-페닐알라닌을 더 함유하는 반 합성 배지 SSM[물에 용해시킨 20g/ℓ 글루코스, 10g/ℓ (NH4)2SO4, 3g/ℓ 우레아, 1g/ℓ효모 추출액, 1g/ℓKH2PO4, 0.4g/ℓMgCl2.6H2O, 10mg/ℓFeSO4.7H2O, 0.2mg/ℓMnSO4.4-6H2O, 0.9mg/ℓZnSO4.7H2O, 0.4mg/ℓCuSO4.5H2O, 0.09mg/ℓNa2B4O7.10H2O, 0.04mg/ℓ(NH4)6Mo7·O24.4H2O, 30㎍/ℓ비오틴 및 1mg/ℓ티아민히드로클로라이드를 함유하는 배지 ; pH 7.2]40㎖에 접종하고, 30℃에서 진탕 배양을 실시한다. 도꾜 고덴(Tokyo Koden) 비색계를 이용하여 660nm에서의 광학밀도(OD)를 결정하고, OD가 0.2에 도다하면 폐니실린 G를 0.5단위/㎖의 최종농도로 가한다. OD가 0.6에 도달할 때까지 계속 진탕 배양한다. 미생물 세포를 수집하고, 1㎎/㎖리소자입을 더 함유하는 RCGP 배지[물에 용해시킨 5g/ℓ글루코스, 5g/ℓ카사미노산, 2.5g/ℓ효모 추출액, 3.5g/ℓK2HPO4, 1.5g/ℓKH2PO4, 0.41g/ℓMgCl2.6H2O, 10mg/ℓFeSO4.7H2O, 2mg/ℓMnSO4.4-6H2O, 0.04mg/ℓZnSO4.7H2O, 0.04mg/ℓ(NH4)6Mo7O24.4H2O, 30㎍/ℓ비오틴, 2㎎/ℓ티아민 히드로클로라이드, 135g/ℓ디소듐 숙시네이트 및 30g/ℓ 폴리비닐 피롤리돈(M.W.:10,000)을 함유하는 배지 ; pH 7.6]10m1에 약 l09세포 /m1의 최종농도로 현탁 시킨다. 이렇게 해서 얻은 현탁액을 L형 시험관에 옮기고 30℃에서 5시간동안 부드럽게 진탕하여 원할구를 유도한다.
생성된 원할구-현탁액(0.5ml)을 조그만 시험관에 넣고, 2,500×g에서 5분간 원심분리하고, 수집한 원탈구를 1m1의 TSMC완충용액(10mM MgCl2, 30mM CaCl2, 50mM 트리스 및 400mM 수크로스 ; pH7.5)에 현탁시키고 원심 세척한다. 원할구를 0.1m1의 TSMC 완충용액에 재현탁 시킨다. 그후에, 1㎍의 pCDS -CM1 플라스미드 DNA를 함유하는 TSMC 완충용액 10㎕를 현탁액에 가하고, 20% PEG6000(Na-karai Chemicals)을 함유하는 TSMC 완충용액 0.8ml를 더 가한다. 그리고, 3분후에 2ml의 RCGP 베지(pH7.2)를 가하고, 혼합물을 2,500×g에서 5분간 원심분리하여 상층액을 제거한다. 침전된 원할구를 1m1의 RCGP 배지에 현탁시킨다. 이렇게 해서 얻은 현탁액(0.2ml)을 400㎍/㎖ 스펙티노마이신을 더 함유하는 RCGP 한천 배지(1.4% 한천을 함유하는 RCGP 배지, pH7.2)에 펴바르고, 30℃에서 7일간 배양한다. 한천 배지상에서 성장한 균주를 형질전환체로서 분리한다.
이렇게해서 수득한 코리네박테리움 글루타미쿰 T6 균주(ATCC21851/pCDS-CM1)를 실시예 1(1)에 기재된 것과 동일한 방법으로 돌연변이 시키고, PC활성이 감소된 L-티로신-생산 코리네박테리움 글루타미쿰 K77 균주를 3BP-민감성 변이주로서 분리한다. K77 균주는 1988년 9월 21일자로 FRI에 FERM BP-2062의 기탁번호로 기탁되어 있다. 모 균주 T6 및 변이주 K77의 3BP-만감성, PC 활성 및 PK 활성을 실시예 1(1)과 동일한 방법으로 측정한다 결과를 표 3에 나타낸다.
[표 3]
Figure kpo00003
(3) L-페닐알라닌-생산균주
형질전환체의 스크리닝을 위해 200㎍/㎖ 카나마이신을 함유하는 RCGP-한천배지를 사용하는 것을 제외하고 실시예 1 (2)와 동일한 방법으로, 일본국 특허 공개 제 105688/1988호에 기재된 대로 에스케리키아콜리의 DS, CM 및 PD 유전자를 함유하는 재조합 플라스미드 pEaroG-pheA3 으로 L-트립토판-생산 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC21851을 형질전한 시킴으로써 L-페닐알라닌-생산 코리네박테리움 글루타미쿰 T17 균주(ATCC21851/pEaroG-pheA3) 을 수득한다.
이렇게 해서 얻은 L-페닐알라닌-생산 코리네박테리움 글루타미쿰 T17 균주(ATCC21851/pEaroG-pheA3)를 실시예 1(1)과 동일한 방법으로 돌연변이 시키고, PC 활성이 감소된 L-페닐알라닌-생산 코리네박테리움 글루타미쿰 K78 균주를 분리한다. K78 균주는 1988년 9월 21일자로 FRI에 FERM BP-2063의 기탁번호로 기탁되었다. 모 균주 T17 및 변이주 K78의 3BP-민감성, PC 활성 및 PK 활성을 실시예 1(1)과 동일한 방법으로 측정한다. 결과를 표 4에 나타내었다.
[표 4]
Figure kpo00004
[실시예 2]
(1) L-트립토판의 생산 시험
20㎖의 종 배지(2% 글루코스, 1.5% 폴리펩톤, 1.5% 효모추출액, 0.25% 염화나트륨, 0.1% 우레아, 200mg/ℓL-티로신 및 200mg/ℓ L-페닐알라닌 ; pH 7.2)를 함유하는 300㎖ 에를렌마이어 플라스크에 코리네박테리움 글루타미쿰 BPS-13(FERM BP-1777)을 접종 시키고, 210rpm 으로 고정시킨 회전 진탕기 상에서 30℃에서 24시간동안 진탕 배양한다. 이렇게 해서 얻은 종 배양액(2㎖)을 하기 조성의 발효배지20㎖를 함유하는 300㎖ 에를렌마이어 플라스크에 접종시키고, 상기와 동일한 조건하에서 72시간 동안 배양한다. 상기와 동일한 방법으로 모 균주 ATCC21851 도 대조로서 배양한다. 배양후에, 각 배양 여액을 페이퍼 크로마토그래피하고, 닌히드린으로 발색시킨 후, 비색 정량 측정법에 의해 L-트립토판의 생산량을 측정한다.
결과를 표 5에 나타낸다.
발효배지의 조성 : 6% 글루코스, 0.05% KH2PO4, 0.05% K2HPO4, 0.025% MgSO4.7H2O, 2% 황산암모늄, 30㎍/ℓ비오틴 10mg/ℓMnSO4.7H2O, 0.5%옥수수침지액, 2%CaCO3(PH 7.2)
[표 5]
Figure kpo00005
(2) L-티로신의 생산 시험
20㎖의 종 배지(2% 글루코스, 1.5% 폴리펩톤, 1.5% 효모추출액, 0.25% 염화나트륨 및 0.1% 우레아, pH 7.2)를 함유하는 300㎖ 에를렌마이어 플라스크에 코리네박테리움 클루타미쿰 K7가 FERM BP-2062)을 접종하고, 210rpm 으로 고정시킨 회전 진탕기 상에서 30℃에서 24시간동안 진탕 배양한다. 이렇게해서수득한 종 배양액(2㎖)을 실시예 2(l)과 동일한 조성을 갖는 발효 배지 20㎖를 함유하는 300㎖ 에를렌마이어 플라스크에 접종시키고, 상기와 동일한 조건하에서 72시간 동안 배양한다. 한편, 동일한 방법으로 모균주 T6(ATCC21851/pCDS-CMl)도 대조로서 배양한다.
배양후에, 이렇게해서 수득한 배양 브로쓰(각 1㎖)를 50㎕의 6N-NaOH 용액과 혼합하고, 65℃에서 5분간 가열하여 침전 L-티로신을 완전히 용해시킨다. 배양 여액을 폐이퍼 크로마토그래피하고, 닌히드린으로 발색시킨 후, 발색정량 측정법에 의해 L-티로신의 생산량을 측정한다.
결과를 표 6에 나타내었다.
[표 6]
Figure kpo00006
(3) L-페닐알라닌의 생산 시험
실시예 2(2)와 동일한 방법으로 코리네박테리움 클루타미쿰 K78(FERM BP-2063)및 그의 모 균주T17(ATCC21851/pEaroG-pheA3)을 배양한다. 배양후에, 각배양여액을 페이퍼크로마토그래피하고, 닌히드린으로 발색시킨 후 비색 정량 측정법에 의해 L-페닐알라닌의 생산량을 측정한다.
결과를 표 7에 나타내었다.
[표 7]
Figure kpo00007

Claims (6)

  1. L-트립토판, L-티로신 또는 L-페닐알라닌을 생산할 수 있고 포스포에놀피루베이트 카르복실라제 활성이 감소 또는 결손되어 있는 코리네박테리움 속에 속하는 미생물을 배지에서 배양하고, 그 배양 브로쓰중에 축적된 L-트립토판, L-티로신, 또는 L-페닐알라닌을 회수함을 특징으로 하는 L-트립토판, L-티로신 및 L-페닐알라닌으로 이루어진 군으로 부터 선택된 아미노산의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 미생물이 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterlum glutamicum) 종인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 미생물이 코리네박테리움 글루타미쿰 BPS-13(FFRM BP-1777), 코리네박테리움글루타미쿰 K77(FERM BP-2062) 또는 코리네박테리움 글루타미쿰 K78(FERM BP-2063)인 방법.
  4. 코리네박테리움 글루타미쿰 BPS-13(FERM BP-1777)의 생물학적으로 순수한 배양물.
  5. 코리네박테리움 글루타미쿰 K77(FERM BP-2062)의 생물학적으로 순수한 배양물.
  6. 코리네박테리움 글루타미쿰 K78(FERM BP-2063)의 생물학적으로 순수한 배양물.
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