JPH05304969A - 発酵法によるアミノ酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるアミノ酸の製造法Info
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- JPH05304969A JPH05304969A JP4314755A JP31475592A JPH05304969A JP H05304969 A JPH05304969 A JP H05304969A JP 4314755 A JP4314755 A JP 4314755A JP 31475592 A JP31475592 A JP 31475592A JP H05304969 A JPH05304969 A JP H05304969A
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 アミノ酸製剤や飼料添加物として有用なＬ−
スレオニンまたはＬ−イソロイシンをより収率良く安価
に製造する方法を提供する。 【構成】 エシェリヒア属に属し、プリンアナログに耐
性を有し、かつＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイシン
生産能を有する微生物を用いることにより、Ｌ−スレオ
ニンまたはＬ−イソロイシンを製造する。
スレオニンまたはＬ−イソロイシンをより収率良く安価
に製造する方法を提供する。 【構成】 エシェリヒア属に属し、プリンアナログに耐
性を有し、かつＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイシン
生産能を有する微生物を用いることにより、Ｌ−スレオ
ニンまたはＬ−イソロイシンを製造する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は発酵法によるＬ−スレオ
ニンまたはＬ−イソロイシンの製造法に関する。Ｌ−ス
レオニンまたはＬ−イソロイシンは、アミノ酸製剤など
の医薬品として有用であるだけでなく、飼料添加用とし
ても利用できるアミノ酸である。
ニンまたはＬ−イソロイシンの製造法に関する。Ｌ−ス
レオニンまたはＬ−イソロイシンは、アミノ酸製剤など
の医薬品として有用であるだけでなく、飼料添加用とし
ても利用できるアミノ酸である。
【０００２】
【従来の技術】発酵法によるＬ−スレオニンの製造法に
おいて、エシェリヒア属に属する微生物を用いる方法と
して、ボレリジン感受性を示す微生物を用いる方法（特
公昭５１−６７５２）、ジアミノピメリン酸とメチオニ
ンの要求性を示し、かつスレオニンの生合成系がスレオ
ニンのフィードバック阻害に対して抵抗性を示す微生物
を用いる方法（特公昭５６−１００３７）、リファンピ
シン、リジン、メチオニン、アスパラギン酸およびホモ
セリンの少なくとも一種に耐性を有するか、またはＬ−
スレオニンの分解能の低下した微生物を用いる方法（特
開昭６３−２７３４８７、米国特許第５０１７４８３）
などが知られている。
おいて、エシェリヒア属に属する微生物を用いる方法と
して、ボレリジン感受性を示す微生物を用いる方法（特
公昭５１−６７５２）、ジアミノピメリン酸とメチオニ
ンの要求性を示し、かつスレオニンの生合成系がスレオ
ニンのフィードバック阻害に対して抵抗性を示す微生物
を用いる方法（特公昭５６−１００３７）、リファンピ
シン、リジン、メチオニン、アスパラギン酸およびホモ
セリンの少なくとも一種に耐性を有するか、またはＬ−
スレオニンの分解能の低下した微生物を用いる方法（特
開昭６３−２７３４８７、米国特許第５０１７４８３）
などが知られている。
【０００３】また本出願人は、Ｌ−セリンおよび／また
はエチオニンに耐性を有する微生物を用いる方法（特開
平３−２５９０８８号公報）、Ｌ−リジン存在下でＬ−
フェニルアラニンおよび／またはＬ−ロイシンに耐性を
有する微生物を用いる方法（特願平３−２２４２５９）
について出願している。
はエチオニンに耐性を有する微生物を用いる方法（特開
平３−２５９０８８号公報）、Ｌ−リジン存在下でＬ−
フェニルアラニンおよび／またはＬ−ロイシンに耐性を
有する微生物を用いる方法（特願平３−２２４２５９）
について出願している。
【０００４】一方、発酵法によるＬ−イソロイシンの製
造法において、エシェリヒア属に属する微生物を用いる
方法はあまり報告されておらず、変異育種された微生物
を用いる方法としては、本出願人が、イソロイシンアナ
ログに耐性で、さらにアルギニンハイドロキサメートお
よび／またはエチオニンに耐性を有する微生物を用いる
方法（特願平３−２９４４２０）について出願している
程度である。
造法において、エシェリヒア属に属する微生物を用いる
方法はあまり報告されておらず、変異育種された微生物
を用いる方法としては、本出願人が、イソロイシンアナ
ログに耐性で、さらにアルギニンハイドロキサメートお
よび／またはエチオニンに耐性を有する微生物を用いる
方法（特願平３−２９４４２０）について出願している
程度である。
【０００５】また組換えＤＮＡ技術によりイソロイシン
合成の鍵酵素であるスレオニンデアミナーゼやアセトハ
イドロキシ酸シンターゼの活性を強化したエシェリヒア
属に属する微生物を用いる方法（特開平２−４５８）も
知られているが、イソロイシン生成収率は低く、十分に
満足し得るものではない。
合成の鍵酵素であるスレオニンデアミナーゼやアセトハ
イドロキシ酸シンターゼの活性を強化したエシェリヒア
属に属する微生物を用いる方法（特開平２−４５８）も
知られているが、イソロイシン生成収率は低く、十分に
満足し得るものではない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、アミ
ノ酸製剤や飼料添加物として有用なＬ−スレオニンまた
はＬ−イソロイシンを、より収率良く安価に製造する方
法を提供することにある。
ノ酸製剤や飼料添加物として有用なＬ−スレオニンまた
はＬ−イソロイシンを、より収率良く安価に製造する方
法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、エシェ
リヒア属に属し、プリンアナログに耐性を有し、かつＬ
−スレオニンまたはＬ−イソロイシン生産能を有する微
生物を培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンまたは
Ｌ−イソロイシンを生成蓄積させ、該培養物よりＬ−ス
レオニンまたはＬ−イソロイシンを採取することを特徴
とする発酵法によるＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイ
シンの製造法を提供することができる。
リヒア属に属し、プリンアナログに耐性を有し、かつＬ
−スレオニンまたはＬ−イソロイシン生産能を有する微
生物を培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンまたは
Ｌ−イソロイシンを生成蓄積させ、該培養物よりＬ−ス
レオニンまたはＬ−イソロイシンを採取することを特徴
とする発酵法によるＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイ
シンの製造法を提供することができる。
【０００８】以下に本発明を詳細に説明する。本発明に
使用する微生物としては、エシェリヒア属に属し、プリ
ンアナログに耐性を有し、かつＬ−スレオニンまたはＬ
−イソロイシン生産能を有する微生物であれば、いずれ
も用いることができる。
使用する微生物としては、エシェリヒア属に属し、プリ
ンアナログに耐性を有し、かつＬ−スレオニンまたはＬ
−イソロイシン生産能を有する微生物であれば、いずれ
も用いることができる。
【０００９】本発明に使用する微生物のプリンアナログ
耐性としては、たとえば、６−ジメチルアミノプリン、
６−メチルアミノプリン、６−メルカプトプリン、８−
アザアデニン、８−アザジアミノプリンなどに対する耐
性があげられる。
耐性としては、たとえば、６−ジメチルアミノプリン、
６−メチルアミノプリン、６−メルカプトプリン、８−
アザアデニン、８−アザジアミノプリンなどに対する耐
性があげられる。
【００１０】本発明のＬ−スレオニンまたはＬ−イソロ
イシン生産菌は、エシェリヒア属のＬ−スレオニンまた
はＬ−イソロイシン生産能を有する微生物を、通常の変
異手段により変異させ、プリンアナログ耐性を付与する
ことにより取得できる。また野生株から誘導したプリン
アナログ耐性変異株に栄養要求性やスレオニンまたはイ
ソロイシン代謝拮抗物質耐性などＬ−スレオニンまたは
Ｌ−イソロイシン生産性を向上させる変異を付与するこ
とによっても取得することができる。好適な例としては
エシェリヒア・コリ( Escherichia coli )Ｈ−８４６
０、Ｈ−８４６１およびＨ−８６２４をあげることがで
きる。
イシン生産菌は、エシェリヒア属のＬ−スレオニンまた
はＬ−イソロイシン生産能を有する微生物を、通常の変
異手段により変異させ、プリンアナログ耐性を付与する
ことにより取得できる。また野生株から誘導したプリン
アナログ耐性変異株に栄養要求性やスレオニンまたはイ
ソロイシン代謝拮抗物質耐性などＬ−スレオニンまたは
Ｌ−イソロイシン生産性を向上させる変異を付与するこ
とによっても取得することができる。好適な例としては
エシェリヒア・コリ( Escherichia coli )Ｈ−８４６
０、Ｈ−８４６１およびＨ−８６２４をあげることがで
きる。
【００１１】本発明の微生物によるＬ−スレオニンまた
はＬ−イソロイシンの生産は、通常の細菌の培養法で実
施できる。
はＬ−イソロイシンの生産は、通常の細菌の培養法で実
施できる。
【００１２】使用培地としては、炭素源、窒素源、無機
物、その他使用菌株の必要とする微量の栄養素を程よく
含有するものならば、合成培地または天然培地いずれも
使用できる。
物、その他使用菌株の必要とする微量の栄養素を程よく
含有するものならば、合成培地または天然培地いずれも
使用できる。
【００１３】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、ラクトース、糖蜜、セルロース加水分解物、粗糖加
水分解物、澱粉加水分解物などの炭水化物、ピルビン
酸、酢酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸などの有機酸が利
用できる。さらに微生物の資化性によって、グリセリ
ン、エタノールなどのアルコール類なども用いられる。
ス、ラクトース、糖蜜、セルロース加水分解物、粗糖加
水分解物、澱粉加水分解物などの炭水化物、ピルビン
酸、酢酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸などの有機酸が利
用できる。さらに微生物の資化性によって、グリセリ
ン、エタノールなどのアルコール類なども用いられる。
【００１４】窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸ア
ンモニウムなどの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム
塩、アミン類、その他の窒素化合物、ならびにペプト
ン、肉エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分
解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化
物などが用いられる。
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸ア
ンモニウムなどの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム
塩、アミン類、その他の窒素化合物、ならびにペプト
ン、肉エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分
解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化
物などが用いられる。
【００１５】無機物としては、燐酸第一カリウム、燐酸
第二カリウム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、
塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、
炭酸カルシウムなどが用いられる。
第二カリウム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、
塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、
炭酸カルシウムなどが用いられる。
【００１６】培養は、深部振盪培養または通気攪拌培養
などの好気的条件下にて行う。培養温度は、２０〜４０
℃で、好ましくは、２５〜３８℃の範囲である。培地の
ｐＨはｐＨ５〜９の範囲で、好ましくは中性付近に保持
する。培地のｐＨ調整は炭酸カルシウム、無機あるいは
有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液など
によって行う。通常２〜７日間の培養により、培養液中
にＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイシンが生成蓄積す
る。
などの好気的条件下にて行う。培養温度は、２０〜４０
℃で、好ましくは、２５〜３８℃の範囲である。培地の
ｐＨはｐＨ５〜９の範囲で、好ましくは中性付近に保持
する。培地のｐＨ調整は炭酸カルシウム、無機あるいは
有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液など
によって行う。通常２〜７日間の培養により、培養液中
にＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイシンが生成蓄積す
る。
【００１７】培養終了後、培養液から菌体などの沈澱物
を除去し、イオン交換処理法、濃縮法、塩析法などを併
用することにより、培養液からＬ−スレオニンまたはＬ
−イソロイシンを回収することができる。以下に本発明
の実施例を示す。
を除去し、イオン交換処理法、濃縮法、塩析法などを併
用することにより、培養液からＬ−スレオニンまたはＬ
−イソロイシンを回収することができる。以下に本発明
の実施例を示す。
【００１８】
実施例１ 変異株の取得（１） Ｌ−スレオニン生産菌エシェリヒア・コリＨ−８３１１
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３５２０）に、Ｎ−メチル−Ｎ’
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンによる常法の変異処
理（0.２mg／ml、３０℃、３０分間）を施した後、６−
ジメチルアミノプリン（1.５ｇ／ｌ）を含む最少培地
（グルコース0.５％、NH4Cl 0.２％、KH2PO4 0.２％、
MgSO4・7H2O 0.０１％、FeSO4・7H2O ２０mg／ｌ、DL−
メチオニン５０mg／ｌ、寒天２％、ｐＨ7.２）に塗布し
た。３０℃で２〜６日間培養し、生育してくる大きなコ
ロニーを６−ジメチルアミノプリン耐性株として釣菌分
離し、Ｈ−８４６０を取得した。この菌株は、ブダペス
ト条約に基づいて平成４年２月２１日付で、工業技術院
微生物工業技術研究所（微工研）に微工研条寄第３７５
６号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３７５６）として寄託されてい
る。
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３５２０）に、Ｎ−メチル−Ｎ’
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンによる常法の変異処
理（0.２mg／ml、３０℃、３０分間）を施した後、６−
ジメチルアミノプリン（1.５ｇ／ｌ）を含む最少培地
（グルコース0.５％、NH4Cl 0.２％、KH2PO4 0.２％、
MgSO4・7H2O 0.０１％、FeSO4・7H2O ２０mg／ｌ、DL−
メチオニン５０mg／ｌ、寒天２％、ｐＨ7.２）に塗布し
た。３０℃で２〜６日間培養し、生育してくる大きなコ
ロニーを６−ジメチルアミノプリン耐性株として釣菌分
離し、Ｈ−８４６０を取得した。この菌株は、ブダペス
ト条約に基づいて平成４年２月２１日付で、工業技術院
微生物工業技術研究所（微工研）に微工研条寄第３７５
６号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３７５６）として寄託されてい
る。
【００１９】また、Ｌ−イソロイシン生産菌エシェリヒ
ア・コリＨ−８２８５（ＦＥＲＭＢＰ−３６２９：特願
平３−２９４４２０）に、上記と同様の変異処理を施し
た後、６−ジメチルアミノプリン（1.５ｇ／ｌ）を含む
上記と同様の最少培地に塗布した。３０℃で２〜６日間
培養し、生育してくる大きなコロニーを６−ジメチルア
ミノプリン耐性株として釣菌分離し、Ｈ−８４６１を取
得した。この菌株は、ブダペスト条約に基づいて平成４
年２月２１日付で微工研に微工研条寄第３７５７号（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−３７５７）として寄託されている。この
際、親株であるＨ−８２８５株はジアミノピメリン酸要
求性のため、上記最少培地に、ジアミノピメリン酸２０
０mg／ｌを添加してＨ−８４６１を取得した。
ア・コリＨ−８２８５（ＦＥＲＭＢＰ−３６２９：特願
平３−２９４４２０）に、上記と同様の変異処理を施し
た後、６−ジメチルアミノプリン（1.５ｇ／ｌ）を含む
上記と同様の最少培地に塗布した。３０℃で２〜６日間
培養し、生育してくる大きなコロニーを６−ジメチルア
ミノプリン耐性株として釣菌分離し、Ｈ−８４６１を取
得した。この菌株は、ブダペスト条約に基づいて平成４
年２月２１日付で微工研に微工研条寄第３７５７号（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−３７５７）として寄託されている。この
際、親株であるＨ−８２８５株はジアミノピメリン酸要
求性のため、上記最少培地に、ジアミノピメリン酸２０
０mg／ｌを添加してＨ−８４６１を取得した。
【００２０】このようにして得られた変異株の６−ジメ
チルアミノプリンに対する耐性度をそれぞれ親株と比較
した。耐性度は、第１表に示した量の６−ジメチルアミ
ノプリンを含む最少培地（グルコース0.５％、NH4Cl
0.２％、KH2PO4 0.２％、MgSO 4・7H2O 0.01％、FeSO4・
7H2O ２０mg／ｌ、DL−メチオニン５０mg／ｌ、ジアミ
ノピメリン酸２００mg／ｌ、寒天２％、ｐＨ7.５）に、
天然培地（トリプトン１％、酵母エキス0.５％、NaCl１
％、ジアミノピメリン酸２００mg／ｌ、ｐＨ7.５）スラ
ント上で２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して塗布
し、３０℃、７２時間培養後の生育の度合いで示した。
チルアミノプリンに対する耐性度をそれぞれ親株と比較
した。耐性度は、第１表に示した量の６−ジメチルアミ
ノプリンを含む最少培地（グルコース0.５％、NH4Cl
0.２％、KH2PO4 0.２％、MgSO 4・7H2O 0.01％、FeSO4・
7H2O ２０mg／ｌ、DL−メチオニン５０mg／ｌ、ジアミ
ノピメリン酸２００mg／ｌ、寒天２％、ｐＨ7.５）に、
天然培地（トリプトン１％、酵母エキス0.５％、NaCl１
％、ジアミノピメリン酸２００mg／ｌ、ｐＨ7.５）スラ
ント上で２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して塗布
し、３０℃、７２時間培養後の生育の度合いで示した。
【００２１】
【表１】
【００２２】変異株の取得（２） Ｌ−スレオニン生産菌エシェリヒア・コリＨ−８３１１
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３５２０）に、Ｎ−メチル−Ｎ’
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンによる常法の変異処
理（0.2mg ／ml、30℃、30分間）を施した後、６−メチ
ルアミノプリン(1.0ｇ／ｌ）を含む最少培地（グルコー
ス 0.5％、NH4Cl 0.2％、KH2PO4 0.2％、MgSO4 ・7H2O
0.01％、FeSO4 ・7H2O 20mg／ｌ、DL−メチオニン50mg／
ｌ、寒天２％、pH7.2)に塗布した。30℃で２〜６日間培
養し、生育してくる大きなコロニーを６−メチルアミノ
プリン耐性株として釣菌分離し、Ｈ−８６２４を取得し
た。この菌株は、ブダペスト条約に基づいて平成４年１
１月１１日付で、工業技術院微生物工業技術研究所（微
工研）に微工研条寄第４０７２号（ＦＥＲＭ ＢＰ−４
０７２）として寄託されている。
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３５２０）に、Ｎ−メチル−Ｎ’
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンによる常法の変異処
理（0.2mg ／ml、30℃、30分間）を施した後、６−メチ
ルアミノプリン(1.0ｇ／ｌ）を含む最少培地（グルコー
ス 0.5％、NH4Cl 0.2％、KH2PO4 0.2％、MgSO4 ・7H2O
0.01％、FeSO4 ・7H2O 20mg／ｌ、DL−メチオニン50mg／
ｌ、寒天２％、pH7.2)に塗布した。30℃で２〜６日間培
養し、生育してくる大きなコロニーを６−メチルアミノ
プリン耐性株として釣菌分離し、Ｈ−８６２４を取得し
た。この菌株は、ブダペスト条約に基づいて平成４年１
１月１１日付で、工業技術院微生物工業技術研究所（微
工研）に微工研条寄第４０７２号（ＦＥＲＭ ＢＰ−４
０７２）として寄託されている。
【００２３】このようにして得られた変異株の６−メチ
ルアミノプリンに対する耐性度を親株と比較した。耐性
度は、第２表に示した量の６−メチルアミノプリンを含
む最少培地（グルコース 0.5％、NH4Cl 0.2％、KH2PO4
0.2％、MgSO4 ・7H2O 0.01％、FeSO4 ・7H2O 20mg／ｌ、D
L−メチオニン50mg／ｌ、ジアミノピメリン酸２００mg
／ｌ、寒天２％、pH7.5)に、天然培地（トリプトン１
％、酵母エキス 0.5％、NaCl１％、ジアミノピメリン酸
２００mg／ｌ、pH7.5)スラント上で２４時間培養した菌
体を殺菌水に懸濁して塗布し、３０℃、７２時間培養後
の生育の度合いで示した。
ルアミノプリンに対する耐性度を親株と比較した。耐性
度は、第２表に示した量の６−メチルアミノプリンを含
む最少培地（グルコース 0.5％、NH4Cl 0.2％、KH2PO4
0.2％、MgSO4 ・7H2O 0.01％、FeSO4 ・7H2O 20mg／ｌ、D
L−メチオニン50mg／ｌ、ジアミノピメリン酸２００mg
／ｌ、寒天２％、pH7.5)に、天然培地（トリプトン１
％、酵母エキス 0.5％、NaCl１％、ジアミノピメリン酸
２００mg／ｌ、pH7.5)スラント上で２４時間培養した菌
体を殺菌水に懸濁して塗布し、３０℃、７２時間培養後
の生育の度合いで示した。
【００２４】
【表２】
【００２５】実施例２ Ｌ−スレオニンの生産試験 実施例１で得られた変異株を用いＬ−スレオニンの発酵
生産試験を行った。エシェリヒア・コリＨ−８３１１、
エシェリヒア・コリＨ−８４６０およびエシェリヒア・
コリＨ−８６２４を、グルコース２％、ペプトン１％、
酵母エキス１％、NaCl 0.２５％の組成からなる種培地
（ｐＨ7.４）にて、それぞれ３０℃、１６時間振盪培養
した。得られた種培養液１００mlを、下記発酵培地１リ
ットルを含む２リットル容小型発酵槽に植菌し、３０℃
にて通気攪拌培養( 通気量１リットル／min 、攪拌数８
００rpm ) を行った。培養中のｐＨ調整および窒素源の
供給はアンモニア水にて行い、ｐＨは6.５±0.２に維持
した。グルコースとKH 2 PO4 を適宜供給しつつ、７０時
間培養を行った。その際のＬ−スレオニン生成量を高速
液体クロマトグラフィー(HPLC)法により定量した。
生産試験を行った。エシェリヒア・コリＨ−８３１１、
エシェリヒア・コリＨ−８４６０およびエシェリヒア・
コリＨ−８６２４を、グルコース２％、ペプトン１％、
酵母エキス１％、NaCl 0.２５％の組成からなる種培地
（ｐＨ7.４）にて、それぞれ３０℃、１６時間振盪培養
した。得られた種培養液１００mlを、下記発酵培地１リ
ットルを含む２リットル容小型発酵槽に植菌し、３０℃
にて通気攪拌培養( 通気量１リットル／min 、攪拌数８
００rpm ) を行った。培養中のｐＨ調整および窒素源の
供給はアンモニア水にて行い、ｐＨは6.５±0.２に維持
した。グルコースとKH 2 PO4 を適宜供給しつつ、７０時
間培養を行った。その際のＬ−スレオニン生成量を高速
液体クロマトグラフィー(HPLC)法により定量した。
【００２６】結果を第３表に示す。
【００２７】
【表３】
【００２８】発酵培地の組成：グルコース４％、(NH4)2
SO4 1.２％、KH2PO4 0.２％、MgSO4・7H2O 0.01％、コ
ーンスチープリカー0.５％、ＤＬ−メチオニン 0.３ｇ
／ｌ、ｐＨ7.４.
SO4 1.２％、KH2PO4 0.２％、MgSO4・7H2O 0.01％、コ
ーンスチープリカー0.５％、ＤＬ−メチオニン 0.３ｇ
／ｌ、ｐＨ7.４.
【００２９】Ｈ−８４６０株を用いて得たＬ−スレオニ
ン含有培養液１リットルを遠心分離（3,000rpm、10min)
し、菌体その他の不純物を除去した。得られた上澄液を
強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂ（Ｈ
+ 型) のカラムに通し、Ｌ−スレオニンを吸着させ、水
洗後0.５規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ−スレオニ
ン画分を集めた。集めた画分を濃縮し、エタノールを加
えて冷却下で保存することにより、純度９８％以上のＬ
−スレオニン結晶が61.4ｇ得られた。 実施例３ Ｌ−イソロイシンの生産試験 実施例１で得られた変異株を用いＬ−イソロイシンの発
酵生産試験を行った。
ン含有培養液１リットルを遠心分離（3,000rpm、10min)
し、菌体その他の不純物を除去した。得られた上澄液を
強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂ（Ｈ
+ 型) のカラムに通し、Ｌ−スレオニンを吸着させ、水
洗後0.５規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ−スレオニ
ン画分を集めた。集めた画分を濃縮し、エタノールを加
えて冷却下で保存することにより、純度９８％以上のＬ
−スレオニン結晶が61.4ｇ得られた。 実施例３ Ｌ−イソロイシンの生産試験 実施例１で得られた変異株を用いＬ−イソロイシンの発
酵生産試験を行った。
【００３０】エシェリヒア・コリＨ−８２８５およびエ
シェリヒア・コリＨ−８４６１を、実施例２で用いた種
培地にジアミノピメリン酸0.02％を加えた組成から成る
種培地（ｐＨ7.４）にて、それぞれ３０℃、１６時間振
盪培養した。得られた種培養液１００mlを、それぞれ下
記発酵培地１リットルを含む２リットル容小型発酵槽に
植菌し、３０℃にて通気攪拌培養( 通気量１リットル／
min 、攪拌数８００rpm ) を行った。培養中のｐＨ調整
および窒素源の供給はアンモニア水にて行い、ｐＨは6.
５±0.２に維持した。グルコースを適宜供給しつつ、４
５時間培養を行った。その際のＬ−イソロイシンの生成
量をHPLC法により定量した。
シェリヒア・コリＨ−８４６１を、実施例２で用いた種
培地にジアミノピメリン酸0.02％を加えた組成から成る
種培地（ｐＨ7.４）にて、それぞれ３０℃、１６時間振
盪培養した。得られた種培養液１００mlを、それぞれ下
記発酵培地１リットルを含む２リットル容小型発酵槽に
植菌し、３０℃にて通気攪拌培養( 通気量１リットル／
min 、攪拌数８００rpm ) を行った。培養中のｐＨ調整
および窒素源の供給はアンモニア水にて行い、ｐＨは6.
５±0.２に維持した。グルコースを適宜供給しつつ、４
５時間培養を行った。その際のＬ−イソロイシンの生成
量をHPLC法により定量した。
【００３１】結果を第４表に示す。
【００３２】
【表４】
【００３３】発酵培地の組成：グルコース４％、(NH4)2
SO4 0.５％、KH2PO4 0.１％、MgSO4・7H2O 0.０１％、
コーンスチープリカー0.５％、ＤＬ−メチオニン 0.３
５ｇ／ｌ、ジアミノピメリン酸0.９ｇ／ｌ、ｐＨ7.４. Ｈ−８４６１株を用いて得た上記Ｌ−イソロイシン含有
培養液１リットルを遠心分離（3,000rpm、10min)し、菌
体その他の不純物を除去した。得られた上澄液を強酸性
陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂ（Ｈ+ 型) のカ
ラムに通し、Ｌ−イソロイシンを吸着させ、水洗後0.５
規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ−イソロイシン画分
を集めた。集めた画分を濃縮し、エタノールを加えて冷
却下で保存することにより、純度９８％以上のＬ−イソ
ロイシン結晶が２2.０ｇ得られた。
SO4 0.５％、KH2PO4 0.１％、MgSO4・7H2O 0.０１％、
コーンスチープリカー0.５％、ＤＬ−メチオニン 0.３
５ｇ／ｌ、ジアミノピメリン酸0.９ｇ／ｌ、ｐＨ7.４. Ｈ−８４６１株を用いて得た上記Ｌ−イソロイシン含有
培養液１リットルを遠心分離（3,000rpm、10min)し、菌
体その他の不純物を除去した。得られた上澄液を強酸性
陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂ（Ｈ+ 型) のカ
ラムに通し、Ｌ−イソロイシンを吸着させ、水洗後0.５
規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ−イソロイシン画分
を集めた。集めた画分を濃縮し、エタノールを加えて冷
却下で保存することにより、純度９８％以上のＬ−イソ
ロイシン結晶が２2.０ｇ得られた。
【００３４】
【発明の効果】本発明により、収率良くＬ−スレオニン
またはＬ−イソロイシンを得ることができる。
またはＬ−イソロイシンを得ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (1)
- 【請求項１】 エシェリヒア属に属しプリンアナログに
耐性を有し、かつＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイシ
ン生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ
−スレオニンまたはＬ−イソロイシンを生成蓄積させ、
該培養物よりＬ−スレオニンまたはＬ−イソロイシンを
採取することを特徴とする発酵法によるＬ−スレオニン
またはＬ−イソロイシンの製造法。
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| MX9301013A MX9301013A (es) | 1992-02-25 | 1993-02-24 | Proceso para la produccion de amino acidos por fermentacion. |
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| HU9300516A HU216323B (hu) | 1992-02-25 | 1993-02-25 | Eljárás aminosavak előállítására fermentációval |
| DE69316405T DE69316405T2 (de) | 1992-02-25 | 1993-02-25 | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren |
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| JP3812192 | 1992-02-25 | ||
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| MX (1) | MX9301013A (ja) |
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