JPS5835079B2 - Ｌ−イソロイシンの製造法 - Google Patents
Ｌ−イソロイシンの製造法Info
- Publication number
- JPS5835079B2 JPS5835079B2 JP14300876A JP14300876A JPS5835079B2 JP S5835079 B2 JPS5835079 B2 JP S5835079B2 JP 14300876 A JP14300876 A JP 14300876A JP 14300876 A JP14300876 A JP 14300876A JP S5835079 B2 JPS5835079 B2 JP S5835079B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明ぼ発酵法によりＬ−イソロイシンを製造する方法
に関するもので、より詳しくはエセリシャ・コリに属し
２−アミノ−３−メチルチオ酪酸に耐性でＬ−イソロイ
シンを生成する能力を有する菌株を培地に培養してＬ−
インロイシンを生成蓄積ぞしめ、これを採取する方法に
関するものである。
に関するもので、より詳しくはエセリシャ・コリに属し
２−アミノ−３−メチルチオ酪酸に耐性でＬ−イソロイ
シンを生成する能力を有する菌株を培地に培養してＬ−
インロイシンを生成蓄積ぞしめ、これを採取する方法に
関するものである。
Ｌ−イソロイシンは必須アミノ酸として人及び動物の栄
養に重要なアミノ酸であって食品工業や飼料工業にとっ
てきわめて有用なものである。
養に重要なアミノ酸であって食品工業や飼料工業にとっ
てきわめて有用なものである。
従来、微生物によるＬ−インロイシンの製造法に関して
ばＬ−イソロイシンの前駆物質であるα−ア□ノ酪酸、
α−ケト酪酸、Ｄ−スレオニンなどを培地に添加してＬ
−インロイシンに変換する方法があるがこれらの前駆物
質は高価であり有利とはいえない。
ばＬ−イソロイシンの前駆物質であるα−ア□ノ酪酸、
α−ケト酪酸、Ｄ−スレオニンなどを培地に添加してＬ
−インロイシンに変換する方法があるがこれらの前駆物
質は高価であり有利とはいえない。
直接発酵法としてはミクロコツカス°グルタミクス（Ｍ
ｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｓ ）セラ
チア・マルセスセンス（Ｓｅｒａｔｉａｍａｒｃｅ −
５ｃｅｎｓ）、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） などの
各種変異株を用いる発酵が知られている。
ｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｓ ）セラ
チア・マルセスセンス（Ｓｅｒａｔｉａｍａｒｃｅ −
５ｃｅｎｓ）、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） などの
各種変異株を用いる発酵が知られている。
一方ジャーナル・オブ・バクテリオロジ−（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ）Ｖ ｏ ｌ
、 ８７゜Ａ、３ 、ｐ、５６６−５７３（１９６
４）にはエセリシャ・コ１．ＩＫ−１２のバリン感受性
菌株から誘導されたバリン抵抗性変異株がＬ−イソロイ
シンを培地中に分泌するという報告がある。
ａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ）Ｖ ｏ ｌ
、 ８７゜Ａ、３ 、ｐ、５６６−５７３（１９６
４）にはエセリシャ・コ１．ＩＫ−１２のバリン感受性
菌株から誘導されたバリン抵抗性変異株がＬ−イソロイ
シンを培地中に分泌するという報告がある。
しかしこの報告には生成量の記載がなくその詳細は不明
である。
である。
本発明者らばＬ−イソロイシン生産菌について種々検討
した結果、エセリシア・コリに属しイソロイシンのアナ
ログである２−ア□ノー３−メチルチオ酪酸に耐性であ
る菌株が著量のＬ−インロイシンを蓄積することを見出
し本発明を完成した。
した結果、エセリシア・コリに属しイソロイシンのアナ
ログである２−ア□ノー３−メチルチオ酪酸に耐性であ
る菌株が著量のＬ−インロイシンを蓄積することを見出
し本発明を完成した。
本発明で使用される菌株はエセリシャ・コリに属し２−
ア□ノー３−メチルチオ酪酸の生育阻害作用に耐性を有
する耐性変異株であるが該耐性を有していれば他の薬剤
に対する耐性あるいぼアミノ酸、核酸、ビタミンなどの
栄養要求性を有していても良い。
ア□ノー３−メチルチオ酪酸の生育阻害作用に耐性を有
する耐性変異株であるが該耐性を有していれば他の薬剤
に対する耐性あるいぼアミノ酸、核酸、ビタミンなどの
栄養要求性を有していても良い。
このようなＬ−イソロイシン生産菌はエセリシャ・コリ
に属する細菌に紫外線照射、γ線照射、薬剤処理などの
変異処理をして得ることができる。
に属する細菌に紫外線照射、γ線照射、薬剤処理などの
変異処理をして得ることができる。
この菌株ば２−アミノ−３−メチルチオ酪酸に対する耐
性をもっている点及びＬ−イソロイシンを生成蓄積する
点で親株と異なる。
性をもっている点及びＬ−イソロイシンを生成蓄積する
点で親株と異なる。
本発明で使用される１菌株、エセリシャ・コリＮＫＩ−
１８２株（微工研菌寄第３７８１号）とその親株である
２−ア□ノー３−メチルチオ酪酸非耐性株であるエセリ
シャ・コリ（ＮＫＩ −０１９の生育に対する２−アミ
ノ−３−メチルチオ酪酸の影響を比較すると下記の如く
である。
１８２株（微工研菌寄第３７８１号）とその親株である
２−ア□ノー３−メチルチオ酪酸非耐性株であるエセリ
シャ・コリ（ＮＫＩ −０１９の生育に対する２−アミ
ノ−３−メチルチオ酪酸の影響を比較すると下記の如く
である。
即ち各種濃度の２−アミノ−３−メチルチオ酪酸を含む
Ｄａｖｉｓ培地（りん酸二カリウム７グ、りん酸−カリ
ウム２２、硫酸マグネシウム０．１？、硫酸アンモニウ
ム１２、クエン酸ナトリウム０．５ｆ、グルコース２グ
、蒸留水１００（７）に上記２菌株を接種して３０’Ｃ
で、６時間培養し、光度計を用いて６６０ｒｒ１１１に
かける吸光度を測定し生育度を観察して次の如き結果を
得た。
Ｄａｖｉｓ培地（りん酸二カリウム７グ、りん酸−カリ
ウム２２、硫酸マグネシウム０．１？、硫酸アンモニウ
ム１２、クエン酸ナトリウム０．５ｆ、グルコース２グ
、蒸留水１００（７）に上記２菌株を接種して３０’Ｃ
で、６時間培養し、光度計を用いて６６０ｒｒ１１１に
かける吸光度を測定し生育度を観察して次の如き結果を
得た。
相対生育度（ｑＡ
上記の如き２−ア□ノー３−メチルチオ酪酸が５０μｒ
Ａ１１ の時、生育が非耐性株では９５俸以上阻害さ
れるのに対して耐性株では３０係程度し力Ａ塩害されな
い。
Ａ１１ の時、生育が非耐性株では９５俸以上阻害さ
れるのに対して耐性株では３０係程度し力Ａ塩害されな
い。
本発明で使用される培地の炭素源としてはグルコース、
フラクトース、シュークロース、マルトース、廃糖蜜な
どが好適であり、窒素源としては硫安、塩安等のアンモ
ニウム塩、ｉｓ、アンモニア、有機のアンモニウム塩等
が使用できる。
フラクトース、シュークロース、マルトース、廃糖蜜な
どが好適であり、窒素源としては硫安、塩安等のアンモ
ニウム塩、ｉｓ、アンモニア、有機のアンモニウム塩等
が使用できる。
無機物としてはナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウム、燐酸などの塩類が使用できる。
グネシウム、燐酸などの塩類が使用できる。
前記のＬ−イソロイシン生産菌株を培養する場合簡単な
合成培地で十分可能であるがコーンスチーブリカー、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、大豆加水分解物などは
発酵促進物質として賞用される。
合成培地で十分可能であるがコーンスチーブリカー、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、大豆加水分解物などは
発酵促進物質として賞用される。
微生物の発酵培地での培養ばＬ−イソロイシンの生産を
効率的に行わしめるため、振盪培養、通気撹拌培養など
好気的条件下に行い、培養中のｐＨを５〜８に保つのが
良い。
効率的に行わしめるため、振盪培養、通気撹拌培養など
好気的条件下に行い、培養中のｐＨを５〜８に保つのが
良い。
培養温度は２５”−３５℃の範囲が好適である。
培養ぼ通常７２〜９６時間以内が適当であるが培養条件
によってはこれを任意に増減するのが良い。
によってはこれを任意に増減するのが良い。
培養終了液中に蓄積されたＬ−イソロイシンの採取は公
知の方法を利用することにより行うことができる。
知の方法を利用することにより行うことができる。
その−例としては培養液を除菌後ｐＨを調節してイオン
交換樹脂により濃縮し晶析、再結晶を行うことにより高
純度のＬ−イソロイシンを採取することができる。
交換樹脂により濃縮し晶析、再結晶を行うことにより高
純度のＬ−イソロイシンを採取することができる。
次に実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例 １
グルコース２％、へ７”）７１係、肉エキス０．５係、
食塩０．５係、コーンステープリカー０．２５係ｐＨ７
，０よりなる種培養培地１００就を含む５００献容三角
フラスコを１２０℃１５分間殺菌後エセリシャ・コＩＪ
ＮＫＩ−１８２（微工研菌寄第３７８１号）のスラント
培養物より一白金耳を接種し３０°Ｃで１６時間振盪培
養し、種培養物とする。
食塩０．５係、コーンステープリカー０．２５係ｐＨ７
，０よりなる種培養培地１００就を含む５００献容三角
フラスコを１２０℃１５分間殺菌後エセリシャ・コＩＪ
ＮＫＩ−１８２（微工研菌寄第３７８１号）のスラント
培養物より一白金耳を接種し３０°Ｃで１６時間振盪培
養し、種培養物とする。
次にグルコース１０係、硫安１．５係燐酸二カリウム０
．０５％、硫酸マグネシウム１水和物０．０５俸、炭酸
カルシウム２％、コーンスチープリ力−１％（ｐＨ６，
８殺菌前）からなる発酵培地を１１００Ｃで１０分間殺
菌した。
．０５％、硫酸マグネシウム１水和物０．０５俸、炭酸
カルシウム２％、コーンスチープリ力−１％（ｐＨ６，
８殺菌前）からなる発酵培地を１１００Ｃで１０分間殺
菌した。
この培地３０ｍを入れた５ ００ ；認専三角フラスコ
に前記の種培養物を１．５就加え３０℃で７２時間振盪
培養した。
に前記の種培養物を１．５就加え３０℃で７２時間振盪
培養した。
培養終了時の培地中のＬ−インロイシン含量をロイコノ
ストック・メセンテロイデスを用いるマイクロバイオア
ッセイで測定したところ、ｉｏ、ｓ範〆ｄであった。
ストック・メセンテロイデスを用いるマイクロバイオア
ッセイで測定したところ、ｉｏ、ｓ範〆ｄであった。
なか、エセリシャ・コリＮＫＩ−１８２株の親株である
エセリシ・コリＮＫＩ−０１９味を同様に培養したとこ
ろ培養終了時の培地中にばＬ−インロイシンぽ検出され
なかった。
エセリシ・コリＮＫＩ−０１９味を同様に培養したとこ
ろ培養終了時の培地中にばＬ−インロイシンぽ検出され
なかった。
実施例 ２
実施例１の発酵培地にポリオキシプロピレンエーテルを
０．０５ ％ （容量）加えたもの２０ｔを３０ｔのジ
ャーファ・−メンタ−に分注し１２０℃で２０分間殺菌
後、エセリシャ・コリＮＫＩ−１８２株の種培養物１０
００．ｄを接種し、通気量２０ｔ／分、攪拌数４００
ｒ、ｐ８ｍ、温度３０℃で７２時間培養した。
０．０５ ％ （容量）加えたもの２０ｔを３０ｔのジ
ャーファ・−メンタ−に分注し１２０℃で２０分間殺菌
後、エセリシャ・コリＮＫＩ−１８２株の種培養物１０
００．ｄを接種し、通気量２０ｔ／分、攪拌数４００
ｒ、ｐ８ｍ、温度３０℃で７２時間培養した。
培地中のＬ−イソロイシンの蓄積量は１２．５憎〆一で
あった。
あった。
Claims (1)
- １ エセリシャ・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ）に属し２−アミノ−３−メチルチオ酪酸に耐
性でＬ−イソロイシンを生成する能力を有する菌株を培
地に培養してＬ−イソロイシンを生成蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とするＬ−イソロイシンの製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14300876A JPS5835079B2 (ja) | 1976-11-30 | 1976-11-30 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14300876A JPS5835079B2 (ja) | 1976-11-30 | 1976-11-30 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5369881A JPS5369881A (en) | 1978-06-21 |
| JPS5835079B2 true JPS5835079B2 (ja) | 1983-07-30 |
Family
ID=15328795
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14300876A Expired JPS5835079B2 (ja) | 1976-11-30 | 1976-11-30 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5835079B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3036930B2 (ja) * | 1991-11-11 | 2000-04-24 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
| JP3151073B2 (ja) * | 1992-02-25 | 2001-04-03 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
| JP3131311B2 (ja) * | 1992-10-27 | 2001-01-31 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
-
1976
- 1976-11-30 JP JP14300876A patent/JPS5835079B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5369881A (en) | 1978-06-21 |
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