JPS5835080B2 - 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法 - Google Patents
発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法Info
- Publication number
- JPS5835080B2 JPS5835080B2 JP14300976A JP14300976A JPS5835080B2 JP S5835080 B2 JPS5835080 B2 JP S5835080B2 JP 14300976 A JP14300976 A JP 14300976A JP 14300976 A JP14300976 A JP 14300976A JP S5835080 B2 JPS5835080 B2 JP S5835080B2
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- inleucine
- culture
- isoleucine
- producing
- fermentation
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によりＬ−インロイシンを製造する方法
に関するものでありより詳しくはプロテウス（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ）属に属しＬ−インロイシン生産能を有する菌
株を栄養培地中で培養してＬ−インロイシンを生産蓄積
せしめついでこの培養物からＬ−インロイシンを採取す
る方法に関するものである。
に関するものでありより詳しくはプロテウス（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ）属に属しＬ−インロイシン生産能を有する菌
株を栄養培地中で培養してＬ−インロイシンを生産蓄積
せしめついでこの培養物からＬ−インロイシンを採取す
る方法に関するものである。
Ｌ−インロイシンは必須アミノ酸として人及び動物の栄
養に重要なアミノ酸であり、従って、食品工業や飼料工
業にとってきわめて有用なものである。
養に重要なアミノ酸であり、従って、食品工業や飼料工
業にとってきわめて有用なものである。
従来微生物によるＬ−インロイシンの製造法に関しては
Ｌ−インロイシンの前駆物質であるα−アミノ酪酸、α
−ケト酪酸、Ｄ−スレオニンなどを培地中へ添加してＬ
−イソロイシンに変換する方法（例えば特公昭３９−１
５２４８）があるがこれらの前駆物質は高価であり有利
な製造方法とは云えない。
Ｌ−インロイシンの前駆物質であるα−アミノ酪酸、α
−ケト酪酸、Ｄ−スレオニンなどを培地中へ添加してＬ
−イソロイシンに変換する方法（例えば特公昭３９−１
５２４８）があるがこれらの前駆物質は高価であり有利
な製造方法とは云えない。
また直接発酵法としてはミクロコツカス・グルタミクス
（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ” ｇｌｕｔａｍｉｃｕｓ
） 。
（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ” ｇｌｕｔａｍｉｃｕｓ
） 。
セラチア・マルセスセンス（５ｅｒａｔｉａ″ｍａｒｃ
ｅｓｃｅｎｓ ） ｓブレビバクテリウム・フラバム（
Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ″ｆｌａｖｕｍ ）な
どの各種変異株による発酵が知られている。
ｅｓｃｅｎｓ ） ｓブレビバクテリウム・フラバム（
Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ″ｆｌａｖｕｍ ）な
どの各種変異株による発酵が知られている。
また特公昭４６−２９７８９号公報にはプロテウス属に
属する菌株を用いてα−ケト−β−メチルバレリアン酸
からＬ−インロイシンをつくル方法が記載されているが
本発明の如くプロテウス属に属する菌株が通常の培地中
でＬ−イソロイシンを直接に生産した事実は未だ知られ
ていない。
属する菌株を用いてα−ケト−β−メチルバレリアン酸
からＬ−インロイシンをつくル方法が記載されているが
本発明の如くプロテウス属に属する菌株が通常の培地中
でＬ−イソロイシンを直接に生産した事実は未だ知られ
ていない。
本発明者らはプロテウス属細菌を研究中プロテウス・レ
トゲリに属する菌株が炭素源、窒素源、無機物、及び該
微生物の必要とする栄養素を含む培地に培養した場合、
その培養液中にＬ−インロイシンを生成、分泌すること
を見出し本発明を完成した。
トゲリに属する菌株が炭素源、窒素源、無機物、及び該
微生物の必要とする栄養素を含む培地に培養した場合、
その培養液中にＬ−インロイシンを生成、分泌すること
を見出し本発明を完成した。
本発明で使用される微生物はプロテウス属に属し、Ｌ−
イソロイシンを通常の培地中で直接生産する能力を有す
る細菌ならばいずれでもよい。
イソロイシンを通常の培地中で直接生産する能力を有す
る細菌ならばいずれでもよい。
このようなＬ−インロイシン生産菌の代表的なものとし
てはプロテウス属に属する細菌に紫外線照射、γ線照射
、薬剤処理などの変異処理をして得た変異株をあげるこ
とができる。
てはプロテウス属に属する細菌に紫外線照射、γ線照射
、薬剤処理などの変異処理をして得た変異株をあげるこ
とができる。
本発明で使用される微生物の１種、プロテウス・レトゲ
リ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ） ＮＫ
Ｉ−１３５（微工研菌寄第３７８９号）はプロテウス・
レトゲリをＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−二トロングア
ニジン処理して得た変異株であってメチオニン要求性を
もち、Ｌ−インロイシンを生産する点で親株と異なるも
のである。
リ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ） ＮＫ
Ｉ−１３５（微工研菌寄第３７８９号）はプロテウス・
レトゲリをＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−二トロングア
ニジン処理して得た変異株であってメチオニン要求性を
もち、Ｌ−インロイシンを生産する点で親株と異なるも
のである。
本発明で使用される培地の炭素源としてはグルコース、
フラクトース、シュークロース、マルトースなどが好適
であり窒素源としては硫安、塩安等の無機のアンモニウ
ム塩、尿素、アンモニア、有機のアンモニウム塩等が使
用できる。
フラクトース、シュークロース、マルトースなどが好適
であり窒素源としては硫安、塩安等の無機のアンモニウ
ム塩、尿素、アンモニア、有機のアンモニウム塩等が使
用できる。
無機物としてはナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウム、燐酸などの塩類が使用できる。
グネシウム、燐酸などの塩類が使用できる。
前記の菌株を培養する場合、簡単な合成培地で十分可能
であるがコーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、大豆加水分解物などは発酵促進物質として
賞用される。
であるがコーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、大豆加水分解物などは発酵促進物質として
賞用される。
微生物の発酵培地での培養はＬ−インロイシンの生産を
効率的に行わしめるため、振盪培養、通気攪拌培養など
好気的条件下に行い培養中のｐＨを５〜８に保つのが良
い。
効率的に行わしめるため、振盪培養、通気攪拌培養など
好気的条件下に行い培養中のｐＨを５〜８に保つのが良
い。
培養温度は２５〜３７°Ｃの範囲が好適である。
培養は通常７２〜９６時間以内が適当であるが培養条件
によってはこれは任意に増減するのが良い。
によってはこれは任意に増減するのが良い。
培養終了液中にはＬ−インロイシンが蓄積するが培養終
了液中よりのＬ−イソロイシンの採取は公知の方法を組
合せることにより行うことができる。
了液中よりのＬ−イソロイシンの採取は公知の方法を組
合せることにより行うことができる。
その−例としては培養液を除菌しｐＨを２附近に調節し
てイオン交換樹脂により濃縮し晶析、再結晶を行うこと
により高純度のＬ−インロイシンを採取することができ
る。
てイオン交換樹脂により濃縮し晶析、再結晶を行うこと
により高純度のＬ−インロイシンを採取することができ
る。
次に実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例 １
グルコース２宏ペフトン１％、肉エキス０．５饅、食塩
０．５％、コーンスチープリカ−０，２５％（ｐＨ７，
０）よりなる種培養培地１００−を入れた５００ｆ１１
！、容三角フラスコを１２０’Ｃ，１５分間殺菌後、プ
ロテウス・レトゲリＮＫＩ−１３５（微工研菌寄第３７
８９号）のスラント培養物より一白金耳を取り、これを
接種し３０’Ｃで１６時間、振盪培養し種培養物とする
。
０．５％、コーンスチープリカ−０，２５％（ｐＨ７，
０）よりなる種培養培地１００−を入れた５００ｆ１１
！、容三角フラスコを１２０’Ｃ，１５分間殺菌後、プ
ロテウス・レトゲリＮＫＩ−１３５（微工研菌寄第３７
８９号）のスラント培養物より一白金耳を取り、これを
接種し３０’Ｃで１６時間、振盪培養し種培養物とする
。
次にグルコース１０％、硫安１．５％、燐酸二カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、炭
酸カルシウム２％、コーンスチーフリカ−１％（ｐＨ６
，８、殺菌前）からなる発酵培地を１１０℃で１０分間
殺菌した。
０．０５％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、炭
酸カルシウム２％、コーンスチーフリカ−１％（ｐＨ６
，８、殺菌前）からなる発酵培地を１１０℃で１０分間
殺菌した。
この培地３０−を入れた５ ００ｔｎｌ容三角フラスコ
に前記の種培養物を１．５ＣＣ，加え３０’Ｃで７２時
間振盪培養した。
に前記の種培養物を１．５ＣＣ，加え３０’Ｃで７２時
間振盪培養した。
培養終了時フラスコ中に平均３．５ｆ／ｌのＬ−インロ
イシンが蓄積した。
イシンが蓄積した。
培養終了液を集めて１１とし遠心分離により菌体及び不
溶の炭酸カルシウムを除去したのち、塩酸でｐＨを２．
０に調節する。
溶の炭酸カルシウムを除去したのち、塩酸でｐＨを２．
０に調節する。
これをＤ ｏｗｅｘ■５０Ｘ−８（Ｈ型）に吸着せしめ
、水洗したのちＩＮアンモニア水で溶出し、ニンヒドリ
ン反応陽性区分を集め減圧下に濃縮し、濃縮物にエタノ
ールを添加してＬ−インロイシンの粗結晶２．５２を得
た。
、水洗したのちＩＮアンモニア水で溶出し、ニンヒドリ
ン反応陽性区分を集め減圧下に濃縮し、濃縮物にエタノ
ールを添加してＬ−インロイシンの粗結晶２．５２を得
た。
実施例 ２
次のような発酵培地を使用したほかは実施例１と全く同
様に培養を行った。
様に培養を行った。
発酵培地ニゲルコース１２斧、硫安２％、燐酸二カリウ
ム０．０５優、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、
コーンスチープリカ−０，５％、酵母エキスＱ、１φ（
ｐＨ６，８、殺菌前）。
ム０．０５優、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、
コーンスチープリカ−０，５％、酵母エキスＱ、１φ（
ｐＨ６，８、殺菌前）。
培養４白目のＬ−インロイシンの蓄積量は４．６ｆｆ／
ｌであった。
ｌであった。
Claims (1)
- １ プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ）属に属しＬ−イソ
ロイシン生産能を有する菌株を栄養培地中で培養してＬ
−インロイシンを生産蓄積せしめ、ついでこの培養物か
らＬ−インロイシンを採取することを特徴とするＬ−イ
ンロイシンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14300976A JPS5835080B2 (ja) | 1976-11-30 | 1976-11-30 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14300976A JPS5835080B2 (ja) | 1976-11-30 | 1976-11-30 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5369882A JPS5369882A (en) | 1978-06-21 |
| JPS5835080B2 true JPS5835080B2 (ja) | 1983-07-30 |
Family
ID=15328819
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14300976A Expired JPS5835080B2 (ja) | 1976-11-30 | 1976-11-30 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5835080B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60116996A (ja) * | 1983-11-30 | 1985-06-24 | 株式会社日立製作所 | ベロ−ズ型伸縮管継手 |
| JPS61289633A (ja) * | 1985-06-18 | 1986-12-19 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | フレキシブルチユ−ブ |
-
1976
- 1976-11-30 JP JP14300976A patent/JPS5835080B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60116996A (ja) * | 1983-11-30 | 1985-06-24 | 株式会社日立製作所 | ベロ−ズ型伸縮管継手 |
| JPS61289633A (ja) * | 1985-06-18 | 1986-12-19 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | フレキシブルチユ−ブ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5369882A (en) | 1978-06-21 |
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