JP2626993B2 - Ｌ−スレオニンの新規製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ−スレオニンは、必須アミノ酸の一つであり医薬品
や食品添加物、飼料添加物等に利用されている。本発明
は、醗酵法によるＬ−スレオニンの製造方法に関するも
のである。

〔従来の技術〕 従来、プロテウス属に属する微生物を用いた醗酵法に
よるＬ−スレオニンの製造法として、具体的な種とし
て、プロテウス レトゲリが多く使用されてきた。しか
し、現在このプロテウス レトゲリは、バージーズ マ
ニュアル オブ システマティック バクテリオロジー
第１版（BERGEY′ Ｓ MANUAL OF Systematic Ba
cteriology Volume １）では、プロビデンシア属に属
している。

プロテウスまたはプロビデンシア属に属する微生物を
用いた醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法としては、
例えばＬ−イソロイシン要求性を有する微生物を用いる
方法（特公昭43−4440）やα−アミノ−β−ハイドロキ
シ吉草酸耐性を有しかつＬ−イソロイシン要求性を有す
る微生物を用いる方法（日本農芸化学会講演要旨集 p.
9（1970））や、メチオニン代謝拮抗物質耐性株を用い
る方法（特公昭60−180597）などが知られている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、これらの方法によるＬ−スレオニンの生成蓄
積濃度は十分に満足できるものではなかった。本発明者
らは、さらに生産性の高いＬ−スレオニンの製造法につ
いて鋭意研究した結果、プロビデンシア属に属しヒスチ
ジン要求性を有する変異株が著量のＬ−スレオニンを蓄
積することを見出し本発明を完成するに至った。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、プロビデンシア属に属し、ヒスチジン要求
性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物を
培養し、培地中にＬ−スレオニンを生成蓄積せしめ、該
培養物からＬ−スレオニンを採取することを特徴とする
醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法に関する。

本発明で使用される微生物は、プロビデンシア属に属
する微生物でヒスチジン要求性を有し、かつＬ−スレオ
ニン生産能を有する微生物であるが、該要求性を有して
いれば他の薬剤に対する耐性あるいはアミノ酸、核酸、
ビタミンなどの栄養要求性などいくつかの性質をあわせ
持っている微生物のいずれも使用できる。

このような微生物の代表的なものとしては、プロビデ
ンシア属に属する微生物に紫外線照射、γ−線照射、あ
るいはＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジンなどの薬剤処理等の変異処理をして得た変異株をあ
げることができる。又、自然変異によっても目的が達せ
られる。

上記のような変異処理した菌体から本発明のヒスチジ
ン要求性等の栄養要求性変異株を分離する方法は、一般
に用いられる方法、すなわちペニシリン濃縮法、レプリ
カ法などを利用して分離することができる。

本発明で使用される微生物として具体的には、例えば
プロビデンシア レトゲリNK−888003株（微工研菌寄第
10057号）があげられる。このプロビデンシア レトゲ
リNK−888003株（微工研菌寄第10057号）は、プロビデ
ンシア レトゲリNK−878002株（微工研菌寄第10009
号）を変異処理して得られたものである。

本発明で使用するNK−888003株とその親株であるNK−
878002株のヒスチジン添加による生育度を表１に示す。

表１から明らかなようにNK−888003株はヒスチジンが
生育に必要である。

なお、本試験は次のようにしておこなった。

即ち、ヒスチジン添加による生育度試験は表２の最小
培地に表１記載のようにヒスチジンを添加した培地を用
い、長さ180mm、径18mmの試験管に10mlの培地を分注・
殺菌したものにそれぞれの菌株を接種し24時間、30℃で
振盪培養した後、610nmにおける吸光度を測定した。

本発明におけるＬ−スレオニン生産用の培地は、炭素
源としてはグルコース、フラクトース、澱粉およびその
分解物等の糖類、フマール酸、コハク酸、クエン酸等の
有機酸などが好適であり、窒素源としては硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、アンモニア水、アンモニアガ
ス等が好適である。無機塩としてはナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウム、マンガン、リン酸など
の塩類を必要に応じて使用する。

又、微量のビタミン類、核酸類は必要に応じて添加す
る。又、使用菌の要求物質は単品として添加してもそれ
を含有する天然系物質のいずれを用いてもよく、天然系
物質として例えばコーンスチープリカー、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス等がある。

培養条件は振盪培養、通気撹拌培養などの好気的条件
下で行うのが良く培養中のpHは４〜９、好ましくはpH6.
0〜7.5の範囲に炭酸カルシウムやアンモニア水、アンモ
ニアガス、鉱酸で保つのがよい。又、培養温度は20℃〜
40℃、好ましくは25℃〜35℃が良く、培養日数は通常２
〜７日である。

培養終了液からＬ−スレオニンを採取する方法は公知
のイオン交換樹脂法、濃縮法吸着法、塩析法などを併用
して行うことが出来る。

〔効 果〕

後記実施例及び参考例に示す如く、本発明例のプロビ
デンシア レトゲリNK−888003株とその親株を培養した
結果を表３に示した。

本発明例のプロビデンシア レトゲリNK−888003株で
は、スレオニンの蓄積濃度が顕著に向上した。

〔実施例〕 表４に示す生産培地を200タンクに110入れ120℃2
0分間加熱殺菌後、表４に示すシード培地で培養したNK
−888003株（微工研菌寄第10057号）を接種し、30℃、
通気量110／分、回転数400rpmで培養した。pHコント
ロール及び窒素源の供給は25％アンモニア水で行い、pH
は6.0〜7.5にコントロールした。グルコース及びコーン
スティープリカーを断続的に添加して90時間培養を行っ
た。

培養終了時のＬ−スレオニン蓄積量は31.6g/であっ
た。培養終了液1000mlを遠心して菌体及び炭酸カルシウ
ム等の不溶物を除去し上澄液を陽イオン交換樹脂（H
⁺型）に通搭する。吸着したＬ−スレオニンを、3.0％の
アンモニア水で溶出しＬ−スレオニン含有区分を濃縮し
てＬ−スレオニンの粗結晶を得た。粗結晶を水で溶解し
て再び濃縮してＬ−スレオニンの結晶26.8gを得た。

〔比較例〕 実施例で使用した菌株を親株のNK−878002株におきか
えて同様の方法で培養した。培養終了時のＬ−スレオニ
ン蓄積量は6.7g/であった。また、実施例と同様の方
法で精製しＬ−スレオニンの結晶5.2gを得た。

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】プロビデンシア属に属し、ヒスチジン要求
   性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物を
   培養し、培地中に生成蓄積したＬ−スレオニンを採取す
   ることを特徴とするＬ−スレオニンの製造法。
2. 【請求項２】プロビデンシア レトゲリに属し、ヒスチ
   ジン要求性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する
   微生物。