JPH0211237B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0211237B2 JPH0211237B2 JP4037182A JP4037182A JPH0211237B2 JP H0211237 B2 JPH0211237 B2 JP H0211237B2 JP 4037182 A JP4037182 A JP 4037182A JP 4037182 A JP4037182 A JP 4037182A JP H0211237 B2 JPH0211237 B2 JP H0211237B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phenylalanine
- corynebacterium
- brevibacterium
- producing
- resistance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は発酵法によるＬ−フエニルアラニン
（以下、単にフエニルアラニンという。）の製造法
に関する。 従来、発酵法によるフエニルアラニンの製造法
としては、ブレビバクテリウム属、又はミクロコ
ツカス属細菌のチロシン要求菌を使用する方法
（特公昭37−6345）、生育にチロシンを要求しかつ
５−メチルトリプトフアンに耐性を有する変異株
を使用する方法（特公昭51−21079）、フエニルア
ラニンアナログに耐性を有する変異株を使用する
方法（特公昭51−28712）更にはデコイニン感受
性異株を使用する方法（特公昭56−64793）等が
知られている。 本発明者等は更に効率良くフエニルアラニンを
発酵生産する方法を開発することを目的として研
究を重ねた結果、ブレビバクテリウム属又はコリ
ネバクテリウム属のフエニルアラニン生産菌にグ
ルタミンアナログ耐性を有する変異株の中により
多量のフエニルアラニンを正成、蓄積する菌株が
存在することを見い出した。 本発明はこの知見に基づいて完成されたもので
ある。 従来、グルタミンアナログ耐性とフエニルアラ
ニンの生成、蓄積の関係については何も報告がな
く、本発明の如く、グルタミンアナログ耐性を付
与せしめることによりフエニルアラニンの蓄積量
が増加するという知見は全く新規である。 本発明において使用される変異株はブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属しグル
タミンアナログ耐性を有し、かつ従来知られてい
るフエニルアラニン生産の為に必要な性質、例え
ばＬ−チロシン要求性、フエニルアラニンアナロ
グ耐性、Ｌ−チロシン要求性でかつトリプトフア
ンもしくはフエニルアラニンアナログ耐性、即ち
フエニルアラニン生産能を有するものである。 本発明の方法において用いられる微生物は、具
体的には次のような変異株が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11821 FERM−P6442（Tyr-、Aza−Serr） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11822 FERM−P6443（Tyr-、5MTr、
DONr） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメフタム
AJ11823 FERM−P6444（Tyr-、5MTr、ｐ−
Ｆ−Pher、Aza−Serr） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
AJ11824 FERM−P6445（ｐ−Ｆ−Pher、Aza
−Serr） Tyr-：Ｌ−チロシン要求性 ５−MTr：５−メチルトリプトフアン耐
性 ｐ−Ｆ−Pher：Ｐ−フルオロフエニルアラニ
ン耐性 Aza−Serr：アザセリン耐性 DONr：６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ
−ノルロイシン耐性 これら本発明の変異株は、ブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属のフエニルアラニン
生産菌を親株として、これに通常の変異誘導操
作、例えば紫外線、Ｘ線照射あるいはＮ−メチル
−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（NGと
略す）、亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処
理した菌体を親株が生育できないような量のグル
タミンアナログを含有する寒天平板培地で培養
し、該平板地上に生育するコロニーを分離するこ
とによつて得られる。 上記ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属のフエニルアラニン生産菌は公知のものを
使用すれば良いが、具体例としては次のような変
異株が使用される。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ3435 FERM−P19121（Tyr-） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ3432 FERM−P1844（Tyrr、５−MTr） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ3437 FERM−P1914（Tyr-、５−MTr、ｐ
−Ｆ−pher） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
AJ3244 ATCC21421（ｐ−Ｆ−pher） 親株としてはこの他、ブレビバクテリウム属又
はコリネバクテリウム属の微生物特にグルタミン
酸生産性細菌として知られている微生物を使用
し、グルタミンアナログ耐性及びフエニルアラニ
ン生産性を付与することによつて誘導することが
できる。このような親株の例としては、ブレビバ
クテリウム・デバリカタムATCC14020、ブレビ
バクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869、ブレビバクテリウム・ロゼウム
ATCC14066、コリネバクテリウム・アセトアシ
ドフイラムATCC13870、コリネバクテリウム・
アセトグルタミクムATCC15806、コリネバクテ
リウム・グルタミクムATCC13032等が使用され
る。 本発明でいうグルタミンアナログとは、ブレビ
バクテリウム属及びコリネバクテリウム属の微生
物の生育を阻害し、その生育阻害がグルタミンの
添加によつて部分的に又は完全に解除されるよう
な薬剤である。 グルタミンアナログとしては次のものが挙げら
れる。 アザセリン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノ
ルロイシン（以下、DONと略す）、デユアゾマイ
シンＡ、Ｂ、アラゾペプチン、メチオニンスルフ
オキサイド、Ｓ−カルバミルシステイン、Ｏ−カ
ルバミルセリン、Ｏ−カルバジルセリン、３−ア
ミノ−３−カルボキシプロペン−スルフオンアミ
ド、Ｎ−ベンジルグルタミン、γ−グルタミルヒ
ドラジン。 次に本発明で使用する変異株の変異誘導法及び
薬剤に対する耐性度を以下の実施例にて示す。 実験例 １ ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869より誘導したＬ−チロシン要求性の
フエニルアラニン生産菌AJ3435 FERM−P1912
をイーストブイヨン寒天斜面培地で培養し、生育
した菌体を集めて1/50Ｍリン酸緩衝液（PH7.0）
に懸濁した（108〜109個／mlの菌体を含む）。こ
の懸濁液にNG（濃度は200μｇ／ml）、室温に30分
間保持した。このようにしてNG変異処理した菌
体を同リン酸緩衝液で充分洗浄した後、アザセリ
ン1000μｇ／mlを含む最小寒天平板培地（第１
表）に塗布し、31.5℃で４〜10日間培養した。
（以下、単にフエニルアラニンという。）の製造法
に関する。 従来、発酵法によるフエニルアラニンの製造法
としては、ブレビバクテリウム属、又はミクロコ
ツカス属細菌のチロシン要求菌を使用する方法
（特公昭37−6345）、生育にチロシンを要求しかつ
５−メチルトリプトフアンに耐性を有する変異株
を使用する方法（特公昭51−21079）、フエニルア
ラニンアナログに耐性を有する変異株を使用する
方法（特公昭51−28712）更にはデコイニン感受
性異株を使用する方法（特公昭56−64793）等が
知られている。 本発明者等は更に効率良くフエニルアラニンを
発酵生産する方法を開発することを目的として研
究を重ねた結果、ブレビバクテリウム属又はコリ
ネバクテリウム属のフエニルアラニン生産菌にグ
ルタミンアナログ耐性を有する変異株の中により
多量のフエニルアラニンを正成、蓄積する菌株が
存在することを見い出した。 本発明はこの知見に基づいて完成されたもので
ある。 従来、グルタミンアナログ耐性とフエニルアラ
ニンの生成、蓄積の関係については何も報告がな
く、本発明の如く、グルタミンアナログ耐性を付
与せしめることによりフエニルアラニンの蓄積量
が増加するという知見は全く新規である。 本発明において使用される変異株はブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属しグル
タミンアナログ耐性を有し、かつ従来知られてい
るフエニルアラニン生産の為に必要な性質、例え
ばＬ−チロシン要求性、フエニルアラニンアナロ
グ耐性、Ｌ−チロシン要求性でかつトリプトフア
ンもしくはフエニルアラニンアナログ耐性、即ち
フエニルアラニン生産能を有するものである。 本発明の方法において用いられる微生物は、具
体的には次のような変異株が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11821 FERM−P6442（Tyr-、Aza−Serr） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11822 FERM−P6443（Tyr-、5MTr、
DONr） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメフタム
AJ11823 FERM−P6444（Tyr-、5MTr、ｐ−
Ｆ−Pher、Aza−Serr） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
AJ11824 FERM−P6445（ｐ−Ｆ−Pher、Aza
−Serr） Tyr-：Ｌ−チロシン要求性 ５−MTr：５−メチルトリプトフアン耐
性 ｐ−Ｆ−Pher：Ｐ−フルオロフエニルアラニ
ン耐性 Aza−Serr：アザセリン耐性 DONr：６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ
−ノルロイシン耐性 これら本発明の変異株は、ブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属のフエニルアラニン
生産菌を親株として、これに通常の変異誘導操
作、例えば紫外線、Ｘ線照射あるいはＮ−メチル
−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（NGと
略す）、亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処
理した菌体を親株が生育できないような量のグル
タミンアナログを含有する寒天平板培地で培養
し、該平板地上に生育するコロニーを分離するこ
とによつて得られる。 上記ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属のフエニルアラニン生産菌は公知のものを
使用すれば良いが、具体例としては次のような変
異株が使用される。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ3435 FERM−P19121（Tyr-） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ3432 FERM−P1844（Tyrr、５−MTr） ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ3437 FERM−P1914（Tyr-、５−MTr、ｐ
−Ｆ−pher） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
AJ3244 ATCC21421（ｐ−Ｆ−pher） 親株としてはこの他、ブレビバクテリウム属又
はコリネバクテリウム属の微生物特にグルタミン
酸生産性細菌として知られている微生物を使用
し、グルタミンアナログ耐性及びフエニルアラニ
ン生産性を付与することによつて誘導することが
できる。このような親株の例としては、ブレビバ
クテリウム・デバリカタムATCC14020、ブレビ
バクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869、ブレビバクテリウム・ロゼウム
ATCC14066、コリネバクテリウム・アセトアシ
ドフイラムATCC13870、コリネバクテリウム・
アセトグルタミクムATCC15806、コリネバクテ
リウム・グルタミクムATCC13032等が使用され
る。 本発明でいうグルタミンアナログとは、ブレビ
バクテリウム属及びコリネバクテリウム属の微生
物の生育を阻害し、その生育阻害がグルタミンの
添加によつて部分的に又は完全に解除されるよう
な薬剤である。 グルタミンアナログとしては次のものが挙げら
れる。 アザセリン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノ
ルロイシン（以下、DONと略す）、デユアゾマイ
シンＡ、Ｂ、アラゾペプチン、メチオニンスルフ
オキサイド、Ｓ−カルバミルシステイン、Ｏ−カ
ルバミルセリン、Ｏ−カルバジルセリン、３−ア
ミノ−３−カルボキシプロペン−スルフオンアミ
ド、Ｎ−ベンジルグルタミン、γ−グルタミルヒ
ドラジン。 次に本発明で使用する変異株の変異誘導法及び
薬剤に対する耐性度を以下の実施例にて示す。 実験例 １ ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869より誘導したＬ−チロシン要求性の
フエニルアラニン生産菌AJ3435 FERM−P1912
をイーストブイヨン寒天斜面培地で培養し、生育
した菌体を集めて1/50Ｍリン酸緩衝液（PH7.0）
に懸濁した（108〜109個／mlの菌体を含む）。こ
の懸濁液にNG（濃度は200μｇ／ml）、室温に30分
間保持した。このようにしてNG変異処理した菌
体を同リン酸緩衝液で充分洗浄した後、アザセリ
ン1000μｇ／mlを含む最小寒天平板培地（第１
表）に塗布し、31.5℃で４〜10日間培養した。
【表】
平板上に生育したコロニーのうち大きなものを
アザセリン耐性株として採取した。このようにし
て得られた耐性株の内には親株よりフエニルアラ
ニン生産能の優れたものが多く見い出された。こ
の内生産能の最も高い菌株AJ11821を選んだ。同
様の変異誘導操作により、AJ3432、AJ3244を親
株として夫々AJ1182、AJ11824を得た。 第３表に示す濃度のアザセリン又はDONを含
む第２表の液体培地を試験管に5.0ml宛分注入し
加熱殺菌した。これに上記変異株を１白金耳宛接
種し30℃にて48時間振盪培養した。生育度は培養
液を水で26倍に希釈し、その562nｍに於る吸光
度を測定して求めた。第３表には薬剤無添加時の
生育度を100とする相対生育値を示した。
アザセリン耐性株として採取した。このようにし
て得られた耐性株の内には親株よりフエニルアラ
ニン生産能の優れたものが多く見い出された。こ
の内生産能の最も高い菌株AJ11821を選んだ。同
様の変異誘導操作により、AJ3432、AJ3244を親
株として夫々AJ1182、AJ11824を得た。 第３表に示す濃度のアザセリン又はDONを含
む第２表の液体培地を試験管に5.0ml宛分注入し
加熱殺菌した。これに上記変異株を１白金耳宛接
種し30℃にて48時間振盪培養した。生育度は培養
液を水で26倍に希釈し、その562nｍに於る吸光
度を測定して求めた。第３表には薬剤無添加時の
生育度を100とする相対生育値を示した。
【表】
【表】
【表】
本発明で使用する培地は炭素源、無機塩類、そ
の他に応じてアミノ酸、ビタミン、核酸等の有機
微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使用され
る。炭素源としては使用する変異株の利用可能な
ものであれば良く、例えばグルコース、フラクト
ース、シユークロース、マルトース、澱粉分解物
糖蜜等の糖類が使用され、その他、エタノール、
プロパノール等のアルコール類、酢酸、クエン酸
等の有機酸類、更に菌株によつてはノルマルパラ
フイン等も単独あるいは他の炭素源と併用して使
用される。 窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、、リン酸アンモニウム等のアンモニウム
塩、硝酸塩、尿素、アンモニア、肉エキス等無機
あるいは有機の窒素源が使用される。有機微量栄
養素としては、アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核
酸、更にこれらのものを含有するペプトン、カザ
ミノ酸、酵母エキス、蛋白分解物等が使用され、
生育にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を
使用する場合には要求される栄養素を補添するこ
とが必要である。無機塩類としてはKH2PO4、
MgSO4、MnSO4、FeSO4等が適宜添加される。 培養は好気的条件で行うことが望ましく、培養
期間中培地のPHを５ないし９、温度を20℃ないし
40℃に制御しつつ１日ないし４日間振盪培養又は
通気撹拌を培養することによりフエニルアラニン
が著量培養液中に蓄積される。培養液からフエニ
ルアラニンを採取する方法は公知の方法に従つて
行えば良く、培養液から菌体を分離除去した後、
濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を用い
る方法等により採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第４表に示すフエニルアラニン生産用培地
を調製し、500ml容振盪フラスコに20ml宛分注し、
120℃で10分間加熱滅菌した。これに別途加熱殺
菌した炭酸カルシウム粉末1.0ｇを補添した。
の他に応じてアミノ酸、ビタミン、核酸等の有機
微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使用され
る。炭素源としては使用する変異株の利用可能な
ものであれば良く、例えばグルコース、フラクト
ース、シユークロース、マルトース、澱粉分解物
糖蜜等の糖類が使用され、その他、エタノール、
プロパノール等のアルコール類、酢酸、クエン酸
等の有機酸類、更に菌株によつてはノルマルパラ
フイン等も単独あるいは他の炭素源と併用して使
用される。 窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、、リン酸アンモニウム等のアンモニウム
塩、硝酸塩、尿素、アンモニア、肉エキス等無機
あるいは有機の窒素源が使用される。有機微量栄
養素としては、アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核
酸、更にこれらのものを含有するペプトン、カザ
ミノ酸、酵母エキス、蛋白分解物等が使用され、
生育にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を
使用する場合には要求される栄養素を補添するこ
とが必要である。無機塩類としてはKH2PO4、
MgSO4、MnSO4、FeSO4等が適宜添加される。 培養は好気的条件で行うことが望ましく、培養
期間中培地のPHを５ないし９、温度を20℃ないし
40℃に制御しつつ１日ないし４日間振盪培養又は
通気撹拌を培養することによりフエニルアラニン
が著量培養液中に蓄積される。培養液からフエニ
ルアラニンを採取する方法は公知の方法に従つて
行えば良く、培養液から菌体を分離除去した後、
濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を用い
る方法等により採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第４表に示すフエニルアラニン生産用培地
を調製し、500ml容振盪フラスコに20ml宛分注し、
120℃で10分間加熱滅菌した。これに別途加熱殺
菌した炭酸カルシウム粉末1.0ｇを補添した。
【表】
この培地に第５表に示すフエニルアラニン生産
菌を１白金耳接種し、30℃で72時間振盪培養し
た。培養液中のフエニルアラニン生成量を測定
し、その結果を第５表に示した。
菌を１白金耳接種し、30℃で72時間振盪培養し
た。培養液中のフエニルアラニン生成量を測定
し、その結果を第５表に示した。
【表】
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属に属し、グルタミンアナログに耐性を有し、
かつＬ−フエニルアラニン生産能を有する微生物
をを培養して培養液中にＬ−フエニルアラニンを
生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
る発酵法によるＬ−フエニルアラニンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4037182A JPS58158194A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4037182A JPS58158194A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58158194A JPS58158194A (ja) | 1983-09-20 |
| JPH0211237B2 true JPH0211237B2 (ja) | 1990-03-13 |
Family
ID=12578780
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4037182A Granted JPS58158194A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58158194A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6066984A (ja) * | 1983-09-22 | 1985-04-17 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フェニルアラニンの製造法 |
-
1982
- 1982-03-15 JP JP4037182A patent/JPS58158194A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58158194A (ja) | 1983-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0379903B1 (en) | Process for producing L-amino acids by fermentation | |
| JPS6236676B2 (ja) | ||
| JPS61202694A (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミンの製造法 | |
| JPH0549489A (ja) | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| JP3008565B2 (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| JPS6115695A (ja) | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法 | |
| JP2876739B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JPH057493A (ja) | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 | |
| JPH027634B2 (ja) | ||
| JPH0211237B2 (ja) | ||
| JP2943312B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JPH0211236B2 (ja) | ||
| JPH0347840B2 (ja) | ||
| JPH0456598B2 (ja) | ||
| JPH0211238B2 (ja) | ||
| JPH0314437B2 (ja) | ||
| JPH052313B2 (ja) | ||
| JP2995816B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JP2817228B2 (ja) | Ｌ―グルタミン酸の製造法 | |
| JPH027635B2 (ja) | ||
| JPH0211235B2 (ja) | ||
| JPS59143596A (ja) | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| JPH0314436B2 (ja) | ||
| JPH0218838B2 (ja) | ||
| JPS61128897A (ja) | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |