JP2943312B2 - 発酵法によるｌ―リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ―リジンの製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は発酵法によるＬ−リジンの製造法に関する。
Ｌ−リジンは、必須アミノ酸の１種、かつ穀類の第１制
限アミノ酸であり、ブロイラーや豚の配合飼料に用いら
れる重要なアミノ酸である。
Ｌ−リジンは、必須アミノ酸の１種、かつ穀類の第１制
限アミノ酸であり、ブロイラーや豚の配合飼料に用いら
れる重要なアミノ酸である。
〈従来の技術〉 従来から知られるリジン発酵法では、自然界から分離
・誘導した微生物人工変異株が用いられる。これら人工
変異株の多くは、ブレビバクテリウム属又はコリネバク
テリウム属に属する微生物由来で、栄養要求性、感受性
及びアナグロ耐性等の性質の組合せ又は順次付加せしめ
ることによりＬ−リジンの生合成系を強化したものであ
ることが知られている「アミノ酸発酵」相田、滝波、千
畑、中山、山田編、学会出版センター、1986年、p27
3）。
・誘導した微生物人工変異株が用いられる。これら人工
変異株の多くは、ブレビバクテリウム属又はコリネバク
テリウム属に属する微生物由来で、栄養要求性、感受性
及びアナグロ耐性等の性質の組合せ又は順次付加せしめ
ることによりＬ−リジンの生合成系を強化したものであ
ることが知られている「アミノ酸発酵」相田、滝波、千
畑、中山、山田編、学会出版センター、1986年、p27
3）。
〈発明が解決しようとする課題〉 Ｌ−レジン生成能を更に向上できる変更株を取得する
ことを目的とする。
ことを目的とする。
〈課題を解決する為の手段とその効果〉 本発明者らは、ブレビバクテリウム属及びコリネバク
テリウム属に属する微生物の中からＬ−リジン生成能の
向上した変異株を取得する為に種々研究した結果、セレ
ナリジン耐性を付与した変異株の中にＬ−リジンの生成
能が向上している微生物を見い出し、本発明はこの知見
に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明
は、セレナリジンに耐性を有し、Ｌ−リジン生成能を有
するブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に
属する微生物を培養し、培養液中に生成蓄積するＬ−リ
ジンを採取することを特徴とする発酵法によるＬ−リジ
ンの製造法に関する。以下、本発明について詳細に説明
する。
テリウム属に属する微生物の中からＬ−リジン生成能の
向上した変異株を取得する為に種々研究した結果、セレ
ナリジン耐性を付与した変異株の中にＬ−リジンの生成
能が向上している微生物を見い出し、本発明はこの知見
に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明
は、セレナリジンに耐性を有し、Ｌ−リジン生成能を有
するブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に
属する微生物を培養し、培養液中に生成蓄積するＬ−リ
ジンを採取することを特徴とする発酵法によるＬ−リジ
ンの製造法に関する。以下、本発明について詳細に説明
する。
本発明でいうセレナリジン（以下、Selysと記す）と
はリジンと類似の化学構造式を有し、リジンγ位のメチ
レン基がセレン（Se）に置換したものである。
はリジンと類似の化学構造式を有し、リジンγ位のメチ
レン基がセレン（Se）に置換したものである。
本発明で誘導する変異株の親株（以下、親株と記す）
の属は、ブレビバクテリムウ属又はコリネバクテリウム
属に属する微生物であるば種、菌株を問わずどのような
微生物でも良い。
の属は、ブレビバクテリムウ属又はコリネバクテリウム
属に属する微生物であるば種、菌株を問わずどのような
微生物でも良い。
例えば、以下に示すようないわゆるコリネ型のＬ−グ
ルタミン酸生産菌として知られる微生物にＬ−リジン生
成能を付加したものが好適である。
ルタミン酸生産菌として知られる微生物にＬ−リジン生
成能を付加したものが好適である。
更に上述のＬ−リジン生成能を有する菌株に、Ｌ−ア
ラニン要求生、フルオロピルビン酸感受性などの性質を
付与することによりＬ−リジン生成能が向上した株菌を
親株として使用することもできる。
ラニン要求生、フルオロピルビン酸感受性などの性質を
付与することによりＬ−リジン生成能が向上した株菌を
親株として使用することもできる。
本発明で言うSelys耐性とは、親株に比して明らかにS
elys高濃度含有培地で生育できる微生物の性質をいう。
elys高濃度含有培地で生育できる微生物の性質をいう。
また、本発明でいう耐性の付与とは、変異誘導により
耐性を付与することをいい、当該方法としては、例えば
紫外線照射又は、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン（以下、NGと記す）、亜硝酸などの化学
薬剤処理による通常の方法に従えばよい。
耐性を付与することをいい、当該方法としては、例えば
紫外線照射又は、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン（以下、NGと記す）、亜硝酸などの化学
薬剤処理による通常の方法に従えばよい。
本発明の培養に用いる炭素源としては、グルコース、
糖蜜などの糖類、酢酸、クエン酸などの有機酸、エタノ
ールなどのアルコール類が使用できる。
糖蜜などの糖類、酢酸、クエン酸などの有機酸、エタノ
ールなどのアルコール類が使用できる。
窒素源としては、硫安、硝安、塩安、リン安、尿素、
アンモニア水、アンモニアガスその他の通常の窒素源が
使用できる。
アンモニア水、アンモニアガスその他の通常の窒素源が
使用できる。
有機微量栄養素としては、大豆蛋白酸加水分解物、酵
母エキスなどが使用できる。
母エキスなどが使用できる。
本発酵の培養条件は通気培養がよく、発酵温度は30〜
35℃、発酵時間は40〜100時間である。培養開始時及び
培養中のpHは6.5〜7.0がよく、pHの調整には、無機又は
有機の酸性又はアルカリ性物質、更には尿素、炭酸カル
シウム、アンモニアガスなどを使用することができる。
35℃、発酵時間は40〜100時間である。培養開始時及び
培養中のpHは6.5〜7.0がよく、pHの調整には、無機又は
有機の酸性又はアルカリ性物質、更には尿素、炭酸カル
シウム、アンモニアガスなどを使用することができる。
発酵液からのＬ−リジンの採取は、通常、イオン交換
樹脂法、その他の公知の方法を組合せることにより実施
できる。
樹脂法、その他の公知の方法を組合せることにより実施
できる。
〈実施例〉 以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
なお、Ｌ−リジンの蓄積値は塩酸塩換算で示し、Ｌ−
リジンの定量は酸性−銅ニンヒドリン比色法による。
リジンの定量は酸性−銅ニンヒドリン比色法による。
実施例１ ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム野生株AT
CC13869をペプトン１％、酵母エキス１％、NaCl 0.5％
及びグルコース0.5％を含み、pHを7.0に調整した培地で
生育させ、集菌後NG250μg/mlを含む0.1Mリン酸緩衝液
（pH7.0）で30℃にて30分間処理した。その後、生残率
1.0％の当該菌体をSelys 500μg/mlを含む最少培地（第
１表）の平板寒天培地に播種し、30℃、７日間培養し、
生育したコロニーの中からブレビバクテリウム・ラクト
ファーメンタムAJ12564（FERM P−11709）を得た。
CC13869をペプトン１％、酵母エキス１％、NaCl 0.5％
及びグルコース0.5％を含み、pHを7.0に調整した培地で
生育させ、集菌後NG250μg/mlを含む0.1Mリン酸緩衝液
（pH7.0）で30℃にて30分間処理した。その後、生残率
1.0％の当該菌体をSelys 500μg/mlを含む最少培地（第
１表）の平板寒天培地に播種し、30℃、７日間培養し、
生育したコロニーの中からブレビバクテリウム・ラクト
ファーメンタムAJ12564（FERM P−11709）を得た。
次に、Ｌ−リジンの発酵生産に際し、第２表に示した
Ｌ−リジン生産培地を調製し、500ml溶媒ml溶の振とう
フラスコに20mlずつ分注した。115℃で10分加熱殺菌
後、あらかじめ乾熱殺菌した炭酸カルシウム1gを加え
た。この培地にAJ12564を接種し往復振とう機により31.
5℃、72時間培養した。発酵液中に蓄積したＬ−リジン
（塩酸塩換算）の定量値を第３表に示す。Selys耐性株
では親株に比べて顕著なＬ−リジンの蓄積の増大が認め
られた。
Ｌ−リジン生産培地を調製し、500ml溶媒ml溶の振とう
フラスコに20mlずつ分注した。115℃で10分加熱殺菌
後、あらかじめ乾熱殺菌した炭酸カルシウム1gを加え
た。この培地にAJ12564を接種し往復振とう機により31.
5℃、72時間培養した。発酵液中に蓄積したＬ−リジン
（塩酸塩換算）の定量値を第３表に示す。Selys耐性株
では親株に比べて顕著なＬ−リジンの蓄積の増大が認め
られた。
実施例２ コリネバクテリウム・アセトアシドフィラムATCC1387
0を実施例１と同様にNGによる変異処理を行い、Selys耐
性株としてコリネバクテリウム・アセトアシドフィラム
AJ12565（FERM P−11710）を得た。ATCC13870とAJ12565
を実施例１と同じ方法で培養し、Ｌ−リジンの生成能を
調べ第４表に示す結果を得た。
0を実施例１と同様にNGによる変異処理を行い、Selys耐
性株としてコリネバクテリウム・アセトアシドフィラム
AJ12565（FERM P−11710）を得た。ATCC13870とAJ12565
を実施例１と同じ方法で培養し、Ｌ−リジンの生成能を
調べ第４表に示す結果を得た。
実施例３ Ｓ−（２−アミノエチル−）Ｌ−システイン耐性のリ
ジン生産菌、ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタ
ムAJ3424（FERM P−1711）を実施例１と同様の変異処理
を行い、Selys耐性株としてブレビバクテリウム・ラク
トファーメンタムAJ12566（FERM P−11711）を得た。AJ
3424とAJ12566を実施例１と同じ方法で培養してＬ−リ
ジンの生成能を調べ第５表に示す結果を得た。AJ12566
はAJ3445に比較して20.3％生産量が向上した。
ジン生産菌、ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタ
ムAJ3424（FERM P−1711）を実施例１と同様の変異処理
を行い、Selys耐性株としてブレビバクテリウム・ラク
トファーメンタムAJ12566（FERM P−11711）を得た。AJ
3424とAJ12566を実施例１と同じ方法で培養してＬ−リ
ジンの生成能を調べ第５表に示す結果を得た。AJ12566
はAJ3445に比較して20.3％生産量が向上した。
実施例４ Ｓ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性のリ
ジン生産菌、コリネバクテリウム・グルタミクムAJ3463
（FERM P−1987）を実施例１と同様の変異処理を行いSe
lys耐性株としてコリネバクテリウム・グルタミクムAJ1
2579（FERM P−11807）を得た。AJ3463とAJ12579を実施
例１と同じ方法で培養し、Ｌ−リジンの生成能を調べ、
第６表に示す結果を得た。
ジン生産菌、コリネバクテリウム・グルタミクムAJ3463
（FERM P−1987）を実施例１と同様の変異処理を行いSe
lys耐性株としてコリネバクテリウム・グルタミクムAJ1
2579（FERM P−11807）を得た。AJ3463とAJ12579を実施
例１と同じ方法で培養し、Ｌ−リジンの生成能を調べ、
第６表に示す結果を得た。
実施例５ ブレビバクテリウム・フラバムAJ11841（FERM P−646
3）に実施例１と同様の変異処理を行い、Selys耐性株と
してブレビバクテリウム・フラバムAJ12568（FERM P−1
1741）を得た。
3）に実施例１と同様の変異処理を行い、Selys耐性株と
してブレビバクテリウム・フラバムAJ12568（FERM P−1
1741）を得た。
AJ11841とAJ12568を実施例１と同じ方法で培養し、Ｌ
−リジンの生成能を調べ、第７表に示す結果を得た。
−リジンの生成能を調べ、第７表に示す結果を得た。
実施例６ ブレビバクテリウム・フラバムAJ11841とAJ12568を それぞれスラント上より１白金耳かきとり第８表に示さ
れる種培養培地50mlに接種し、18時間、31.5℃にて通気
攪拌培養を行なって種培養液を調製した。
れる種培養培地50mlに接種し、18時間、31.5℃にて通気
攪拌培養を行なって種培養液を調製した。
一方、１容小型ガラス型ジャーファーメンターに第
９表に示される種培養培地を300mlに分注し、これらに
上記の主培養液をそれぞれ15ml宛、接種し31.5℃にて通
気毎分1/1容の撹拌培養を行なった。
９表に示される種培養培地を300mlに分注し、これらに
上記の主培養液をそれぞれ15ml宛、接種し31.5℃にて通
気毎分1/1容の撹拌培養を行なった。
培養液中にグルコースと硫安の混合液（グルコース：
硫安の混合液は10:1、混合液のグルコース濃度は40％）
を培地のpH7.0〜8.0の間に保持しつつ、連続的にあるい
は間けつ的に添加して31.5℃で72時間培養を行なった。
その結果を第10表に示した。
硫安の混合液は10:1、混合液のグルコース濃度は40％）
を培地のpH7.0〜8.0の間に保持しつつ、連続的にあるい
は間けつ的に添加して31.5℃で72時間培養を行なった。
その結果を第10表に示した。
〈発明の効果〉 このようにして本発明のSelys耐性株を培養すると、
親株に比べてＬ−リジンが培養液中に顕著に増大して蓄
積する。これにより工業生産段階においても大幅なコス
ト・ダウンが期待できるものである。
親株に比べてＬ−リジンが培養液中に顕著に増大して蓄
積する。これにより工業生産段階においても大幅なコス
ト・ダウンが期待できるものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中森 茂 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１―１ 味 の素株式会社技術センター内 (72)発明者 江崎 信芳 滋賀県大津市田上黒津町215―26 (72)発明者 左右田 健次 京都府宇治市木幡御蔵山45―61 審査官 新見 浩一 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 13/08 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】セレナリジンに耐性を有し、Ｌ−リジン生
成能を有するブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属に属する微生物を培養し、培養液中に生成蓄積す
るＬ−リジンを採取することを特徴とする発酵法による
Ｌ−リジンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2291441A JP2943312B2 (ja) | 1990-10-29 | 1990-10-29 | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 |
| US07/793,950 US5362636A (en) | 1990-10-29 | 1991-10-22 | Process for producing L-lysine by fermentation with a bacteria having selenalysine resistance |
| ITMI912873A IT1251649B (it) | 1990-10-29 | 1991-10-29 | Procedimento per produrre l-lisina mediante fermentazione |
| FR919113343A FR2668496B1 (fr) | 1990-10-29 | 1991-10-29 | Procede pour la production de l-lysine par fermentation. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2291441A JP2943312B2 (ja) | 1990-10-29 | 1990-10-29 | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04166092A JPH04166092A (ja) | 1992-06-11 |
| JP2943312B2 true JP2943312B2 (ja) | 1999-08-30 |
Family
ID=17768909
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2291441A Expired - Fee Related JP2943312B2 (ja) | 1990-10-29 | 1990-10-29 | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5362636A (ja) |
| JP (1) | JP2943312B2 (ja) |
| FR (1) | FR2668496B1 (ja) |
| IT (1) | IT1251649B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6863815B1 (en) * | 2000-09-14 | 2005-03-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Interior | Small-scale hydrogen-oxidizing-denitrifying bioreactor |
| DE102005019967A1 (de) | 2005-04-29 | 2006-11-02 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren |
| US11187717B2 (en) | 2018-10-16 | 2021-11-30 | Ruben Flores | Radio frequency accelerometer |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5610036B1 (ja) * | 1969-07-23 | 1981-03-05 | ||
| GB1342308A (en) * | 1970-01-22 | 1974-01-03 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Production of threonine and lysine by fermentation |
| US3825472A (en) * | 1972-04-27 | 1974-07-23 | Ajinomoto Kk | Method of producing l-lysine by fermentation |
| JPS5434836B2 (ja) * | 1973-01-30 | 1979-10-29 | ||
| JPS52102498A (en) * | 1976-02-20 | 1977-08-27 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-lysine |
| JPS5763095A (en) * | 1980-09-30 | 1982-04-16 | Ajinomoto Co Inc | Production of l-lysine through fermentation process |
| JPS57115186A (en) * | 1980-12-29 | 1982-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-lysine by fermentation |
| ES514806A0 (es) * | 1981-08-10 | 1983-08-16 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Un procedimiento para la produccion de l-lisina. |
| JPS5988094A (ja) * | 1982-11-10 | 1984-05-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
| JP2721975B2 (ja) * | 1988-08-01 | 1998-03-04 | 三菱化学株式会社 | Ｌ−リジンの製造法 |
-
1990
- 1990-10-29 JP JP2291441A patent/JP2943312B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-10-22 US US07/793,950 patent/US5362636A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-10-29 FR FR919113343A patent/FR2668496B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-29 IT ITMI912873A patent/IT1251649B/it active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2668496B1 (fr) | 1993-04-30 |
| US5362636A (en) | 1994-11-08 |
| ITMI912873A1 (it) | 1993-04-29 |
| IT1251649B (it) | 1995-05-17 |
| FR2668496A1 (fr) | 1992-04-30 |
| ITMI912873A0 (it) | 1991-10-29 |
| JPH04166092A (ja) | 1992-06-11 |
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