JPS6296094A - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法Info
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- JPS6296094A JPS6296094A JP60235798A JP23579885A JPS6296094A JP S6296094 A JPS6296094 A JP S6296094A JP 60235798 A JP60235798 A JP 60235798A JP 23579885 A JP23579885 A JP 23579885A JP S6296094 A JPS6296094 A JP S6296094A
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- Japan
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- glutamic acid
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- mutant
- cultured
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
Ｌ−グルタミン酸（以下グルタミン酸と略す。）は調味
料として大きな用途があるほか、医薬原料又は界面活性
剤の原料などとして巾広い用途がある。本発明はグルタ
ミン酸を発酵法によって製造する方法を改良するもので
ある。
料として大きな用途があるほか、医薬原料又は界面活性
剤の原料などとして巾広い用途がある。本発明はグルタ
ミン酸を発酵法によって製造する方法を改良するもので
ある。
（従来の技術）
グルタミン酸は大量に生産されているアミノ酸であり、
製造法に種々の改良が加えられている。
製造法に種々の改良が加えられている。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは発酵法によるグルタミン酸の製造法を改良
すべく鋭意研究した結果、Ｌ−アラニン。
すべく鋭意研究した結果、Ｌ−アラニン。
Ｌ−バリン、 Ｉ、−イソロイシン及びＬ−ロイシンを
含まない培地では親株より生育が悪く、Ｌ−アラニン＋
Ｌ −バリン、Ｌ−イソロイシン又はＬ−ロイシンよ
り成る群から選ばれる１種類以上のアミノ酸を含む培地
では親株と同等以上の生育を示す変異株の中に、親株以
上のグルタミン酸生産能を示す菌株が存在することを発
見した。本発明はこの事実に基いて成されたものである
。
含まない培地では親株より生育が悪く、Ｌ−アラニン＋
Ｌ −バリン、Ｌ−イソロイシン又はＬ−ロイシンよ
り成る群から選ばれる１種類以上のアミノ酸を含む培地
では親株と同等以上の生育を示す変異株の中に、親株以
上のグルタミン酸生産能を示す菌株が存在することを発
見した。本発明はこの事実に基いて成されたものである
。
即ち、本発明はコリネバクテリウム属又はブレビバクテ
リウム属に属し、グルコースが５ ｇ／ｄｉ。
リウム属に属し、グルコースが５ ｇ／ｄｉ。
ＫＨ２ＰＯ４が０．１１／ｄｌ 、 （ＮＨ４）２Ｓｏ
、が１９／ｄｉ及びビオチンが１０μｇ／ｌより成る培
地での生育速度が親株に比較して７０％以下であり、該
培地にＬ−バリン、Ｌ−アラニン、Ｌ−インロイシン又
はＬ−ロイシンより成る群から選ばれる１種類以上のア
ミノ酸を１００１１９７ｄｉ添加した培地での生育速度
が親株と同等以上であり、かつＬ−グルタミン酸生産能
を有する変異株をＬ−グルタミン酸生産培地に接種・培
養し、培養液中にＬ−グルタミン酸を生成・蓄積せしめ
、これを採取するととを特徴とする発酵法によるＬ−グ
ルタミン酸の製造法に関する。以下、本発明を更に詳細
に説明する。
、が１９／ｄｉ及びビオチンが１０μｇ／ｌより成る培
地での生育速度が親株に比較して７０％以下であり、該
培地にＬ−バリン、Ｌ−アラニン、Ｌ−インロイシン又
はＬ−ロイシンより成る群から選ばれる１種類以上のア
ミノ酸を１００１１９７ｄｉ添加した培地での生育速度
が親株と同等以上であり、かつＬ−グルタミン酸生産能
を有する変異株をＬ−グルタミン酸生産培地に接種・培
養し、培養液中にＬ−グルタミン酸を生成・蓄積せしめ
、これを採取するととを特徴とする発酵法によるＬ−グ
ルタミン酸の製造法に関する。以下、本発明を更に詳細
に説明する。
本発明に使用する変異株は、例えば以下の菌株がある。
がある。これらの変異株は、各々ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１３８６９，ブレビバク
テリウム・フラバムＡＴＣＣ１４０６７及びコリネバク
テリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２を親株とし
て変異誘導したものである。
ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１３８６９，ブレビバク
テリウム・フラバムＡＴＣＣ１４０６７及びコリネバク
テリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２を親株とし
て変異誘導したものである。
その他例えばブレビバクテリウム・ディバリカタム（Ｂ
ｒｅｖｌｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｌｖａｒｌｃａｔｕｍ
）ＡＴＣＣ１４０２０、及びブレビバクテリウム・サラ
カロリティカム（Ｂｒｅｖｌｂａｅｔｓｒｊｕｍ ｓａ
ｃｅｈａｒｏｌｉｔｉｃｕｍ） ＡＴＣＣ１４０６６等
を親株として用いても同様に変異株をつくることができ
る。
ｒｅｖｌｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｌｖａｒｌｃａｔｕｍ
）ＡＴＣＣ１４０２０、及びブレビバクテリウム・サラ
カロリティカム（Ｂｒｅｖｌｂａｅｔｓｒｊｕｍ ｓａ
ｃｅｈａｒｏｌｉｔｉｃｕｍ） ＡＴＣＣ１４０６６等
を親株として用いても同様に変異株をつくることができ
る。
本発明の変異株が、更に、元来Ｌ−グルタミン酸の生産
性を高めることが知られている性質、例、ｔＪｆフルオ
ロクエン酸耐性、ケトマロン酸耐性。
性を高めることが知られている性質、例、ｔＪｆフルオ
ロクエン酸耐性、ケトマロン酸耐性。
リゾチーム感受性、フルオロマロン酸耐性、 ２．６−
ピリシンジカルデン酸耐性、Ｎ−グルタミル／−１ルミ
チン酸感受性、グアニ・シン耐性等を併有すればよりＬ
−グルタミン酸の収率が向上する。
ピリシンジカルデン酸耐性、Ｎ−グルタミル／−１ルミ
チン酸感受性、グアニ・シン耐性等を併有すればよりＬ
−グルタミン酸の収率が向上する。
上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照射、Ｘ線
照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば２５０μｇ／ｍＡ’のＮ−ニトロ−Ｎ’
−メチル−Ｎ−二トロソクアニゾンにより３０℃で２０
分間処理する方法等がある。
照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば２５０μｇ／ｍＡ’のＮ−ニトロ−Ｎ’
−メチル−Ｎ−二トロソクアニゾンにより３０℃で２０
分間処理する方法等がある。
上記例示の変異株及び対応する親株の第１表に示した組
成の培地及び第１表に示した組成の培地ＫＬ、−バリン
、Ｌ−アラニン、Ｌ−インロイシン又はＬ−ロイシンを
１００１ｎ９７ｄｔ添加した培地での生育度を第２表に
示した。
成の培地及び第１表に示した組成の培地ＫＬ、−バリン
、Ｌ−アラニン、Ｌ−インロイシン又はＬ−ロイシンを
１００１ｎ９７ｄｔ添加した培地での生育度を第２表に
示した。
第 １ 表
グルコース ５９７ｄｌ
ＫＨ２ＰＯ４０，１，９／ｄｉ
（ＮＨ４）２Ｓ０４１１１／ｄ７！
ビオチン １０μｇ／ｌ
ｐＨ６，６
第１表に示した培地を２ｒｎｌ含む小型試験管に、第２
表に示した微生物を接種し、３１．５℃で２４時間振盪
培養を行った後の培養液について、２６倍希釈液の５６
２ｍμにおける吸光度を測定して生育度とした。第２表
には各々の親株のアミノ酸無添加培地中での生育度を１
００としだ時の相対生育度を示した。
表に示した微生物を接種し、３１．５℃で２４時間振盪
培養を行った後の培養液について、２６倍希釈液の５６
２ｍμにおける吸光度を測定して生育度とした。第２表
には各々の親株のアミノ酸無添加培地中での生育度を１
００としだ時の相対生育度を示した。
上記本発明の変異株を用いてＬ−グルタミン酸を生成蓄
積させるには、Ｌ−グルタミン酸発酵に通常用いられる
方法が使用できる。
積させるには、Ｌ−グルタミン酸発酵に通常用いられる
方法が使用できる。
すなわち、培地としては、炭素源、窒素源、無機イオン
及び必要あれば有機微量栄養素を含有する通常の培地が
用いられる。炭素源としては例えば、糖類（グルコース
、シュクロース等及びこれらを含有するサトウキビ、甜
菜からの糖汁あるいは廃糖蜜、澱粉加水分解物等）、有
機酸（酢酸等）及びアルコール（エタノール等）が好適
である。
及び必要あれば有機微量栄養素を含有する通常の培地が
用いられる。炭素源としては例えば、糖類（グルコース
、シュクロース等及びこれらを含有するサトウキビ、甜
菜からの糖汁あるいは廃糖蜜、澱粉加水分解物等）、有
機酸（酢酸等）及びアルコール（エタノール等）が好適
である。
窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に用いられ
る例えばアンモニウム塩、アンモニア水。
る例えばアンモニウム塩、アンモニア水。
アンモニアガス、尿素等が用いられる。その他リン酸イ
オン、マグネシウムイオン等の無機イオンが必要に応じ
て適宜培地に添加される。ピオチン又は、ピオチン活性
物質は、生育の適量以下の制限量含有するように培地が
調製され、廃糖蜜等の多量のビオチンを含有する原料を
炭素源として使用スるときは、ペニシリン類、ツクルミ
チン酸等の高級脂肪酸、ポリオキシエチレンソルビタン
−モノパルミテート等の界面活性剤等が、ビオチン抑制
剤として培地に添加される。
オン、マグネシウムイオン等の無機イオンが必要に応じ
て適宜培地に添加される。ピオチン又は、ピオチン活性
物質は、生育の適量以下の制限量含有するように培地が
調製され、廃糖蜜等の多量のビオチンを含有する原料を
炭素源として使用スるときは、ペニシリン類、ツクルミ
チン酸等の高級脂肪酸、ポリオキシエチレンソルビタン
−モノパルミテート等の界面活性剤等が、ビオチン抑制
剤として培地に添加される。
培養は、好気的条件下で温度３０〜３８℃の範囲、Ｐ）
（６から８の範囲に調節しつつ行えば、より好ましい結
果が得られる。
（６から８の範囲に調節しつつ行えば、より好ましい結
果が得られる。
かくして２０ないし８０時間も培養すれば培地中には著
量のＬ−グルタミン酸が生成蓄積される。
量のＬ−グルタミン酸が生成蓄積される。
培地中に蓄積されたＬ−グルタミン酸を採取する方法は
、通常の方法が使用できる。
、通常の方法が使用できる。
実施例（１）
ｙ ルコ−ス３６１℃ｇ／ｍ１．尿素２ ｍｙ／ｍｌ、
ｌｏ（２ＰＯ４１■／−１ＭｇＳＯ４・７ａｑ ０８４
ｒｎ９／ｍ／！、ＦｅＳＯ４−７ａ４１０ μｇ／Ｉｌ
ｌ。
ｌｏ（２ＰＯ４１■／−１ＭｇＳＯ４・７ａｑ ０８４
ｒｎ９／ｍ／！、ＦｅＳＯ４−７ａ４１０ μｇ／Ｉｌ
ｌ。
Ｍｎ５Ｏ４・４ａｑ８μｇ／ゴ、大豆蛋白酸加水分解物
（「味液Ｊ ） ５ ｐｉ／ｍｌ、サイアミン塩酸塩１
００μｇ／ｌ、ビオチン５０μｇ／ｌを含有する培地を
調製しその２０ａｔづつを５００ ｒｎｔ容の振盪フラ
スコに入れ１１５℃で１０分間加熱滅菌した。この培地
に次に示す菌株を接種し往復振盪機により３１．５℃で
培養を行った。培養中、培養液を声６．５ないし８．０
に保つように４５０■／Ｈの濃度の尿素溶液を少量づつ
添加した。培地の２６倍希釈液の５６２ｍμにおける吸
光度が０．３０に達した時にｐＥｓｐを添加し、３０時
間で発酵を終了し発酵液中に蓄積しメンタムＡＪ１２２
４１はＰＥ５Ｐ （ポリオキシエチレンソルビタンモノ
／Ｉルミテート） ５ ｒｎ９／ｍｌ 添加で対メンタ
ムＡＴＣＣ１３８６９はＰＥ５Ｐ ５〜／ｄ添加で対糖
収率４７％のＬ−グルタミン酸を蓄積した。
（「味液Ｊ ） ５ ｐｉ／ｍｌ、サイアミン塩酸塩１
００μｇ／ｌ、ビオチン５０μｇ／ｌを含有する培地を
調製しその２０ａｔづつを５００ ｒｎｔ容の振盪フラ
スコに入れ１１５℃で１０分間加熱滅菌した。この培地
に次に示す菌株を接種し往復振盪機により３１．５℃で
培養を行った。培養中、培養液を声６．５ないし８．０
に保つように４５０■／Ｈの濃度の尿素溶液を少量づつ
添加した。培地の２６倍希釈液の５６２ｍμにおける吸
光度が０．３０に達した時にｐＥｓｐを添加し、３０時
間で発酵を終了し発酵液中に蓄積しメンタムＡＪ１２２
４１はＰＥ５Ｐ （ポリオキシエチレンソルビタンモノ
／Ｉルミテート） ５ ｒｎ９／ｍｌ 添加で対メンタ
ムＡＴＣＣ１３８６９はＰＥ５Ｐ ５〜／ｄ添加で対糖
収率４７％のＬ−グルタミン酸を蓄積した。
実施例（２）
粗糖を糖として１００η／プ、ＫＨ２ＰＯ４１■／ゴＭ
ｇＳＯ４・７ ＆（ｌ ０．４ Ｔｎ９／ｖＬｌ、 Ｆ
ｅＳＯ４・７ ａｑ １０ μｇ／ｍＡ！ 。
ｇＳＯ４・７ ＆（ｌ ０．４ Ｔｎ９／ｖＬｌ、 Ｆ
ｅＳＯ４・７ ａｑ １０ μｇ／ｍＡ！ 。
Ｍｎ５Ｏａ ・４ ａｑ ２０ μｇ ／”、尿素５
ｍｙ／ｍｌ、大豆蛋白酸加水分解物（「味液」）５μｌ
／ｒｒｔｌを含有する培地を調製し、その２０Ｉｎｔづ
つを５００ｄ容の振盪フラスコに入れ１１５℃で１０分
間加熱滅菌した。
ｍｙ／ｍｌ、大豆蛋白酸加水分解物（「味液」）５μｌ
／ｒｒｔｌを含有する培地を調製し、その２０Ｉｎｔづ
つを５００ｄ容の振盪フラスコに入れ１１５℃で１０分
間加熱滅菌した。
この培地に次に示す菌を接種し往復振盪機により３１．
５℃で培養を行った。培養中、培養液を−６，５ないし
８．０に保つように４５０ ｍ９／ｍの濃度の尿素水溶
液を夕景づつ添加した。
５℃で培養を行った。培養中、培養液を−６，５ないし
８．０に保つように４５０ ｍ９／ｍの濃度の尿素水溶
液を夕景づつ添加した。
培養液の２６倍希釈液の５６２ｍμにおける吸光度が０
．３０に到達時にＰＥ５Ｐを添加し、３０時間で発酵を
終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収
率を測定した。
．３０に到達時にＰＥ５Ｐを添加し、３０時間で発酵を
終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収
率を測定した。
その結果、コリネバクテリウム・グルタミクムＡＪ １
２２４２はＰＥ５Ｐ ５ｍｑ／ｍｌ添加で対糖収充４７
１１７）ＰＫＳＰ ５ｒｎ９／ｍ／添加で対糖収率４４
チのＬ−グルタミン酸を蓄積した。
２２４２はＰＥ５Ｐ ５ｍｑ／ｍｌ添加で対糖収充４７
１１７）ＰＫＳＰ ５ｒｎ９／ｍ／添加で対糖収率４４
チのＬ−グルタミン酸を蓄積した。
実施例（３）
甘蔗糖蜜を糖として５０ ｍ９／ｄ、ＫＩ（２Ｐ０４１
ｍ９／ｍｌ、ＭｇＳＯ４・７ ｎｑ Ｏ，４ｍ９／Ｒ
１，ＦｅＥ３０４・７ ａｑ １０ ｆｉｇ／ｍｌ 。
ｍ９／ｍｌ、ＭｇＳＯ４・７ ｎｑ Ｏ，４ｍ９／Ｒ
１，ＦｅＥ３０４・７ ａｑ １０ ｆｉｇ／ｍｌ 。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属又はブレビバクテリウム属に属し
、グルコース、５ｇ／ｄｌ；ＫＨ＿２ＰＯ＿４、０．１
ｇ／ｄｌ；（ＮＨ＿４）＿２ＳＯ＿４、１ｇ／ｄｌ及び
ビオチン、１０μｇ／ｌより成る培地での生育速度が親
株に比較して７０％以下であり、該培地にＬ−バリン、
Ｌ−アラニン、Ｌ−イソロイシン又はＬ−ロイシンより
成る群から選ばれる１種類以上のアミノ酸を１００ｍｇ
／ｄｌ添加した培地での生育速度が親株と同等以上であ
り、かつＬ−グルタミン酸生産能を有する変異株をＬ−
グルタミン酸生産培地に接種・培養し、培養液中にＬ−
グルタミン酸を生成・蓄積せしめ、これを採取すること
を特徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60235798A JPS6296094A (ja) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60235798A JPS6296094A (ja) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6296094A true JPS6296094A (ja) | 1987-05-02 |
Family
ID=16991411
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60235798A Pending JPS6296094A (ja) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6296094A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100513996B1 (ko) * | 1996-11-21 | 2005-12-07 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 연속발효에의한l-글루탐산의제조방법 |
| CN116121135A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-05-16 | 大连医诺生物股份有限公司 | 一种谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-异亮氨酸发酵中的应用 |
-
1985
- 1985-10-22 JP JP60235798A patent/JPS6296094A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100513996B1 (ko) * | 1996-11-21 | 2005-12-07 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 연속발효에의한l-글루탐산의제조방법 |
| CN116121135A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-05-16 | 大连医诺生物股份有限公司 | 一种谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-异亮氨酸发酵中的应用 |
| CN116121135B (zh) * | 2022-12-29 | 2024-04-09 | 大连医诺生物股份有限公司 | 一种谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-异亮氨酸发酵中的应用 |
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