JP3065172B2 - 発酵法によるアデノシンの製造法 - Google Patents
発酵法によるアデノシンの製造法Info
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- JP3065172B2 JP3065172B2 JP12383992A JP12383992A JP3065172B2 JP 3065172 B2 JP3065172 B2 JP 3065172B2 JP 12383992 A JP12383992 A JP 12383992A JP 12383992 A JP12383992 A JP 12383992A JP 3065172 B2 JP3065172 B2 JP 3065172B2
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- adenosine
- producing
- thioadenyl
- guanine
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は発酵法によるアデノシン
の製造法に関するものである。
の製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、発酵法によるアデノシン製造法に
関しては、通常の炭素源や窒素源から直接アデノシンを
生産する方法として、イソロイシン要求性を有するバチ
ルス・ズブチリスを用いる方法（昭和３９年度日本農芸
化学会大会）、キサンチン、ヒスチジン及びスレオニン
要求性を有し、かつ８−アザキサンチン耐性を有するバ
チルス・ズブチリスを用いる方法（Agric. Biol. Che
m., 35, 1906 (1971)）、あるいはバチルス属に属し、
生育のためにグアニンを要求し、８−アザアデニン及び
／又は６−メチルアミノプリンに耐性を有する変異株を
用いる方法（特開昭６０−７８５９３号公報）等が知ら
れている。しかしながら、これらの製造法は、いずれも
アデノシンの生産性が低く、工業生産においてより有利
なアデノシンの製造法の開発が望まれていた。
関しては、通常の炭素源や窒素源から直接アデノシンを
生産する方法として、イソロイシン要求性を有するバチ
ルス・ズブチリスを用いる方法（昭和３９年度日本農芸
化学会大会）、キサンチン、ヒスチジン及びスレオニン
要求性を有し、かつ８−アザキサンチン耐性を有するバ
チルス・ズブチリスを用いる方法（Agric. Biol. Che
m., 35, 1906 (1971)）、あるいはバチルス属に属し、
生育のためにグアニンを要求し、８−アザアデニン及び
／又は６−メチルアミノプリンに耐性を有する変異株を
用いる方法（特開昭６０−７８５９３号公報）等が知ら
れている。しかしながら、これらの製造法は、いずれも
アデノシンの生産性が低く、工業生産においてより有利
なアデノシンの製造法の開発が望まれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
法より安価かつ効率的な発酵法によるアデノシンの製造
法を提供することである。
法より安価かつ効率的な発酵法によるアデノシンの製造
法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来法よ
り工業的に有利な発酵法によるアデノシンの製造法を開
発するために鋭意研究を重ねた結果、バチルス属に属す
るグアニン要求性のアデノシン生産菌にチオアデニルサ
ルフェート耐性を付与することにより、アデノシンの生
産能が飛躍的に向上することを見いだし、この知見に基
づいて本発明を完成するに至った。
り工業的に有利な発酵法によるアデノシンの製造法を開
発するために鋭意研究を重ねた結果、バチルス属に属す
るグアニン要求性のアデノシン生産菌にチオアデニルサ
ルフェート耐性を付与することにより、アデノシンの生
産能が飛躍的に向上することを見いだし、この知見に基
づいて本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、バチルス属に属し、
生育のためにグアニンを要求し、チオアデニルサルフェ
ート耐性及びアデノシン生産能を有する変異株を液体培
地中に培養し、培養液中にアデノシンを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とする発酵法によるアデ
ノシンの製造法を提供するものである。
生育のためにグアニンを要求し、チオアデニルサルフェ
ート耐性及びアデノシン生産能を有する変異株を液体培
地中に培養し、培養液中にアデノシンを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とする発酵法によるアデ
ノシンの製造法を提供するものである。
【０００６】本発明において用いられる変異株は、バチ
ルス属に属し、生育のためにグアニンを要求し、チオア
デニルサルフェート耐性及びアデノシン生産能を有する
ものであり、具体的に例示すると以下のような菌株が挙
げられる。バチルス・ズブチリス ＡＪ１２７０８（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１２９５２）
ルス属に属し、生育のためにグアニンを要求し、チオア
デニルサルフェート耐性及びアデノシン生産能を有する
ものであり、具体的に例示すると以下のような菌株が挙
げられる。バチルス・ズブチリス ＡＪ１２７０８（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１２９５２）
【０００７】また、上記菌株にイソロイシン要求性、８
−アザキサンチン耐性、８−アザアデニン耐性及び６−
メチルアミノプリン耐性等の性質を付与することによ
り、更にアデノシン生産能の高い菌株を得ることができ
るが、そのような菌株の本発明の変異株に含まれる。
−アザキサンチン耐性、８−アザアデニン耐性及び６−
メチルアミノプリン耐性等の性質を付与することによ
り、更にアデノシン生産能の高い菌株を得ることができ
るが、そのような菌株の本発明の変異株に含まれる。
【０００８】このような本発明の変異株は、バチルス属
に属するグアニン要求性のアデノシン生産菌を親株と
し、これに通常の変異誘導操作、例えば紫外線、Ｘ線等
の照射、あるいはＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン（以下、ＮＧと略す）、亜硝酸等の化学
薬剤処理を施し、変異処理した菌体を親株が生育できな
いような濃度のチオアデニルサルフェートを含有する寒
天平板培地で培養し、該平板培地上に生育するコロニー
を分離することによって得ることができる。
に属するグアニン要求性のアデノシン生産菌を親株と
し、これに通常の変異誘導操作、例えば紫外線、Ｘ線等
の照射、あるいはＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン（以下、ＮＧと略す）、亜硝酸等の化学
薬剤処理を施し、変異処理した菌体を親株が生育できな
いような濃度のチオアデニルサルフェートを含有する寒
天平板培地で培養し、該平板培地上に生育するコロニー
を分離することによって得ることができる。
【０００９】バチルス属に属するグアニン要求性のアデ
ノシン生産菌は公知のものを使用すればよいが、具体例
としては以下のような菌株が使用される。バチルス・ズ
ブチリス ＡＪ１２７０７（ＦＥＲＭ Ｐ−１２９５
１）
ノシン生産菌は公知のものを使用すればよいが、具体例
としては以下のような菌株が使用される。バチルス・ズ
ブチリス ＡＪ１２７０７（ＦＥＲＭ Ｐ−１２９５
１）
【００１０】次に本発明で使用する変異株の取得法及び
チオアデニルサルフェートに対する耐性度を以下の実験
例にて示す。
チオアデニルサルフェートに対する耐性度を以下の実験
例にて示す。
【００１１】実験例 バチルス・ズブチリス ＡＴＣＣ６６４３より誘導した
グアニン要求性のアデノシン生産菌ＡＪ１２７０７を天
然斜面培地で培養し、生育した菌体を１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し（１ｍｌ当り１０9〜１
０10個の菌体を含む）、これに２５０μｇ／ｍｌ濃度と
なるようにＮＧを加えて３４℃で３０分間保持した。こ
のようにしてＮＧ処理した菌体を同緩衝液で充分洗浄し
た後、５００μｇ／ｍｌのチオアデニルサルフェートを
含む表１に示す組成の最少寒天平板培地に塗布し、３４
℃で４日間培養した。平板上に生育したコロニーのうち
大きなものをチオアデニルサルフェート耐性株として採
取した。このようにして得られた耐性株の内には親株よ
りアデノシン生産能の優れたものが多く見いだされ、そ
の１株としてＡＪ１２７０８を取得した。
グアニン要求性のアデノシン生産菌ＡＪ１２７０７を天
然斜面培地で培養し、生育した菌体を１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し（１ｍｌ当り１０9〜１
０10個の菌体を含む）、これに２５０μｇ／ｍｌ濃度と
なるようにＮＧを加えて３４℃で３０分間保持した。こ
のようにしてＮＧ処理した菌体を同緩衝液で充分洗浄し
た後、５００μｇ／ｍｌのチオアデニルサルフェートを
含む表１に示す組成の最少寒天平板培地に塗布し、３４
℃で４日間培養した。平板上に生育したコロニーのうち
大きなものをチオアデニルサルフェート耐性株として採
取した。このようにして得られた耐性株の内には親株よ
りアデノシン生産能の優れたものが多く見いだされ、そ
の１株としてＡＪ１２７０８を取得した。
【００１２】
【表１】
【００１３】かくして得られた本発明の変異株並びにそ
の親株のチオアデニルサルフェートに対する耐性度を次
の方法により調べた。表２に示す組成の最少培地に表３
の各濃度のチオアデニルサルフェートを添加して試験管
に４ｍｌずつ分注し加熱殺菌した後、表２に示した最少
培地でよく洗浄した各菌株の菌体を接種し、３４℃で２
０時間振盪培養を行った。培養終了後、培養液の５６０
ｎｍにおける吸光度を測定した。表３には各培地での生
育度を相対値で示した。
の親株のチオアデニルサルフェートに対する耐性度を次
の方法により調べた。表２に示す組成の最少培地に表３
の各濃度のチオアデニルサルフェートを添加して試験管
に４ｍｌずつ分注し加熱殺菌した後、表２に示した最少
培地でよく洗浄した各菌株の菌体を接種し、３４℃で２
０時間振盪培養を行った。培養終了後、培養液の５６０
ｎｍにおける吸光度を測定した。表３には各培地での生
育度を相対値で示した。
【００１４】
【表２】
【００１５】
【表３】
【００１６】本発明で使用する液体培地は、炭素源、窒
素源、無機塩類、グアニン及びその他必要に応じてアミ
ノ酸、ビタミン、核酸等の有機微量栄養素を含有する通
常の栄養培地である。炭素源としては、使用する変異株
が利用可能なものであればよく、グルコース、シュクロ
ース、フラクトース、マルトース等の糖類、これら糖類
を含有する澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜、ハイテス
トモラセス等が使用され、更には酢酸等の有機酸類、エ
タノール、グリセリン等のアルコール類も使用される。
窒素源としては、アンモニアガス、アンモニア水、アン
モニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用され、その他補
助的に使用される有機窒素源として、油粕類、大豆加水
分解液、コーンスティープリカー、酵母エキス、ペプト
ン等が挙げられる。無機塩類としては、リン酸塩、マグ
ネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜
使用される。又、栄養要求物質としてのグアニンは、グ
アニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニル酸、リ
ポ核酸等のいずれも使用できる。また本発明の変異株に
アミノ酸等の要求性を付与することにより更にアデノシ
ンの収量が向上することもあるが、その場合にはその要
求物質を補添することが必要である。
素源、無機塩類、グアニン及びその他必要に応じてアミ
ノ酸、ビタミン、核酸等の有機微量栄養素を含有する通
常の栄養培地である。炭素源としては、使用する変異株
が利用可能なものであればよく、グルコース、シュクロ
ース、フラクトース、マルトース等の糖類、これら糖類
を含有する澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜、ハイテス
トモラセス等が使用され、更には酢酸等の有機酸類、エ
タノール、グリセリン等のアルコール類も使用される。
窒素源としては、アンモニアガス、アンモニア水、アン
モニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用され、その他補
助的に使用される有機窒素源として、油粕類、大豆加水
分解液、コーンスティープリカー、酵母エキス、ペプト
ン等が挙げられる。無機塩類としては、リン酸塩、マグ
ネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜
使用される。又、栄養要求物質としてのグアニンは、グ
アニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニル酸、リ
ポ核酸等のいずれも使用できる。また本発明の変異株に
アミノ酸等の要求性を付与することにより更にアデノシ
ンの収量が向上することもあるが、その場合にはその要
求物質を補添することが必要である。
【００１７】微生物の培養は通常ｐＨ４ないし１０、温
度２０ないし４０℃の範囲で好気的条件下で行われる。
培養液のｐＨ調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ
性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
などによって行う。かくして２ないし５日間培養するこ
とにより、培養液中に著量のアデノシンが生成蓄積され
る。
度２０ないし４０℃の範囲で好気的条件下で行われる。
培養液のｐＨ調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ
性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
などによって行う。かくして２ないし５日間培養するこ
とにより、培養液中に著量のアデノシンが生成蓄積され
る。
【００１８】培養液からアデノシンを採取する方法は公
知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を分離除去
し、イオン交換樹脂処理法あるいは濃縮冷却晶析法、膜
分離法、その他の方法を組み合わせることにより行なわ
れる。不純物を除くためには常法の活性炭吸着法及び再
結法を用いて精製してもよい。
知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を分離除去
し、イオン交換樹脂処理法あるいは濃縮冷却晶析法、膜
分離法、その他の方法を組み合わせることにより行なわ
れる。不純物を除くためには常法の活性炭吸着法及び再
結法を用いて精製してもよい。
【００１９】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００２０】実施例１ 表４に示す組成の培地２０ｍｌを５００ｍｌ振盪フラス
コに分注し、加熱殺菌した。これに予め天然寒天斜面培
地上で生育させたバチルス・ズブチリス ＡＪ１２７０
７及びＡＪ１２７０８を一白金耳量接種し、３４℃にて
７２時間振盪培養を行った。培養終了後、培養液中に生
成蓄積したアデノシンの量を高速液体クロマトグラフィ
ーにより定量した結果は表５に示す通りであった。
コに分注し、加熱殺菌した。これに予め天然寒天斜面培
地上で生育させたバチルス・ズブチリス ＡＪ１２７０
７及びＡＪ１２７０８を一白金耳量接種し、３４℃にて
７２時間振盪培養を行った。培養終了後、培養液中に生
成蓄積したアデノシンの量を高速液体クロマトグラフィ
ーにより定量した結果は表５に示す通りであった。
【００２１】
【表４】
【００２２】
【表５】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:125）
Claims (1)
- 【請求項１】 バチルス属に属し、生育のためにグアニ
ンを要求し、チオアデニルサルフェート耐性及びアデノ
シン生産能を有する変異株を液体培地中に培養し、培養
液中にアデノシンを生成蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする発酵法によるアデノシンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12383992A JP3065172B2 (ja) | 1992-05-15 | 1992-05-15 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12383992A JP3065172B2 (ja) | 1992-05-15 | 1992-05-15 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05317076A JPH05317076A (ja) | 1993-12-03 |
| JP3065172B2 true JP3065172B2 (ja) | 2000-07-12 |
Family
ID=14870664
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12383992A Expired - Fee Related JP3065172B2 (ja) | 1992-05-15 | 1992-05-15 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3065172B2 (ja) |
-
1992
- 1992-05-15 JP JP12383992A patent/JP3065172B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05317076A (ja) | 1993-12-03 |
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Legal Events
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Year of fee payment: 10 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100512 |
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| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |