JPH0838188A - イノシトールの製造方法およびグルコース代謝拮抗物質耐性株の取得法 - Google Patents

イノシトールの製造方法およびグルコース代謝拮抗物質耐性株の取得法

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JPH0838188A
JPH0838188A JP17531694A JP17531694A JPH0838188A JP H0838188 A JPH0838188 A JP H0838188A JP 17531694 A JP17531694 A JP 17531694A JP 17531694 A JP17531694 A JP 17531694A JP H0838188 A JPH0838188 A JP H0838188A
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resistance
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Makoto Shirai
真 白井
Toru Yonehara
徹 米原
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Abstract

(57)【要約】 【構成】グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、かつイ
ノシトール分泌生産能を有する微生物を用いることを特
徴とするイノシトールの製造方法、およびグルコース代
謝拮抗物質に耐性でかつイノシトール分泌生産能を有す
る微生物を取得する方法において、炭素源としてアルコ
ール類を用いることを特徴とする、グルコース代謝拮抗
物質耐性変異株の取得法。 【効果】本発明の酵母を用い、本発明の発酵法および菌
体を用いた反応により、既存の方法と比較し、より経済
的なイノシトールの生産が可能となる。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】イノシトールは、高等動物におい
てビタミンの一種として重要な物質で、栄養食品、飼料
添加物、医薬品などに利用される。
【0002】
【従来の技術】従来イノシトールは、米糠、コーンステ
ィープリカーなどからの抽出(特開昭61−5614
2)、パン酵母を培養して製造する方法(Eur.Pa
t.506289A1(1992))などが知られてい
る。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】米糠、コーンスティー
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、パン酵母以外にはイノシトールを菌体外
に生産する微生物は、知られていない。
【0004】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を解決するため、パン酵母以外にイノシトールを生産
する潜在能力を持つ微生物を探索し、イノシトールを菌
体外に分泌する微生物を広く検討した結果、キャンディ
ダ属に属する微生物の変異株がイノシトールを菌体外に
分泌することを見い出した。通常の発酵法、すなわち、
炭素源および窒素源などを添加し、微生物が増殖しなが
ら、生産物を生成する方法で、イノシトールが菌体外に
生成蓄積されることは当然であるが、さらに通常の発酵
法とは異なり、培養によって得られた菌体もしくは培養
物またはその処理物を用い、事実上微生物の増殖が停止
し、酵素反応のみが行われる条件(以後酵素法と記す)
で、炭素源からイノシトールを生成し、菌体外に分泌す
ることも見い出した。しかし、これらの方法によるイノ
シトールの生成蓄積濃度または糖などの原料からのイノ
シトール生成収率は十分に満足できるものではなかっ
た。
【0005】本発明者らはさらに生産性の高いイノシト
ールの製造方法について鋭意研究した結果、イノシトー
ルの生産能を有する微生物に、グルコース代謝拮抗物質
に対する耐性を付与することにより、イノシトールの蓄
積濃度、生成収率が著しく向上することを見出し本発明
に到達した。
【0006】すなわち、本発明はグルコース代謝拮抗物
質に耐性を有し、かつイノシトールを分泌する性質を持
った微生物を培養して、培養液中にイノシトールを蓄積
せしめ、前記培養液よりイノシトールを採取することお
よび、グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、かつイノ
シトール生産能を有する微生物を培養して、得られた菌
体、もしくはそれらの処理物を用い、イノシトールを生
成蓄積せしめる反応を行い、前記反応液よりイノシトー
ルを単離採取することを特徴とするイノシトールの製造
方法である。
【0007】ここでグルコース酸代謝拮抗物質とは、微
生物の(1) 生育を阻害し、その生育阻害がグルコースの
添加により回復する物質または(2) グルコースからイノ
シトール生合成する場合の生合成系に関与する酵素の抑
制あるいは阻害作用を示し、その抑制あるいは阻害がイ
ノシトールおよび、またはイノシトール以降の生合成系
の物質の添加により回復する物質のことである。従っ
て、グルコース酸代謝拮抗物質分離時には、グルコース
以外の炭素源を用いる事が必要であり、グリセロール、
メタノール、エタノールなどのアルコール類が好ましく
用いられる。
【0008】グルコース代謝拮抗物質としては、たとえ
ば2- デオキシグルコース、1- チオグルコース、5-
チオグルコースなどが挙げられる。
【0009】本発明に使用する微生物は、イノシトール
を分泌する微生物であるならばいずれでもよいが、親株
としては、本発明者らによりイノシトールを分泌する変
異株として取得された、キャンディダ・ボイディニイ
(Candida boidinii)IP−2(FE
RM P−14262)を用いることが好ましい。イノ
シトールを分泌する性質があれば、他に、薬剤に対する
耐性、栄養要求性などの性質があってもよく、イノシト
ールを分泌する微生物はすべて本発明に含まれるもので
ある。本発明で用いられる変異株の代表的なものとして
はたとえば以下のものがある。キャンディダ・ボイディ
ニイDGR1- 14(FERM P−14319)。
【0010】この変異株はキャンディダ・ボイディニイ
IP- 2より通常の変異処理方法によって得られたもの
で、2- デオキシグルコースに耐性な変異株である。
【0011】変異株の誘導は親株を紫外線照射するか、
あるいは変異誘発剤(たとえばN−メチル−N′−ニト
ロ−N−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など)で処理した後、親株が生育できないような濃度の
グルコース代謝拮抗物質を含む固体培地で生育可能な菌
株を採取すればよい。
【0012】グルコース代謝拮抗物質耐性変異株は、親
株よりグルコース代謝拮抗物質に強い耐性を有する株の
ことであり、好ましくは親株の相対生育度が30%以下
を示すグルコース代謝拮抗物質の濃度範囲において60
%以上の相対生育度を示す変異株のことである。ここで
の相対生育度は培養液の660nmにおける吸光度を測
定し、各菌株のグルコース代謝拮抗物質を添加していな
い培養液の吸光度を100%とした時の相対値で示す。
耐性を検定する場合のグルコース代謝拮抗物質は市販の
ものを用いればよい。
【0013】本発明における培養方法について説明す
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地である。
【0014】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを1〜15%、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を0.1〜4.0%、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が0.00
0001%〜0.1%、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等0〜5%をそれ
ぞれ適当に含有する培地が用いられる。これらの他に、
リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第1鉄、等が
微量成分として添加される。また好ましくは消泡剤など
も添加し、培養条件の安定化をはかる。
【0015】培養は通常、好気条件で行う。培養の間、
培地のpH3〜8に、温度は20〜35℃に調節し、2
4〜96時間振とうまたは通気撹拌培養すれば好ましい
結果が得られる。
【0016】次に本発明における酵素法でのイノシトー
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体を得る。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは公知の方法で原形質分
離(プラスモリシス)化処理を行う。
【0017】反応原料としては、一般にしられているイ
ノシトール生合成の前駆体である、グルコース−6−リ
ン酸あるいはさらにグルコース−6−リン酸の前駆体で
あるグルコースを使用する。反応はニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド(NAD)、アンモニウムイオン、
の存在下で行い、グルコースを前駆体とする場合には、
さらにマグネシウム、アデノシン−3−リン酸もしくは
その前駆体を添加する。なお、これらのイノシトール生
合成に必要な化合物群は、各々単独に添加してもよい
が、これらを含む天然由来の混合物をかわりに使用する
ことも可能である。また、SH基保護剤など反応を安定
化するための添加物を含んでもよい。反応の間、反応液
のpH3〜8に、温度は20〜35℃に調節し、10〜
72時間振とうまたは通気撹拌すれば好ましい結果が得
られる。
【0018】培養液中に分泌蓄積されたイノシトール
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
【0019】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
【0020】実施例1 (2- デオキシグルコース耐性変異株の分離)キャンデ
ィダ・ボイディニイIP- 2の菌体を常法によりN−メ
チル−N’−ニトロ−N−ニトロソグアニジン処理(3
00μg /ml)、30℃10分)した後、この細胞を適
当に希釈し、表1に示した培地に15g /l の濃度に寒
天を、および1mMの濃度で2- デオキシグルコースを
加えた平板培地に塗布し、30℃で4日間培養した。生
育してきた変異処理したキャンディダ・ボイディニイI
P- 2のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キャ
ンディダ・ボイディニイDGR1- 14を取得した。
【0021】
【表1】
【0022】実施例2 (2- デオキシグルコース耐性変異株の耐性度)表3に
示す各菌株を表2に示す各培地を用いて30℃で24時
間振盪培養し、生育した菌体を集菌し生理食塩水で洗浄
した。この菌体懸濁液を表3に示す濃度の2- デオキシ
グルコースを添加した表3に示す培地5mlに植菌し
て、30℃にて培養し、各菌株の72時間後の生育度を
調べた。その結果は表3に示すとおりである。本発明で
使用するに2- デオキシグルコースに耐性な変異株は親
株とと比較して、高濃度の2- デオキシグルコースによ
って生育が阻害されず、強い2- デオキシグルコース耐
性を獲得していることを示している。
【0023】
【表2】
【0024】
【表3】
【0025】実施例3 (発酵法による2- デオキシグルコース耐性変異株の培
養およびイノシトールの生産)表5に示す菌株をそれぞ
れ、表2に示した培地で30℃24時間振とうして前培
養した後、あらかじめ115℃10分上記滅菌した表4
に示した組成の培地50mlを含む50ml溶三角フラスコ
に植え継ぎ、180rpm 、振幅30cmの条件下で48時
間培養した。
【0026】培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去
したろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ
法で定量したところ、表5に示すような結果を得た。親
株と比較し、変異株ではイノシトールの生産量が大幅に
向上している結果を得た。
【0027】
【表4】
【0028】
【表5】
【0029】実施例4 (酵素法による2- デオキシグルコース耐性変異株の培
養およびイノシトールの生産)表10および表11に示
す菌株をそれぞれ、表2に示した培地で30℃24時間
振とうして前培養した後、あらかじめ115℃10分上
記滅菌した表5および表7に示した組成の培地10mlを
含む25mm経の試験管に植え継ぎ、30℃24時間振と
う培養した。分離酵母菌体80g /l (乾燥重量換算)
を蒸留水に分散せしめ、45分間37℃でかつ静止状態
で放置した。しかる後に、4mol/lのD−ソルビト
ール水溶液を加え、最終濃度1.5mol/lのD−ソ
ルビトール濃度とし、10分間37℃で静止状態で放置
した。
【0030】処理菌体を用い表8および表9に示した組
成で30℃20時間振とうし反応した。反応終了後、菌
体を除去したろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオ
アッセイ法で定量したところ、表10および表11に示
すような結果を得た。親株と比較し、変異株ではイノシ
トールの生産量が大幅に向上している結果を得た。
【0031】
【表6】
【0032】
【表7】
【0033】
【表8】
【0034】
【表9】
【0035】
【表10】
【0036】
【表11】
【0037】実施例5 実施例3での培養液1L分の上清をカチオン交換樹脂ダ
イヤイオンSK1Bに通液し、その素通り画分をあつ
め、さらにアニオン交換樹脂ダイヤイオンPA316に
通液し、その素通り画分をあつめ、濃縮晶析し、純度9
7%以上のイノシトール結晶2. 1g を得た。
【0038】
【発明の効果】本発明の酵母を用い、本発明の発酵法お
よび菌体を用いた反応により、既存の方法と比較し、よ
り経済的なイノシトールの生産が可能となる。

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、か
    つイノシトール分泌生産能を有する微生物を用いること
    を特徴とするイノシトールの製造方法。
  2. 【請求項2】グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、か
    つイノシトール分泌生産能を有する微生物を培養して、
    培養液中にイノシトールを蓄積せしめることを特徴とす
    る請求項1記載のイノシトールの製造方法。
  3. 【請求項3】グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、か
    つイノシトール生産能を有する微生物を培養して、培養
    液中にイノシトールを蓄積せしめ、前記培養液よりイノ
    シトールを単離採取することを特徴とする請求項2記載
    のイノシトールの製造方法。
  4. 【請求項4】グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、か
    つイノシトール分泌生産能を有する微生物を培養して、
    得られた菌体、もしくはそれらの処理物を用い、イノシ
    トールを生成蓄積せしめる反応を行うことを特徴とする
    請求項1記載のイノシトールの製造方法。
  5. 【請求項5】グルコース代謝拮抗物質に耐性を有し、か
    つイノシトール分泌生産能を有する微生物を培養して、
    得られた菌体、もしくはそれらの処理物を用い、イノシ
    トールを生成蓄積せしめる反応を行い、前記反応液より
    イノシトールを単離採取することを特徴とする請求項4
    記載のイノシトールの製造方法。
  6. 【請求項6】イノシトール分泌生産能を有する微生物が
    キャンディダ属に属する微生物であることを特徴とする
    請求項1から5のいずれか1項に記載のイノシトールの
    製造方法。
  7. 【請求項7】キャンディダ属に属する微生物が、キャン
    ディダ・ボイディニイであることを特徴とする請求項6
    記載のイノシトールの製造方法。
  8. 【請求項8】グルコース代謝拮抗物質が、2−デオキシ
    グルコースであることを特徴とする請求項1から7のい
    ずれか1項記載のイノシトールの製造方法。
  9. 【請求項9】グルコース代謝拮抗物質に耐性でかつイノ
    シトール分泌生産能を有する微生物を取得する方法にお
    いて、炭素源としてアルコール類を用いることを特徴と
    する、グルコース代謝拮抗物質耐性変異株の取得法。
JP17531694A 1994-04-19 1994-07-27 イノシトールの製造方法およびグルコース代謝拮抗物質耐性株の取得法 Withdrawn JPH0838188A (ja)

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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013073483A1 (ja) 2011-11-14 2013-05-23 旭化成ケミカルズ株式会社 ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法
WO2013115012A1 (ja) 2012-02-02 2013-08-08 旭化成ケミカルズ株式会社 シロ‐イノシトールの製造方法
WO2018004307A1 (ko) 2016-06-30 2018-01-04 씨제이제일제당 (주) 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법
US10262794B2 (en) 2012-09-20 2019-04-16 Nittoku Engineering Co., Ltd. Winding method

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013073483A1 (ja) 2011-11-14 2013-05-23 旭化成ケミカルズ株式会社 ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法
KR20140048334A (ko) 2011-11-14 2014-04-23 아사히 가세이 케미칼즈 가부시키가이샤 미오이노시톨 및 미오이노시톨 유도체의 제조 방법
EP2921558A1 (en) 2011-11-14 2015-09-23 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative
US9365603B2 (en) 2011-11-14 2016-06-14 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative
US9994871B2 (en) 2011-11-14 2018-06-12 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative
WO2013115012A1 (ja) 2012-02-02 2013-08-08 旭化成ケミカルズ株式会社 シロ‐イノシトールの製造方法
US9505795B2 (en) 2012-02-02 2016-11-29 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for producing scyllo-inositol
US10262794B2 (en) 2012-09-20 2019-04-16 Nittoku Engineering Co., Ltd. Winding method
WO2018004307A1 (ko) 2016-06-30 2018-01-04 씨제이제일제당 (주) 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법

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