JPH09117295A - イノシトールの製造法と３級アミンに耐性を有する株の取得法 - Google Patents
イノシトールの製造法と３級アミンに耐性を有する株の取得法Info
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- JPH09117295A JPH09117295A JP27893495A JP27893495A JPH09117295A JP H09117295 A JPH09117295 A JP H09117295A JP 27893495 A JP27893495 A JP 27893495A JP 27893495 A JP27893495 A JP 27893495A JP H09117295 A JPH09117295 A JP H09117295A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】経済的なイノシトール生産を可能とする。
【解決手段】３級アミンに耐性を有し、かつイノシトー
ル生産能を有する微生物を用いる。
ル生産能を有する微生物を用いる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】イノシトールは、高等動物に
おいてビタミンの一種として重要な物質で、栄養食品、
飼料添加物、医薬品などに利用される。本発明は、イノ
シトールを微生物を利用して製造する方法に関する。
おいてビタミンの一種として重要な物質で、栄養食品、
飼料添加物、医薬品などに利用される。本発明は、イノ
シトールを微生物を利用して製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来イノシトールは、米糠、コーンステ
ィープリカーなどからの抽出（特開昭６１−５６１４２
号公報）、パン酵母を培養して製造する方法（欧州特許
５０６２８９号公開公報）などが知られている。
ィープリカーなどからの抽出（特開昭６１−５６１４２
号公報）、パン酵母を培養して製造する方法（欧州特許
５０６２８９号公開公報）などが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】米糠、コーンスティー
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、パン酵母以外にはイノシトールを菌体外
に生産する微生物は、知られていない。
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、パン酵母以外にはイノシトールを菌体外
に生産する微生物は、知られていない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を解決するため、パン酵母以外にイノシトールを生産
する潜在能力を持つ微生物を探索し、イノシトールを菌
体外に分泌する微生物を広く検討した結果、キャンディ
ダ属に属する微生物の変異株がイノシトールを菌体外に
分泌することを見い出した。通常の発酵法、すなわち、
炭素源および窒素源などを添加し、微生物が増殖しなが
ら、生産物を生成する方法で、イノシトールが菌体外に
生成蓄積されることは当然であるが、さらに通常の発酵
法とは異なり、培養によって得られた菌体もしくは培養
物またはその処理物を用い、事実上微生物の増殖が停止
し、酵素反応のみが行われる条件（以後酵素法と記す）
で、炭素源からイノシトールを生成し、菌体外に分泌す
ることも見い出した。しかし、これらの方法によるイノ
シトールの生成蓄積濃度または糖などの原料からのイノ
シトール生成収率は十分に満足できるものではなかっ
た。
点を解決するため、パン酵母以外にイノシトールを生産
する潜在能力を持つ微生物を探索し、イノシトールを菌
体外に分泌する微生物を広く検討した結果、キャンディ
ダ属に属する微生物の変異株がイノシトールを菌体外に
分泌することを見い出した。通常の発酵法、すなわち、
炭素源および窒素源などを添加し、微生物が増殖しなが
ら、生産物を生成する方法で、イノシトールが菌体外に
生成蓄積されることは当然であるが、さらに通常の発酵
法とは異なり、培養によって得られた菌体もしくは培養
物またはその処理物を用い、事実上微生物の増殖が停止
し、酵素反応のみが行われる条件（以後酵素法と記す）
で、炭素源からイノシトールを生成し、菌体外に分泌す
ることも見い出した。しかし、これらの方法によるイノ
シトールの生成蓄積濃度または糖などの原料からのイノ
シトール生成収率は十分に満足できるものではなかっ
た。
【０００５】本発明者らはさらに生産性の高いイノシト
ールの製造方法について鋭意研究した結果、イノシトー
ルの生産能を有する微生物に、３級アミンに対する耐性
を付与することにより、イノシトールの蓄積濃度、生成
収率が著しく向上することを見出し本発明に到達した。
ールの製造方法について鋭意研究した結果、イノシトー
ルの生産能を有する微生物に、３級アミンに対する耐性
を付与することにより、イノシトールの蓄積濃度、生成
収率が著しく向上することを見出し本発明に到達した。
【０００６】すなわち、本発明は３級アミンに耐性を有
し、かつイノシトールを分泌する性質を持った微生物を
培養して、培養液中にイノシトールを蓄積せしめ、前記
培養液よりイノシトールを採取することおよび、３級ア
ミンに耐性を有し、かつイノシトール生産能を有する微
生物を培養して、得られた菌体、もしくはそれらの処理
物を用い、イノシトールを生成蓄積せしめる反応を行
い、前記反応液よりイノシトールを単離採取することを
特徴とするイノシトールの製造方法である。
し、かつイノシトールを分泌する性質を持った微生物を
培養して、培養液中にイノシトールを蓄積せしめ、前記
培養液よりイノシトールを採取することおよび、３級ア
ミンに耐性を有し、かつイノシトール生産能を有する微
生物を培養して、得られた菌体、もしくはそれらの処理
物を用い、イノシトールを生成蓄積せしめる反応を行
い、前記反応液よりイノシトールを単離採取することを
特徴とするイノシトールの製造方法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明に使用する微生物は、３級
アミンに耐性を有し、イノシトールを分泌する微生物で
あるならばいずれでもよいが、親株としては、本発明者
らによりイノシトールを分泌する変異株として取得され
た、キャンディダ・ボイディニイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂ
ｏｉｄｉｎｉｉ）ＤＣＳＲ０．２−５９（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５０７１）を用いることが好ましい。イノシトール
を分泌する性質があれば、他に、薬剤に対する耐性、栄
養要求性などの性質があってもよく、イノシトールを分
泌する微生物はすべて本発明に含まれるものである。
アミンに耐性を有し、イノシトールを分泌する微生物で
あるならばいずれでもよいが、親株としては、本発明者
らによりイノシトールを分泌する変異株として取得され
た、キャンディダ・ボイディニイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂ
ｏｉｄｉｎｉｉ）ＤＣＳＲ０．２−５９（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５０７１）を用いることが好ましい。イノシトール
を分泌する性質があれば、他に、薬剤に対する耐性、栄
養要求性などの性質があってもよく、イノシトールを分
泌する微生物はすべて本発明に含まれるものである。
【０００８】３級アミンとしては、分子内に少なくとも
１つの３級アミノ基を有する化合物が用いられる。好ま
しくは、少なくとも１つのメチル基が窒素に直接結合し
た３級アミノ基を有する化合物が用いられる。さらに好
ましくは、３級アミノ基の他にさらに１つ以上の３級ア
ミノ基または２級アミノ基を有する化合物が用いられ
る。
１つの３級アミノ基を有する化合物が用いられる。好ま
しくは、少なくとも１つのメチル基が窒素に直接結合し
た３級アミノ基を有する化合物が用いられる。さらに好
ましくは、３級アミノ基の他にさらに１つ以上の３級ア
ミノ基または２級アミノ基を有する化合物が用いられ
る。
【０００９】具体的には、テトラケイン、プロメタジ
ン、カフェインなどが挙げられる。
ン、カフェインなどが挙げられる。
【００１０】本発明で用いられる変異株の代表的なもの
としてはたとえば以下のものがある。キャンディダ・ボ
イディニイＴＥＲ８０（ＦＥＲＭ Ｐ−１５１０９）、
ＰＲＯＭＲ１０８（ＦＥＲＭ Ｐ−１５１１０）、ＣＡ
ＦＲ４８（ＦＥＲＭ Ｐ−１５１１１）。
としてはたとえば以下のものがある。キャンディダ・ボ
イディニイＴＥＲ８０（ＦＥＲＭ Ｐ−１５１０９）、
ＰＲＯＭＲ１０８（ＦＥＲＭ Ｐ−１５１１０）、ＣＡ
ＦＲ４８（ＦＥＲＭ Ｐ−１５１１１）。
【００１１】キャンディダ・ボイディニイＴＥＲ８０は
キャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９より
通常の変異処理方法によって得られたもので、テトラケ
インに耐性な変異株である。
キャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９より
通常の変異処理方法によって得られたもので、テトラケ
インに耐性な変異株である。
【００１２】キャンディダ・ボイディニイＰＲＯＭＲ１
０８はキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５
９より通常の変異処理方法によって得られたもので、プ
ロメタジンに耐性な変異株である。
０８はキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５
９より通常の変異処理方法によって得られたもので、プ
ロメタジンに耐性な変異株である。
【００１３】キャンディダ・ボイディニイＣＡＦＲ４８
はキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９よ
り通常の変異処理方法によって得られたもので、カフェ
インに耐性な変異株である。
はキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９よ
り通常の変異処理方法によって得られたもので、カフェ
インに耐性な変異株である。
【００１４】変異株の誘導は親株を紫外線照射するか、
あるいは変異誘発剤（たとえばＮ−メチル−Ｎ´−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など）で処理した後、親株が生育できないような濃度の
３級アミンを含む固体培地で生育可能な菌株を採取すれ
ばよい。
あるいは変異誘発剤（たとえばＮ−メチル−Ｎ´−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など）で処理した後、親株が生育できないような濃度の
３級アミンを含む固体培地で生育可能な菌株を採取すれ
ばよい。
【００１５】３級アミンに耐性な変異株とは、親株より
３級アミンに強い耐性を有する株のことであり、好まし
くは親株の相対生育度が３０％以下を示す３級アミンの
濃度範囲において６０％以上の相対生育度を示す変異株
のことである。ここでの相対生育度は培養液の６６０ｎ
ｍにおける吸光度を測定し、各菌株の３級アミンを添加
していない培養液の吸光度を１００％とした時の相対値
で示す。耐性を検定する場合の３級アミンは市販のもの
を用いればよい。
３級アミンに強い耐性を有する株のことであり、好まし
くは親株の相対生育度が３０％以下を示す３級アミンの
濃度範囲において６０％以上の相対生育度を示す変異株
のことである。ここでの相対生育度は培養液の６６０ｎ
ｍにおける吸光度を測定し、各菌株の３級アミンを添加
していない培養液の吸光度を１００％とした時の相対値
で示す。耐性を検定する場合の３級アミンは市販のもの
を用いればよい。
【００１６】なお、３級アミンに耐性を有する株の分離
時には、好ましくはグルコース以外の炭素源を用い、グ
リセロール、メタノール、エタノールなどのアルコール
類が好ましく用いられる。
時には、好ましくはグルコース以外の炭素源を用い、グ
リセロール、メタノール、エタノールなどのアルコール
類が好ましく用いられる。
【００１７】本発明における培養方法について説明す
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地が好ましく用いられる。
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地が好ましく用いられる。
【００１８】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを１〜１５％、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を０．１〜４．０％、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が０．００
０００１％〜０．１％、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等０〜５％をそれ
ぞれ適当に含有する培地が用いられる。これらの他に、
リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第１鉄、等が
微量成分として添加される。また好ましくは消泡剤など
も添加し、培養条件の安定化をはかる。
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを１〜１５％、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を０．１〜４．０％、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が０．００
０００１％〜０．１％、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等０〜５％をそれ
ぞれ適当に含有する培地が用いられる。これらの他に、
リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第１鉄、等が
微量成分として添加される。また好ましくは消泡剤など
も添加し、培養条件の安定化をはかる。
【００１９】培養は好気条件で行うのが好ましい。培養
の間、培地のｐＨ３〜８に、温度は２０〜３５℃に調節
し、２４〜９６時間振盪または通気撹拌培養すれば好ま
しい結果が得られる。
の間、培地のｐＨ３〜８に、温度は２０〜３５℃に調節
し、２４〜９６時間振盪または通気撹拌培養すれば好ま
しい結果が得られる。
【００２０】次に本発明における酵素法でのイノシトー
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体を得る。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは公知の方法で原形質分
離（プラスモリシス）化処理を行う。
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体を得る。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは公知の方法で原形質分
離（プラスモリシス）化処理を行う。
【００２１】反応原料としては、一般に知られているイ
ノシトール生合成の前駆体である、グルコース−６−リ
ン酸あるいはさらにグルコース−６−リン酸の前駆体で
あるグルコースを使用するのが好ましい。反応はニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、アンモニ
ウムイオン、の存在下で行い、グルコースを前駆体とす
る場合には、さらにマグネシウム、アデノシン−３−リ
ン酸もしくはその前駆体を添加するのが好ましい。な
お、これらのイノシトール生合成に必要な化合物群は、
各々単独に添加してもよいが、これらを含む天然由来の
混合物をかわりに使用することも可能である。また、Ｓ
Ｈ基保護剤など反応を安定化するための添加物を含んで
もよい。反応の間、反応液のｐＨ３〜８に、温度は２０
〜３５℃に調節し、１０〜７２時間振盪または通気撹拌
すれば好ましい結果が得られる。
ノシトール生合成の前駆体である、グルコース−６−リ
ン酸あるいはさらにグルコース−６−リン酸の前駆体で
あるグルコースを使用するのが好ましい。反応はニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、アンモニ
ウムイオン、の存在下で行い、グルコースを前駆体とす
る場合には、さらにマグネシウム、アデノシン−３−リ
ン酸もしくはその前駆体を添加するのが好ましい。な
お、これらのイノシトール生合成に必要な化合物群は、
各々単独に添加してもよいが、これらを含む天然由来の
混合物をかわりに使用することも可能である。また、Ｓ
Ｈ基保護剤など反応を安定化するための添加物を含んで
もよい。反応の間、反応液のｐＨ３〜８に、温度は２０
〜３５℃に調節し、１０〜７２時間振盪または通気撹拌
すれば好ましい結果が得られる。
【００２２】培養液中に分泌蓄積されたイノシトール
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
【００２３】このようにして得られたイノシトールは、
栄養食品、栄養補助食品、粉ミルクなどの食品添加剤、
ニワトリ、牛、豚などの家畜用飼料添加剤、ハマチ、エ
ビなどの養殖魚用飼料添加剤、犬、猫などのペットフー
ド用添加剤、医薬品などの原料や添加剤、化粧品、入浴
剤、トイレタリー製品、医薬部外品などの添加剤などに
用いられる。
栄養食品、栄養補助食品、粉ミルクなどの食品添加剤、
ニワトリ、牛、豚などの家畜用飼料添加剤、ハマチ、エ
ビなどの養殖魚用飼料添加剤、犬、猫などのペットフー
ド用添加剤、医薬品などの原料や添加剤、化粧品、入浴
剤、トイレタリー製品、医薬部外品などの添加剤などに
用いられる。
【００２４】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
る。
【００２５】実施例１ （テトラケイン耐性変異株の分離）キャンディダ・ボイ
ディニイＤＣＳＲ０．２−５９の菌体を常法によりＮ−
メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理
（３００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞
を適当に希釈し、表１に示した培地に０．７５ｇ／Ｌの
濃度でテトラケイン（Ａｌｄｒｉｃｈ製）を加えた平板
培地に塗布し、３０℃で４日間培養した。生育してきた
変異処理したキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．
２−５９のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キ
ャンディダ・ボイディニイＴＥＲ８０を取得した。
ディニイＤＣＳＲ０．２−５９の菌体を常法によりＮ−
メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理
（３００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞
を適当に希釈し、表１に示した培地に０．７５ｇ／Ｌの
濃度でテトラケイン（Ａｌｄｒｉｃｈ製）を加えた平板
培地に塗布し、３０℃で４日間培養した。生育してきた
変異処理したキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．
２−５９のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キ
ャンディダ・ボイディニイＴＥＲ８０を取得した。
【００２６】（テトラケイン耐性変異株の耐性度）キャ
ンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９およびキ
ャンディダ・ボイディニイＴＥＲ８０を表２に示す培地
を用いて３０℃で２４時間振盪培養し、生育した菌体を
集菌し生理食塩水で洗浄した。この菌体懸濁液を表２に
示す培地５ｍｌおよび表２の組成にテトラケインを２ｇ
／ｌ添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養
し、各菌株の７２時間後の生育度を調べた。その結果は
表３に示すとおりである。本発明で使用するテトラケイ
ンに耐性な変異株は親株と比較して、テトラケインによ
って生育が阻害されず、強いテトラケイン耐性を獲得し
ていることを示している。
ンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９およびキ
ャンディダ・ボイディニイＴＥＲ８０を表２に示す培地
を用いて３０℃で２４時間振盪培養し、生育した菌体を
集菌し生理食塩水で洗浄した。この菌体懸濁液を表２に
示す培地５ｍｌおよび表２の組成にテトラケインを２ｇ
／ｌ添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養
し、各菌株の７２時間後の生育度を調べた。その結果は
表３に示すとおりである。本発明で使用するテトラケイ
ンに耐性な変異株は親株と比較して、テトラケインによ
って生育が阻害されず、強いテトラケイン耐性を獲得し
ていることを示している。
【００２７】
【表１】
【００２８】
【表２】
【００２９】
【表３】
【００３０】実施例２ （プロメタジン耐性変異株の分離）キャンディダ・ボイ
ディニイＤＣＳＲ０．２−５９の菌体を常法によりＮ−
メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理
（３００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞
を適当に希釈し、表１に示した培地に０．５ｇ／Ｌの濃
度でプロメタジン（Ａｌｄｒｉｃｈ製）を加えた平板培
地に塗布し、３０℃で４日間培養した。生育してきた変
異処理したキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２
−５９のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キャ
ンディダ・ボイディニイＰＲＯＭＲ１０８を取得した。
ディニイＤＣＳＲ０．２−５９の菌体を常法によりＮ−
メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理
（３００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞
を適当に希釈し、表１に示した培地に０．５ｇ／Ｌの濃
度でプロメタジン（Ａｌｄｒｉｃｈ製）を加えた平板培
地に塗布し、３０℃で４日間培養した。生育してきた変
異処理したキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２
−５９のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キャ
ンディダ・ボイディニイＰＲＯＭＲ１０８を取得した。
【００３１】（プロメタジン耐性変異株の耐性度）キャ
ンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９およびキ
ャンディダ・ボイディニイＰＲＯＭＲ１０８を表２に示
す培地を用いて３０℃で２４時間振盪培養し、生育した
菌体を集菌し生理食塩水で洗浄した。この菌体懸濁液を
表２に示す培地５ｍｌおよびプロメタジンを０．１ｇ／
ｌ添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養し、
各菌株の７２時間後の生育度を調べた。その結果は表４
に示すとおりである。本発明で使用するプロメタジンに
耐性な変異株は親株と比較して、プロメタジンによって
生育が阻害されず、強いプロメタジン耐性を獲得してい
ることを示している。
ンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９およびキ
ャンディダ・ボイディニイＰＲＯＭＲ１０８を表２に示
す培地を用いて３０℃で２４時間振盪培養し、生育した
菌体を集菌し生理食塩水で洗浄した。この菌体懸濁液を
表２に示す培地５ｍｌおよびプロメタジンを０．１ｇ／
ｌ添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養し、
各菌株の７２時間後の生育度を調べた。その結果は表４
に示すとおりである。本発明で使用するプロメタジンに
耐性な変異株は親株と比較して、プロメタジンによって
生育が阻害されず、強いプロメタジン耐性を獲得してい
ることを示している。
【００３２】
【表４】
【００３３】実施例３ （カフェイン耐性変異株の分離）キャンディダ・ボイデ
ィニイＤＣＳＲ０．２−５９の菌体を常法によりＮ−メ
チル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理（３
００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞を適
当に希釈し、表５に示した培地に１０ｇ／Ｌの濃度でカ
フェイン（Ａｌｄｒｉｃｈ製）を加えた平板培地に塗布
し、３０℃で４日間培養した。生育してきた変異処理し
たキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９の
コロニーを、純粋な変異株として単離し、キャンディダ
・ボイディニイＣＡＦＲ４８を取得した。
ィニイＤＣＳＲ０．２−５９の菌体を常法によりＮ−メ
チル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理（３
００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞を適
当に希釈し、表５に示した培地に１０ｇ／Ｌの濃度でカ
フェイン（Ａｌｄｒｉｃｈ製）を加えた平板培地に塗布
し、３０℃で４日間培養した。生育してきた変異処理し
たキャンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９の
コロニーを、純粋な変異株として単離し、キャンディダ
・ボイディニイＣＡＦＲ４８を取得した。
【００３４】（カフェイン耐性変異株の耐性度）キャン
ディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９およびキャ
ンディダ・ボイディニイＣＡＦＲ４８を表２に示す培地
を用いて３０℃で２４時間振盪培養し、生育した菌体を
集菌し生理食塩水で洗浄した。この菌体懸濁液を表２に
示す培地５ｍｌおよびカフェインを０．２ｇ／ｌ添加し
た培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養し、各菌株の
７２時間後の生育度を調べた。その結果は表６に示すと
おりである。本発明で使用するカフェインに耐性な変異
株は親株と比較して、高濃度のカフェインによって生育
が阻害されず、強いカフェイン耐性を獲得していること
を示している。
ディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９およびキャ
ンディダ・ボイディニイＣＡＦＲ４８を表２に示す培地
を用いて３０℃で２４時間振盪培養し、生育した菌体を
集菌し生理食塩水で洗浄した。この菌体懸濁液を表２に
示す培地５ｍｌおよびカフェインを０．２ｇ／ｌ添加し
た培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養し、各菌株の
７２時間後の生育度を調べた。その結果は表６に示すと
おりである。本発明で使用するカフェインに耐性な変異
株は親株と比較して、高濃度のカフェインによって生育
が阻害されず、強いカフェイン耐性を獲得していること
を示している。
【００３５】
【表５】
【００３６】
【表６】
【００３７】実施例４〜６、比較例１ （発酵法によるイノシトールの生産）実施例１〜３で得
たそれぞれの薬品に耐性を有する菌株およびキャンディ
ダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９をそれぞれ、あ
らかじめ１１５℃１０分滅菌した表７に示した組成の培
地５ｍｌで３０℃７２時間培養した。
たそれぞれの薬品に耐性を有する菌株およびキャンディ
ダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９をそれぞれ、あ
らかじめ１１５℃１０分滅菌した表７に示した組成の培
地５ｍｌで３０℃７２時間培養した。
【００３８】培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去
したろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ
法で定量したところ、表８に示すような結果を得た。親
株と比較し、変異株ではイノシトールの生産量が大幅に
向上している結果を得た。
したろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ
法で定量したところ、表８に示すような結果を得た。親
株と比較し、変異株ではイノシトールの生産量が大幅に
向上している結果を得た。
【００３９】
【表７】
【００４０】
【表８】
【００４１】実施例７〜１０、比較例２〜５ （酵素法によるイノシトールの生産）キャンディダ・ボ
イディニイＴＥＲ８０およびキャンディダ・ボイディニ
イＤＣＳＲ０．２−５９をそれぞれ、表２に示した培地
で３０℃２４時間振とうして前培養した後、あらかじめ
１１５℃１０分上記滅菌した表９および表１０に示した
組成の培地１０ｍｌを含む２５ｍｍ径の試験管に植え継
ぎ、３０℃２４時間振盪培養した。分離酵母菌体８０ｇ
／ｌ（乾燥重量換算）を蒸留水に分散せしめ、４５分間
３７℃でかつ静止状態で放置した。しかる後に、４ｍｏ
ｌ／ｌのＤ−ソルビトール水溶液を加え、最終濃度１．
５ｍｏｌ／ｌのＤ−ソルビトール濃度とし、１０分間３
７℃で静止状態で放置した。
イディニイＴＥＲ８０およびキャンディダ・ボイディニ
イＤＣＳＲ０．２−５９をそれぞれ、表２に示した培地
で３０℃２４時間振とうして前培養した後、あらかじめ
１１５℃１０分上記滅菌した表９および表１０に示した
組成の培地１０ｍｌを含む２５ｍｍ径の試験管に植え継
ぎ、３０℃２４時間振盪培養した。分離酵母菌体８０ｇ
／ｌ（乾燥重量換算）を蒸留水に分散せしめ、４５分間
３７℃でかつ静止状態で放置した。しかる後に、４ｍｏ
ｌ／ｌのＤ−ソルビトール水溶液を加え、最終濃度１．
５ｍｏｌ／ｌのＤ−ソルビトール濃度とし、１０分間３
７℃で静止状態で放置した。
【００４２】
【表９】
【００４３】
【表１０】
【００４４】上記の方法で処理した菌体を用い表１１お
よび表１２に示した組成で３０℃２０時間振盪し反応し
た。反応終了後、菌体を除去したろ液中のイノシトール
濃度を用いたバイオアッセイ法で定量したところ、表１
３に示すような結果を得た。親株と比較し、変異株では
イノシトールの生産量が大幅に向上している結果を得
た。
よび表１２に示した組成で３０℃２０時間振盪し反応し
た。反応終了後、菌体を除去したろ液中のイノシトール
濃度を用いたバイオアッセイ法で定量したところ、表１
３に示すような結果を得た。親株と比較し、変異株では
イノシトールの生産量が大幅に向上している結果を得
た。
【００４５】
【表１１】
【００４６】
【表１２】
【００４７】
【表１３】
【００４８】実施例１１ 実施例７での培養液１Ｌ分の上清をカチオン交換樹脂ダ
イヤイオンＳＫ１Ｂに通液し、その素通り画分をあつ
め、さらにアニオン交換樹脂ダイヤイオンＰＡ３１６に
通液し、その素通り画分をあつめ、濃縮晶析し、純度９
７％以上のイノシトール結晶３．０ｇを得た。
イヤイオンＳＫ１Ｂに通液し、その素通り画分をあつ
め、さらにアニオン交換樹脂ダイヤイオンＰＡ３１６に
通液し、その素通り画分をあつめ、濃縮晶析し、純度９
７％以上のイノシトール結晶３．０ｇを得た。
【００４９】
【発明の効果】本発明の酵母を用い、本発明の発酵法お
よび菌体を用いた反応により、既存の方法と比較し、よ
り経済的なイノシトールの生産が可能となる。
よび菌体を用いた反応により、既存の方法と比較し、よ
り経済的なイノシトールの生産が可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:72）
Claims (14)
- 【請求項１】 ３級アミンに耐性を有し、かつイノシト
ール分泌生産能を有する微生物を用いることを特徴とす
るイノシトールの製造方法。 - 【請求項２】 ３級アミンに耐性を有し、かつイノシト
ール分泌生産能を有する微生物を培養して、培養液中に
イノシトールを蓄積せしめることを特徴とする請求項１
記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項３】 ３級アミンに耐性を有し、かつイノシト
ール生産能を有する微生物を培養して、培養液中にイノ
シトールを蓄積せしめ、前記培養液よりイノシトールを
単離採取することを特徴とする請求項２記載のイノシト
ールの製造方法。 - 【請求項４】 ３級アミンに耐性を有し、かつイノシト
ール分泌生産能を有する微生物を培養して、得られた菌
体、もしくはそれらの処理物を用い、イノシトールを生
成蓄積せしめる反応を行うことを特徴とする請求項１記
載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項５】 ３級アミンに耐性を有し、かつイノシト
ール分泌生産能を有する微生物を培養して、得られた菌
体、もしくはそれらの処理物を用い、イノシトールを生
成蓄積せしめる反応を行い、前記反応液よりイノシトー
ルを単離採取することを特徴とする請求項４記載のイノ
シトールの製造方法。 - 【請求項６】 ３級アミンが、少なくとも１つのメチル
基が窒素に直接結合した構造を有する３級アミンである
ことを特徴とする請求項１から５のいずれか１項に記載
のイノシトールの製造方法。 - 【請求項７】 ３級アミンが、分子内にさらに１つ以上
の３級アミノ基または２級アミノ基を有することを特徴
とする請求項６記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項８】 ３級アミンが、テトラケインまたはプロ
メタジンまたはカフェインであることを特徴とする請求
項７記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項９】 イノシトール生産能を有する微生物がキ
ャンディダ属に属する微生物であることを特徴とする請
求項１から８のいずれか１項に記載のイノシトールの製
造方法。 - 【請求項１０】 キャンディダ属に属する微生物が、キ
ャンディダ・ボイディニイであることを特徴とする請求
項９記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項１１】 ３級アミンに耐性でかつイノシトール
分泌生産能を有する微生物を取得する方法において、炭
素源としてアルコール類を用いることを特徴とする、３
級アミンに耐性を持つ変異株の取得法。 - 【請求項１２】 ３級アミンが、少なくとも１つのメチ
ル基が窒素に直接結合した構造を有する３級アミンであ
ることを特徴とする請求項１１に記載の３級アミンに耐
性を持つ変異株の取得法。 - 【請求項１３】 ３級アミンが、分子内にさらに１つ以
上の３級アミンまたは２級アミンを有することを特徴と
する請求項１２記載の３級アミンに耐性を持つ変異株の
取得法。 - 【請求項１４】 ３級アミンが、テトラケインまたはプ
ロメタジンまたはカフェインであることを特徴とする請
求項１３記載の３級アミンに耐性を持つ変異株の取得
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27893495A JPH09117295A (ja) | 1995-10-26 | 1995-10-26 | イノシトールの製造法と３級アミンに耐性を有する株の取得法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27893495A JPH09117295A (ja) | 1995-10-26 | 1995-10-26 | イノシトールの製造法と３級アミンに耐性を有する株の取得法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09117295A true JPH09117295A (ja) | 1997-05-06 |
Family
ID=17604116
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27893495A Pending JPH09117295A (ja) | 1995-10-26 | 1995-10-26 | イノシトールの製造法と３級アミンに耐性を有する株の取得法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09117295A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013073483A1 (ja) | 2011-11-14 | 2013-05-23 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法 |
| WO2013115012A1 (ja) | 2012-02-02 | 2013-08-08 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | シロ‐イノシトールの製造方法 |
| WO2018004307A1 (ko) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법 |
-
1995
- 1995-10-26 JP JP27893495A patent/JPH09117295A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013073483A1 (ja) | 2011-11-14 | 2013-05-23 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法 |
| KR20140048334A (ko) | 2011-11-14 | 2014-04-23 | 아사히 가세이 케미칼즈 가부시키가이샤 | 미오이노시톨 및 미오이노시톨 유도체의 제조 방법 |
| EP2921558A1 (en) | 2011-11-14 | 2015-09-23 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative |
| US9365603B2 (en) | 2011-11-14 | 2016-06-14 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative |
| US9994871B2 (en) | 2011-11-14 | 2018-06-12 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative |
| WO2013115012A1 (ja) | 2012-02-02 | 2013-08-08 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | シロ‐イノシトールの製造方法 |
| US9505795B2 (en) | 2012-02-02 | 2016-11-29 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing scyllo-inositol |
| WO2018004307A1 (ko) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법 |
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