SU553283A1 - Способ получени алкогольдегидрогеназы - Google Patents
Способ получени алкогольдегидрогеназыInfo
- Publication number
- SU553283A1 SU553283A1 SU2300688A SU2300688A SU553283A1 SU 553283 A1 SU553283 A1 SU 553283A1 SU 2300688 A SU2300688 A SU 2300688A SU 2300688 A SU2300688 A SU 2300688A SU 553283 A1 SU553283 A1 SU 553283A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- alcohol dehydrogenase
- yeast
- biomass
- protein
- cultivation
- Prior art date
Links
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 title description 19
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 title description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 25
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 23
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical class CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Natural products N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 239000011720 vitamin B Chemical class 0.000 description 2
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 1
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Chemical class 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Chemical class 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Изобретение относитс к микробиологии, а именно к способам иолученм фермента -алкогольдегидрогеназы , примен емого в молекул рной биологии и медицине дл лечени нервных заболеваний, нанрнмер алкоголизма.
Известен сиособ получени алкогольдегидрогеиазы из биомассы дрожжей, включаюиигй илазмолиз дрожжей толуолом, осаждение фермента сульфатом аммони и его кристаллизацию.
Активность алкогольдегидрогеназы иосле первой нерекристаллизации 62,40 ед/мг белка 1.
Активность алкогольдегидрогеназы зависит от качества биомассы дрожжей.
Недостатком известного способа вл етс низкий выход, т. е. низка активность алкогольдегидрогеиазы в первоначальном экстракте био.массы дрожжей, так как обработка биомассы иеред выделением дл повышени активности алкогольдегидрогеназы не ироводитс .
С целью повышени выхода фермента по иредлагае.мому способу перед плазмолизом дрожжей толуолом дрожжи активируют пу-. тем культивировани их на питательной среде , содержащей фосфат кали в течение 1 - 6 ч, а затем в питательную среду ввод т этанол , витамины груииы В, соль цинка и осуществл ют культивирование в течение 3-6 ч.
2
Согласно оиисываемому способу проведе1П1ем культивировани био.массы дрожжей с активностью 0,11-0,30 ед/мг белка получают биомассу дрожжей с активностью 0,86-
1,80 ед/мг белка.
Выход алкогольдегидрогеназы повышаетс благодар дополнительному культивированию исходной биомассы дрожжей. Культивирование исходной биомассы дрожжей провод т в две стадии. На первой стадии введением фосфата кали происходит активаци ферментных систем клетки, в том числе ферментов цикла гликолиза. Это достигаетс путем частичного и обратимого блокировапи окислительных железоферментов дрожжей , в результате чего дыхание клетки частично тормозитс и поэто.му активируетс анаэробна фаза дыхани . На второй стадии добавлением этанола в качестве нндуктора
активности алкогольдегидрогеназы вместе с биологически активными веществами в фер .мептациониой среде осуществл етс следующа реакци :
1°С 30°С этанол - ацетальдегнд
фермент алкогольдегидрогеиаза; аэробные услови ; перемешивание.
Таким образом по предлагаемому способу провод т культивирование исходного дрожжевого сырь . Биомассу дрожжей (500 г прессованных дрожжей на 1 л среды) суспендируют в растворе фосфата кали (2,7% КН2РО4) и при непрерывном перемешивании и аэрации культивируют 2-6 ч. Температура культивировани 25-35°С, рН среды 4,5-5,5. Затем к ферментационной среде добавл ют этанол, витамины группы В (, Be - биотин ) или их источники и соли цинка. Процесс культивировани продолжают еще 3-6 ч. Активность алкогольдегидрогеназы в биомассе дролокей 1,8 ед/мг белка. Дрожжи плазмолизируют толуолом, фермент осаждают сульфатом аммони с последующей его кристаллизацией .
Пример 1. В качестве исходного сырь используют биомассу спиртовых дрожжей Saccharomyces cerevisiae. 1500 г прессованных дрожжей с активностью алкогольдегидрогеназы 0,3 ед/мг белка подвергают культивированию в реакторе емкостью 10,0 л. В первой стадии культивировани примен ют питательную среду, состо щую из 81,0 г КН2РО4 и 1,5 л воды. Температура культивировани 30°С. В реактор через распределитель подают стерильный воздух (3л/мин). Культуральную жидкость перемешивают со скоростью мешалки 600 об/мин.
После 3 ч начинают вторую стадию культивировани биомассы и в реактор добавл ют 150,0 мл этанола, 15,0 г экстракта дрожжей и 4,5 мг ZnCl2-6H2O. После этого процесс культивировани дрожжей при данном режиме продолжают 6 ч.
Полученную биомассу дрожжей отдел ют от культуральной жидкости на вакуумном фильтре. Концентраци алкогольдегидрогеиазы в биомассе 1,8 ед/мг белка. В сравнении с исходным сырьем активность алкогольдегидрогеназы повышаетс с 0,3 до 1,8 ед/мг белка.
Дрожжи плазмолизируют толуолом, экстракт фракционируют сульфатом аммони с последующей кристаллизацией фермента. Получают ферментативную активность алкогольдегидрогеназы 65,3 ед/мг белка.
Пример 2. В качестве исходного сырь используют биомассу хлебопекарных дрожжей Saccharomyces cerevisiae. 1500 г прессованных дрожжей с активностью алкогольдегндрогеназы 0,11 ед/мг белка подвергают культивированию в реакторе емкостью 10 л.
В первой стадии культивировани примен ют питательную среду, состо щую из 81,0 г КН2РО4 и 1,5 л воды. Температура культивировани 30°С. В реактор через распределитель подают стерильный воздух (3 л/мин). Культуральную жидкость перемешивают со скоростью мешалки 600 об/мин.
После 3 ч начинаетс втора стади , культивировани био.массы дрожжей и в реактор добавл ют 180,0 мл этанола, 15,0 мг витамина BI, 15,0 мг витамина В2, 15,0 мг витамина Вб, 0,3 мг биотина и 4,5 мг ZnCl2-6H2O.
После этого процесс культивировани дрожжей продолл ают 6 ч.
Полученную биомассу дролсжей отдел ют от культуральной л идкости на вакуумном фильтре. Концентраци алкогольдегидрогеназы в биомассе 0,86 ед/мг белка.
В сравнении с исходным сырьем активность алкогольдегидрогеназы повышаетс с 0,11 до 0,86 ед/мг белка. Алкогольдегидрогеназу из биомассы дрожжей выдел ют, как в примере 1.
Предлагаемый способ обеспечивает повышение активности алкогольдегидрогеназы в биомассе до 0,86-1,80 ед/мг белка
Claims (1)
1. Журнал «Biochemical Journal, 1970, 118, 375.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU2300688A SU553283A1 (ru) | 1975-12-19 | 1975-12-19 | Способ получени алкогольдегидрогеназы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU2300688A SU553283A1 (ru) | 1975-12-19 | 1975-12-19 | Способ получени алкогольдегидрогеназы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU553283A1 true SU553283A1 (ru) | 1977-04-05 |
Family
ID=20641065
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU2300688A SU553283A1 (ru) | 1975-12-19 | 1975-12-19 | Способ получени алкогольдегидрогеназы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU553283A1 (ru) |
-
1975
- 1975-12-19 SU SU2300688A patent/SU553283A1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1435159A3 (ru) | Способ получени L-карнитина | |
| Özbas et al. | Comparative study of riboflavin production from two microorganisms: Eremothecium ashbyii and Ashbya gossypii | |
| JPH044887A (ja) | Ｌ―リジンの発酵的製造法 | |
| JP3008565B2 (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| SU521849A3 (ru) | Способ получени цефалоспорина с | |
| JPH11501822A (ja) | クラブラン酸及び／又はその塩を生産するための方法 | |
| SU553283A1 (ru) | Способ получени алкогольдегидрогеназы | |
| JPH01277495A (ja) | Ｌ―チロシン及びｌ―フエニルアラニンの２，５―ジヒドロキシフエニル酢酸への生物学的変換法 | |
| US4357425A (en) | Process for producing L-amino acid oxidase | |
| DE2363285B2 (de) | Verfahren zur Herstellung von 1-Apfelsäure aus Fumarsäure | |
| JP2001517429A (ja) | 繊毛虫（原生動物）の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質を生産する発酵法 | |
| SU520926A3 (ru) | Способ получени 2-замещенного-4(р)-гидроксициклопентан1,4-диона | |
| JP2833037B2 (ja) | グルタチオン高含有酵母の製造方法 | |
| RU2103349C1 (ru) | Способ обогащения растительного сырья микробным белком | |
| SU759055A3 (ru) | Способ получени биомассы | |
| US3121668A (en) | Method for the production of 1-glutamic acid | |
| SU577229A1 (ru) | Способ получени гексокиназы | |
| JPH08258A (ja) | キャンディダ属に属する微生物およびそれを用いたイノシトールの製造方法 | |
| SU789581A1 (ru) | Способ получени диоксиацетона | |
| HU185652B (en) | Process for producing riboflavine with microbiological method | |
| SU859441A1 (ru) | Способ получени лимонной кислоты | |
| SU1036741A1 (ru) | Способ приготовлени питательной среды дл выращивани кормовых дрожжей | |
| JPH09117295A (ja) | イノシトールの製造法と３級アミンに耐性を有する株の取得法 | |
| CN119020221A (zh) | 贝莱斯芽孢杆菌与双歧杆菌混合菌剂及其制备方法和应用 | |
| SU1097673A1 (ru) | Способ получени глюкоамилазы и белкового корма |