JPH0889262A - イノシトールの製造方法および抗生物質耐性株の取得法 - Google Patents
イノシトールの製造方法および抗生物質耐性株の取得法Info
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- JPH0889262A JPH0889262A JP7140972A JP14097295A JPH0889262A JP H0889262 A JPH0889262 A JP H0889262A JP 7140972 A JP7140972 A JP 7140972A JP 14097295 A JP14097295 A JP 14097295A JP H0889262 A JPH0889262 A JP H0889262A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】抗生物質に耐性を有し、かつイノシトール分泌
生産能を有する微生物を用いることを特徴とするイノシ
トールの製造方法、および抗生物質に耐性でかつイノシ
トール分泌生産能を有する微生物を取得する方法におい
て、炭素源としてアルコール類を用いることを特徴とす
る、抗生物質耐性変異株の取得法。 【効果】本発明の酵母を用い、本発明の発酵法および菌
体を用いた反応により、既存の方法と比較し、より経済
的なイノシトールの生産が可能となる。
生産能を有する微生物を用いることを特徴とするイノシ
トールの製造方法、および抗生物質に耐性でかつイノシ
トール分泌生産能を有する微生物を取得する方法におい
て、炭素源としてアルコール類を用いることを特徴とす
る、抗生物質耐性変異株の取得法。 【効果】本発明の酵母を用い、本発明の発酵法および菌
体を用いた反応により、既存の方法と比較し、より経済
的なイノシトールの生産が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】イノシトールは、シクロヘキサン
の６つの炭素がそれぞれ１個の水酸基で置換された化合
物であり、９個の立体異性体が存在するが、ここでイノ
シトールとはミオイノシトールと呼ばれる天然型のもの
をさす。
の６つの炭素がそれぞれ１個の水酸基で置換された化合
物であり、９個の立体異性体が存在するが、ここでイノ
シトールとはミオイノシトールと呼ばれる天然型のもの
をさす。
【０００２】イノシトールは、高等動物においてビタミ
ンの一種として重要な物質で、栄養食品、飼料添加物、
医薬品などに利用される。
ンの一種として重要な物質で、栄養食品、飼料添加物、
医薬品などに利用される。
【０００３】
【従来の技術】従来イノシトールは、米糠、コーンステ
ィープリカーなどからの抽出（特開昭６１−５６１４
２）、パン酵母を培養して製造する方法（Ｅｕｒ．Ｐａ
ｔ．５０６２８９Ａ１（１９９２））などが知られてい
る。
ィープリカーなどからの抽出（特開昭６１−５６１４
２）、パン酵母を培養して製造する方法（Ｅｕｒ．Ｐａ
ｔ．５０６２８９Ａ１（１９９２））などが知られてい
る。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】米糠、コーンスティー
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、パン酵母以外にはイノシトールを菌体外
に生産する微生物は、知られていない。
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、パン酵母以外にはイノシトールを菌体外
に生産する微生物は、知られていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を解決するため、パン酵母以外にイノシトールを生産
する潜在能力を持つ微生物を探索し、イノシトールを菌
体外に分泌する微生物を広く検討した結果、キャンディ
ダ属に属する微生物の変異株がイノシトールを菌体外に
分泌することを見い出した。通常の発酵法、すなわち、
炭素源および窒素源などを添加し、微生物が増殖しなが
ら、生産物を生成する方法で、イノシトールが菌体外に
生成蓄積されることは当然であるが、さらに通常の発酵
法とは異なり、培養によって得られた菌体もしくは培養
物またはその処理物を用い、事実上微生物の増殖が停止
し、酵素反応のみが行われる条件（以後酵素法と記す）
で、炭素源からイノシトールを生成し、菌体外に分泌す
ることも見い出した。しかし、これらの方法によるイノ
シトールの生成蓄積濃度または糖などの原料からのイノ
シトール生成収率は十分に満足できるものではなかっ
た。
点を解決するため、パン酵母以外にイノシトールを生産
する潜在能力を持つ微生物を探索し、イノシトールを菌
体外に分泌する微生物を広く検討した結果、キャンディ
ダ属に属する微生物の変異株がイノシトールを菌体外に
分泌することを見い出した。通常の発酵法、すなわち、
炭素源および窒素源などを添加し、微生物が増殖しなが
ら、生産物を生成する方法で、イノシトールが菌体外に
生成蓄積されることは当然であるが、さらに通常の発酵
法とは異なり、培養によって得られた菌体もしくは培養
物またはその処理物を用い、事実上微生物の増殖が停止
し、酵素反応のみが行われる条件（以後酵素法と記す）
で、炭素源からイノシトールを生成し、菌体外に分泌す
ることも見い出した。しかし、これらの方法によるイノ
シトールの生成蓄積濃度または糖などの原料からのイノ
シトール生成収率は十分に満足できるものではなかっ
た。
【０００６】本発明者らはさらに生産性の高いイノシト
ールの製造方法について鋭意研究した結果、イノシトー
ルの生産能を有する微生物に、抗生物質に対する耐性を
付与することにより、イノシトールの蓄積濃度、生成収
率が著しく向上することを見出し本発明に到達した。
ールの製造方法について鋭意研究した結果、イノシトー
ルの生産能を有する微生物に、抗生物質に対する耐性を
付与することにより、イノシトールの蓄積濃度、生成収
率が著しく向上することを見出し本発明に到達した。
【０００７】すなわち、本発明は抗生物質に耐性を有
し、かつイノシトールを分泌する性質を持った微生物を
培養して、培養液中にイノシトールを蓄積せしめ、前記
培養液よりイノシトールを採取することおよび、抗生物
質に耐性を有し、かつイノシトール生産能を有する微生
物を培養して、得られた菌体、もしくはそれらの処理物
を用い、イノシトールを生成蓄積せしめる反応を行い、
前記反応液よりイノシトールを単離採取することを特徴
とするイノシトールの製造方法である。
し、かつイノシトールを分泌する性質を持った微生物を
培養して、培養液中にイノシトールを蓄積せしめ、前記
培養液よりイノシトールを採取することおよび、抗生物
質に耐性を有し、かつイノシトール生産能を有する微生
物を培養して、得られた菌体、もしくはそれらの処理物
を用い、イノシトールを生成蓄積せしめる反応を行い、
前記反応液よりイノシトールを単離採取することを特徴
とするイノシトールの製造方法である。
【０００８】なお、抗生物質耐性株を分離する際には、
グルコース以外の炭素源を用いる事が必要であり、グリ
セロール、メタノール、エタノールなどのアルコール類
が好ましく用いられる。
グルコース以外の炭素源を用いる事が必要であり、グリ
セロール、メタノール、エタノールなどのアルコール類
が好ましく用いられる。
【０００９】抗生物質としては、たとえばセルレニン、
Ｄ−シクロセリン、ブレフェルディンＡなどが挙げられ
る。
Ｄ−シクロセリン、ブレフェルディンＡなどが挙げられ
る。
【００１０】本発明に使用する微生物は、イノシトール
を分泌する微生物であるならばいずれでもよいが、親株
としては、本発明者らによりイノシトールを分泌する変
異株として取得された、キャンディダ・ボイディニイ
（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）ＩＰ−２（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５０７７）を用いることが好ましい。イノ
シトールを分泌する性質があれば、他に、薬剤に対する
耐性、栄養要求性などの性質があってもよく、イノシト
ールを分泌する微生物はすべて本発明に含まれるもので
ある。本発明で用いられる変異株の代表的なものとして
はたとえば以下のものがある。キャンディダ・ボイディ
ニイＣＥＲ１７６（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０６９）、キャ
ンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５０７１）、キャンディダ・ボイディニイＤ
ＣＳＲ０．３−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０７２）。
を分泌する微生物であるならばいずれでもよいが、親株
としては、本発明者らによりイノシトールを分泌する変
異株として取得された、キャンディダ・ボイディニイ
（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）ＩＰ−２（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５０７７）を用いることが好ましい。イノ
シトールを分泌する性質があれば、他に、薬剤に対する
耐性、栄養要求性などの性質があってもよく、イノシト
ールを分泌する微生物はすべて本発明に含まれるもので
ある。本発明で用いられる変異株の代表的なものとして
はたとえば以下のものがある。キャンディダ・ボイディ
ニイＣＥＲ１７６（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０６９）、キャ
ンディダ・ボイディニイＤＣＳＲ０．２−５９（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５０７１）、キャンディダ・ボイディニイＤ
ＣＳＲ０．３−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０７２）。
【００１１】これらの変異株はキャンディダ・ボイディ
ニイＩＰ−２より通常の変異処理方法によって得られた
もので、キャンディダ・ボイディニイＣＥＲ１７６はセ
ルレニンに耐性な変異株、キャンディダ・ボイディニイ
ＤＣＳＲ０．２−５９およびキャンディダ・ボイディニ
イＤＣＳＲ０．３−１１はＤ−シクロセリンに耐性な変
異株である。
ニイＩＰ−２より通常の変異処理方法によって得られた
もので、キャンディダ・ボイディニイＣＥＲ１７６はセ
ルレニンに耐性な変異株、キャンディダ・ボイディニイ
ＤＣＳＲ０．２−５９およびキャンディダ・ボイディニ
イＤＣＳＲ０．３−１１はＤ−シクロセリンに耐性な変
異株である。
【００１２】変異株の誘導は親株を紫外線照射するか、
あるいは変異誘発剤（たとえばＮ−メチル−Ｎ´−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など）で処理した後、親株が生育できないような濃度の
抗生物質を含む固体培地で生育可能な菌株を採取すれば
よい。
あるいは変異誘発剤（たとえばＮ−メチル−Ｎ´−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など）で処理した後、親株が生育できないような濃度の
抗生物質を含む固体培地で生育可能な菌株を採取すれば
よい。
【００１３】抗生物質耐性変異株は、親株より抗生物質
に強い耐性を有する株のことであり、好ましくは親株の
相対生育度が３０％以下を示す抗生物質の濃度範囲にお
いて６０％以上の相対生育度を示す変異株のことであ
る。ここでの相対生育度は培養液の６６０ｎｍにおける
吸光度を測定し、各菌株の抗生物質を添加していない培
養液の吸光度を１００％とした時の相対値で示す。耐性
を検定する場合の抗生物質は市販のものを用いればよ
い。
に強い耐性を有する株のことであり、好ましくは親株の
相対生育度が３０％以下を示す抗生物質の濃度範囲にお
いて６０％以上の相対生育度を示す変異株のことであ
る。ここでの相対生育度は培養液の６６０ｎｍにおける
吸光度を測定し、各菌株の抗生物質を添加していない培
養液の吸光度を１００％とした時の相対値で示す。耐性
を検定する場合の抗生物質は市販のものを用いればよ
い。
【００１４】本発明における培養方法について説明す
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地が用いられる。
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地が用いられる。
【００１５】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを１〜１５％、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を０．１〜４．０％、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が０．００
０００１％〜０．１％、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等０〜５％をそれ
ぞれ適当に含有する培地が好ましく用いられる。これら
の他に、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カル
シウム、塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第１
鉄、等を微量成分として添加しても良い。また好ましく
は消泡剤なども添加し、培養条件の安定化をはかる。
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを１〜１５％、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を０．１〜４．０％、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が０．００
０００１％〜０．１％、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等０〜５％をそれ
ぞれ適当に含有する培地が好ましく用いられる。これら
の他に、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カル
シウム、塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第１
鉄、等を微量成分として添加しても良い。また好ましく
は消泡剤なども添加し、培養条件の安定化をはかる。
【００１６】培養は通常、好気条件で行う。培養の間、
培地のｐＨは３〜８に、温度は２０〜３５℃に調節し、
２４〜９６時間振とうまたは通気撹拌培養すれば好まし
い結果が得られる。
培地のｐＨは３〜８に、温度は２０〜３５℃に調節し、
２４〜９６時間振とうまたは通気撹拌培養すれば好まし
い結果が得られる。
【００１７】次に本発明における酵素法でのイノシトー
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体を得る。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは公知の方法で原形質分
離（プラスモリシス）化処理を行う。
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体を得る。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは公知の方法で原形質分
離（プラスモリシス）化処理を行う。
【００１８】反応原料としては、一般に知られているイ
ノシトール生合成の前駆体である、グルコース−６−リ
ン酸あるいはさらにグルコース−６−リン酸の前駆体で
あるグルコースを使用するのが好ましい。反応はニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、アンモニ
ウムイオン、の存在下で行い、グルコースを前駆体とす
る場合には、さらにマグネシウム、アデノシン−３−リ
ン酸もしくはその前駆体を添加するのが好ましい。な
お、これらのイノシトール生合成に必要な化合物群は、
各々単独に添加してもよいが、これらを含む天然由来の
混合物をかわりに使用することも可能である。また、Ｓ
Ｈ基保護剤など反応を安定化するための添加物を含んで
もよい。反応の間、反応液のｐＨ３〜８に、温度は２０
〜３５℃に調節し、１０〜７２時間振とうまたは通気撹
拌すれば好ましい結果が得られる。
ノシトール生合成の前駆体である、グルコース−６−リ
ン酸あるいはさらにグルコース−６−リン酸の前駆体で
あるグルコースを使用するのが好ましい。反応はニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、アンモニ
ウムイオン、の存在下で行い、グルコースを前駆体とす
る場合には、さらにマグネシウム、アデノシン−３−リ
ン酸もしくはその前駆体を添加するのが好ましい。な
お、これらのイノシトール生合成に必要な化合物群は、
各々単独に添加してもよいが、これらを含む天然由来の
混合物をかわりに使用することも可能である。また、Ｓ
Ｈ基保護剤など反応を安定化するための添加物を含んで
もよい。反応の間、反応液のｐＨ３〜８に、温度は２０
〜３５℃に調節し、１０〜７２時間振とうまたは通気撹
拌すれば好ましい結果が得られる。
【００１９】培養液中に分泌蓄積されたイノシトール
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
【００２０】このようにして得られたイノシトールは、
栄養食品、栄養補助食品、粉ミルクなどの食品添加剤、
ニワトリ、牛、豚などの家畜用飼料添加剤、ハマチ、エ
ビなどの養殖魚用飼料添加剤、犬、猫などのペットフー
ド用添加剤、医薬品などの原料や添加剤、化粧品、入浴
剤、トイレタリー製品、医薬部外品などの添加剤などに
用いられる。
栄養食品、栄養補助食品、粉ミルクなどの食品添加剤、
ニワトリ、牛、豚などの家畜用飼料添加剤、ハマチ、エ
ビなどの養殖魚用飼料添加剤、犬、猫などのペットフー
ド用添加剤、医薬品などの原料や添加剤、化粧品、入浴
剤、トイレタリー製品、医薬部外品などの添加剤などに
用いられる。
【００２１】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
る。
【００２２】（セルレニン耐性変異株の分離）キャンデ
ィダ・ボイディニイＩＰ−２の菌体を常法によりＮ−メ
チル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理（３
００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞を適
当に希釈し、表１に示した培地に１５ｇ／ｌの濃度に寒
天を、および４０ｍｇ／Ｌの濃度でセルレニンを加えた
平板培地に塗布し、３０℃で４日間培養した。生育して
きた変異処理したキャンディダ・ボイディニイＩＰ−２
のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キャンディ
ダ・ボイディニイＣＥＲ１７６を取得した。
ィダ・ボイディニイＩＰ−２の菌体を常法によりＮ−メ
チル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理（３
００μｇ／ｍｌ、３０℃１０分）した後、この細胞を適
当に希釈し、表１に示した培地に１５ｇ／ｌの濃度に寒
天を、および４０ｍｇ／Ｌの濃度でセルレニンを加えた
平板培地に塗布し、３０℃で４日間培養した。生育して
きた変異処理したキャンディダ・ボイディニイＩＰ−２
のコロニーを、純粋な変異株として単離し、キャンディ
ダ・ボイディニイＣＥＲ１７６を取得した。
【００２３】
【表１】
【００２４】（Ｄ−シクロセリン耐性変異株の分離）４
０ｍｇ／Ｌのセルレニンの代わりに２００ｍｇ／ＬのＤ
−シクロセリンを加えた平板培地を用いて、セルレニン
耐性変異株の分離と同様の方法でＤ−シクロセリン耐性
を持つ純粋な変異株として単離し、キャンディダ・ボイ
ディニイＤＣＳＲ０．３−１１およびＤＣＳＲ０．２−
５９を取得した。
０ｍｇ／Ｌのセルレニンの代わりに２００ｍｇ／ＬのＤ
−シクロセリンを加えた平板培地を用いて、セルレニン
耐性変異株の分離と同様の方法でＤ−シクロセリン耐性
を持つ純粋な変異株として単離し、キャンディダ・ボイ
ディニイＤＣＳＲ０．３−１１およびＤＣＳＲ０．２−
５９を取得した。
【００２５】（セルレニン耐性変異株の耐性度）表３に
示す各菌株を表２に示す各培地を用いて３０℃で２４時
間振盪培養し、生育した菌体を集菌し生理食塩水で洗浄
した。この菌体懸濁液を表３に示す濃度のセルレニンを
添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養し、各
菌株の７２時間後の生育度を調べた。その結果は表３に
示すとおりである。本発明で使用するセルレニンに耐性
な変異株は親株とと比較して、高濃度のセルレニンによ
って生育が阻害されず、強いセルレニン耐性を獲得して
いることを示している。
示す各菌株を表２に示す各培地を用いて３０℃で２４時
間振盪培養し、生育した菌体を集菌し生理食塩水で洗浄
した。この菌体懸濁液を表３に示す濃度のセルレニンを
添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃にて培養し、各
菌株の７２時間後の生育度を調べた。その結果は表３に
示すとおりである。本発明で使用するセルレニンに耐性
な変異株は親株とと比較して、高濃度のセルレニンによ
って生育が阻害されず、強いセルレニン耐性を獲得して
いることを示している。
【００２６】
【表２】
【００２７】
【表３】
【００２８】（Ｄ−シクロセリン耐性変異株の耐性度）
表４に示す各菌株を表２に示す各培地を用いて３０℃で
２４時間振盪培養し、生育した菌体を集菌し生理食塩水
で洗浄した。この菌体懸濁液を表４に示す濃度のＤ−シ
クロセリンを添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃に
て培養し、各菌株の７２時間後の生育度を調べた。その
結果は表４に示すとおりである。本発明で使用するにＤ
−シクロセリンに耐性な変異株は親株と比較して、高濃
度のＤ−シクロセリンによって生育が阻害されず、強い
Ｄ−シクロセリン耐性を獲得していることを示してい
る。
表４に示す各菌株を表２に示す各培地を用いて３０℃で
２４時間振盪培養し、生育した菌体を集菌し生理食塩水
で洗浄した。この菌体懸濁液を表４に示す濃度のＤ−シ
クロセリンを添加した培地５ｍｌに植菌して、３０℃に
て培養し、各菌株の７２時間後の生育度を調べた。その
結果は表４に示すとおりである。本発明で使用するにＤ
−シクロセリンに耐性な変異株は親株と比較して、高濃
度のＤ−シクロセリンによって生育が阻害されず、強い
Ｄ−シクロセリン耐性を獲得していることを示してい
る。
【００２９】
【表４】
【００３０】実施例１〜３、比較例１ （発酵法による抗生物質耐性変異株の培養およびイノシ
トールの生産）キャンディダ・ボイディニイＣＥＲ１７
６、ＤＣＳＲ０．２−５９、ＤＣＳＲ０．３−１１およ
びＩＰ−２をそれぞれ、表２に示した組成の培地で３０
℃２４時間振盪して前培養した後、あらかじめ１１５℃
で１０分蒸気滅菌した表５に示した組成の培地５０ｍｌ
を含む５０ｍｌ溶三角フラスコに植え継ぎ、１８０ｒｐ
ｍ、振幅３０ｃｍの条件下で４８時間培養した。
トールの生産）キャンディダ・ボイディニイＣＥＲ１７
６、ＤＣＳＲ０．２−５９、ＤＣＳＲ０．３−１１およ
びＩＰ−２をそれぞれ、表２に示した組成の培地で３０
℃２４時間振盪して前培養した後、あらかじめ１１５℃
で１０分蒸気滅菌した表５に示した組成の培地５０ｍｌ
を含む５０ｍｌ溶三角フラスコに植え継ぎ、１８０ｒｐ
ｍ、振幅３０ｃｍの条件下で４８時間培養した。
【００３１】培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去
したろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ
法で定量したところ、表６に示すような結果を得た。親
株（ＩＰ−２）と比較し、変異株ではイノシトールの生
産量が大幅に向上している結果を得た。
したろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ
法で定量したところ、表６に示すような結果を得た。親
株（ＩＰ−２）と比較し、変異株ではイノシトールの生
産量が大幅に向上している結果を得た。
【００３２】
【表５】
【００３３】
【表６】
【００３４】実施例４〜６、比較例２ （グルコース−６−リン酸を原料とする酵素法によるイ
ノシトールの生産）キャンディダ・ボイディニイＣＥＲ
１７６、ＤＣＳＲ０．２−５９、ＤＣＳＲ０．３−１１
およびＩＰ−２をそれぞれ、表２に示した培地で３０℃
２４時間振盪して前培養した後、あらかじめ１１５℃で
１０分蒸気滅菌した表７（グルコース培養）および表８
（メタノール培養）に示した組成の培地１０ｍｌを含む
２５ｍｍ径の試験管に植え継ぎ、３０℃で２４時間振盪
培養した。分離酵母菌体８０ｇ／ｌ（乾燥重量換算）を
蒸留水に分散せしめ、４５分間３７℃でかつ静止状態で
放置した。しかる後に、４ｍｏｌ／ｌのＤ−ソルビトー
ル水溶液を加え、最終濃度１．５ｍｏｌ／ｌのＤ−ソル
ビトール濃度とし、１０分間３７℃で静止状態で放置し
た。グルコース培養およびメタノール培養による処理菌
体を得た。
ノシトールの生産）キャンディダ・ボイディニイＣＥＲ
１７６、ＤＣＳＲ０．２−５９、ＤＣＳＲ０．３−１１
およびＩＰ−２をそれぞれ、表２に示した培地で３０℃
２４時間振盪して前培養した後、あらかじめ１１５℃で
１０分蒸気滅菌した表７（グルコース培養）および表８
（メタノール培養）に示した組成の培地１０ｍｌを含む
２５ｍｍ径の試験管に植え継ぎ、３０℃で２４時間振盪
培養した。分離酵母菌体８０ｇ／ｌ（乾燥重量換算）を
蒸留水に分散せしめ、４５分間３７℃でかつ静止状態で
放置した。しかる後に、４ｍｏｌ／ｌのＤ−ソルビトー
ル水溶液を加え、最終濃度１．５ｍｏｌ／ｌのＤ−ソル
ビトール濃度とし、１０分間３７℃で静止状態で放置し
た。グルコース培養およびメタノール培養による処理菌
体を得た。
【００３５】処理菌体を用い表９に示した組成で３０℃
２０時間振盪し反応した。反応終了後、菌体を除去した
ろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ法で
定量したところ、表１０に示すような結果を得た。親株
（ＩＰ−２）と比較し、変異株ではイノシトールの生産
量が大幅に向上している結果を得た。
２０時間振盪し反応した。反応終了後、菌体を除去した
ろ液中のイノシトール濃度を用いたバイオアッセイ法で
定量したところ、表１０に示すような結果を得た。親株
（ＩＰ−２）と比較し、変異株ではイノシトールの生産
量が大幅に向上している結果を得た。
【００３６】
【表７】
【００３７】
【表８】
【００３８】
【表９】
【００３９】
【表１０】
【００４０】実施例７〜９、比較例３ （グルコースを原料とする酵素法によるイノシトールの
生産）実施例４〜６、比較例２と同様の処理菌体を用
い、表１１に示した組成で３０℃２０時間振盪し反応し
た。反応終了後、菌体を除去したろ液中のイノシトール
濃度を用いたバイオアッセイ法で定量したところ、表１
２に示すような結果を得た。
生産）実施例４〜６、比較例２と同様の処理菌体を用
い、表１１に示した組成で３０℃２０時間振盪し反応し
た。反応終了後、菌体を除去したろ液中のイノシトール
濃度を用いたバイオアッセイ法で定量したところ、表１
２に示すような結果を得た。
【００４１】
【表１１】
【００４２】
【表１２】
【００４３】実施例１０ （イノシトールの単離）実施例１での培養液１Ｌ分の上
清をカチオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂに通液し、
その素通り画分をあつめ、さらにアニオン交換樹脂ダイ
ヤイオンＰＡ３１６に通液し、その素通り画分をあつ
め、濃縮晶析し、純度９７％以上のイノシトール結晶
２．０ｇを得た。
清をカチオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂに通液し、
その素通り画分をあつめ、さらにアニオン交換樹脂ダイ
ヤイオンＰＡ３１６に通液し、その素通り画分をあつ
め、濃縮晶析し、純度９７％以上のイノシトール結晶
２．０ｇを得た。
【００４４】
【発明の効果】本発明の酵母を用い、本発明の発酵法お
よび菌体を用いた反応により、既存の方法と比較し、よ
り経済的なイノシトールの生産が可能となる。
よび菌体を用いた反応により、既存の方法と比較し、よ
り経済的なイノシトールの生産が可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:72）
Claims (9)
- 【請求項１】抗生物質に耐性を有し、かつイノシトール
分泌生産能を有する微生物を用いることを特徴とするイ
ノシトールの製造方法。 - 【請求項２】抗生物質に耐性を有し、かつイノシトール
分泌生産能を有する微生物を培養して、培養液中にイノ
シトールを蓄積せしめることを特徴とする請求項１記載
のイノシトールの製造方法。 - 【請求項３】抗生物質に耐性を有し、かつイノシトール
生産能を有する微生物を培養して、培養液中にイノシト
ールを蓄積せしめ、前記培養液よりイノシトールを単離
採取することを特徴とする請求項２記載のイノシトール
の製造方法。 - 【請求項４】抗生物質に耐性を有し、かつイノシトール
分泌生産能を有する微生物を培養して、得られた菌体、
もしくはそれらの処理物を用い、イノシトールを生成蓄
積せしめる反応を行うことを特徴とする請求項１記載の
イノシトールの製造方法。 - 【請求項５】抗生物質に耐性を有し、かつイノシトール
分泌生産能を有する微生物を培養して、得られた菌体、
もしくはそれらの処理物を用い、イノシトールを生成蓄
積せしめる反応を行い、前記反応液よりイノシトールを
単離採取することを特徴とする請求項４記載のイノシト
ールの製造方法。 - 【請求項６】イノシトール分泌生産能を有する微生物が
キャンディダ属に属する微生物であることを特徴とする
請求項１から５のいずれか１項に記載のイノシトールの
製造方法。 - 【請求項７】キャンディダ属に属する微生物が、キャン
ディダ・ボイディニイであることを特徴とする請求項６
記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項８】抗生物質が、セルレニンおよび／またはＤ
−シクロセリンであることを特徴とする請求項１から７
のいずれか１項記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項９】抗生物質に耐性でかつイノシトール分泌生
産能を有する微生物を取得する際に、炭素源としてアル
コール類を用いることを特徴とする、抗生物質耐性変異
株の取得法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7140972A JPH0889262A (ja) | 1994-07-27 | 1995-06-08 | イノシトールの製造方法および抗生物質耐性株の取得法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17531594 | 1994-07-27 | ||
| JP6-175315 | 1994-07-27 | ||
| JP7140972A JPH0889262A (ja) | 1994-07-27 | 1995-06-08 | イノシトールの製造方法および抗生物質耐性株の取得法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0889262A true JPH0889262A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=26473330
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7140972A Pending JPH0889262A (ja) | 1994-07-27 | 1995-06-08 | イノシトールの製造方法および抗生物質耐性株の取得法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0889262A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013073483A1 (ja) | 2011-11-14 | 2013-05-23 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法 |
| WO2013115012A1 (ja) | 2012-02-02 | 2013-08-08 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | シロ‐イノシトールの製造方法 |
| WO2018004307A1 (ko) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법 |
| JP2020022377A (ja) * | 2018-08-06 | 2020-02-13 | 三菱ケミカル株式会社 | グルカル酸生産能を有する高耐酸性微生物、及びそれを用いたグルカル酸の製造方法 |
-
1995
- 1995-06-08 JP JP7140972A patent/JPH0889262A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013073483A1 (ja) | 2011-11-14 | 2013-05-23 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法 |
| KR20140048334A (ko) | 2011-11-14 | 2014-04-23 | 아사히 가세이 케미칼즈 가부시키가이샤 | 미오이노시톨 및 미오이노시톨 유도체의 제조 방법 |
| EP2921558A1 (en) | 2011-11-14 | 2015-09-23 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative |
| US9365603B2 (en) | 2011-11-14 | 2016-06-14 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative |
| US9994871B2 (en) | 2011-11-14 | 2018-06-12 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing myo-inositol and myo-inositol derivative |
| WO2013115012A1 (ja) | 2012-02-02 | 2013-08-08 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | シロ‐イノシトールの製造方法 |
| US9505795B2 (en) | 2012-02-02 | 2016-11-29 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Method for producing scyllo-inositol |
| WO2018004307A1 (ko) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법 |
| JP2020022377A (ja) * | 2018-08-06 | 2020-02-13 | 三菱ケミカル株式会社 | グルカル酸生産能を有する高耐酸性微生物、及びそれを用いたグルカル酸の製造方法 |
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