JPH01320990A - Ｌ−スレオニンの新規製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ−スレオニンは、必須アミノ酸の一つであり医薬品や
食品添加物、飼料添加物等Ｇこ利用されている。本発明
は、醗酵法によるＬ−スレオニンの製造方法に関するも
のである。

〔従来の技術〕

従来、プロテウス属に属する微生物を用し）た醗酵法に
よるＬ−スレオニンの製造法として、具体的な種として
、プロテウス　レトゲリが多く使用されてきた。しかし
、現在このプロテウス　レトケＩＪは、バーシーズ　マ
ニュアル　オブ　システマテインク　バクテリオロジー
　第１版（ＢＥＲＧＢＹ’Ｓ　　ＭＡＮＵＡＬ　　ＯＦ
　　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ　　Ｖｏｌｕｍｅ　　１）では、プロビデンシア属に
属しているプロテウスまたはプロビデンシア属に属する
微生物を用いた醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法と
しては、例えばＬ−イソロイシン要求性を有する微生物
を用いる方法（特公昭４３−４４４０）やα−アミノ−
β−ハイドロキシ吉草酸耐性を有しかつＬ−イソロイシ
ン要求性を有する微生物を用いる方法（日本農芸化学会
講演要旨集　９．９（１９７０））や、メチオニン代謝
拮抗物質耐性株を用いる方法（特公昭６Ｏ−１８０５９
７）などが知られている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、これらの方法によるＬ−スレオニンの生成蓄積
濃度は十分に満足できるものではなかった。本発明者ら
は、さらに生産性の高いＬ−スレオニンの製造法につい
て鋭意研究した結果、プロビデンシア属に属しヒスチジ
ン要求性を有する変異株が著足のＬ−スレオニンを蓄積
することを見出し本発明を完成するに至った。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、プロビデンシア属に属し、ヒスチジン要求性
を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物を培
養し、培地中にＬ−スレオニンを生成蓄積せしめ、該培
養物からＬ−スレオニンを採取することを特徴とする醗
酵法によるＬ−スレオニンの製造法に関する。

本発明で使用される微生物は、プロビデンシア属に属す
る微生物でヒスチジン要求性を有し、かつＬ−スレオニ
ン生産能を有する微生物であるが、該要求性を有してい
れば他の薬剤に対する耐性あるいはアミノ酸、核酸、ビ
タミンなどの栄養要求性などいくつかの性質をあわせ持
っている微生物のいずれも使用できる。

このような微生物の代表的なものとしては、プロビデン
シア属に属する微生物に紫外線照射、Ｔ−線照射、ある
いはＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジ
ンなどの薬剤処理等の変異処理をして得た変異株をあげ
ることができる。又、自然変異によっても目的が達せら
れる。

上記のような変異処理した菌体から本発明のヒスチジン
要求性等の栄養要求性変異株を分離する方法は、−Ｓに
用いられる方法、すなわちペニシリン濃縮法、レプリカ
法などを利用して分離することができる。

本発明で使用される微生物として具体的には、例えばプ
ロビデンシア　レトゲリＮＫ−８８８００３株（微工研
菌寄第１００５７号）があげられる。このプロビデンシ
ア　レトゲリＮＫ−８８８００３株（微工研菌寄第１０
０５７号）は、プロビデンシア　レトゲリＮＫ−８７８
００２株（微工研蘭寄第１０００９号）を変異処理して
得られたものである。

本発明で使用するＮＫ−８８８００３株とその親株であ
るＮＫ−８７８００２株のヒスチジン添加による生育度
を表１に示す。

表１゜ （注）生育値　（ＯＤ）は６１０ｎｍで測定した。

表１から明らかなようにＮＫ−８８８００３株はヒスチ
ジンが生育に必要である。

なお、本試験は次のようにしておこなった。

即ち、ヒスチジン添加による生育度試験は表２の最小培
地に表１記載のようにヒスチジンを添加した培地を用い
、長さ１８０鵬、径１８ｍｍの試験管に１０　ｍｌの培
地を分注・殺苗したものにそれぞれの菌株を接種し２４
時間、３０°Ｃで振盪培養した後、６１０ｎｍにおける
吸光度を測定した。

本発明におけるＬ−スレオニン生産用の培地は、炭素源
としてはグルコース、フラクトース、澱粉およびその分
解物等の糖類、フマール酸、コハク酸、クエン酸等の有
機酸などが好適であり、窒素源としては硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、アンモニア水、アンモニアガス
等が好適である。無機塩としてはナトリウム、カリウム
、カルシウム、マグネシウム、マンガン、リン酸などの
塩類を必要に応じて使用する。

又、微量のビタミン類、核酸類は必要に応じて添加する
。又、使用菌の要求物質は単品として添加してもそれを
含有する天然系物質のいずれを用いてもよく、天然系物
質として例えばコーンスチープリカー、ペプトン、肉エ
キス、酵母エキス等がある。

培養条件は振の培養、通気攪拌培養などの好気的条件下
で行うのが良く培養中のｐＨは４〜９、好ましくはｐＨ
６，０〜７．５の範囲に炭酸カルシウムやアンモニア水
、アンモニアガス、鉱酸で保つのがよい。又、培養温度
は２０°Ｃ〜４０°Ｃ１好ましくは２５°Ｃ〜３５°Ｃ
が良く、培養口数は通常２〜７日である。

培養終了液からＬ−スレオニンを採取する方法は公知の
イオン交換樹脂法、濃縮法、吸着法、塩析法などを併用
して行うことが出来る。

〔効　果〕

後記実施例及び参考例に示す如く、本発明例のプロビデ
ンシア　レトゲリＮＫ−８８８００３株とその親株を培
養した結果を表３に示した。

本発明例のプロビデンシア　レトゲリＮＫ−８８８００
３株では、スレオニンの蓄積濃度が顕著に向上した。

表３．効果 〔実施例〕 表４に示す生産培地を２００！タンクに１１０２入れ１
２０　”Ｃ２０分間加熱殺菌後、表４に示すジアド培地
で培養したＮＫ−８８８００３株（微工研菌寄第１００
５７号）を接種し、３０　’Ｃ１通気１ｉｉｏｚ／分、
回転数４０　Ｏｒｐｍで培養した。ｐＨコントロール及
び窒素源の供給は２５％アンモニア水で行い、ｐＨは６
，０〜７．５にコントロールした。グルコース及びコー
ンステイープリカーを断続的に添加して９０時間培養を
行った。

培養終了時のＬ−スレオニン蓄積量は３１．６ｇ／ｊ２
であった。培養終了液１０００ｍを遠心して菌体及び炭
酸カルシウム等の不溶物を除去し上澄液を陽イオン交換
樹脂（Ｈ”型）に通塔する。

吸着したＬ−スレオニンを３．０％のアンモニア水で溶
出しＬ−スレオニン含有区分を濃縮してＬ−スレオニン
の粗結晶を得た。粗結晶を水で溶解して再びｅｉｔｌで
Ｌ−スレオニンの結晶２６．８　ｇを得た。

〔比較例〕

実施例で使用した苗株を親株のＮＫ−８７８００２株に
おきかえて同様の方法で培養した。培養終了時のＬ−ス
レオニン蓄積量は６．７ｇ／／２であった。また、実施
例と同様の方法で精製しＬ−スレオニンの結晶５．２ｇ
を得た。

表４．シード培地及び生産培地組成 特許出願人　　日本化薬株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）プロビデンシア属に属し、ヒスチジン要求性を有
   し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物を培養し
   、培地中に生成蓄積したＬ−スレオニンを採取すること
   を特徴とするＬ−スレオニンの製造法。
2. （２）プロビデンシア属に属し、ヒスチジン要求性を有
   する微生物。