JPS5955194A - Ｌ−ロイシンの製造法及びそのための微生物 - Google Patents
Ｌ−ロイシンの製造法及びそのための微生物Info
- Publication number
- JPS5955194A JPS5955194A JP16381082A JP16381082A JPS5955194A JP S5955194 A JPS5955194 A JP S5955194A JP 16381082 A JP16381082 A JP 16381082A JP 16381082 A JP16381082 A JP 16381082A JP S5955194 A JPS5955194 A JP S5955194A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- leucine
- ethionine
- strain
- producing
- resistant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ−ロイシンの製造法及びそのだ
めの微生物に関する。
めの微生物に関する。
従来微生物によるＬ−ロイシンの製造法に関してはサル
モネラ・チフィムリウムの５′・５′・５７−ドリフル
オローロイシン耐性変異株による方法、セラチア・マル
セーセンスのα−アミノ酪酸耐性インロイシン部分要求
−変異株例よる方法、およびブレビバクテリウム・ラク
トーファメンタムの２−チアゾールアラニン耐性インロ
イシン・メチオニン複要求株による方法、などが知られ
ているが本発明のエシェリヒア属のり、Ｌ−エチオニン
耐性株による方法は未だ知られていない。
モネラ・チフィムリウムの５′・５′・５７−ドリフル
オローロイシン耐性変異株による方法、セラチア・マル
セーセンスのα−アミノ酪酸耐性インロイシン部分要求
−変異株例よる方法、およびブレビバクテリウム・ラク
トーファメンタムの２−チアゾールアラニン耐性インロ
イシン・メチオニン複要求株による方法、などが知られ
ているが本発明のエシェリヒア属のり、Ｌ−エチオニン
耐性株による方法は未だ知られていない。
本発明で使用される微生物はエシェリヒア属に属し、Ｄ
Ｌ−エチオニン耐性を有しＬ−ロイシン生産能を有す
るものであり、具体的には例えばエシェリヒア−コリに
一１２株を親株とし紫外線、ニトロソグアニジンなどに
よる変異処理によりエチオニン耐性が親株よシ高くなっ
たもので、その耐性が好ましくは１■／ ｍ６以上、よ
り好ましくは１０ｑ／ｍ１以上のＤＪ、−エチオニ／を
含む最小培地（グルコ−、ス２ｆ／ｌ、硫安ｉ ｆ／ｌ
。
Ｌ−エチオニン耐性を有しＬ−ロイシン生産能を有す
るものであり、具体的には例えばエシェリヒア−コリに
一１２株を親株とし紫外線、ニトロソグアニジンなどに
よる変異処理によりエチオニン耐性が親株よシ高くなっ
たもので、その耐性が好ましくは１■／ ｍ６以上、よ
り好ましくは１０ｑ／ｍ１以上のＤＪ、−エチオニ／を
含む最小培地（グルコ−、ス２ｆ／ｌ、硫安ｉ ｆ／ｌ
。
Ｎａ２Ｈ，ＰＯ４７７Ｈ２０８，２Ｆ／！’ ｔ 、
’ＫＨ２ＰＯ４２，７Ｂ ｆ ／ ｔ 。
’ＫＨ２ＰＯ４２，７Ｂ ｆ ／ ｔ 。
ＦθＳＯ４！７Ｈ２００，２、、５η７／、 ｌ 、、
ＭｇＳ’Ｏ４・７Ｈ２ｏ １ｏｏη７ｔ。
ＭｇＳ’Ｏ４・７Ｈ２ｏ １ｏｏη７ｔ。
Ｃａ （Ｎ０３ ）２ ５η／Ｌ−チアミン１００ｒｑ
／ｌ、寒天２０ｙ ７ ｔ、 １）Ｈ７，２，）におけ
る相対生育度５０以上で生育しうる変異株として誘導さ
れたものでエシェリヒア・コリＮＫ−８１００１（ＦＢ
ＲＭｐ−６５１２）が挙げられる。
／ｌ、寒天２０ｙ ７ ｔ、 １）Ｈ７，２，）におけ
る相対生育度５０以上で生育しうる変異株として誘導さ
れたものでエシェリヒア・コリＮＫ−８１００１（ＦＢ
ＲＭｐ−６５１２）が挙げられる。
該変異株と親株に一、１２株のＤＬ−工、７オ＝、、ン
。
。
に対する酬性度を次に示す。培地は上記最小培地より寒
天を除功たもあて□試験管（１ａ ａｍ ×ｌ’ｌｌＱ
Ｂ１０１’ｍｍ）に５ ｍｌ宛分注し殺菌後裔菌株を
接種して３０℃で１８時間振盪培養し菌の生育を調べだ
ものであるら：本発明で使用される培地の炭素源として
はグルコース、フラクトース、シュークロース、マンノ
ースなどが好適であり窒素源としては尿素、硫安、クエ
ン酸、アンモニウムなどが使用できる。無機物としては
すトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど
の塩酸塩、硫酸塩、燐酸塩力とを必要に応じて使用する
。コーンステープリカー、１１１ ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆加水分解□、物
１・：・１どは発ｌ促進物質として賞月される。
天を除功たもあて□試験管（１ａ ａｍ ×ｌ’ｌｌＱ
Ｂ１０１’ｍｍ）に５ ｍｌ宛分注し殺菌後裔菌株を
接種して３０℃で１８時間振盪培養し菌の生育を調べだ
ものであるら：本発明で使用される培地の炭素源として
はグルコース、フラクトース、シュークロース、マンノ
ースなどが好適であり窒素源としては尿素、硫安、クエ
ン酸、アンモニウムなどが使用できる。無機物としては
すトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど
の塩酸塩、硫酸塩、燐酸塩力とを必要に応じて使用する
。コーンステープリカー、１１１ ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆加水分解□、物
１・：・１どは発ｌ促進物質として賞月される。
い弊生物の発酵樟地での培養はＬ−ロイシンの生産を効
率的に行わしめるため振盪培・養、通気攪拌１．培、１
ど好気的条件下に行い、培養：中４７） ｐＨを６〜８
に保つのが良い。培養温度は２７〜３７℃の範囲が好適
である。培養は通常７２〜９６時間以内であるが任意に
増減できる。
率的に行わしめるため振盪培・養、通気攪拌１．培、１
ど好気的条件下に行い、培養：中４７） ｐＨを６〜８
に保つのが良い。培養温度は２７〜３７℃の範囲が好適
である。培養は通常７２〜９６時間以内であるが任意に
増減できる。
□培養液よりのＬ−ロイシンの採取は公知の方法を組合
せることにより行うのが良い。その−例としては培養、
液：声艷菌しｐＨを調、節、してイリン交換樹脂法によ
り濃縮し晶析・恩給、晶を行うことにより高純度のＬ−
ロイシンを採取できる。
せることにより行うのが良い。その−例としては培養、
液：声艷菌しｐＨを調、節、してイリン交換樹脂法によ
り濃縮し晶析・恩給、晶を行うことにより高純度のＬ−
ロイシンを採取できる。
実施例１
ペプトン１％、肉エキス１チ、酵母エキス０．５チ、食
塩０．３係、ｐＨ６，８よりなる種培養培地１００ｓ＋
Ｊを含む５００ ｒａｇ三角フラスコを１２０℃で２０
分間殺菌しこれにエシェリヒア・コリＮＫ−８１００１
（ＦＫＲＭＰ−６５１２）を接種した。３０℃で２４時
間振盪培養したものを５％容量の割合で発酵培地に接種
した。発酵培地の組成は次の妬くであった。グルコース
１０％、硫安２チ、燐酸二カリウム０．１％、硫酸マグ
ネシウム７水和物０．０６チ、コーンステープリカ−０
８５％、ｐＨ７゜この組成の培地５’ Ｏｍｇを５００
ａＪ三角フラスコに分注して１２０℃、２０分間殺菌し
これに別殺菌の炭酸カルシウムを２チの割合に力るよう
加えた。
塩０．３係、ｐＨ６，８よりなる種培養培地１００ｓ＋
Ｊを含む５００ ｒａｇ三角フラスコを１２０℃で２０
分間殺菌しこれにエシェリヒア・コリＮＫ−８１００１
（ＦＫＲＭＰ−６５１２）を接種した。３０℃で２４時
間振盪培養したものを５％容量の割合で発酵培地に接種
した。発酵培地の組成は次の妬くであった。グルコース
１０％、硫安２チ、燐酸二カリウム０．１％、硫酸マグ
ネシウム７水和物０．０６チ、コーンステープリカ−０
８５％、ｐＨ７゜この組成の培地５’ Ｏｍｇを５００
ａＪ三角フラスコに分注して１２０℃、２０分間殺菌し
これに別殺菌の炭酸カルシウムを２チの割合に力るよう
加えた。
これを３０℃で４日間振盪培養した結果各フラス；中に
平均７．５ｆ／ｌのＬ？−ロイシンが蓄積した。１ｔの
培養終了液から遠心分離により菌体および不溶の炭酸カ
ルシウムを除去し得られた上澄液のｐＨを２．０とし／
こ。これを陽イオン交換樹脂ダウエックス５０Ｘ−４（
Ｈ型）に吸着せしめ水洗したのち１規定アンモニア水で
溶出しＬ−ロイシン含有区分を集めて減圧下に濃縮した
。濃縮物を冷却後濾過して得だ粗結晶を水−アルコール
から再結してＬ−ロイシンの精結晶５．０２を得た。
平均７．５ｆ／ｌのＬ？−ロイシンが蓄積した。１ｔの
培養終了液から遠心分離により菌体および不溶の炭酸カ
ルシウムを除去し得られた上澄液のｐＨを２．０とし／
こ。これを陽イオン交換樹脂ダウエックス５０Ｘ−４（
Ｈ型）に吸着せしめ水洗したのち１規定アンモニア水で
溶出しＬ−ロイシン含有区分を集めて減圧下に濃縮した
。濃縮物を冷却後濾過して得だ粗結晶を水−アルコール
から再結してＬ−ロイシンの精結晶５．０２を得た。
実施例２
実施例１と同様の組成を有する発酵培地２Ｄｔを５０を
容のジャーファーメンタ−に分注し殺菌した。これに実
施例１と同様に培養した種培養物を５％の割合で接種し
３０℃３通気量１０ｔ／ｍｉｎ攪拌５００ ｒ、ｐ、ｍ
・ の条件下で７２時間培養した。
容のジャーファーメンタ−に分注し殺菌した。これに実
施例１と同様に培養した種培養物を５％の割合で接種し
３０℃３通気量１０ｔ／ｍｉｎ攪拌５００ ｒ、ｐ、ｍ
・ の条件下で７２時間培養した。
培養終了液中のＬ−ロイビン生成量は７，３り／ｌであ
った。
った。
特許出願人 日本・化薬株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （リ エシェリヒア属に属しＤＬ−エチオニン耐性及び
Ｌ−・ロイシン生産能を有する微生物を栄養培地で培養
しＬ−ロイシンを生成蓄積せしめ、ついでこの培養物か
らＬ−ロイシンを採取することを特徴とするＬニロイシ
ンの製造法。 （２）ＤＬ＝エチオニン１ｔｆｉｅ有し、かつＬ−ロイ
シン生産能を有するエシェリヒア・コリ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16381082A JPS5955194A (ja) | 1982-09-22 | 1982-09-22 | Ｌ−ロイシンの製造法及びそのための微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16381082A JPS5955194A (ja) | 1982-09-22 | 1982-09-22 | Ｌ−ロイシンの製造法及びそのための微生物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5955194A true JPS5955194A (ja) | 1984-03-30 |
Family
ID=15781134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16381082A Pending JPS5955194A (ja) | 1982-09-22 | 1982-09-22 | Ｌ−ロイシンの製造法及びそのための微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5955194A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0698668A1 (en) * | 1994-06-30 | 1996-02-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-leucine |
-
1982
- 1982-09-22 JP JP16381082A patent/JPS5955194A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0698668A1 (en) * | 1994-06-30 | 1996-02-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-leucine |
| US5744331A (en) * | 1994-06-30 | 1998-04-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-leucine |
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