JPH0692A - 発酵法によるl−アルギニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるl−アルギニンの製造法Info
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Abstract
る。 【構成】 コリネバクテリウム属またはブレビバクテリ
ウム属に属し、親株が生育できない浸透圧を有する培地
で生育でき、かつL−アルギニン生産能を有する微生物
を用いるL−アルギニンの製造法。
Description
ニンの製造法に関する。L−アルギニンは医薬品、食品
等として有用なアミノ酸である。
白質からの抽出法により製造されている。発酵法で生産
する方法としては、アルギニンアナログに耐性の菌株を
利用する方法〔アグリカルチュラル・アンド・バイオロ
ジカル・ケミストリィ(Agricultural & Biological Ch
emistry),36 , 1675(1972)、ジャーナル・オブ・ジェネ
ラル・アンド・アプライド・マイクロバイオロジィ(Jou
rnal of General & Applied Microbiology),19 , 339(1
973) および特公昭48−3391号公報〕、コリネバ
クテリウム属に属しピリミジンアナログに耐性を有する
微生物を用いる方法(特公昭57−50479号公
報)、コリネバクテリウム属に属しシステインアナログ
に耐性を有する微生物を用いる方法(特開平1−257
486号公報)などが知られている。
のアナログに耐性を付与することにより、L−アルギニ
ン生産性の高い菌株が取得できることは知られている
が、浸透圧に対する耐性度を高めることにより、L−ア
ルギニンの生産性が高まることは知られていない。
収率よく安価に製造する方法が求められている。
バクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属し、親
株が生育できない浸透圧を有する培地で生育でき、かつ
L−アルギニン生産能を有する微生物を培地に培養し、
培養物中にL−アルギニンを生成蓄積させ、該培養物よ
りL−アルギニンを採取することを特徴とする発酵法に
よるL−アルギニンの製造法を提供することができる。
用いられる微生物としては、コリネバクテリウム属また
はブレビバクテリウム属に属し、親株が生育できない浸
透圧を有する培地で生育でき、かつL−アルギニン生産
能を有するものであればいずれも用いられる。このよう
な微生物はコリネバクテリウム属またはブレビバクテリ
ウム属に属し、L−アルギニン生産能を有する微生物に
通常の変異処理を施して親株が生育できない浸透圧を有
する培地で生育できる能力を付与することにより、得る
ことができる。
クテリウム属またはブレビバクテリウム属に属し、L−
アルギニン生産能を有する菌株であれば野性株でも変異
株でもいずれでもよい。たとえば、コリネバクテリウム
・グルタミクム(Corynebacterium glutamicum) 、コリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィラム(Corynebacteri
um acetoacidophilum)、コリネバクテリウム・リリウム
(Corynebacterium lilium)、ブレビバクテリウム・フラ
バム(Brevibacterium flavum) 、ブレビバクテリウム・
ラクトファーメンタム(Brevibacterium lactofermentu
m) 、ブレビバクテリウム・ディバリカツム(Brevibacte
rium divaricatum)などに属する菌株があげられ、具体
的にはコリネバクテリウム・アセトアシドフィラム(Cor
ynebacterium acetoacidophilum)H−7117(FER
M BP−1822)があげられる。目的とする変異株
を有する微生物の造成・単離は前記したような親株にN
−メチル−N´−ニトロ−N−ニトロソグアニジン処
理、紫外線照射、X線照射なと通常の変異処理を施した
後、親株が生育できない浸透圧を有する培地で培養し、
生育してきたコロニーを分離することによりおこなうこ
とができる。
を親株が生育できない浸透圧に調整する必要がある。浸
透圧は一般には溶液のモル濃度に比例するもので培地の
浸透圧を高める物質としては、水に対する溶解度の高い
物質であれば、無機物質でも有機物質でもいずれも利用
でき、それらは単独でもあるいは混合物としても利用で
きる。たとえばナトリウム、カリウム、アンモニウム等
の塩類、具体的には塩化ナトリウム、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウムなどをあげることができる。また
発酵終了時の培養物のように多種の無機物質や有機物質
を含有する混合液も利用できる。
地の場合、浸透圧を高める物質としてたとえば硫酸アン
モニウムを利用するときは650mOSM/kg以上、塩
化ナトリウムを利用するときは1000mOSM/kg以
上、塩化アンモニウムを利用するときは500mOSM
/kg以上である(いずれも5日間培養後に判定)。本発
明で使用される変異株の例としては、コリネバクテリウ
ム・アセトアシドフィラム(Corynebacterium acetoacid
ophilum)H−8492、H−8493およびH−849
4があげられる。これらの菌株はブダペスト条約に基づ
いて平成4年5月26日付で工業技術院微生物工業技術
研究所にそれぞれ微工研条寄第3872号(FERM
BP−3872)、微工研条寄第3873号(FERM
BP−3873)、微工研条寄第3874号(FER
M BP−3874)として寄託されている。
る。本明細書中の各略号は次のとおりである。 ArgHxR :アルギニンハイドロキサメート耐性 2TAR :2−チアゾールアラニン耐性 〔MFA+CBZArg〕R :モノフルオロ酢酸存在下
でのN−カルボベンゾキシアルギニン耐性 6AUR :6−アザウラシル耐性 CYSR :システイン耐性 ASR :硫酸アンモニウム耐性 NaClR :塩化ナトリウム耐性 ACR :塩化アンモニウム耐性
7(以下H−7117と称す)(ArgHxR 、2TA
R 、6AUR 、〔MFA+CBZArg〕R 、CY
SR )をN−メチル−N´−ニトロ−N−ニトロソグア
ニジン 250mg/mlで30℃、30分処理した後、該処理
株を親株が生育阻害を示す濃度(250mM)の硫酸ア
ンモニウムを含む最小培地寒天平板(シュークロース10
g/l、塩化アンモニウム1g/l、尿素2g/l、燐
酸第一カリウム1g/l、燐酸第二カリウム3g/l、
塩化マグネシウム・2水和物 0.4g/l、硫酸第一鉄・
7水和物10mg/l、硫酸マンガン・4水和物10mg/l、
硫酸亜鉛・7水和物1mg/l、硫酸銅・5水和物1mg/
l、モリブデン酸アンモニウム・4水和物1mg/l、ビ
オチン0.05mg/l、寒天20g/l、pH7.2)上に塗布し、
30℃で4〜6日間培養して生育する変異株を取得す
る。
−アルギニン生産能の優れた株としてH−8492(A
rgHxR 、2TAR 、6AUR 、〔MFA+CBZA
rg〕R 、CYSR 、ASR )を選択する。
取得方法 前記(1)項の取得方法において、硫酸アンモニウムの
代わりに塩化ナトリウム(500mM)または塩化アン
モニウム(300mM)を用いる以外は(1)項と同様
に行い、H−8493(ArgHxR 、2TAR 、6A
UR 、〔MFA+CBZArg〕R 、CYSR 、NaC
lR )およびH−8494(ArgHx R 、2TAR 、
6AUR 、〔MFA+CBZArg〕R 、CYSR 、A
CR )を得る。
ム、塩化ナトリウムまたは塩化アンモニウムを含む最小
培地寒天平板上で30℃、5日間培養したときの生育度
を第1表に示す。これらの耐性株においては、各種浸透
圧調整剤に対して交差耐性が認められることから、特定
物質に対する耐性株ではなく、浸透圧に対する耐性度が
向上した株であると考えられる。
培養に際しては、一般にアミノ酸の発酵生産に用いられ
る培地が使用される。すなわち微生物が資化しうる炭素
源、窒素源、無機塩類等を含有する合成培地または天然
培地が適宜用いられる。炭素源としては、グルコース、
フラクトース、シュークロース、糖蜜、澱粉、澱粉加水
分物等の糖類、酢酸、フマール酸、クエン酸等の有機
酸、エタノール、メタノール、グリセロール等のアルコ
ール類等が用いられる。
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸ア
ンモニウム等の無機塩類、フマール酸アンモニウム等の
有機酸のアンモニウム塩、エチルアミン等のアミン類、
尿素等の含窒素化合物、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、コーン・スティープ・リカー、カゼイン加水分解
物、大豆粕またはその加水分解物、アミノ酸発酵、核酸
発酵等の発酵菌体およびその消化物等が用いられる。
酸第二カリウム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウ
ム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸
銅、炭酸カルシウム等が用いられる。その他必要により
培地にビオチン、チアミン、ニコチン酸、β−アラニン
等のビタミン類、グルタミン酸等のアミノ酸類を添加す
ることがある。
どの好気的条件下20〜40℃、好ましくは25〜38
℃の温度で行われる。培地のpHは5〜9、好ましくは
中性付近に保持する。培地のpH調整は炭酸カルシウ
ム、無機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、
pH緩衝液等によって行う。培養期間は通常1〜7日間
で、培養物中にL−アルギニンが生成蓄積する。
を除去し、イオン交換処理法、濃縮法、塩析法、等電点
沈澱法等を併用することにより、培養液からL−アルギ
ニンを回収することができる。以下に本発明の実施例を
示す。
7、H−8492、H−8493およびH−8494を
それぞれグルコース50g/l、ペプトン10g/l、
酵母エキス10g/l、硫酸アンモニウム5g/l、燐
酸第一カリウム5g/l、硫酸マグネシウム・2水和物
0.5g/l、ビオチン0.05mg/lおよび塩化ナトリウム
5g/lの組成よりなる種培地(pH7.2)6mlで30
℃、24時間培養した。得られた各種培養液2mlを後記
生産培地20mlを含む300ml容三角フラスコに植菌し
た後、30℃で72時間振盪培養した。 生産培地の組成 廃糖蜜80g/l(グルコース換算)、燐酸第一カリウ
ム 0.5g/l、燐酸第二カリウム 0.5g/l、硫酸アン
モニウム45g/l、尿素2g/l、炭酸カルシウム3
0g/l(pH 7.2) 培養液中のL−アルギニン生成量を第2表に示す。
不溶物を除いた濾液1リットルを強酸性イオン交換樹脂
〔ダウエックス50X8(Na型)、ダウケミカル社製〕の
カラムに通し、常法に従ってL−アルギニンを分離、精
製、濃縮晶出し、18.8gのL−アルギニンの結晶を得
た。
よく得ることができる。
Claims (1)
- 【請求項1】 コリネバクテリウム属またはブレビバク
テリウム属に属し、親株が生育できない浸透圧を有する
培地で生育でき、かつL−アルギニン生産能を有する微
生物を培地に培養し、培養物中にL−アルギニンを生成
蓄積させ、該培養物よりL−アルギニンを採取すること
を特徴とする発酵法によるL−アルギニンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15820592A JP3100763B2 (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | 発酵法によるl−アルギニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15820592A JP3100763B2 (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | 発酵法によるl−アルギニンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0692A true JPH0692A (ja) | 1994-01-11 |
JP3100763B2 JP3100763B2 (ja) | 2000-10-23 |
Family
ID=15666585
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15820592A Expired - Lifetime JP3100763B2 (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | 発酵法によるl−アルギニンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3100763B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009112205A (ja) * | 2007-11-02 | 2009-05-28 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | L−オルニチン含有物の製造方法 |
US8652264B2 (en) | 2008-04-04 | 2014-02-18 | Honda Motor Co., Ltd. | Rear washer fluid enable/disable |
-
1992
- 1992-06-17 JP JP15820592A patent/JP3100763B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009112205A (ja) * | 2007-11-02 | 2009-05-28 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | L−オルニチン含有物の製造方法 |
US8652264B2 (en) | 2008-04-04 | 2014-02-18 | Honda Motor Co., Ltd. | Rear washer fluid enable/disable |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP3100763B2 (ja) | 2000-10-23 |
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