JP3016883B2 - 発酵法による5’−キサンチル酸の製造法 - Google Patents
発酵法による5’−キサンチル酸の製造法Info
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Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、発酵法による5’−キ
サンチル酸の製造法に関する。5’−キサンチル酸は、
呈味物質として有用である。
サンチル酸の製造法に関する。5’−キサンチル酸は、
呈味物質として有用である。
【0002】
【従来の技術】従来、5’−キサンチル酸を発酵生産す
る方法としては、コリネバクテリウム属に属する微生物
をデコイニンを含む培地で培養する方法(特公昭40−
115784)、アデニン要求性もしくは、グアニン要
求性を有するコリネバクテリウム属に属する変異株を用
いる方法(特公昭43−20932)などが知られてい
る。
る方法としては、コリネバクテリウム属に属する微生物
をデコイニンを含む培地で培養する方法(特公昭40−
115784)、アデニン要求性もしくは、グアニン要
求性を有するコリネバクテリウム属に属する変異株を用
いる方法(特公昭43−20932)などが知られてい
る。
【0003】また、コリネバクテリウム属に属し細胞壁
合成阻害抗生物質に耐性を有する微生物を用いる方法が
知られている(特公昭60−107916)。なお、本
明細書中では、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
と命名されている菌株をコリネバクテリウム・アンモニ
アゲネスに変更して記載する。本菌株属名の変更はイン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック
・バクテリオロジー(International Journal of Syste
matic Bacteriology,442−443,10月, 1987年)に基づく
ものとする。
合成阻害抗生物質に耐性を有する微生物を用いる方法が
知られている(特公昭60−107916)。なお、本
明細書中では、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
と命名されている菌株をコリネバクテリウム・アンモニ
アゲネスに変更して記載する。本菌株属名の変更はイン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック
・バクテリオロジー(International Journal of Syste
matic Bacteriology,442−443,10月, 1987年)に基づく
ものとする。
【0004】
【問題を解決するための手段】本発明によれば、コリネ
バクテリウム属に属し、脂肪族アミノ酸アナログに耐性
を有し、かつ5’−キサンチル酸生産能を有する微生物
を培地に培養し、培養物中に5’−キサンチル酸を生成
蓄積させ、該培養物より5’−キサンチル酸を採取する
ことを特徴とする発酵法による5’−キサンチル酸の製
造法を提供することができる。
バクテリウム属に属し、脂肪族アミノ酸アナログに耐性
を有し、かつ5’−キサンチル酸生産能を有する微生物
を培地に培養し、培養物中に5’−キサンチル酸を生成
蓄積させ、該培養物より5’−キサンチル酸を採取する
ことを特徴とする発酵法による5’−キサンチル酸の製
造法を提供することができる。
【0005】以下に本発明を詳細に説明する。用いられ
る微生物としては、コリネバクテリウム属に属し、脂肪
族アミノ酸アナログに耐性を有し、かつ5’−キサンチ
ル酸生産能を有するものであればいずれでもよい。脂肪
族アミノ酸アナログに耐性を有する微生物とは、親株が
生育阻害を示す濃度の脂肪族アミノ酸アナログを含む培
地でも生育することのできる変異株のことをいう。
る微生物としては、コリネバクテリウム属に属し、脂肪
族アミノ酸アナログに耐性を有し、かつ5’−キサンチ
ル酸生産能を有するものであればいずれでもよい。脂肪
族アミノ酸アナログに耐性を有する微生物とは、親株が
生育阻害を示す濃度の脂肪族アミノ酸アナログを含む培
地でも生育することのできる変異株のことをいう。
【0006】本発明において脂肪族アミノ酸アナログと
は最少培地寒天平板中に該アナログを添加し、コリネバ
クテリウム属に属する5’−キサンチル酸生産菌を培養
したとき、該生産菌の生育を阻害するが、この阻害が脂
肪族アミノ酸たとえばバリン、イソロイシン、ロイシン
などが存在することにより解除されるような化合物をい
う。脂肪属アミノ酸アナログとしては例えば、バリンハ
イドロキサメート、N−メチル−DL−バリン、DL−
4−チアイソロイシン、イソロイシンハイドロキサメー
ト、ロイシンメチルエステル、ロイシンハイドロキサメ
ートなどがあげられる。培地に添加される脂肪族アミノ
酸アナログの量は、1−5g /l が適当である。
は最少培地寒天平板中に該アナログを添加し、コリネバ
クテリウム属に属する5’−キサンチル酸生産菌を培養
したとき、該生産菌の生育を阻害するが、この阻害が脂
肪族アミノ酸たとえばバリン、イソロイシン、ロイシン
などが存在することにより解除されるような化合物をい
う。脂肪属アミノ酸アナログとしては例えば、バリンハ
イドロキサメート、N−メチル−DL−バリン、DL−
4−チアイソロイシン、イソロイシンハイドロキサメー
ト、ロイシンメチルエステル、ロイシンハイドロキサメ
ートなどがあげられる。培地に添加される脂肪族アミノ
酸アナログの量は、1−5g /l が適当である。
【0007】上記したような変異株は、コリネバクテリ
ウム属に属する5’−キサンチル酸生産菌に脂肪族アミ
ノ酸アナログ耐性を付与したり、コリネバクテリウム属
に属し脂肪族アミノ酸アナログ耐性を有している菌株に
5’−キサンチル酸生産能を付与したりすることにより
得ることができる。本発明の変異株は、コリネバクテリ
ウム・アンモニアゲネス(Corynebacterium ammoniage
nes) ATCC21075を親株として、これにN−メチル−N’
−ニトロ−N−ニトロソグアニジン処理、紫外線照射、
X線照射など通常の変異処理を施すことにより得られ
る。
ウム属に属する5’−キサンチル酸生産菌に脂肪族アミ
ノ酸アナログ耐性を付与したり、コリネバクテリウム属
に属し脂肪族アミノ酸アナログ耐性を有している菌株に
5’−キサンチル酸生産能を付与したりすることにより
得ることができる。本発明の変異株は、コリネバクテリ
ウム・アンモニアゲネス(Corynebacterium ammoniage
nes) ATCC21075を親株として、これにN−メチル−N’
−ニトロ−N−ニトロソグアニジン処理、紫外線照射、
X線照射など通常の変異処理を施すことにより得られ
る。
【0008】以下に本発明で用いられる変異株の具体的
取得方法を示す。親株として ATCC21075株を用い、該菌
株 108個/mlをN−メチル−N’−ニトロ−N−ニトロ
ソグアニジン 130mg/lで30℃、30分処理した後、親株
が生育阻害を示す濃度(3g/l )のバリンハイドロキ
サメートを含む最少培地寒天平板(グルコース20g /
l,塩化アンモニウム3g /l,KH2PO4 0.1g/l,K2 H
PO4 0.3 g/l,MgCl2 ・2H2 O 0.3g/l,
尿素2g/l,FeSO4 ・7H2 O 10mg /l,Mn
SO4 ・4−6H2 O4mg/l,ZnSO4 ・7H 2 O
1mg/l,CuSO4 ・5H2 O 0.2mg/l, CaCl
2 ・2H2 O 10mg /l,L−システイン40mg/l,サ
イアミン塩酸塩10mg/l,パントテン酸カルシウム20mg
/l,ビオチン 60 μg/l,アデニン 20mg /l,グ
アニン20mg/l,寒天 20 g/l,pH7.2)上に塗布す
る。30℃で7〜10日間培養後、生育してくるコロニ
ーのうち、親株より5’−キサンチル酸の生産能が優れ
ている菌株を選んだ。そのうちとくに優れている一株を
コリネバクテリウム・アンモニアゲネスH−8077
(以下、H−8077株という。)と命名した。
取得方法を示す。親株として ATCC21075株を用い、該菌
株 108個/mlをN−メチル−N’−ニトロ−N−ニトロ
ソグアニジン 130mg/lで30℃、30分処理した後、親株
が生育阻害を示す濃度(3g/l )のバリンハイドロキ
サメートを含む最少培地寒天平板(グルコース20g /
l,塩化アンモニウム3g /l,KH2PO4 0.1g/l,K2 H
PO4 0.3 g/l,MgCl2 ・2H2 O 0.3g/l,
尿素2g/l,FeSO4 ・7H2 O 10mg /l,Mn
SO4 ・4−6H2 O4mg/l,ZnSO4 ・7H 2 O
1mg/l,CuSO4 ・5H2 O 0.2mg/l, CaCl
2 ・2H2 O 10mg /l,L−システイン40mg/l,サ
イアミン塩酸塩10mg/l,パントテン酸カルシウム20mg
/l,ビオチン 60 μg/l,アデニン 20mg /l,グ
アニン20mg/l,寒天 20 g/l,pH7.2)上に塗布す
る。30℃で7〜10日間培養後、生育してくるコロニ
ーのうち、親株より5’−キサンチル酸の生産能が優れ
ている菌株を選んだ。そのうちとくに優れている一株を
コリネバクテリウム・アンモニアゲネスH−8077
(以下、H−8077株という。)と命名した。
【0009】また、バリンハイドロキサメートの代わり
にイソロイシンハイドロキサメートを用いる以外は上記
と同様の方法をおこなって、得られた菌株のうち、とく
に5’−キサンチル酸生産性の優れた一株をコリネバク
テリウム・アンモニアゲネスH−8078(以下、H−
8078株という。)と命名した。また、バリンハイド
ロキサメートの代わりにロイシンハイドロキサメートを
用いる以外は上記と同様の方法をおこなって、得られた
菌株のうち、とくに生産性の優れた一株をコリネバクテ
リウム・アンモニアゲネスH−8079(以下、H−8
079株という。)と命名した。
にイソロイシンハイドロキサメートを用いる以外は上記
と同様の方法をおこなって、得られた菌株のうち、とく
に5’−キサンチル酸生産性の優れた一株をコリネバク
テリウム・アンモニアゲネスH−8078(以下、H−
8078株という。)と命名した。また、バリンハイド
ロキサメートの代わりにロイシンハイドロキサメートを
用いる以外は上記と同様の方法をおこなって、得られた
菌株のうち、とくに生産性の優れた一株をコリネバクテ
リウム・アンモニアゲネスH−8079(以下、H−8
079株という。)と命名した。
【0010】H−8077株、H−8078株およびH
−8079株は、ブダペスト条約に基づいて、平成3年
2月16日付で工業技術院微生物工業技術研究所にそれ
ぞれ微工研条寄第3282号(FERM BP−3282)、第
3283号(FERM BP−3283)および第3284号(FE
RM BP−3284)として寄託されている。ATCC2
1075株、H−8077株、H−8078株およびH
−8079株を、それぞれ第1表記載の濃度で脂肪族ア
ミノ酸アナログを含む最少培地寒天平板上で30℃5日
間培養したときの生育度を第1表に示す。
−8079株は、ブダペスト条約に基づいて、平成3年
2月16日付で工業技術院微生物工業技術研究所にそれ
ぞれ微工研条寄第3282号(FERM BP−3282)、第
3283号(FERM BP−3283)および第3284号(FE
RM BP−3284)として寄託されている。ATCC2
1075株、H−8077株、H−8078株およびH
−8079株を、それぞれ第1表記載の濃度で脂肪族ア
ミノ酸アナログを含む最少培地寒天平板上で30℃5日
間培養したときの生育度を第1表に示す。
【0011】
【表1】
【0012】本発明で用いられる微生物の培養に際して
は、一般に核酸の発酵生産に用いられる培地が使用され
る。微生物が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類、生
育因子などを含有する培地であれば、合成培地、天然培
地などいかなる培地でも使用できる。炭素源としては、
グルコース、フラクトース、シュクロースあるいは、糖
蜜、澱粉などの加水分解物のほか、酢酸、フマール酸、
クエン酸などの各種有機酸、エタノール、グリセロール
などのアルコール類などが使用できる。
は、一般に核酸の発酵生産に用いられる培地が使用され
る。微生物が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類、生
育因子などを含有する培地であれば、合成培地、天然培
地などいかなる培地でも使用できる。炭素源としては、
グルコース、フラクトース、シュクロースあるいは、糖
蜜、澱粉などの加水分解物のほか、酢酸、フマール酸、
クエン酸などの各種有機酸、エタノール、グリセロール
などのアルコール類などが使用できる。
【0013】窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸ア
ンモニウムなどの各種無機酸のアンモニウム塩、フマー
ル酸アンモニウムなどの有機酸のアンモニウム塩、エチ
ルアミンなどのアミン類、尿素などの含窒素化合物、な
らびにペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・ステ
ィープ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕またはそ
の加水分解物、アミノ酸発酵、核酸発酵などの各種発酵
菌体およびその消化物などが用いられる。
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸ア
ンモニウムなどの各種無機酸のアンモニウム塩、フマー
ル酸アンモニウムなどの有機酸のアンモニウム塩、エチ
ルアミンなどのアミン類、尿素などの含窒素化合物、な
らびにペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・ステ
ィープ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕またはそ
の加水分解物、アミノ酸発酵、核酸発酵などの各種発酵
菌体およびその消化物などが用いられる。
【0014】無機物としては、燐酸第一カリウム、燐酸
第二カリウム、燐酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫
酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウムなど
が用いられる。そのほか、必要に応じてビオチン、サイ
アミン、ニコチン酸、β−アラニンなどのビタミン類や
グルタミン酸などのアミノ酸類を添加することもでき
る。
第二カリウム、燐酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫
酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウムなど
が用いられる。そのほか、必要に応じてビオチン、サイ
アミン、ニコチン酸、β−アラニンなどのビタミン類や
グルタミン酸などのアミノ酸類を添加することもでき
る。
【0015】培養は、振とう、深部攪拌などの好気的条
件下、温度20−40℃好ましくは25−38℃で、p
H5−9、好ましくは中性付近に保持しておこなわれ、
通常2−7日間で完了する。培地のpHは炭酸カルシウ
ム、無機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、
pH緩衝液などによって調整される。培養終了後、培養
液から菌体などの沈澱物を除去し、イオン交換処理、吸
着法、抽出法、沈澱法などを併用することにより、培養
液から5’−キサンチル酸を採取することができる。
件下、温度20−40℃好ましくは25−38℃で、p
H5−9、好ましくは中性付近に保持しておこなわれ、
通常2−7日間で完了する。培地のpHは炭酸カルシウ
ム、無機または有機の酸、アルカリ溶液、アンモニア、
pH緩衝液などによって調整される。培養終了後、培養
液から菌体などの沈澱物を除去し、イオン交換処理、吸
着法、抽出法、沈澱法などを併用することにより、培養
液から5’−キサンチル酸を採取することができる。
【0016】以下に本発明の実施例を示す。
【0017】
【0018】実施例1 ATCC21075株、H−8077株、H−8078
株およびH−8079株を種菌として用いた。第2表に
示す組成からなる培地10mlを大型試験管に分注し、1
20℃で20分間加熱滅菌した。
株およびH−8079株を種菌として用いた。第2表に
示す組成からなる培地10mlを大型試験管に分注し、1
20℃で20分間加熱滅菌した。
【0019】
【表2】
【0020】この培地に、上記種菌をブイヨンスラント
上で30℃、24時間培養して得られた菌体を1白金耳
接種し、30℃で4日間培養した。培養中pHが 6.0−
7.0 になったとき、尿素3g/lを添加した。培養中蓄
積された5’−キサンチル酸を第3表に示す。
上で30℃、24時間培養して得られた菌体を1白金耳
接種し、30℃で4日間培養した。培養中pHが 6.0−
7.0 になったとき、尿素3g/lを添加した。培養中蓄
積された5’−キサンチル酸を第3表に示す。
【0021】
【表3】
【0022】実施例2 種菌として第3表に示す菌株を用いる。第2表の液体培
地(但しグルコース18g/l)750mlを2リットル
容ジャーファメンターに張り込み、120℃、10分間
加熱滅菌した。これに実施例1と同様の方法で調製した
種菌体(それぞれスラント6本の菌体)を接種し、30
℃で72時間、通気1リットル/min 、攪拌800rpm
で培養した。尚、培養期間中の培養液のpHはアンモニ
ア水を用いて 6.5−7.5 に維持した。その結果、ATC
C21075株、H−8077株、H−8078株およ
びH−8079株の培養液中の5’−キサンチル酸生成
量はそれぞれ30g/l、38g/l,40g/lおよ
び36g/lであった。
地(但しグルコース18g/l)750mlを2リットル
容ジャーファメンターに張り込み、120℃、10分間
加熱滅菌した。これに実施例1と同様の方法で調製した
種菌体(それぞれスラント6本の菌体)を接種し、30
℃で72時間、通気1リットル/min 、攪拌800rpm
で培養した。尚、培養期間中の培養液のpHはアンモニ
ア水を用いて 6.5−7.5 に維持した。その結果、ATC
C21075株、H−8077株、H−8078株およ
びH−8079株の培養液中の5’−キサンチル酸生成
量はそれぞれ30g/l、38g/l,40g/lおよ
び36g/lであった。
【0023】このH−8078株の培養終了液より菌体
を除去して得られた濾液500mlを1NHClでpH
0.8として強酸性カチオン交換樹脂ダイヤイオンSK#
1(H型)に通した後、水でレジンを洗浄した。この流
出液および水洗による最初の流出液を合わせて、飽和水
酸化バリウム液でpH7.2に調節した後、30℃で減圧
濃縮した。濃縮液100mlにエタノール200mlを滴下
して0℃一昼夜放置し、、5’−キサンチル酸バリウム
塩の結晶を得た。これを濾別採取後常法によりキサンチ
ル酸ナトリウム塩にかえ5’−キサンチル酸・2ナトリ
ウム塩の7水塩の結晶15gが得られた。
を除去して得られた濾液500mlを1NHClでpH
0.8として強酸性カチオン交換樹脂ダイヤイオンSK#
1(H型)に通した後、水でレジンを洗浄した。この流
出液および水洗による最初の流出液を合わせて、飽和水
酸化バリウム液でpH7.2に調節した後、30℃で減圧
濃縮した。濃縮液100mlにエタノール200mlを滴下
して0℃一昼夜放置し、、5’−キサンチル酸バリウム
塩の結晶を得た。これを濾別採取後常法によりキサンチ
ル酸ナトリウム塩にかえ5’−キサンチル酸・2ナトリ
ウム塩の7水塩の結晶15gが得られた。
【0024】
【発明の効果】本発明によれば、5’−キサンチル酸を
工業的に安価に効率よく製造することができる。
工業的に安価に効率よく製造することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI C12R 1:15) (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) C12P 19/00 - 19/64 C12N 1/00 - 1/38 BIOSIS(DIALOG) WPI(DIALOG)
Claims (1)
- 【請求項1】 コリネバクテリウム属に属し、脂肪族ア
ミノ酸アナログに耐性を有し、かつ5’−キサンチル酸
生産能を有する微生物を培地に培養し、培養液中に5’
−キサンチル酸を生成蓄積させ、該培養物より5’−キ
サンチル酸を採取することを特徴とする発酵法による
5’−キサンチル酸の製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3024773A JP3016883B2 (ja) | 1991-02-19 | 1991-02-19 | 発酵法による5’−キサンチル酸の製造法 |
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JP3024773A JP3016883B2 (ja) | 1991-02-19 | 1991-02-19 | 発酵法による5’−キサンチル酸の製造法 |
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Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04262790A JPH04262790A (ja) | 1992-09-18 |
JP3016883B2 true JP3016883B2 (ja) | 2000-03-06 |
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ID=12147493
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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JP3024773A Expired - Fee Related JP3016883B2 (ja) | 1991-02-19 | 1991-02-19 | 発酵法による5’−キサンチル酸の製造法 |
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---|---|
JP (1) | JP3016883B2 (ja) |
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RU2209249C2 (ru) * | 2000-11-22 | 2003-07-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения ксантозин-5'-монофосфата, штамм corynebacterium ammoniagenes - продуцент ксантозин-5'-монофосфата (варианты) |
KR100429926B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2004-05-03 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
KR100429925B1 (ko) | 2001-12-28 | 2004-05-03 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
KR100429927B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2004-05-03 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
JP2003261594A (ja) * | 2002-03-07 | 2003-09-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 5’−キサンチル酸・2ナトリウム塩の結晶 |
KR20040051731A (ko) * | 2002-12-11 | 2004-06-19 | 씨제이 주식회사 | 5’-크산틸산을 생산하는 미생물 |
KR100542568B1 (ko) * | 2003-12-10 | 2006-01-11 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
KR100588578B1 (ko) * | 2004-12-01 | 2006-06-14 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산 생성 미생물 및 이를 사용한 5'-크산틸산의생산 방법 |
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BRPI0709635A2 (pt) | 2006-04-24 | 2011-07-19 | Ajinomoto Kk | bactéria pertencendo ao gênero bacillus, e, métodos para produzir uma substáncia derivada de purina, e um nucleotìdeo de purina |
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