JPS5894391A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法Info
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- JPS5894391A JPS5894391A JP56190071A JP19007181A JPS5894391A JP S5894391 A JPS5894391 A JP S5894391A JP 56190071 A JP56190071 A JP 56190071A JP 19007181 A JP19007181 A JP 19007181A JP S5894391 A JPS5894391 A JP S5894391A
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- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/227—Tryptophan
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるＬ−）リプトファン（以下、ト
リプトファンと記す）の製造法に関する。
リプトファンと記す）の製造法に関する。
従来トリプトファンの製造法としては、ドリフト−ｙ
−ｙ−ｙノ前駆物質であるアントラニル酸、イノドール
或いは３−インドールピルビン酸よりトリプトファンを
製造する方法が知られている。
−ｙ−ｙノ前駆物質であるアントラニル酸、イノドール
或いは３−インドールピルビン酸よりトリプトファンを
製造する方法が知られている。
これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物質を使用
しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属Ｖこ属しト
リプトファンアナログに耐性を有する変異株を使用して
直接発酵法ｔこよりトリプトファンを生産する方法（特
公昭５３−３９５１７）が開発されている。
しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属Ｖこ属しト
リプトファンアナログに耐性を有する変異株を使用して
直接発酵法ｔこよりトリプトファンを生産する方法（特
公昭５３−３９５１７）が開発されている。
そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用いて更に
糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法により
安価に製造する方法を開発すべく研究を行なった結果、
バチルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐性
の他に更にアザセリン（０−ジアゾアセチル−し−セリ
フ）に耐性を有する微生物の中に、従来知られているも
のより更ｔこ大量のトリプトファンを生産する能力を有
する菌株があることを見い出した。この発明はこの知見
に基づし・て更Ｖこ研究の結果完成されたものである。
糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法により
安価に製造する方法を開発すべく研究を行なった結果、
バチルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐性
の他に更にアザセリン（０−ジアゾアセチル−し−セリ
フ）に耐性を有する微生物の中に、従来知られているも
のより更ｔこ大量のトリプトファンを生産する能力を有
する菌株があることを見い出した。この発明はこの知見
に基づし・て更Ｖこ研究の結果完成されたものである。
本発明の方法で使用される変異株は、バチルス属に属し
トリプトファンアナログ及びアザセリンに耐性を有し、
かつトリプトファンを生産する能力を有する微生物であ
り、例えば、次のような変異株が使用される。
トリプトファンアナログ及びアザセリンに耐性を有し、
かつトリプトファンを生産する能力を有する微生物であ
り、例えば、次のような変異株が使用される。
１Ｆ−Ｔｒｐｒ ：５−フルオロトリプトファン耐性Ａ
Ｓｒ ＋アザセリン耐性 Ｌｅｕ−：Ｌ−ロインノ要求性 ＩＭｒ ：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファンアナログ耐性、トリプトファン生産菌を親株
とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、紫外線照射
あるいはに一メチルーＮ１−二ドローＮ−二トロングア
ニンン（以下、ＮＧと略す。）、亜硝酸等の化学薬剤処
理を施し、変異処理した菌株を親株が生育できないよう
な量のアザセリンを含有する平板寒天培地で培養し、該
平板培地上に生育するコロニーを分離することしこよっ
て得られる。
Ｓｒ ＋アザセリン耐性 Ｌｅｕ−：Ｌ−ロインノ要求性 ＩＭｒ ：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファンアナログ耐性、トリプトファン生産菌を親株
とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、紫外線照射
あるいはに一メチルーＮ１−二ドローＮ−二トロングア
ニンン（以下、ＮＧと略す。）、亜硝酸等の化学薬剤処
理を施し、変異処理した菌株を親株が生育できないよう
な量のアザセリンを含有する平板寒天培地で培養し、該
平板培地上に生育するコロニーを分離することしこよっ
て得られる。
上記の親株としてはトリプトファンアナログ耐性の他に
トリプトファン生産に有用な性質を有するトリプトファ
ン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ−
ロイシンもしくはＬ−フェニルアラニン要求性のトリプ
トファン生産菌（特公昭５３−３９５１７号公報）、再
にはトリプトファンアナログ耐性でかつインドールマイ
シン耐性のトリプトファン生産菌（特開昭５６−９２７
９６号公報）等が使用される。具体例としては次のよう
なトリプトファンアナログ耐性のトリプトファン生産菌
が使用される。
トリプトファン生産に有用な性質を有するトリプトファ
ン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ−
ロイシンもしくはＬ−フェニルアラニン要求性のトリプ
トファン生産菌（特公昭５３−３９５１７号公報）、再
にはトリプトファンアナログ耐性でかつインドールマイ
シン耐性のトリプトファン生産菌（特開昭５６−９２７
９６号公報）等が使用される。具体例としては次のよう
なトリプトファンアナログ耐性のトリプトファン生産菌
が使用される。
その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株を親株と
し、これにアザセリン耐性を付与した後トリプトファン
アナログ耐性を付与することによっても誘導することが
できる。この場合１こも再にトリプトファン生産１こ有
用な性質、例えば、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロノ
ン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対す
る栄ｉ要求性、あるいはフェニルアラニンアナログ耐性
等を付与することが望ましい。
し、これにアザセリン耐性を付与した後トリプトファン
アナログ耐性を付与することによっても誘導することが
できる。この場合１こも再にトリプトファン生産１こ有
用な性質、例えば、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロノ
ン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対す
る栄ｉ要求性、あるいはフェニルアラニンアナログ耐性
等を付与することが望ましい。
以下の実験例にて、本発明のアザセリン耐性トリプトフ
ァン生産菌のアザセリンに対する耐性度を示す。
ァン生産菌のアザセリンに対する耐性度を示す。
実験例
第１表に示す組成の最少培地及び最少培地に１００ ｐ
ｆ／ｍｅのアザセリンを添加した寒天培地を調製し、加
熱滅菌した後直径８５ｃｒｎのフレー）＆こ移してブー
レート寒天培地を作った。
ｆ／ｍｅのアザセリンを添加した寒天培地を調製し、加
熱滅菌した後直径８５ｃｒｎのフレー）＆こ移してブー
レート寒天培地を作った。
上記アザセリ／含有のプレー）Ｅ最少寒天プレー ト、
１−に生育したバチルス・ズブチリスＡＪ１１７（１９
，ＡＪ１２７１０及びＡＪ１１７１６を夫々各ブ・レー
ト当り１０６個宛個宛上、３０ｔＴて４８時間プレート
培養を行い、プレート上に生育したコロニー数を測定し
た。その結果を第２表に示す。
１−に生育したバチルス・ズブチリスＡＪ１１７（１９
，ＡＪ１２７１０及びＡＪ１１７１６を夫々各ブ・レー
ト当り１０６個宛個宛上、３０ｔＴて４８時間プレート
培養を行い、プレート上に生育したコロニー数を測定し
た。その結果を第２表に示す。
グルコース ｓ、ｏ ｔ／を
硫酸アンモニウム １．ＯｔｔＫＨ２Ｐ
Ｏ４８，６５／／ Ｍｇ５Ｏ，・７）（、ＯＯ，２／／ Ｆ ｅ ＳＯ４・７ Ｈ９０１０１Ｂ’；ｌ／ ｌＭｎ
５Ｏ，−４Ｈ，０１０ クエン酸ナトリウム ｏ、ｓ ｙ７）※ Ｌ−口４レン、 ノＯ
ｓｔ／、ｔｅ（°１！−Ａ７１１７１ｏｓＪ毫令のみミ
牟力Ｄ）ＦＴ−１４５０ ＡＪ−１］ ７０９ １ＪＯＯ
ＡＪ−１１７１０１０００以上 ＡＪ−１１７１６ １００
０ 以」二尚、本発明でいうアザセリン耐性とは、１０
６個の変異株をアザセリンを１００μ９／ｍｅ含む最少
培地そ上記培養条件下で培養した場合ｅ二５００個以、
ヒ０コロニーなゝ生成するものをいう。
硫酸アンモニウム １．ＯｔｔＫＨ２Ｐ
Ｏ４８，６５／／ Ｍｇ５Ｏ，・７）（、ＯＯ，２／／ Ｆ ｅ ＳＯ４・７ Ｈ９０１０１Ｂ’；ｌ／ ｌＭｎ
５Ｏ，−４Ｈ，０１０ クエン酸ナトリウム ｏ、ｓ ｙ７）※ Ｌ−口４レン、 ノＯ
ｓｔ／、ｔｅ（°１！−Ａ７１１７１ｏｓＪ毫令のみミ
牟力Ｄ）ＦＴ−１４５０ ＡＪ−１］ ７０９ １ＪＯＯ
ＡＪ−１１７１０１０００以上 ＡＪ−１１７１６ １００
０ 以」二尚、本発明でいうアザセリン耐性とは、１０
６個の変異株をアザセリンを１００μ９／ｍｅ含む最少
培地そ上記培養条件下で培養した場合ｅ二５００個以、
ヒ０コロニーなゝ生成するものをいう。
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、そ
の他必要１こ応してアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄
養素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源と
してはグルコース、ンユークロース、マルトース、澱粉
氷解物、糖蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、
クエン酸等も単独あるいは上記能の炭素源と併用して用
いられる。
の他必要１こ応してアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄
養素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源と
してはグルコース、ンユークロース、マルトース、澱粉
氷解物、糖蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、
クエン酸等も単独あるいは上記能の炭素源と併用して用
いられる。
窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、ペプトン等有機あるいは無機の窒素源が使用される。
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、ペプトン等有機あるいは無機の窒素源が使用される。
有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸、
核酸、再に、これらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育
にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する場
合には要求される栄養素を補添することが必要である。
核酸、再に、これらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育
にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する場
合には要求される栄養素を補添することが必要である。
無機塩類としてはリン酸塩、マグネンウム塩、カルンウ
ム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
ム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
培養は通常の培養条件下で行えば良く、ｐＨを５ないし
９、温度を２０ないし４０ｒに制御しつつ１〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養することりこより培養液中に著
量のトリプトファンが蓄積される。培養中にｐＨが下が
る場合には、炭酸カルシウムを別殺菌して加えるか又は
アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する
。又、有機酸を炭素源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸又
は有機酸で中和する。。
９、温度を２０ないし４０ｒに制御しつつ１〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養することりこより培養液中に著
量のトリプトファンが蓄積される。培養中にｐＨが下が
る場合には、炭酸カルシウムを別殺菌して加えるか又は
アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する
。又、有機酸を炭素源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸又
は有機酸で中和する。。
培養液からトリプトファンを採取する方法ハ、公知のト
リプトファン回収方法ンこ従って行えば良く、培養液か
ら菌体を除去した後濃縮晶析する方法、あるいはイオン
交換クロマトグラフィー等によって採取される。
リプトファン回収方法ンこ従って行えば良く、培養液か
ら菌体を除去した後濃縮晶析する方法、あるいはイオン
交換クロマトグラフィー等によって採取される。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表に示した組成のトリプトファン生産用培地２
０厘／を５００ｗ１容のフラスコに分注し、これに第３
表に示す微生物をそれぞれ晃スラント量植えつけ３０Ｃ
で９６時間振盪培養した。それぞれの培養液中のトリプ
トフ７ノ生成量は第４表の如くであった。
０厘／を５００ｗ１容のフラスコに分注し、これに第３
表に示す微生物をそれぞれ晃スラント量植えつけ３０Ｃ
で９６時間振盪培養した。それぞれの培養液中のトリプ
トフ７ノ生成量は第４表の如くであった。
グルコース ｓｏ ｖ／を塩
化アンモニウム ｌ Ｑ ｔｔＫＨ
２ＰＯ４１ｎ ＫＣｌ ２ ｔｔ
ＭｎＳＯ４＠ ７Ｈ２０１０１ｔ９／ＬＦｅＳ０４＠
４Ｈ２０１０ カザミノ酸 ４ ｙ／１
Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２０Ｑ、４ ／／（Ｘ Ａゴ
Ｉ＋７ＬＤａｌＪｈ、＠ｒＮ 帰’Ｍ１）ｉ４表′ト
リプトファン生成量 ＦＴ−１４５１，９＋Ｉ ＡＪ １１７０９
３．５ＡＪ １１７１０
７．０ＡＪ １１７１６
７．１特許出願人゛ 味の素株式会社
化アンモニウム ｌ Ｑ ｔｔＫＨ
２ＰＯ４１ｎ ＫＣｌ ２ ｔｔ
ＭｎＳＯ４＠ ７Ｈ２０１０１ｔ９／ＬＦｅＳ０４＠
４Ｈ２０１０ カザミノ酸 ４ ｙ／１
Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２０Ｑ、４ ／／（Ｘ Ａゴ
Ｉ＋７ＬＤａｌＪｈ、＠ｒＮ 帰’Ｍ１）ｉ４表′ト
リプトファン生成量 ＦＴ−１４５１，９＋Ｉ ＡＪ １１７０９
３．５ＡＪ １１７１０
７．０ＡＪ １１７１６
７．１特許出願人゛ 味の素株式会社
Claims (1)
- バチルス属に属し、トリプトファンアナログ及びアザセ
リンｔこ耐性を有し、かっＬ−）リプトファン生産能を
有する微生物を液体培地中に好気的に培養し、培養液中
にＬ−）’Ｊブトファンを生成蓄積せしめ、・これを採
取することを特徴とするＬ−）リブトファンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56190071A JPS5894391A (ja) | 1981-11-27 | 1981-11-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
| DE8282110586T DE3273233D1 (en) | 1981-11-27 | 1982-11-16 | Process for producing l-tryptophan by fermentation |
| EP82110586A EP0081107B1 (en) | 1981-11-27 | 1982-11-16 | Process for producing l-tryptophan by fermentation |
| US06/444,172 US4560652A (en) | 1981-11-27 | 1982-11-24 | Process for producing L-tryptophan by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56190071A JPS5894391A (ja) | 1981-11-27 | 1981-11-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5894391A true JPS5894391A (ja) | 1983-06-04 |
| JPH027635B2 JPH027635B2 (ja) | 1990-02-20 |
Family
ID=16251869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56190071A Granted JPS5894391A (ja) | 1981-11-27 | 1981-11-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4560652A (ja) |
| EP (1) | EP0081107B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5894391A (ja) |
| DE (1) | DE3273233D1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57174096A (en) * | 1981-04-20 | 1982-10-26 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-tryptophan by fermentation method |
| AU4929899A (en) * | 1998-07-30 | 2000-02-21 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Process for producing indolemycin |
| CN104478787A (zh) * | 2014-11-24 | 2015-04-01 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种从脱色用废活性炭中提取色氨酸的方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3700558A (en) * | 1967-11-20 | 1972-10-24 | Lepetit Spa | Production of l-tryptophan by fermentation |
| JPS4818828B1 (ja) * | 1969-08-28 | 1973-06-08 | ||
| JPS5335152B1 (ja) * | 1971-03-09 | 1978-09-26 | ||
| JPS5119037B2 (ja) * | 1972-11-16 | 1976-06-14 | ||
| JPS5339517B2 (ja) * | 1972-12-20 | 1978-10-21 | ||
| JPS575694A (en) * | 1980-06-10 | 1982-01-12 | Showa Denko Kk | Production of l-tryptophane |
| JPS57208994A (en) * | 1981-06-19 | 1982-12-22 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-tryptophan by fermentation |
| JPS5881107A (ja) * | 1981-11-06 | 1983-05-16 | ナショナル住宅産業株式会社 | 建築用化粧板の条溝形成方法 |
| JPS5880378A (ja) * | 1981-11-10 | 1983-05-14 | Ishikawajima Harima Heavy Ind Co Ltd | コ−クス乾式消火設備におけるプリチヤンバ圧制御装置 |
| JPS6092796A (ja) * | 1983-10-27 | 1985-05-24 | 松下電器産業株式会社 | 脱水洗濯機の駆動装置 |
-
1981
- 1981-11-27 JP JP56190071A patent/JPS5894391A/ja active Granted
-
1982
- 1982-11-16 DE DE8282110586T patent/DE3273233D1/de not_active Expired
- 1982-11-16 EP EP82110586A patent/EP0081107B1/en not_active Expired
- 1982-11-24 US US06/444,172 patent/US4560652A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3273233D1 (en) | 1986-10-16 |
| EP0081107A2 (en) | 1983-06-15 |
| EP0081107B1 (en) | 1986-09-10 |
| EP0081107A3 (en) | 1984-02-01 |
| US4560652A (en) | 1985-12-24 |
| JPH027635B2 (ja) | 1990-02-20 |
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