JPS5945899A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法Info
- Publication number
- JPS5945899A JPS5945899A JP15561182A JP15561182A JPS5945899A JP S5945899 A JPS5945899 A JP S5945899A JP 15561182 A JP15561182 A JP 15561182A JP 15561182 A JP15561182 A JP 15561182A JP S5945899 A JPS5945899 A JP S5945899A
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- tryptophan
- histidine
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- colony
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるＬ−１−リプドアアン（以下、
トリプトファンと記す）の製造法に関する。
トリプトファンと記す）の製造法に関する。
従来トリプトファンの製造法としては、トリプトファン
の前駆物質であるアントラニル酸、インドール或は３−
インドールピルビン酸よシトリブトファンを製造する方
法が知られている。
の前駆物質であるアントラニル酸、インドール或は３−
インドールピルビン酸よシトリブトファンを製造する方
法が知られている。
これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物質を使用
しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属に属しトリ
プトファンアナログに耐性を有する変異株を使用して直
接発酵法によりトリプトファンを生産する方法（特公昭
４８−１８８２８、特公昭５３−３９，５１７）が開発
されている。
しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属に属しトリ
プトファンアナログに耐性を有する変異株を使用して直
接発酵法によりトリプトファンを生産する方法（特公昭
４８−１８８２８、特公昭５３−３９，５１７）が開発
されている。
そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用いて更に
糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法によシ
安価に製造する方法を開発すべく研究を行った結果、バ
チルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐性の
他に更にＬ−ヒスチジン感受性を有する微生物の中に、
従来知られているものよシ更に大量のトリプトファンを
生産する能力を有する菌株があることを見い出した。こ
の発明はこの知見に基づいて更に研究の結果完成された
ものである。
糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法によシ
安価に製造する方法を開発すべく研究を行った結果、バ
チルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐性の
他に更にＬ−ヒスチジン感受性を有する微生物の中に、
従来知られているものよシ更に大量のトリプトファンを
生産する能力を有する菌株があることを見い出した。こ
の発明はこの知見に基づいて更に研究の結果完成された
ものである。
本発明でいうトリプトファンアナログとはバチルス属に
属する微生物の生育を阻害し、この生育阻害がＬ −）
リプドアアンの存在によって部分的又は完全に解除さ
れるような薬剤をいい、例えば５−メチルトリプトファ
ン等の５，６又は７−低級アルキルトリプトファン、５
−フルオロトリプトファン等の５又は６−バロゲノトリ
プトフアン、トリプトファンハイドロキサメート、又は
７−アザトリプトファン等がある。
属する微生物の生育を阻害し、この生育阻害がＬ −）
リプドアアンの存在によって部分的又は完全に解除さ
れるような薬剤をいい、例えば５−メチルトリプトファ
ン等の５，６又は７−低級アルキルトリプトファン、５
−フルオロトリプトファン等の５又は６−バロゲノトリ
プトフアン、トリプトファンハイドロキサメート、又は
７−アザトリプトファン等がある。
本発明で使用する微生物は、バチルス属に属し、上記の
トリプトファンアナログに耐性を有し、更にＬ−ヒスチ
ジン感受性、即ちＬ−ヒスチジンの存在により生育が抑
制される性質を有し、かつトリプトファン生産能を有す
る変異株であり、例えば次のような変異株が代表例とし
て挙げられる。
トリプトファンアナログに耐性を有し、更にＬ−ヒスチ
ジン感受性、即ちＬ−ヒスチジンの存在により生育が抑
制される性質を有し、かつトリプトファン生産能を有す
る変異株であり、例えば次のような変異株が代表例とし
て挙げられる。
バチルス・ズブチリス ＡＪｌ１９５９ ＦＥＲＭ−
Ｐ６７０１（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｈｉｓ”’） バチルス・ズブチリス ＡＪ１１９６０ ＦＥＲＭ−
Ｐ ６７０２（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｌｅｕ−、Ｈｉｓ
ｓ）バチルス・ズブチリス ＡＪ１１９６１ ＦＫＲ
Ｍ−Ｐ ６７０３（５−Ｆ−Ｔｒｐ”、 ＩＭｒ、 Ｈ
ｉｓ”）（註） ５−Ｆ−Ｔｒｐ 、 ５−フ
ルオロトリプトファン耐性Ｈｊ、ｓ” ：Ｌ−ヒ
スチジン感受性Ｌｅｕ−： Ｌ−ロイシン要求性 工Ｍｒ ： インドールマイシン耐性、これら
本発明で使用される変異株は、バチルス属に属するトリ
プトファンアナログ耐性のトリプトファン生産菌を親株
とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、紫外線照射
或はＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン（以下、ＮＧと略す。）亜硝酸等の化学薬剤処理を施
し、変異処理した菌体を完全培地（平板培地）で培養し
、生育したコロニーを、最少培地及び００５〜２０ｇ／
ｄＡのＬ−ヒスチジンを含む最少培地で培養し、Ｌ−ヒ
スチジンを含む培地で生育しないか又は生育が抑制され
るコロニーを分離することによって得られる。
Ｐ６７０１（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｈｉｓ”’） バチルス・ズブチリス ＡＪ１１９６０ ＦＥＲＭ−
Ｐ ６７０２（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｌｅｕ−、Ｈｉｓ
ｓ）バチルス・ズブチリス ＡＪ１１９６１ ＦＫＲ
Ｍ−Ｐ ６７０３（５−Ｆ−Ｔｒｐ”、 ＩＭｒ、 Ｈ
ｉｓ”）（註） ５−Ｆ−Ｔｒｐ 、 ５−フ
ルオロトリプトファン耐性Ｈｊ、ｓ” ：Ｌ−ヒ
スチジン感受性Ｌｅｕ−： Ｌ−ロイシン要求性 工Ｍｒ ： インドールマイシン耐性、これら
本発明で使用される変異株は、バチルス属に属するトリ
プトファンアナログ耐性のトリプトファン生産菌を親株
とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、紫外線照射
或はＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン（以下、ＮＧと略す。）亜硝酸等の化学薬剤処理を施
し、変異処理した菌体を完全培地（平板培地）で培養し
、生育したコロニーを、最少培地及び００５〜２０ｇ／
ｄＡのＬ−ヒスチジンを含む最少培地で培養し、Ｌ−ヒ
スチジンを含む培地で生育しないか又は生育が抑制され
るコロニーを分離することによって得られる。
上記の親株としては、トリプトファンアナログ耐性の他
にトリプトファン生産に有用な性質を有するトリプトフ
ァン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ
−ロイシンもしくはＬ−７エニルアラニン要求性のトリ
プトファン生産菌（特公昭５３−３９５１７号公報）、
更にはトリプトファンアナログ耐性でかつインドールマ
イシン耐性のトリプトファン生産菌（特開昭５６−９２
７９６号公報）等が使用される。具体例としては次のよ
うなトリプトファンアナログ耐性のトリプトファン生産
菌が使用される。
にトリプトファン生産に有用な性質を有するトリプトフ
ァン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ
−ロイシンもしくはＬ−７エニルアラニン要求性のトリ
プトファン生産菌（特公昭５３−３９５１７号公報）、
更にはトリプトファンアナログ耐性でかつインドールマ
イシン耐性のトリプトファン生産菌（特開昭５６−９２
７９６号公報）等が使用される。具体例としては次のよ
うなトリプトファンアナログ耐性のトリプトファン生産
菌が使用される。
バチルス・ズブチリス ＦＴ−１４５ＦＥＲＭ−Ｐ１７
８３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） バチルス・ズブチリス ＦＦＬ−５ＦＥＲＭ−Ｐ１７８
６（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ＋Ｌｅｕ”） バチルス・ズブチリス ＡＪ１１４８３ ＦＥＲＭ−
Ｐ５２１６（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ十ＩＭｒ） その他、本発明の変異株はバチルス属の野生株を親株と
し、これにＬ−ヒスチジン感受性を付与した後トリプト
ファンアナログ耐性を付与することによっても誘導する
ことができる。この場合にも更にトリプトファン生産に
有用な性質、例えば、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロ
シン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対
する栄養要求性、或はフェニルアラニンアナログ耐性等
を付与することが望ましい。
８３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） バチルス・ズブチリス ＦＦＬ−５ＦＥＲＭ−Ｐ１７８
６（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ＋Ｌｅｕ”） バチルス・ズブチリス ＡＪ１１４８３ ＦＥＲＭ−
Ｐ５２１６（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ十ＩＭｒ） その他、本発明の変異株はバチルス属の野生株を親株と
し、これにＬ−ヒスチジン感受性を付与した後トリプト
ファンアナログ耐性を付与することによっても誘導する
ことができる。この場合にも更にトリプトファン生産に
有用な性質、例えば、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロ
シン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対
する栄養要求性、或はフェニルアラニンアナログ耐性等
を付与することが望ましい。
以下の実験例にて、本発明のＬ−ヒスチジン感受性トリ
プトファン生産菌のＬ−ヒスチジンに対 ５− する感受性を示す。
プトファン生産菌のＬ−ヒスチジンに対 ５− する感受性を示す。
実験例
第１表に示す組成の最少培地に第２表に示す濃度となる
ようにＬ−ヒスチジンを加え直径１６５話の試験管に４
． Ｏｍｌ！宛分注し、１１０ｒで１０分間加熱殺菌し
て培地を調製した。
ようにＬ−ヒスチジンを加え直径１６５話の試験管に４
． Ｏｍｌ！宛分注し、１１０ｒで１０分間加熱殺菌し
て培地を調製した。
上記培地にＬ−ヒスチジンを含まない最少培地で２４時
間培養して得られた第２表に示した菌株の培養液を、夫
々各０．１ｍｌ宛接種し、３０Ｃで３０時間振盪培養を
行い、培養液の５７０ｎｍの吸光度を測定した。その結
果を第２表に示す。
間培養して得られた第２表に示した菌株の培養液を、夫
々各０．１ｍｌ宛接種し、３０Ｃで３０時間振盪培養を
行い、培養液の５７０ｎｍの吸光度を測定した。その結
果を第２表に示す。
第１表 最少培地の組成（ｐＨ７，０）グルコース
５．０ ？／Ｊｌ硫酸アンモニウム
１０ 〃ＫＨ２Ｐ０．
８．６５ ｔｔＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，２ｔｔ ＦｅＳＯ４・７Ｈ，，０１０ＷＦ１７′ノＭｎ５Ｏ，−
４Ｈ２０１０／／ クエン酸ナトリウム ０．５ ｉ／ｉ（×
Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加） ６− 第２表 Ｌ−ヒスチジン感受性 （相対生育度で示す） Ｌ−ヒスチジン（？／丞） 菌株（性質） ＯＯ，１０，５１，０ＦＴ１
４５ １００ １１０ １２０
１１０（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） ＡＪｌ１９５９ １００ ８５
６５ ４３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｈｉｓｓ） ＦＦＬ−５１００１０５１０２９８ （５−Ｆ’−Ｔｒｐｒ、 Ｌｅｕ−） ＡＪ １１９６０ １００
７２ ４８ ２５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、
Ｌｅｕ”’、 ＨｉｓＳ）ＡＪ１１４８３
１００ ８９ ８１ ７６（５−Ｆ−
Ｔｒｐｒ、 ＩＭｒ） ＡＪ１１９６１ １００
４８ ２２ １５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｉ
Ｍｒ、 Ｈｉｓ８）（Ｌ−ヒスチジン無添加区の生育度
を１００とした。） 本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、そ
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有、機微量栄
養素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源と
してはグルコース、シュークロース、マルトース、澱粉
氷解物、糖蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、
クエン醒等も単独或は上記他の炭素源と併用して用いら
れる。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩
、尿素、ペプトン等有機或は無機の窒素源が使用される
。有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸
、核酸、更にこれらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育
にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する場
合には要求される栄養素を補添することが必要である。
５．０ ？／Ｊｌ硫酸アンモニウム
１０ 〃ＫＨ２Ｐ０．
８．６５ ｔｔＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，２ｔｔ ＦｅＳＯ４・７Ｈ，，０１０ＷＦ１７′ノＭｎ５Ｏ，−
４Ｈ２０１０／／ クエン酸ナトリウム ０．５ ｉ／ｉ（×
Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加） ６− 第２表 Ｌ−ヒスチジン感受性 （相対生育度で示す） Ｌ−ヒスチジン（？／丞） 菌株（性質） ＯＯ，１０，５１，０ＦＴ１
４５ １００ １１０ １２０
１１０（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） ＡＪｌ１９５９ １００ ８５
６５ ４３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｈｉｓｓ） ＦＦＬ−５１００１０５１０２９８ （５−Ｆ’−Ｔｒｐｒ、 Ｌｅｕ−） ＡＪ １１９６０ １００
７２ ４８ ２５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、
Ｌｅｕ”’、 ＨｉｓＳ）ＡＪ１１４８３
１００ ８９ ８１ ７６（５−Ｆ−
Ｔｒｐｒ、 ＩＭｒ） ＡＪ１１９６１ １００
４８ ２２ １５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 Ｉ
Ｍｒ、 Ｈｉｓ８）（Ｌ−ヒスチジン無添加区の生育度
を１００とした。） 本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、そ
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有、機微量栄
養素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源と
してはグルコース、シュークロース、マルトース、澱粉
氷解物、糖蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、
クエン醒等も単独或は上記他の炭素源と併用して用いら
れる。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩
、尿素、ペプトン等有機或は無機の窒素源が使用される
。有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸
、核酸、更にこれらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育
にアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する場
合には要求される栄養素を補添することが必要である。
無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウ
ム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
ム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
培養は通常の培養条件下で行えば良く、ｐＨを５ないし
９、温度を２０ないし４０ｉＣに制御しつつ１〜４日間
振盪培養又は通気攪拌培養することによ）培養液中に著
量のトリプトファンが蓄積される。培養中にｐＨが下が
る場合には、炭素カルシウムを別殺菌して加えるか又は
アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する
。又、有、磯酸を炭素源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸
又は有機酸で中和する。
９、温度を２０ないし４０ｉＣに制御しつつ１〜４日間
振盪培養又は通気攪拌培養することによ）培養液中に著
量のトリプトファンが蓄積される。培養中にｐＨが下が
る場合には、炭素カルシウムを別殺菌して加えるか又は
アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する
。又、有、磯酸を炭素源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸
又は有機酸で中和する。
培養液からトリプトファンを採取する方法は、公知のト
リプトファン回収方法に従って行えば良く、培養液から
菌体を除去した後濃縮晶析する方法或はイオン交換クロ
マトグラフィー等によって採取される。
リプトファン回収方法に従って行えば良く、培養液から
菌体を除去した後濃縮晶析する方法或はイオン交換クロ
マトグラフィー等によって採取される。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表に示した組成のトリプトファン生産用培地２
ｏｒｎｌを５００ｍ１容フラスコに分注し、１１０Ｃで
１０分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞれＺ
スラント量植えつけ３０ｔＺ’で９６時間振盪培養した
。それぞれの培養液中のトリプトファン生成量は第４表
の如くであった。
ｏｒｎｌを５００ｍ１容フラスコに分注し、１１０Ｃで
１０分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞれＺ
スラント量植えつけ３０ｔＺ’で９６時間振盪培養した
。それぞれの培養液中のトリプトファン生成量は第４表
の如くであった。
第３表 トリプトファン生産用培地組成（ｐＨ７，０）
成 分 濃 度グルコー
ス ８０ ？／ノ塩化アンモニウ
ム １０／／ＫＩ（２ＰＯ，ｌ ｔ
ｔ ＫＣｌ
２ １Ｍｎ５Ｏ，−７Ｈ２０１０”ｆｌ
／） ＦｅＳＯ４−４Ｈ，，０１０／／ カザミノ酸 ４２／ノＭｇ５Ｏ
，・７Ｈ２００，４／／ ＣａＣＯ２４０〃 第４表 トリプトファン生成量 ＦＴ１４５
１．９ＡＪ：ＬＬ９５９
４．６ＦＦＬ５
４．２ＡＪ１１９６０
７．８ＡＪ１１４８３
６．２特許出願人 味°の゛′素
株式会社
成 分 濃 度グルコー
ス ８０ ？／ノ塩化アンモニウ
ム １０／／ＫＩ（２ＰＯ，ｌ ｔ
ｔ ＫＣｌ
２ １Ｍｎ５Ｏ，−７Ｈ２０１０”ｆｌ
／） ＦｅＳＯ４−４Ｈ，，０１０／／ カザミノ酸 ４２／ノＭｇ５Ｏ
，・７Ｈ２００，４／／ ＣａＣＯ２４０〃 第４表 トリプトファン生成量 ＦＴ１４５
１．９ＡＪ：ＬＬ９５９
４．６ＦＦＬ５
４．２ＡＪ１１９６０
７．８ＡＪ１１４８３
６．２特許出願人 味°の゛′素
株式会社
Claims (1)
- バチルス属に属し、Ｌ−ヒスチジン感受性及びトリプト
ファンアナログ耐性を有しかつＬ−トリプトファン生産
能を有する微生物を培養して培養液中にＬ−）リプドア
アンを生成、蓄積せしめ、該Ｌ−）リプドアアンを採取
することを特徴とする発酵法によるＬ −トＩＪブトフ
ァンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15561182A JPS5945899A (ja) | 1982-09-07 | 1982-09-07 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15561182A JPS5945899A (ja) | 1982-09-07 | 1982-09-07 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5945899A true JPS5945899A (ja) | 1984-03-14 |
| JPH028720B2 JPH028720B2 (ja) | 1990-02-26 |
Family
ID=15609802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15561182A Granted JPS5945899A (ja) | 1982-09-07 | 1982-09-07 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5945899A (ja) |
-
1982
- 1982-09-07 JP JP15561182A patent/JPS5945899A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH028720B2 (ja) | 1990-02-26 |
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