JPS6078590A - 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法Info
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- JPS6078590A JPS6078590A JP58188041A JP18804183A JPS6078590A JP S6078590 A JPS6078590 A JP S6078590A JP 58188041 A JP58188041 A JP 58188041A JP 18804183 A JP18804183 A JP 18804183A JP S6078590 A JPS6078590 A JP S6078590A
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- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
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- C12P13/222—Phenylalanine
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法にょるＬ−フェニルアラニン（υ下、革
にフェニルアラニンという、）ノ製造法に関する。
にフェニルアラニンという、）ノ製造法に関する。
従来、発酵法によるフェニルアラニンの製造法としては
、ブレビバクテリウム属、又はミクロコツカス属細菌の
チロシン要求菌を使用する方法（特公昭３７−６３４５
）、生育−チロジンを要求しかつ５−メチルトリプトフ
ァンに耐性を有する変異株を使用する方法（特公昭５ｌ
−２１０７９）、フェニルアラニンアナログに耐性を有
する変異株を使用する方法（特公昭５ｌ−２８７１２）
、更にはデコイニン感受性変具株を使用する方法（特公
昭５６−６４７９３）等が知られている。
、ブレビバクテリウム属、又はミクロコツカス属細菌の
チロシン要求菌を使用する方法（特公昭３７−６３４５
）、生育−チロジンを要求しかつ５−メチルトリプトフ
ァンに耐性を有する変異株を使用する方法（特公昭５ｌ
−２１０７９）、フェニルアラニンアナログに耐性を有
する変異株を使用する方法（特公昭５ｌ−２８７１２）
、更にはデコイニン感受性変具株を使用する方法（特公
昭５６−６４７９３）等が知られている。
一方、バチルス属についてはＬ−チロシン要求性変異株
を使用する方法（特公昭３７−６３４５）、あるいはト
リプトファン要求性、ｐ−フルオロフェニルアラニンＩ
ｔｌ性及ヒβ−２−チェニルアラニン耐性の変異株を使
用する方法（特開昭４８−６７４８８ ）等が知られて
いるが、そのフェニルアラニン蓄積最は０．２〜０．４
１１７ｄｉ程度であり、上記ブレビバクテリウム属又は
コリネバクテリウム属のフェニルアラニン生産菌に比べ
て著るしく劣っている。この為、フェニルアラニンの工
業的生産を目的とした菌株の育種は殆んど検問がなされ
ず、実際にフェニルアラニン生産性の高いものは知られ
ていない。
を使用する方法（特公昭３７−６３４５）、あるいはト
リプトファン要求性、ｐ−フルオロフェニルアラニンＩ
ｔｌ性及ヒβ−２−チェニルアラニン耐性の変異株を使
用する方法（特開昭４８−６７４８８ ）等が知られて
いるが、そのフェニルアラニン蓄積最は０．２〜０．４
１１７ｄｉ程度であり、上記ブレビバクテリウム属又は
コリネバクテリウム属のフェニルアラニン生産菌に比べ
て著るしく劣っている。この為、フェニルアラニンの工
業的生産を目的とした菌株の育種は殆んど検問がなされ
ず、実際にフェニルアラニン生産性の高いものは知られ
ていない。
本発明者等は、バチルス属の微生物によるフェニルアラ
ニンの工業生産を目的とした〆フェニルアラニン生産菌
の育種を行った。その結果、バチルス属の微生物に、ト
リブトファンとチロシンの複要求性且つ、メタフロロフ
ェニルアラニン（ｍＦＰ）及び又は桂皮酸に耐性を付与
したところ多路のフェニルアラニンを生成、蓄積する菌
株が存在することを見い出した。
ニンの工業生産を目的とした〆フェニルアラニン生産菌
の育種を行った。その結果、バチルス属の微生物に、ト
リブトファンとチロシンの複要求性且つ、メタフロロフ
ェニルアラニン（ｍＦＰ）及び又は桂皮酸に耐性を付与
したところ多路のフェニルアラニンを生成、蓄積する菌
株が存在することを見い出した。
本発明はこの知見に基づいて完成されたものである。
本発明において用いられる微生物は、具体的には次のよ
うな変異株が挙げられる。
うな変異株が挙げられる。
バチルス・ズブチリス ＡＪ１２０９５ＦＥＲＭ−Ｐ
Ｖ７＞’ｉｌら （Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｍＦＰｒ）バ
チルス・ズブチリス ＡＪ１２０９６ＦＥＲＭ−Ｐ ７
Ｊ７ （Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｃｉｎｒ）バチルス・ズ
ブチリス ＡＪ１２０９７ＦＥＲＭ−Ｐ ’７）ＪＰ
（Ｔｒｐ−＋Ｔｙｒ−、ｍＦＰｒ＋ｃｉｎｒ）Ｔｒｐ−
： ）リゾトファン安求 Ｔｙｒ−： チロシン要求 ｍＦＰｒ： メタフロロフェニルアラニン耐性ａｉｎｒ
：桂皮酸耐性 本発明の変異株はノ々チルス属の野生株又は公知のフェ
ニルアラニン生産菌を親株として、これに通常の変異誘
導操作、例えば紫外線、Ｘ線朋射あるいはＮ−メチル−
Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン（ＮＧと略す）
、亜硝酸等の化学変異剤処理を施し、変異誘導法として
育種することが可能である。
Ｖ７＞’ｉｌら （Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｍＦＰｒ）バ
チルス・ズブチリス ＡＪ１２０９６ＦＥＲＭ−Ｐ ７
Ｊ７ （Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｃｉｎｒ）バチルス・ズ
ブチリス ＡＪ１２０９７ＦＥＲＭ−Ｐ ’７）ＪＰ
（Ｔｒｐ−＋Ｔｙｒ−、ｍＦＰｒ＋ｃｉｎｒ）Ｔｒｐ−
： ）リゾトファン安求 Ｔｙｒ−： チロシン要求 ｍＦＰｒ： メタフロロフェニルアラニン耐性ａｉｎｒ
：桂皮酸耐性 本発明の変異株はノ々チルス属の野生株又は公知のフェ
ニルアラニン生産菌を親株として、これに通常の変異誘
導操作、例えば紫外線、Ｘ線朋射あるいはＮ−メチル−
Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン（ＮＧと略す）
、亜硝酸等の化学変異剤処理を施し、変異誘導法として
育種することが可能である。
実験例１
バチルス・ズブチリスＡＪ １１７０８よシ誘導した斜
面培地で培養し、生育した菌体を集めて１７５０Ｍリン
酸緩衝液（…７．０）に懸濁しく１６９個／ｄの菌体を
含む）、これにＮＧを加え（ＮＧ濃度は２００μｇｙｍ
ｌ） 、室淵で３０分間保持した。
面培地で培養し、生育した菌体を集めて１７５０Ｍリン
酸緩衝液（…７．０）に懸濁しく１６９個／ｄの菌体を
含む）、これにＮＧを加え（ＮＧ濃度は２００μｇｙｍ
ｌ） 、室淵で３０分間保持した。
ＮＧ処理菌体を同リン酸緩衝液で充分洗浄した後、ｍＦ
Ｐ１０００μｇ／ｄを含む第１表に示す最少寒天平板培
地に塗布し、３１．５℃で７日間培養した。
Ｐ１０００μｇ／ｄを含む第１表に示す最少寒天平板培
地に塗布し、３１．５℃で７日間培養した。
第１表 最少培地の組成
（ＰＨ７，０）
成 分 濃 度
グルコース ２０１／１
硫酸アンモニウム ５１
尿 素 ２１
ＫＨ２ＰＯ４１１
Ｍｇ、ＳＯ４・７Ｈ２０１＃
Ｆｅ ＋Ｍｎ イオｙ ２ｐｐｍ
ビオチン ５０μｍ１／Ｉｌｊ
サイアミン塩酸堪 ２００１
Ｌ−）リゾトファン １５０■／ｌ
Ｌ−チロシン １５０ 〃
寒天平板上に生育したコロニーのうち、大きなものをｍ
ＦＰ ｉｌ性株として採取した。このようにして得られ
た耐性株の内には親株よジフェニルアラニン生産能の優
れたものが多く見出された０このうち、生産能の最も高
い菌株ＡＪ１２０９５ を選んだ。同様の変異操作によ
、ｊＤＡＪ１２０９４ に桂皮酸耐性を付与してＡＪ１
２０９６を、ＡＪ１２０９５に桂皮酸耐性を付与してＡ
Ｊ１２０９７を誘導した。
ＦＰ ｉｌ性株として採取した。このようにして得られ
た耐性株の内には親株よジフェニルアラニン生産能の優
れたものが多く見出された０このうち、生産能の最も高
い菌株ＡＪ１２０９５ を選んだ。同様の変異操作によ
、ｊＤＡＪ１２０９４ に桂皮酸耐性を付与してＡＪ１
２０９６を、ＡＪ１２０９５に桂皮酸耐性を付与してＡ
Ｊ１２０９７を誘導した。
実験例２
第２表に示す濃度のｍＦＰ又はｃｌｎを含む最少培地（
第１表）を試験管に４．０ｄ宛分注し加熱殺菌した。こ
の培地に上記変異誘導法を一定量接種し３１．５℃、２
４時間振盪培養した。各培養液を水で２６倍に稀釈し、
その５６２ ｎｍに於ける吸光度を測定して生育度をめ
た。その結果を第２表に示す。尚、第２表には薬剤無添
加時の生育度を１００とする相対生育値を示しだ。
第１表）を試験管に４．０ｄ宛分注し加熱殺菌した。こ
の培地に上記変異誘導法を一定量接種し３１．５℃、２
４時間振盪培養した。各培養液を水で２６倍に稀釈し、
その５６２ ｎｍに於ける吸光度を測定して生育度をめ
た。その結果を第２表に示す。尚、第２表には薬剤無添
加時の生育度を１００とする相対生育値を示しだ。
第２表 薬剤耐性度
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、Ｌ
−チロシンＬ−）リプドアアンその他必要に応じてアミ
ノ酸、ビタミン、核酸等の有機微量栄養素を含有する通
常の栄養培地が使用される。
−チロシンＬ−）リプドアアンその他必要に応じてアミ
ノ酸、ビタミン、核酸等の有機微量栄養素を含有する通
常の栄養培地が使用される。
炭素源としては使用する変異株の利用可能なものであれ
ば良く、例えばグルコース、７ラクトース、シー−クロ
ース、マルトース、澱粉分解物糖蜜等の糖類が使用され
、その他、エタノール、プロパツール等のアルコール類
、酢酸、クエン酸等の有機酸類等が使用される。
ば良く、例えばグルコース、７ラクトース、シー−クロ
ース、マルトース、澱粉分解物糖蜜等の糖類が使用され
、その他、エタノール、プロパツール等のアルコール類
、酢酸、クエン酸等の有機酸類等が使用される。
窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、アンモニア、肉エキス等無機あるいけ有機の窒素源が
使用される。有轡微隆栄腔素としてはアミノ酸、ビタミ
ン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有するにプト
ン、カザミノ酸、酵母エキス、蛋白分解物等が使用され
る。
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、アンモニア、肉エキス等無機あるいけ有機の窒素源が
使用される。有轡微隆栄腔素としてはアミノ酸、ビタミ
ン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有するにプト
ン、カザミノ酸、酵母エキス、蛋白分解物等が使用され
る。
Ｌ−チロシン、Ｌ−）リプドアアン等のアミノ酸を要求
する変異株を使用するときは、要求する栄養素等を補添
することが必要である・ 培養は好気的条件で行うことが望ましく、培養期間中培
地のＰＨを５ないし９、温度を２０℃ないし４０℃に制
御しつつ１日ないし４日間振盪培養又は通気撹拌培養す
るととによりフェニルアラニンが著量培養液中に蓄積さ
れる。培養液からフェニルアラニンを採取する方法は公
知の方法に従って行えば良く、培養液から菌体を合部除
去した後、濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を
用いる方法等により採取される。
する変異株を使用するときは、要求する栄養素等を補添
することが必要である・ 培養は好気的条件で行うことが望ましく、培養期間中培
地のＰＨを５ないし９、温度を２０℃ないし４０℃に制
御しつつ１日ないし４日間振盪培養又は通気撹拌培養す
るととによりフェニルアラニンが著量培養液中に蓄積さ
れる。培養液からフェニルアラニンを採取する方法は公
知の方法に従って行えば良く、培養液から菌体を合部除
去した後、濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を
用いる方法等により採取される。
以下、実施例にて謂、明する。
実施例１
下記第３表に示ナフェニルアラニン生産用培地をｐｆＪ
Ｍし、５００ｍ１容振盪フラスコに２Ｑｍｌ宛分注し、
１２０℃で１０分間加熱滅、菌した。これに別途加熱殺
菌した炭酸カルシウム粉末１０ｇを補添した。
Ｍし、５００ｍ１容振盪フラスコに２Ｑｍｌ宛分注し、
１２０℃で１０分間加熱滅、菌した。これに別途加熱殺
菌した炭酸カルシウム粉末１０ｇを補添した。
第３表 フェニルアラニン生産培地の組成グルコース
８０．０！！ ＮＩ（４Ｃｔ１０．０１ ＫＣｌ ２．０１ ＫＨ２ＰＯ４１，０゜ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４＃ Ｆｅ” ＋ Ｍｎ” 各２ｐｐｍ Ｌ−チロシン ０．１５ｇ Ｌ−）リプドアアン ０．２０ｇ （※Ｔ−Ｎ濃度 ４１／ｄｌ） この培地に第４表に示すフェニルアラニン生産菌を１白
金耳接種し、３０℃で７２時間振盪培養した。培養液中
のフェニルアラニン生成量を測定し、その結果を＃４表
に示した。
８０．０！！ ＮＩ（４Ｃｔ１０．０１ ＫＣｌ ２．０１ ＫＨ２ＰＯ４１，０゜ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，４＃ Ｆｅ” ＋ Ｍｎ” 各２ｐｐｍ Ｌ−チロシン ０．１５ｇ Ｌ−）リプドアアン ０．２０ｇ （※Ｔ−Ｎ濃度 ４１／ｄｌ） この培地に第４表に示すフェニルアラニン生産菌を１白
金耳接種し、３０℃で７２時間振盪培養した。培養液中
のフェニルアラニン生成量を測定し、その結果を＃４表
に示した。
第４表 Ｌ−フェニルアラニンの蓄積量ＡＪ １２０９
４ Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−２，ＩＡＪ １２０９５ Ｔｒ
ｐ７．Ｔｙｒ−、ｍＦＰｒ７．６ＡＪ １２０９６ Ｔ
ｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｃｉｎｒ７．５ＡＪ １２０９７
Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｍＦＰ’、ｃｉｎ’ １０．０特
許出願人 味の素株式会社
４ Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−２，ＩＡＪ １２０９５ Ｔｒ
ｐ７．Ｔｙｒ−、ｍＦＰｒ７．６ＡＪ １２０９６ Ｔ
ｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｃｉｎｒ７．５ＡＪ １２０９７
Ｔｒｐ−、Ｔｙｒ−、ｍＦＰ’、ｃｉｎ’ １０．０特
許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- バチルス属に属しトリプトファンとチロシンの複要求性
を示し、且つ、メタフロロフェニルアラニン及び又は桂
皮酸に耐性を有するＬ−フェニルアラニン生産菌を液体
培地中で培養してＬ−フェニルアラニンを生成蓄積せし
め、これを採取することを特数とする発酵法にょるＬ−
フェニルアラニンの製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58188041A JPS6078590A (ja) | 1983-10-07 | 1983-10-07 | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
| EP84306803A EP0138526B1 (en) | 1983-10-07 | 1984-10-05 | Method of producing l-phenylalanine by fermentation, and bacteria therefor |
| DE8484306803T DE3477938D1 (en) | 1983-10-07 | 1984-10-05 | Method of producing l-phenylalanine by fermentation, and bacteria therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58188041A JPS6078590A (ja) | 1983-10-07 | 1983-10-07 | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6078590A true JPS6078590A (ja) | 1985-05-04 |
| JPH0347840B2 JPH0347840B2 (ja) | 1991-07-22 |
Family
ID=16216637
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58188041A Granted JPS6078590A (ja) | 1983-10-07 | 1983-10-07 | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0138526B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6078590A (ja) |
| DE (1) | DE3477938D1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0514405B1 (en) * | 1990-01-31 | 1995-01-04 | The Upjohn Company | Strain ral-4, useful for production of small proteins and peptides |
| DE19644566A1 (de) | 1996-10-26 | 1998-04-30 | Forschungszentrum Juelich Gmbh | Mikrobielle Herstellung von Substanzen aus dem aromatischen Stoffwechsel / I |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4867488A (ja) * | 1971-12-20 | 1973-09-14 | ||
| JPS58134994A (ja) * | 1982-02-05 | 1983-08-11 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3660235A (en) * | 1969-08-22 | 1972-05-02 | Ajinomoto Kk | Method for producing phenylalanine by fermentation |
| US3909353A (en) * | 1973-03-12 | 1975-09-30 | Ajinomoto Kk | Method of producing L-phenylalanine by fermentation |
| JPS50123878A (ja) * | 1974-03-18 | 1975-09-29 | ||
| JPS58158193A (ja) * | 1982-03-15 | 1983-09-20 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
| JPS5971698A (ja) * | 1982-10-15 | 1984-04-23 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
-
1983
- 1983-10-07 JP JP58188041A patent/JPS6078590A/ja active Granted
-
1984
- 1984-10-05 EP EP84306803A patent/EP0138526B1/en not_active Expired
- 1984-10-05 DE DE8484306803T patent/DE3477938D1/de not_active Expired
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4867488A (ja) * | 1971-12-20 | 1973-09-14 | ||
| JPS58134994A (ja) * | 1982-02-05 | 1983-08-11 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0138526B1 (en) | 1989-04-26 |
| DE3477938D1 (en) | 1989-06-01 |
| EP0138526A2 (en) | 1985-04-24 |
| EP0138526A3 (en) | 1987-03-04 |
| JPH0347840B2 (ja) | 1991-07-22 |
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