JPS59120092A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法Info
- Publication number
- JPS59120092A JPS59120092A JP22791382A JP22791382A JPS59120092A JP S59120092 A JPS59120092 A JP S59120092A JP 22791382 A JP22791382 A JP 22791382A JP 22791382 A JP22791382 A JP 22791382A JP S59120092 A JPS59120092 A JP S59120092A
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- JP
- Japan
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- tryptophan
- phosphonomethyl
- glycine
- resistance
- bis
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法１こよるＬ−）リブトファン（以下、
トリプトファンと記す）の製造法ｅこ関する。
トリプトファンと記す）の製造法ｅこ関する。
従来トリプトファンの製造法としては、トリプトファン
の前駆物質であるアントラニル酸、インドール或は３−
インドールピルビン酸よりドリフトファンを製造する方
法が知られている。
の前駆物質であるアントラニル酸、インドール或は３−
インドールピルビン酸よりドリフトファンを製造する方
法が知られている。
これら前駆物質を使用する方法ｔこ創し、前駆物質を使
用しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属Ｐこ属し
トリプトファンアナログＶこ耐性を有する変異株を使用
して直接発酵法によりトリプトファンを生産する方法（
特公昭４Ｂ−１８８２８、特公昭５３−３’９５１７
）が開発されている。
用しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属Ｐこ属し
トリプトファンアナログＶこ耐性を有する変異株を使用
して直接発酵法によりトリプトファンを生産する方法（
特公昭４Ｂ−１８８２８、特公昭５３−３’９５１７
）が開発されている。
そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用いて更ｔ
こ糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法によ
り安価Ｐこ製造する方法を開発すべく研究を行った結果
、バチルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐
性の他にＮ−（ホスホノメチル）グリシン又はＮ、Ｎ−
ビス−（ホスホノメチル）グリシンに耐性を付与した微
生物の中ｉこ従来知られているものより更に犬“量のＬ
’−）ｕブトファンを生産する能力を有する菌株がある
ことを見い出した。本発明はこの知見に基づいて更Ｐこ
研究の結果完成されたものである。
こ糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法によ
り安価Ｐこ製造する方法を開発すべく研究を行った結果
、バチルス属の上記のようなトリプトファンアナログ耐
性の他にＮ−（ホスホノメチル）グリシン又はＮ、Ｎ−
ビス−（ホスホノメチル）グリシンに耐性を付与した微
生物の中ｉこ従来知られているものより更に犬“量のＬ
’−）ｕブトファンを生産する能力を有する菌株がある
ことを見い出した。本発明はこの知見に基づいて更Ｐこ
研究の結果完成されたものである。
本発明の方法で使用される変異株はバチルス属ンこ属し
、Ｎ−（ホスホノメチル）グリシンまたはＮ、Ｎ−ビス
−（ホスホ／メチル）グリシンＰこ耐姓を有し、かつＬ
−）リプトファンを生産する能力を有する微生物であり
、例えば次のような変異株が使用される。
、Ｎ−（ホスホノメチル）グリシンまたはＮ、Ｎ−ビス
−（ホスホ／メチル）グリシンＰこ耐姓を有し、かつＬ
−）リプトファンを生産する能力を有する微生物であり
、例えば次のような変異株が使用される。
バチルス・ズブチリス ＡＪ１’１９８６ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ ６Ｂ４７（５−ＦＴｒ、ＰＭＧｒ） バチルス・ズブチリス ヘＪｓ１９ｓ７ ＦＥＲＭ−
Ｐ ６８４８（５−ＦＴｒ、ＢＰＭＧｒ） バチルス・ズブチリス Ａ’Ｊ１１９８８ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ ６８４９（５−ＦＴｒ、 ＩＭｒ、ＰＭＧｒ） バチルス・ズブチリ７、 ＡＪ１１９８９ ＦＥ
ＲＭ−Ｐ６８５０（５−ＦＴｒ、 ＩＭｒ、ＢＰＭＧｒ
）５−ＦＴｒ： ５−フルオロトリプトファン耐性ＩＭ
ｒ：インドールマイシン耐性 ＰＭＧ：Ｎ−（ホスホノメチル）グリシンＢＰＭＧ ：
Ｎ 、Ｎ−ビス−（ポスボッメチル）グリシン これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファ／アナログ耐性、のＬ−）リプトファン生産菌
を親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、紫外
線照射或はＮ−メチル−Ｎ’−二トローＮ−二トロソグ
アニジン、亜硝酸等の化学薬剤処理を施した後、親株が
生育できないような濃度のＮＴ（ホスホノメチル）グリ
シンまたｔｙおよびＮ、Ｎ−ビア、−（ホスホノメチル
）グリシンを含有する寒天平板培地で培養し、該平板培
地上１こ生育するコルニーを分離することＶこよって得
られる。
Ｍ−Ｐ ６Ｂ４７（５−ＦＴｒ、ＰＭＧｒ） バチルス・ズブチリス ヘＪｓ１９ｓ７ ＦＥＲＭ−
Ｐ ６８４８（５−ＦＴｒ、ＢＰＭＧｒ） バチルス・ズブチリス Ａ’Ｊ１１９８８ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ ６８４９（５−ＦＴｒ、 ＩＭｒ、ＰＭＧｒ） バチルス・ズブチリ７、 ＡＪ１１９８９ ＦＥ
ＲＭ−Ｐ６８５０（５−ＦＴｒ、 ＩＭｒ、ＢＰＭＧｒ
）５−ＦＴｒ： ５−フルオロトリプトファン耐性ＩＭ
ｒ：インドールマイシン耐性 ＰＭＧ：Ｎ−（ホスホノメチル）グリシンＢＰＭＧ ：
Ｎ 、Ｎ−ビス−（ポスボッメチル）グリシン これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファ／アナログ耐性、のＬ−）リプトファン生産菌
を親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えば、紫外
線照射或はＮ−メチル−Ｎ’−二トローＮ−二トロソグ
アニジン、亜硝酸等の化学薬剤処理を施した後、親株が
生育できないような濃度のＮＴ（ホスホノメチル）グリ
シンまたｔｙおよびＮ、Ｎ−ビア、−（ホスホノメチル
）グリシンを含有する寒天平板培地で培養し、該平板培
地上１こ生育するコルニーを分離することＶこよって得
られる。
上記の親株としては、トリプトファンアナログ耐性の他
にトリプトファン生産Ｆこ有用な性質を有するトリプト
ファン生産菌、例えば、Ｌ−フルギニン、Ｌ−リジン、
Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フｘ ＝ ／Ｌ、 ７ラニン
要求性のトリプトファン生産菌（特公昭５３−３’９５
１７号公報）、更ｒこはトリプトファンアナログ耐性で
かつインドールマイシン耐性のトリプトファン生産菌（
特開昭５６−９２７９６号公報）等が使用される。具体
例としては次のようなトリプトファンアナログ耐性のト
リプトファン生産菌が使用される。
にトリプトファン生産Ｆこ有用な性質を有するトリプト
ファン生産菌、例えば、Ｌ−フルギニン、Ｌ−リジン、
Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フｘ ＝ ／Ｌ、 ７ラニン
要求性のトリプトファン生産菌（特公昭５３−３’９５
１７号公報）、更ｒこはトリプトファンアナログ耐性で
かつインドールマイシン耐性のトリプトファン生産菌（
特開昭５６−９２７９６号公報）等が使用される。具体
例としては次のようなトリプトファンアナログ耐性のト
リプトファン生産菌が使用される。
バチルス・ズブチリス ＦＴ−１４５ＦＥＲＭ−Ｐ１
７８３（５−ＦＴｒ） バチルス・ズブチリス ＡＪ１１４８３ ＦＥＲＭ
−Ｐ５２１６（５−Ｆ、Ｔｒ、ＩＭｒ） その他、本発明の変異株はバチルス属の野生株全親株と
し、これにＮ−（ホスホノメチル）グリシンまたは／お
よびＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル）グリシンの耐性
を行年した後、トリプトン、 アンアナロ
グ耐性を付午するこ七Ｐこよっても誘導できる。
７８３（５−ＦＴｒ） バチルス・ズブチリス ＡＪ１１４８３ ＦＥＲＭ
−Ｐ５２１６（５−Ｆ、Ｔｒ、ＩＭｒ） その他、本発明の変異株はバチルス属の野生株全親株と
し、これにＮ−（ホスホノメチル）グリシンまたは／お
よびＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル）グリシンの耐性
を行年した後、トリプトン、 アンアナロ
グ耐性を付午するこ七Ｐこよっても誘導できる。
なお、上記のトリプトファンアナログとはバチルス属Ｐ
こ属する微生物の生育を阻害し、この生育阻害がＬ−）
１１ブトフアンの存在１こよって部分的又は完全に解除
されるような薬剤をいい、例えば５−メチルトリブトフ
ァン等の５，６又は７−低級フルキルトリプトファン、
５−フルオロトリプトファン等の５又は６−バロゲノト
リプトフアン、トリプトファンハイドロキサメート、又
は７−アザトリプトファン等がある。
こ属する微生物の生育を阻害し、この生育阻害がＬ−）
１１ブトフアンの存在１こよって部分的又は完全に解除
されるような薬剤をいい、例えば５−メチルトリブトフ
ァン等の５，６又は７−低級フルキルトリプトファン、
５−フルオロトリプトファン等の５又は６−バロゲノト
リプトフアン、トリプトファンハイドロキサメート、又
は７−アザトリプトファン等がある。
Ｕ下、実験（ＭＵこて本発明のＮ−（ホスホノメチル）
グリシン耐性あるいはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル
）グリシン耐性のトリプトファン生産菌のＮ−（ホスホ
ノメチル）グリシンあるいはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノ
メチル）グリシンに対する耐性度を示す。
グリシン耐性あるいはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル
）グリシン耐性のトリプトファン生産菌のＮ−（ホスホ
ノメチル）グリシンあるいはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノ
メチル）グリシンに対する耐性度を示す。
実施例
第１表に示す組成の最少培地にＮ−（ホスホノメチル）
グリシンまたはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル）グリ
シンを第２表に示す濃度となるよう加え、試験管に４
ｍｌ宛分注し加熱滅菌して液体培地を作成した。上記液
体培地に薬剤無添加培地で２４時間振盪培養した第２表
に示したバチルス・ズブチリスの変異株の培養液を０．
Ｉ ＷＬｌ宛接種し、３０Ｃで４８時間振盪培養を行い
５７０ ｎｍの吸光度を測定することにより生育度を測
定した。その結果を第２表Ｐこ示す。
グリシンまたはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル）グリ
シンを第２表に示す濃度となるよう加え、試験管に４
ｍｌ宛分注し加熱滅菌して液体培地を作成した。上記液
体培地に薬剤無添加培地で２４時間振盪培養した第２表
に示したバチルス・ズブチリスの変異株の培養液を０．
Ｉ ＷＬｌ宛接種し、３０Ｃで４８時間振盪培養を行い
５７０ ｎｍの吸光度を測定することにより生育度を測
定した。その結果を第２表Ｐこ示す。
第１表 最少培地の組成（ｐＨ７−０）成 分
濃 度グルコース
５．ｏ ｙ／を硫酸アンモニ
ウム １．０〃ＫＨ２ＰＯ４８，６５
／／ Ｍｇ５Ｏ＜ ・７Ｈｓｌｂ 、Ｑ２
〃Ｆｅ５０． ！ ７Ｈ，０１０ｍ９／ｌＭｎ５０
４ｍ４ＨｓＯ１０ クエン酸ナトリウム ０．５ ｔ／
１ＫＯＨ２’、１８ 〃 第２表 耐性株の生育度（相対生育度で示す）本発明で
使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、その他必要
ｔこ応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素を含
有する通常の栄養培地が使用される。炭素源としてはグ
ルツース、シュークロース、マルトース、澱粉氷解物、
糖蜜等が使用され、その他エタノニル、酢酸、クエン酸
等も単独或は上記他の炭素源と併用して用いられる。窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素、
ペプトン等有機或は無機の窒素源が使用される。有機微
量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核酸、
更にこれらのものを含有するペプトン、カザミノ酸、酵
母エキス、−大豆蛋白分解物等が使用され、生育にアミ
ノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する場合Ｐこ
は要求される栄養素を補添することが必要である。無機
塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩
、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
濃 度グルコース
５．ｏ ｙ／を硫酸アンモニ
ウム １．０〃ＫＨ２ＰＯ４８，６５
／／ Ｍｇ５Ｏ＜ ・７Ｈｓｌｂ 、Ｑ２
〃Ｆｅ５０． ！ ７Ｈ，０１０ｍ９／ｌＭｎ５０
４ｍ４ＨｓＯ１０ クエン酸ナトリウム ０．５ ｔ／
１ＫＯＨ２’、１８ 〃 第２表 耐性株の生育度（相対生育度で示す）本発明で
使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、その他必要
ｔこ応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素を含
有する通常の栄養培地が使用される。炭素源としてはグ
ルツース、シュークロース、マルトース、澱粉氷解物、
糖蜜等が使用され、その他エタノニル、酢酸、クエン酸
等も単独或は上記他の炭素源と併用して用いられる。窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素、
ペプトン等有機或は無機の窒素源が使用される。有機微
量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核酸、
更にこれらのものを含有するペプトン、カザミノ酸、酵
母エキス、−大豆蛋白分解物等が使用され、生育にアミ
ノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する場合Ｐこ
は要求される栄養素を補添することが必要である。無機
塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩
、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
培養は通常の培養条件下で行えば良く、ｐＨを５ないし
９、温度を２０かいし４０Ｕに制御しつつｌ〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養することｒこより培養液中に著
量のトリプトファンが蓄積される。培養中ｐ’ｃ ｐ
Ｈが下がる場合には、炭素カルシウムを別殺菌して加え
るか又はアンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで
中和する。又、有機酸を炭素源とする場合はｐＨの上昇
な鉱酸又は有機酸で中和する。
９、温度を２０かいし４０Ｕに制御しつつｌ〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養することｒこより培養液中に著
量のトリプトファンが蓄積される。培養中ｐ’ｃ ｐ
Ｈが下がる場合には、炭素カルシウムを別殺菌して加え
るか又はアンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで
中和する。又、有機酸を炭素源とする場合はｐＨの上昇
な鉱酸又は有機酸で中和する。
培養液からトリプトファンを採取する方法は、公知のト
リプトファン回収方法に従って行えば良く、培養液から
菌体を除去した後濃縮晶析する方法或はイオン交換クロ
マトグラフィー等１こよって採取される。
リプトファン回収方法に従って行えば良く、培養液から
菌体を除去した後濃縮晶析する方法或はイオン交換クロ
マトグラフィー等１こよって採取される。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表ｒこ示した組成のトリプトファン生″産用培
地２０ｒｎｌを５００ｍ１容フラスコに分注し、１１０
ｒで１０分間加熱した後、第４表Ｖこ示す微生物をそれ
ぞれ猶スラント量植えつけ３０ｒ：で９６時間振盪培養
した。それぞれの培養液中のトリプトファン生成量は第
４表の如くであった。
地２０ｒｎｌを５００ｍ１容フラスコに分注し、１１０
ｒで１０分間加熱した後、第４表Ｖこ示す微生物をそれ
ぞれ猶スラント量植えつけ３０ｒ：で９６時間振盪培養
した。それぞれの培養液中のトリプトファン生成量は第
４表の如くであった。
グルコース ８０ｔ／を塩化ア
ンモニウム １０ＫＨ，ＰＯ４１ ＫＣＩ
２ １１ＭｎＳＯ４４Ｈ２
０１０ｍｇ／Ｌ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１０〃 カザミノ酸 ４２／１Ｍｇ５
Ｏ４−７Ｈ２００，４〃 ＣａＣＯ３４０ 第４表 トリプトファン生成量
ンモニウム １０ＫＨ，ＰＯ４１ ＫＣＩ
２ １１ＭｎＳＯ４４Ｈ２
０１０ｍｇ／Ｌ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１０〃 カザミノ酸 ４２／１Ｍｇ５
Ｏ４−７Ｈ２００，４〃 ＣａＣＯ３４０ 第４表 トリプトファン生成量
Claims (1)
- バチルス属ｅこ属し、Ｎ−（ホスホノメチル）グリシン
またはＮ、Ｎ−ビス−（ホスホノメチル）クリシンンこ
耐性を有するＬ−トリプトファン生産性の微生物を液体
培地中Ｖこ好気的ｅこ培養し、培養液中にＬ −１−’
）ブトファンを生成せしめ、これを採取するこ七を特徴
とするＬ−）！Ｊブトファンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22791382A JPS59120092A (ja) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22791382A JPS59120092A (ja) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59120092A true JPS59120092A (ja) | 1984-07-11 |
| JPH029795B2 JPH029795B2 (ja) | 1990-03-05 |
Family
ID=16868255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22791382A Granted JPS59120092A (ja) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59120092A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010279283A (ja) * | 2009-06-04 | 2010-12-16 | Kao Corp | アルカリプロテアーゼ高生産菌 |
| CN109133704A (zh) * | 2018-08-09 | 2019-01-04 | 姜香 | 一种微生物修复水泥基材料的制备方法 |
-
1982
- 1982-12-27 JP JP22791382A patent/JPS59120092A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010279283A (ja) * | 2009-06-04 | 2010-12-16 | Kao Corp | アルカリプロテアーゼ高生産菌 |
| CN109133704A (zh) * | 2018-08-09 | 2019-01-04 | 姜香 | 一种微生物修复水泥基材料的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH029795B2 (ja) | 1990-03-05 |
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