JPH027636B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、発酵法によるＬ−トリプトフアン
（以下、トリプトフアンと記す）の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法（特公昭48−18828、特公昭
53−39517）が開発されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、バチルス属の上記のような
トリプトフアンアナログ耐性の他に更に６−ジア
ゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン（以下、
DONと略す）に耐性を有する微生物の中に、従
来知られているものより更に大量のトリプトフア
ンを生産する能力を有する菌株があることを見い
出した。この発明はこの知見に基づいて更に研究
の結果完成されたものである。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属しトリプトフアンアナログ及びDONに耐
性を有し、かつトリプトフアンを生産する能力を
有する微生物であり、例えば、次のような変異株
が使用される。 バチルス・ズブチリス AJ11741
FERM−P6253（５−Ｆ−Trp^r、DON^r） バチルス・ズブチリス AJ11745
FERM−P6257（５−Ｆ−Trp^r、Leu^-、
DON^r） バチルス・ズブチリス AJ11746
FERM−P6258（５−Ｆ−Trp^r、IM^r、
DON^r） ５−Ｆ−Trp^r：５−フルオロトリプトフアン耐
性 ５−Ｆ−Trp^r：５−フロロトリプトフアン耐性 DON^r：DON耐性 Leu^-：Ｌ−ロイシン要求性 IM^r：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性のトリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射あるいはＮ−メチル−
N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、
NGと略す。）、亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、
変異処理した菌株を親株が生育できないような量
のDONを含有する平板寒天培地で培養し、該平
板培地上に生育するコロニーを分離することによ
つて得られる。 上記の親株としてはトリプトフアンアナログ耐
性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有す
るトリプトフアン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニ
ン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フエ
ニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌（特
公昭53−39517号公報）、再にはトリプトフアンア
ナログ耐性でかつインドールマイシン耐性のトリ
プトフアン生産菌（特開昭56−92796号公報）等
が使用される。具体例としては次のようなトリプ
トフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌が
使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145
FERM−P1783（５−Ｆ−Trp^r） バチルス・ズブチリス FFL−５
FERM−P1786（５−Ｆ−Trp^r＋Leu^-） バチルス・ズブチリス AJ11483
FERM−P5286（５−Ｆ−Trp^r＋IM^r） その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これにDON耐性を付与した後トリ
プトフアンアナログ耐性を付与することによつて
も誘導することができる。この場合にも再にトリ
プトフアン生産に有用な性質、例えば、Ｌ−フエ
ニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ
−ヒスチジン等のアミノ酸に対する栄養要求性、
あるいはフエニルアラニンアナログ耐性等を付与
することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明のDON耐性トリプ
トフアン生産菌のDONに対する耐性度を示す。 実験例 第１表に示す組成の最少培地を直径16.5mmの試
験管に４mlづつ分注し加熱滅菌した後、別途フイ
ルター除菌したDON溶液を第２表に示す濃度に
なるように添加した。 上記DON含有液体培地にDONを含まない最少
培地で24時間培養したバチルス・ズブチリス
AJ11741、AJ11745及びAJ11746の培養液を夫々
0.1ml迄接種し、30℃で48時間振盪培養を行い、
培養液の570nｍに於る吸光度を測定した。その
結果を第２表に示す。

【表】

【表】 相対生育度はDON無添加の場合を100とした。 本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース、澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独あるいは上記他の炭素源と併用して用いられ
る。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム
塩、硝酸塩、尿素、ペプトン等有機あるいは無機
の窒素源が使用される。有機微量栄養素としては
アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核酸、再に、これ
らのものを含有するペプトン、カガミノ酸、酵母
エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育にア
ミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する
場合には要求される栄養素を補添することが必要
である。無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウ
ム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用
される。 培養は通常条件下で行えば良く、PHを５ないし
９、温度を20ないし40℃に制御しつつ１〜４日間
振盪培養又は通気撹拌培養することにより培養液
中に著量のトリプトフアンが蓄積される。培養中
にPHが下がる場合には、炭酸カルシウムを別殺菌
して加えるか又はアンモニア水、アンモニアガス
等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭素源と
する場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中和す
る。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法、あるいはイオン交換クロマトグラフイー等に
よつて採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第３表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500mlを500ml容のフラスコに分注
し、それに第３表に示す微生物をそれぞれ1/3ス
ラント量植えつけ30℃で96時間振盪培養した。そ
れぞれの培養液中のトリプトフアン生成量は第４
表の如くであつた。

【表】

【表】

【表】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ バチルス属に属し、トリプトフアンアナログ
   及び６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン
   に耐性を有し、かつＬ−トリプトフアン生産能を
   有する微生物を液体培地中に好気的に培養し、培
   養液中にＬ−トリプトフアンを生成蓄積せしめ、
   これを採取することを特徴とするＬ−トリプトフ
   アンの製造法。