JPH027636B2 - - Google Patents

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JPH027636B2
JPH027636B2 JP20457381A JP20457381A JPH027636B2 JP H027636 B2 JPH027636 B2 JP H027636B2 JP 20457381 A JP20457381 A JP 20457381A JP 20457381 A JP20457381 A JP 20457381A JP H027636 B2 JPH027636 B2 JP H027636B2
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JP
Japan
Prior art keywords
tryptophan
don
resistance
producing
resistant
Prior art date
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Expired - Lifetime
Application number
JP20457381A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS58107190A (ja
Inventor
Yasushi Morinaga
Yasuhiko Toride
Osamu Kurahashi
Hitoshi Ei
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Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
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Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
Priority to JP20457381A priority Critical patent/JPS58107190A/ja
Publication of JPS58107190A publication Critical patent/JPS58107190A/ja
Publication of JPH027636B2 publication Critical patent/JPH027636B2/ja
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるL−トリプトフアン
(以下、トリプトフアンと記す)の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは3−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法(特公昭48−18828、特公昭
53−39517)が開発されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、バチルス属の上記のような
トリプトフアンアナログ耐性の他に更に6−ジア
ゾ−5−オキソ−L−ノルロイシン(以下、
DONと略す)に耐性を有する微生物の中に、従
来知られているものより更に大量のトリプトフア
ンを生産する能力を有する菌株があることを見い
出した。この発明はこの知見に基づいて更に研究
の結果完成されたものである。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属しトリプトフアンアナログ及びDONに耐
性を有し、かつトリプトフアンを生産する能力を
有する微生物であり、例えば、次のような変異株
が使用される。 バチルス・ズブチリス AJ11741
FERM−P6253(5−F−Trpr、DONr) バチルス・ズブチリス AJ11745
FERM−P6257(5−F−Trpr、Leu-
DONr) バチルス・ズブチリス AJ11746
FERM−P6258(5−F−Trpr、IMr
DONr) 5−F−Trpr:5−フルオロトリプトフアン耐
性 5−F−Trpr:5−フロロトリプトフアン耐性 DONr:DON耐性 Leu-:L−ロイシン要求性 IMr:インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性のトリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射あるいはN−メチル−
N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン(以下、
NGと略す。)、亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、
変異処理した菌株を親株が生育できないような量
のDONを含有する平板寒天培地で培養し、該平
板培地上に生育するコロニーを分離することによ
つて得られる。 上記の親株としてはトリプトフアンアナログ耐
性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有す
るトリプトフアン生産菌、例えば、L−アルギニ
ン、L−リジン、L−ロイシンもしくはL−フエ
ニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌(特
公昭53−39517号公報)、再にはトリプトフアンア
ナログ耐性でかつインドールマイシン耐性のトリ
プトフアン生産菌(特開昭56−92796号公報)等
が使用される。具体例としては次のようなトリプ
トフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌が
使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145
FERM−P1783(5−F−Trpr) バチルス・ズブチリス FFL−5
FERM−P1786(5−F−Trpr+Leu-) バチルス・ズブチリス AJ11483
FERM−P5286(5−F−Trpr+IMr) その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これにDON耐性を付与した後トリ
プトフアンアナログ耐性を付与することによつて
も誘導することができる。この場合にも再にトリ
プトフアン生産に有用な性質、例えば、L−フエ
ニルアラニン、L−チロシン、L−ロイシン、L
−ヒスチジン等のアミノ酸に対する栄養要求性、
あるいはフエニルアラニンアナログ耐性等を付与
することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明のDON耐性トリプ
トフアン生産菌のDONに対する耐性度を示す。 実験例 第1表に示す組成の最少培地を直径16.5mmの試
験管に4mlづつ分注し加熱滅菌した後、別途フイ
ルター除菌したDON溶液を第2表に示す濃度に
なるように添加した。 上記DON含有液体培地にDONを含まない最少
培地で24時間培養したバチルス・ズブチリス
AJ11741、AJ11745及びAJ11746の培養液を夫々
0.1ml迄接種し、30℃で48時間振盪培養を行い、
培養液の570nmに於る吸光度を測定した。その
結果を第2表に示す。
【表】
【表】 相対生育度はDON無添加の場合を100とした。 本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース、澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独あるいは上記他の炭素源と併用して用いられ
る。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム
塩、硝酸塩、尿素、ペプトン等有機あるいは無機
の窒素源が使用される。有機微量栄養素としては
アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核酸、再に、これ
らのものを含有するペプトン、カガミノ酸、酵母
エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育にア
ミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する
場合には要求される栄養素を補添することが必要
である。無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウ
ム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用
される。 培養は通常条件下で行えば良く、PHを5ないし
9、温度を20ないし40℃に制御しつつ1〜4日間
振盪培養又は通気撹拌培養することにより培養液
中に著量のトリプトフアンが蓄積される。培養中
にPHが下がる場合には、炭酸カルシウムを別殺菌
して加えるか又はアンモニア水、アンモニアガス
等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭素源と
する場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中和す
る。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法、あるいはイオン交換クロマトグラフイー等に
よつて採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 1 下記第3表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500mlを500ml容のフラスコに分注
し、それに第3表に示す微生物をそれぞれ1/3ス
ラント量植えつけ30℃で96時間振盪培養した。そ
れぞれの培養液中のトリプトフアン生成量は第4
表の如くであつた。
【表】
【表】
【表】

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1 バチルス属に属し、トリプトフアンアナログ
    及び6−ジアゾ−5−オキソ−L−ノルロイシン
    に耐性を有し、かつL−トリプトフアン生産能を
    有する微生物を液体培地中に好気的に培養し、培
    養液中にL−トリプトフアンを生成蓄積せしめ、
    これを採取することを特徴とするL−トリプトフ
    アンの製造法。
JP20457381A 1981-12-18 1981-12-18 発酵法によるl−トリプトフアンの製造法 Granted JPS58107190A (ja)

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JP20457381A JPS58107190A (ja) 1981-12-18 1981-12-18 発酵法によるl−トリプトフアンの製造法

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JP2514791Y2 (ja) * 1989-06-13 1996-10-23 株式会社ミヤギ U型パンチ・ダイセット
JP4849383B2 (ja) * 2008-09-17 2012-01-11 株式会社石垣 ベルト型濃縮機の運転制御方法

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