JPS58107190A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法Info
- Publication number
- JPS58107190A JPS58107190A JP20457381A JP20457381A JPS58107190A JP S58107190 A JPS58107190 A JP S58107190A JP 20457381 A JP20457381 A JP 20457381A JP 20457381 A JP20457381 A JP 20457381A JP S58107190 A JPS58107190 A JP S58107190A
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- JP
- Japan
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- tryptophan
- strain
- resistance
- producing
- culture solution
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法ｅこよるＬ−トリプトファン（以下、
トリプトファンと記す）の製造法ｔこ関する。
トリプトファンと記す）の製造法ｔこ関する。
従来トリプトファンの製造法としては、トリプトファン
の前駆物質であるアントラニル酸、インドール或いは３
−インドールピルビン酸よりトリプトファンを製造する
方法が知られている。
の前駆物質であるアントラニル酸、インドール或いは３
−インドールピルビン酸よりトリプトファンを製造する
方法が知られている。
これら前駆物質を使用する方法にり＋ｊし、前駆物質を
使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属に属し
トリプトファンアナログｅこ耐性を有する変異株を使用
して直接発酵法によりトリプトファンを生産する方法（
特公昭４８−１８８２８、特公昭５ ３ − ３ ９
５ １ ７ ）が開発されている。
使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチルス属に属し
トリプトファンアナログｅこ耐性を有する変異株を使用
して直接発酵法によりトリプトファンを生産する方法（
特公昭４８−１８８２８、特公昭５ ３ − ３ ９
５ １ ７ ）が開発されている。
そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用いて更Ｐ
こ糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法？こ
より安価Ｖこ製造する方法を開発すべく研究を行なった
結果、バチルス属の上記のようなトリプトファンアナロ
グ耐性の他ｅこ更ｅこ６−ジアシー５−オキソ−Ｌ−ノ
ルロイシン（以下、ＤｏＮと略す）ンこ耐性を有する微
生物の中ｅこ、従来知られているものより更に大量のト
リプトファンを生産する能力を有する菌株があることを
見い出した。
こ糖類等の炭素源からトリプトファンを直接発酵法？こ
より安価Ｖこ製造する方法を開発すべく研究を行なった
結果、バチルス属の上記のようなトリプトファンアナロ
グ耐性の他ｅこ更ｅこ６−ジアシー５−オキソ−Ｌ−ノ
ルロイシン（以下、ＤｏＮと略す）ンこ耐性を有する微
生物の中ｅこ、従来知られているものより更に大量のト
リプトファンを生産する能力を有する菌株があることを
見い出した。
この発明はこの知見に基づいて更ｅこ研究の結果完成さ
れたものである。
れたものである。
本発明の方法で使用される変異株は、バチルス属に属し
トリプトファンアナログ及びＤＯＮに耐性を有し、かつ
トリプトファンを生産する能力を有する微生物てあり、
例えば、次のような変異株が使用される。
トリプトファンアナログ及びＤＯＮに耐性を有し、かつ
トリプトファンを生産する能力を有する微生物てあり、
例えば、次のような変異株が使用される。
５−Ｆ−’ｐ ｒ ｐ ｒ＋ ５−フルオロトリプトフ
ァン耐性５−Ｆ−Ｔｒｐｒ： ５−フロロトリプトファ
ン耐性ＤＯＮｒ ： ＤＯＮ耐性 Ｌｅｕ ：Ｌ−ロイシン要求性 ＩＭｒ ：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファンアナログ耐性のトリプトファン生産菌を親株
とし、これｅこ通常の変異誘導操作、例えば、紫外線照
射あるいはＮ−メチル−Ｎ“−二トローＮ−二トロング
アニジン（以下、ＮＧと略す。）、亜硝酸等の化学薬剤
処理を施し、変異処理した菌株を親株が生育できないよ
うな量のＤＯＮを含有する平板寒天培地て培養し、該平
板培地」二に生育するコロニーを分離することによって
得られる。
ァン耐性５−Ｆ−Ｔｒｐｒ： ５−フロロトリプトファ
ン耐性ＤＯＮｒ ： ＤＯＮ耐性 Ｌｅｕ ：Ｌ−ロイシン要求性 ＩＭｒ ：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス属のトリ
プトファンアナログ耐性のトリプトファン生産菌を親株
とし、これｅこ通常の変異誘導操作、例えば、紫外線照
射あるいはＮ−メチル−Ｎ“−二トローＮ−二トロング
アニジン（以下、ＮＧと略す。）、亜硝酸等の化学薬剤
処理を施し、変異処理した菌株を親株が生育できないよ
うな量のＤＯＮを含有する平板寒天培地て培養し、該平
板培地」二に生育するコロニーを分離することによって
得られる。
」二記の親株としてはトリプトファンアナログ耐性の他
Ｆこトリプトファン生産に有用な性質を有するトリプト
ファン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、
Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フェニルアラニン要求性のト
リプトファン生産菌（特公昭５３−３９５１７号公報）
、再ｅこはトリプトファンアナログ耐性でかつインドー
ルマイシン耐性のトリプトファン生産菌（特開昭５６−
９２７９６号公報）等が使用される。具体例としては次
のようなトリプトファンアナログ耐性のトリプトファン
生産菌が使用される。
Ｆこトリプトファン生産に有用な性質を有するトリプト
ファン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、
Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フェニルアラニン要求性のト
リプトファン生産菌（特公昭５３−３９５１７号公報）
、再ｅこはトリプトファンアナログ耐性でかつインドー
ルマイシン耐性のトリプトファン生産菌（特開昭５６−
９２７９６号公報）等が使用される。具体例としては次
のようなトリプトファンアナログ耐性のトリプトファン
生産菌が使用される。
バチルス拳ズブチリス ＦＴ−１４５ＦＥＲＭ−Ｐ１７
８３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） バチルス・ズブチリス ＦＦＬ−５ＦＥＲＭ−Ｐ１７８
６（５−−Ｆ Ｔｒｐｒ＋Ｌｅｕ ）その他、本発
明の変異株はバチルス属の野性株を親株とし、これにＤ
ＯＮ耐性を付与した後トリプトファンアナログ耐性を付
与することｔこよっても誘導することができる。この場
合ｅこも再にドリフトファン生産に有用な性質、例えば
、Ｌ−フェニルアラニ／、Ｌ−チロンン、Ｌ−ロイシン
、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸ンこ対する栄養要求性、
あるいはフェニルアラニンアナログ耐性等を付与するこ
とが望ましい。
８３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） バチルス・ズブチリス ＦＦＬ−５ＦＥＲＭ−Ｐ１７８
６（５−−Ｆ Ｔｒｐｒ＋Ｌｅｕ ）その他、本発
明の変異株はバチルス属の野性株を親株とし、これにＤ
ＯＮ耐性を付与した後トリプトファンアナログ耐性を付
与することｔこよっても誘導することができる。この場
合ｅこも再にドリフトファン生産に有用な性質、例えば
、Ｌ−フェニルアラニ／、Ｌ−チロンン、Ｌ−ロイシン
、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸ンこ対する栄養要求性、
あるいはフェニルアラニンアナログ耐性等を付与するこ
とが望ましい。
以下の実験例シこて、本発明のＤＯＮ耐性トリプトファ
ン生産菌のＤＯＮに対する耐性度を示す。
ン生産菌のＤＯＮに対する耐性度を示す。
実験例
第１表ｅこ示す組成の最少培地を直径１６．ｓｍｍの試
験管（こ４ ｍ６ずつ分注し加熱滅菌した後、別途フィ
ルター除菌したＤ＝ＯＮ溶液を第２表ｅこ示す濃度？こ
なるようＶこ添加した。
験管（こ４ ｍ６ずつ分注し加熱滅菌した後、別途フィ
ルター除菌したＤ＝ＯＮ溶液を第２表ｅこ示す濃度？こ
なるようＶこ添加した。
上記ＤＯＮ含有液体培地にＤＯＮを含まない最少培地で
２４時間培養したバチルス・ズブチリスＡＪ １１’
７ｔｆ／ 、ＡＪ ／／’７’ｌタ １■Ｉ■■
■■ｌ■及びＡＪｌ１７ＬＡ乙 の培養液を夫々ａ、
１ｍｅ宛接種 ５− し、３０Ｃで４８時間振盪培養を行い、培養液の５７０
ｎｍｆこ於る吸光度を測定した。その結果を第２表ｔこ
示す。
２４時間培養したバチルス・ズブチリスＡＪ １１’
７ｔｆ／ 、ＡＪ ／／’７’ｌタ １■Ｉ■■
■■ｌ■及びＡＪｌ１７ＬＡ乙 の培養液を夫々ａ、
１ｍｅ宛接種 ５− し、３０Ｃで４８時間振盪培養を行い、培養液の５７０
ｎｍｆこ於る吸光度を測定した。その結果を第２表ｔこ
示す。
グルコース ５．０ ？／’Ｌ硫
酸アンモニウム １．０〃ＫＨＰＯ８，６
５１１ Ｍｇ５Ｏ４ａ７Ｈ２００，２〃 Ｆ ｅ Ｓ ０４ ・７ Ｈ、ＩＯ１，Ｏｆｎｊｌ ／
１ＭｎＳＯ４＠ ４Ｈ２０１０ クエン酸ナトリウム ｏ、ｓ ｙ／ｌ※Ｌ
−ロイシン１０ ｍｇ／ｄｅ ６− 第２表 耐性株の生育度（相対生育度で示す）ＯＬｉ２
２０ ４０ １００ ＦＴ−１４５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） １０
０ １１ ８ ７ ６ＡＪ／／７（／ （５−Ｆ−Ｔｒ
ｐｒ、ＴＸ）Ｎｒ） １００ ５７ ２６ １１
６ＦＦＬ−５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、Ｌｅｕ”−）
］００１４ ８ ６ ４ＡＪ ノｔ７’ｔＪ
（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、Ｌｅｕ−、ＴＸ）Ｎｒ）
１００ ５４ ２３ ８ ８ＡＪ／／ゲ３
３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、ＩＭｒ） １００
１０ ７ ７ ５ＡＪ／／７５’６（５−Ｆ−
Ｔｒｐｒ＋ＩＭｒ＋ＴＸ）Ｎｒ） １００ ５１ ２
７ １０ ４相対生育度はＤＯＮ無添加の場合を１００
とした。
酸アンモニウム １．０〃ＫＨＰＯ８，６
５１１ Ｍｇ５Ｏ４ａ７Ｈ２００，２〃 Ｆ ｅ Ｓ ０４ ・７ Ｈ、ＩＯ１，Ｏｆｎｊｌ ／
１ＭｎＳＯ４＠ ４Ｈ２０１０ クエン酸ナトリウム ｏ、ｓ ｙ／ｌ※Ｌ
−ロイシン１０ ｍｇ／ｄｅ ６− 第２表 耐性株の生育度（相対生育度で示す）ＯＬｉ２
２０ ４０ １００ ＦＴ−１４５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） １０
０ １１ ８ ７ ６ＡＪ／／７（／ （５−Ｆ−Ｔｒ
ｐｒ、ＴＸ）Ｎｒ） １００ ５７ ２６ １１
６ＦＦＬ−５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、Ｌｅｕ”−）
］００１４ ８ ６ ４ＡＪ ノｔ７’ｔＪ
（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、Ｌｅｕ−、ＴＸ）Ｎｒ）
１００ ５４ ２３ ８ ８ＡＪ／／ゲ３
３（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、ＩＭｒ） １００
１０ ７ ７ ５ＡＪ／／７５’６（５−Ｆ−
Ｔｒｐｒ＋ＩＭｒ＋ＴＸ）Ｎｒ） １００ ５１ ２
７ １０ ４相対生育度はＤＯＮ無添加の場合を１００
とした。
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機塩類、そ
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養
素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源とし
てはグルコース、シュークロース、マルト−ス、澱粉水
解物、糖蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、ク
エン酸等もｌＪｉ独あるいは上記他の炭素源と併用して
用いられる。
の他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養
素を含有する通常の栄養培地が使用される。炭素源とし
てはグルコース、シュークロース、マルト−ス、澱粉水
解物、糖蜜等が使用され、その他エタノール、酢酸、ク
エン酸等もｌＪｉ独あるいは上記他の炭素源と併用して
用いられる。
窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、ペプトン等有機あるいは無機の窒素源が使用される。
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素
、ペプトン等有機あるいは無機の窒素源が使用される。
有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸、
核酸、再に、これらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育
？こアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する
場合ｒこは要求される栄養素を補添することが必要であ
る。無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カル
シウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
核酸、再に、これらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育
？こアミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する
場合ｒこは要求される栄養素を補添することが必要であ
る。無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カル
シウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。
培養は通常条件下て行えば良く、ｐ Ｔ（を５ないし９
、温度を２０ないし４０ｒｒこ制御しつつ１〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養すること？こより培養液中ｔこ
著量のトリプトファンが蓄積される。
、温度を２０ないし４０ｒｒこ制御しつつ１〜４日間振
盪培養又は通気攪拌培養すること？こより培養液中ｔこ
著量のトリプトファンが蓄積される。
培養中ｅこｐ Ｈが下がる場合にこけ、炭酸カルシウム
を別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニアガ
ス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭素源とする
場合はｐ）Ｔの上昇を鉱酸又は有機酸で中和する。
を別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニアガ
ス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭素源とする
場合はｐ）Ｔの上昇を鉱酸又は有機酸で中和する。
培養液からトリプトファンを採取する方法は、公知のト
リプトファン回収方法にこ従って行えば良く、培養液か
ら菌体を除去した後濃縮晶析する方法、あるいはイオン
交換クロマトグラフィー等によって採取される。
リプトファン回収方法にこ従って行えば良く、培養液か
ら菌体を除去した後濃縮晶析する方法、あるいはイオン
交換クロマトグラフィー等によって採取される。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表ｅこ示した組成のトリプトファン生産用培地
２０ｍ１を５００ｍＪを５００ｍ１容のフラ７．コ１こ
分注し、これに第３表Ｖこ示す微生物をそれぞれいスラ
ント量植えつけ３０Ｕで９６時間振盪培養した。それぞ
れの培養液中のトリプトファン生成量は第４表の如くで
あった。
２０ｍ１を５００ｍＪを５００ｍ１容のフラ７．コ１こ
分注し、これに第３表Ｖこ示す微生物をそれぞれいスラ
ント量植えつけ３０Ｕで９６時間振盪培養した。それぞ
れの培養液中のトリプトファン生成量は第４表の如くで
あった。
グルコース ｓｏ ｙ／を塩化
アンモニウム １０ ＫＴ（、ＰＯ４１ ＫＣＩ
２９− ＭｎＳ０４・７Ｈ，Ｏ］ Ｏｍｇ／Ｌ ＦｅＳＯ４”４Ｈ，０１０ カザミノ酸 ４ ２／１ＭｇＳＯ
４・７Ｔ（２００，４／／ ＣａＣ０，４０ ※、−２イツ７ ２０ □、／ｄ。
アンモニウム １０ ＫＴ（、ＰＯ４１ ＫＣＩ
２９− ＭｎＳ０４・７Ｈ，Ｏ］ Ｏｍｇ／Ｌ ＦｅＳＯ４”４Ｈ，０１０ カザミノ酸 ４ ２／１ＭｇＳＯ
４・７Ｔ（２００，４／／ ＣａＣ０，４０ ※、−２イツ７ ２０ □、／ｄ。
（※Ｌ−ロイし専キ°株の場合のみ添加）ＦＴ−１４５
（５ＦＴｒ） １．９０Ａ Ｊ １１７４１
（５ＦＴｒ、ＤＯＮｒ） ２．８Ｆ Ｆ Ｌ
−５（５ＦＴｒ、Ｌｅｕ−） ４２Ａ Ｊ
１１７４５ （５ＦＴｒ、 Ｌｅｕ−、ＤＯＮｒ）
５．３Ａ Ｊ １１４３３ （５ＦＴｒ、ＩＭｒ）
６．２Ａ Ｊ １１７４６ （ｓ ＦＴｒ
、■Ｍｒ、ＤＯＮｒ） ７°５−１０−
（５ＦＴｒ） １．９０Ａ Ｊ １１７４１
（５ＦＴｒ、ＤＯＮｒ） ２．８Ｆ Ｆ Ｌ
−５（５ＦＴｒ、Ｌｅｕ−） ４２Ａ Ｊ
１１７４５ （５ＦＴｒ、 Ｌｅｕ−、ＤＯＮｒ）
５．３Ａ Ｊ １１４３３ （５ＦＴｒ、ＩＭｒ）
６．２Ａ Ｊ １１７４６ （ｓ ＦＴｒ
、■Ｍｒ、ＤＯＮｒ） ７°５−１０−
Claims (1)
- バチルス属Ｖこ属し、トリプトファンアナログ及び６−
ジアシー５−オギソーＬ−ノルロイシンＰこ剛性を有し
、かつＬ−）リプトファン生産能を有する微生物を液体
培地中に好気的ンこ培養し、培養液中ンこＬ−）リプト
ファンを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴と
するＬ−トリプトファン
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20457381A JPS58107190A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20457381A JPS58107190A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58107190A true JPS58107190A (ja) | 1983-06-25 |
| JPH027636B2 JPH027636B2 (ja) | 1990-02-20 |
Family
ID=16492703
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20457381A Granted JPS58107190A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58107190A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH039229U (ja) * | 1989-06-13 | 1991-01-29 | ||
| JP2010069390A (ja) * | 2008-09-17 | 2010-04-02 | Ishigaki Co Ltd | ベルト型濃縮機の運転制御方法 |
-
1981
- 1981-12-18 JP JP20457381A patent/JPS58107190A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH039229U (ja) * | 1989-06-13 | 1991-01-29 | ||
| JP2010069390A (ja) * | 2008-09-17 | 2010-04-02 | Ishigaki Co Ltd | ベルト型濃縮機の運転制御方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH027636B2 (ja) | 1990-02-20 |
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