JPH0347838B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0347838B2 JPH0347838B2 JP58243572A JP24357283A JPH0347838B2 JP H0347838 B2 JPH0347838 B2 JP H0347838B2 JP 58243572 A JP58243572 A JP 58243572A JP 24357283 A JP24357283 A JP 24357283A JP H0347838 B2 JPH0347838 B2 JP H0347838B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tryptophan
- resistance
- sulfaguanidine
- strain
- ferm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 40
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims description 31
- BRBKOPJOKNSWSG-UHFFFAOYSA-N sulfaguanidine Chemical compound NC(=N)NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BRBKOPJOKNSWSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229960004257 sulfaguanidine Drugs 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 7
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- HUNCSWANZMJLPM-UHFFFAOYSA-N 5-methyltryptophan Chemical compound CC1=CC=C2NC=C(CC(N)C(O)=O)C2=C1 HUNCSWANZMJLPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 2
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- AGNGYMCLFWQVGX-AGFFZDDWSA-N (e)-1-[(2s)-2-amino-2-carboxyethoxy]-2-diazonioethenolate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CO\C([O-])=C\[N+]#N AGNGYMCLFWQVGX-AGFFZDDWSA-N 0.000 description 1
- HMVYERAUBSAVAX-UHFFFAOYSA-N 1-nitro-1-nitrosoguanidine Chemical compound NC(=N)N(N=O)[N+]([O-])=O HMVYERAUBSAVAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSTKLPZEZYGQPY-UHFFFAOYSA-N 3-(indol-3-yl)pyruvic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)C(=O)O)=CNC2=C1 RSTKLPZEZYGQPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INPQIVHQSQUEAJ-UHFFFAOYSA-N 5-fluorotryptophan Chemical compound C1=C(F)C=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 INPQIVHQSQUEAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 241001517047 Corynebacterium acetoacidophilum Species 0.000 description 1
- 241001485655 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- GNTVWGDQPXCYBV-UHFFFAOYSA-N Indolmycin Natural products O1C(NC)=NC(=O)C1C(C)C1=CNC2=CC=CC=C12 GNTVWGDQPXCYBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229950011321 azaserine Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNTVWGDQPXCYBV-PELKAZGASA-N indolmycin Chemical compound O1C(NC)=NC(=O)[C@@H]1[C@H](C)C1=CNC2=CC=CC=C12 GNTVWGDQPXCYBV-PELKAZGASA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000014 iron salts Chemical class 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000002696 manganese Chemical class 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 150000002994 phenylalanines Chemical class 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003354 serine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229910021654 trace metal Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は発酵法によるＬ−トリプトフアン（以
下、トリプトフアンと記す）の製造法に関する。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。これ
に対し、本発明者たちは５−メチルトリプトフア
ン、５−フロロトリプトフアン等のトリプトフア
ンアナログに耐性を有するブレビバクテリウム属
及びコリネバクテリウム属の微生物を用いて糖類
等の炭素源から直接発酵法によりトリプトフアン
を製造する方法を開発した（特公昭48−18828、
フランス特許公開2059715号、特開昭55−
162771）。またこれらの菌株にフエニルアラニン、
チロシン等の栄養要求性、フエニルアラニン又は
チロシンのアナログに対する耐性を付与すること
により（特公昭48−18828、フランス特許公開
2059715号）又セリンアナログに対する耐性を付
与することにより（特開昭57−174096）トリプト
フアンの蓄積量が増加することも明らかにした。 本発明者らはこれらの直接発酵法により更に安
価にトリプトフアンを製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、コリネバクテリウム属の従
来知られているトリプトフアン生産菌に更にサル
フア剤として知られているサルフアグアニジンに
対する耐性を付与せしめたところ、従来のトリプ
トフアン生産菌より更に大量にトリプトフアンを
生産することを見い出した。この発明はこの知見
に基づいて更に研究の結果完成されたものであ
る。 本発明のトリプトフアン製造法において用いら
れる微生物はコリネバクテリウム属に属しサルフ
アグアニジンに耐性かつトリプトフアン生産能を
有する変異株である。サルフアグアニジンに対す
る耐性の他に更にトリプトフアンアナログ、フエ
ニルアラニンアナログ、チロシンアナログ、アザ
セリン、インドールマイシン、デコイニン等に対
する薬剤耐性、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チロ
シン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−メチオニン等の栄養
要求性を付与せしめた菌株を用いることによりト
リプトフアン蓄積を増大させることができる。 本発明の変異株の親株はいわゆるＬ−グルタミ
ン酸生産菌として知られているコリネバクテリウ
ム属の微生物である。例えば、コリネバクテリウ
ムグルタミクムATCC13032、コリネバクテリウ
ムアセトアシドフイラムATCC13870、コリネバ
クテリウムリリウムATCC15990等がある。 本発明で用いる変異株はこれら上述の菌株を親
株として変異操作を施して、トリプトフアン生成
に必要な性質、例えば５−メチルトリプトフアン
耐性及びサルフアグアニジン耐性を付与すること
によつて得られる。この場合両性質の付与の順序
は任意に行えば良い。なお変異操作は通常の方
法、例えば紫外線照射或いはＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下NGと略
す）、亜硝酸等の化学薬剤処理によつて行うこと
ができる。 以下に本発明の使用菌株の一例、コリネバクテ
リウムグルタミクムAJ12118（FERM−P7374、
FERM BP−478）の具体的誘導方法とそのサル
フアグアニジンに対する耐性の度合を示す実験例
を示す。 コリネバクテリウムグルタミクムFERM−
P1674を親株として用いた。本菌株は特公昭51−
19037（特開昭49−71194）において例示された菌
株で、その性質としてはフエニルアラニン及びチ
ロシン要求性とフエニルアラニン、チロシンのア
ナログであるパラアミノフエニルアラニン、パラ
フロロフエニルアラニン及びチロシンハイドロキ
サメートに対する耐性が記載されているが、更に
トリプトフアンアナログ耐性を有する。例えばフ
ランス特許公開2059715号記載の方法でこの
FERM−P1674株のトリプトフアンアナログの一
つである５−メチルトリプトフアンに対する耐性
の度合をコリネバクテリウムグルタミクムの野生
株ATCC13032と比較した時、５−メチル−DL−
トリプトフアンを各600、900μｇ／ml含む試験培
地におよそ106コ接種し30℃で４日間培養後野生
株ではそれぞれ122コ、０コに対しFERM−
P1674株ではそれぞれ1000コ以上のコロニーを生
成した。次にFERM−P1674株よりサルフアグア
ニジン耐性株を誘導した。400μｇ／mlのNGで30
℃15分間処理した（生残率12％）のち、第一表に
示す最少培地に親株が生育できない濃度の1000μ
ｇ／mlになるようにサルフアグアニジンを添加し
て平板培地を作製し、これに接種した。30℃に10
日間放置後コロニーとして生育する菌株即ちサル
フアグアニジン耐性変異株を採取しこのうちトリ
プトフアン生産能のすぐれた変異株AJ12118
（FERM−P7374 FERM BP−478）（サルフアグ
アニジン耐性、トリプトフアンアナログ耐性、パ
ラアミノフエニルアラニン耐性、パラフロロフエ
ニルアラニン耐性、チロシンハイドロキサメート
耐性、フエニルアラニン要求性、及びチロシン要
求性）を採取した。この変異株は実施例に示すよ
うに親株よりトリプトフアンを2.16倍多く生成し
た。 次にこのAJ12118株のサルフアグアニジンに対
する耐性の度合を調べた結果を第二表に示す。 第一表に示す最少培地にサルフアグアニジンを
第二表に示した濃度になるように溶解して平板培
地を作り各々の培地に完全培地（酵母エキス10
ｇ／、ポリペプトン10ｇ／、塩化ナトリウム
５ｇ／、グルコース５ｇ／、Ｌ−メチオニン
200mg／、Ｌ−チロシン200mg／、を含みPH
7.0）に生育したコリネバクテリウムグルタミク
ムFERM−P1674及びコリネバクテリウムグルタ
ミクムAJ12118（FERM−P7374 FERM BP478）
をおよそ107コ接種したのち30℃で３日間培養を
行ない生成したコロニー数を調べた。その結果を
第二表に示す。 尚本発明で言うサルフアグアニジン耐性とは上
記培養条件下においてサルフアグアニジンを
1000μｇ／ml含む上記培地に微生物をおよそ107コ
接種し、30℃３日間培養後1000コ以上のコロニー
を生成する場合を言う。 トリプトフアン生産用の培養培地は特に制限す
るところはなく、炭素源、窒素源、無機塩及び必
要ならば有機微量栄養素を含有する通常の培地で
ある。炭素源として炭水化物（グルコース、フラ
クトース或いはデンプン、セルロース等の加水分
解物、糖蜜等）、有機酸（酢酸、クエン酸等）、ア
ルコール（グリセリン、エタノール等）或いは炭
化水素（ノルマルバラフイン等）が使用できる。
窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアガス、その他を、無機塩として
はリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄
塩、マンガン塩、その他微量金属塩等を必要に応
じて使用する。有機微量栄養素としては栄養要求
性のある場合には該当するアミノ酸、ビタミン、
脂肪酸類、有機塩基物質等を適量添加し、必要に
下、トリプトフアンと記す）の製造法に関する。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。これ
に対し、本発明者たちは５−メチルトリプトフア
ン、５−フロロトリプトフアン等のトリプトフア
ンアナログに耐性を有するブレビバクテリウム属
及びコリネバクテリウム属の微生物を用いて糖類
等の炭素源から直接発酵法によりトリプトフアン
を製造する方法を開発した（特公昭48−18828、
フランス特許公開2059715号、特開昭55−
162771）。またこれらの菌株にフエニルアラニン、
チロシン等の栄養要求性、フエニルアラニン又は
チロシンのアナログに対する耐性を付与すること
により（特公昭48−18828、フランス特許公開
2059715号）又セリンアナログに対する耐性を付
与することにより（特開昭57−174096）トリプト
フアンの蓄積量が増加することも明らかにした。 本発明者らはこれらの直接発酵法により更に安
価にトリプトフアンを製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、コリネバクテリウム属の従
来知られているトリプトフアン生産菌に更にサル
フア剤として知られているサルフアグアニジンに
対する耐性を付与せしめたところ、従来のトリプ
トフアン生産菌より更に大量にトリプトフアンを
生産することを見い出した。この発明はこの知見
に基づいて更に研究の結果完成されたものであ
る。 本発明のトリプトフアン製造法において用いら
れる微生物はコリネバクテリウム属に属しサルフ
アグアニジンに耐性かつトリプトフアン生産能を
有する変異株である。サルフアグアニジンに対す
る耐性の他に更にトリプトフアンアナログ、フエ
ニルアラニンアナログ、チロシンアナログ、アザ
セリン、インドールマイシン、デコイニン等に対
する薬剤耐性、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チロ
シン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−メチオニン等の栄養
要求性を付与せしめた菌株を用いることによりト
リプトフアン蓄積を増大させることができる。 本発明の変異株の親株はいわゆるＬ−グルタミ
ン酸生産菌として知られているコリネバクテリウ
ム属の微生物である。例えば、コリネバクテリウ
ムグルタミクムATCC13032、コリネバクテリウ
ムアセトアシドフイラムATCC13870、コリネバ
クテリウムリリウムATCC15990等がある。 本発明で用いる変異株はこれら上述の菌株を親
株として変異操作を施して、トリプトフアン生成
に必要な性質、例えば５−メチルトリプトフアン
耐性及びサルフアグアニジン耐性を付与すること
によつて得られる。この場合両性質の付与の順序
は任意に行えば良い。なお変異操作は通常の方
法、例えば紫外線照射或いはＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下NGと略
す）、亜硝酸等の化学薬剤処理によつて行うこと
ができる。 以下に本発明の使用菌株の一例、コリネバクテ
リウムグルタミクムAJ12118（FERM−P7374、
FERM BP−478）の具体的誘導方法とそのサル
フアグアニジンに対する耐性の度合を示す実験例
を示す。 コリネバクテリウムグルタミクムFERM−
P1674を親株として用いた。本菌株は特公昭51−
19037（特開昭49−71194）において例示された菌
株で、その性質としてはフエニルアラニン及びチ
ロシン要求性とフエニルアラニン、チロシンのア
ナログであるパラアミノフエニルアラニン、パラ
フロロフエニルアラニン及びチロシンハイドロキ
サメートに対する耐性が記載されているが、更に
トリプトフアンアナログ耐性を有する。例えばフ
ランス特許公開2059715号記載の方法でこの
FERM−P1674株のトリプトフアンアナログの一
つである５−メチルトリプトフアンに対する耐性
の度合をコリネバクテリウムグルタミクムの野生
株ATCC13032と比較した時、５−メチル−DL−
トリプトフアンを各600、900μｇ／ml含む試験培
地におよそ106コ接種し30℃で４日間培養後野生
株ではそれぞれ122コ、０コに対しFERM−
P1674株ではそれぞれ1000コ以上のコロニーを生
成した。次にFERM−P1674株よりサルフアグア
ニジン耐性株を誘導した。400μｇ／mlのNGで30
℃15分間処理した（生残率12％）のち、第一表に
示す最少培地に親株が生育できない濃度の1000μ
ｇ／mlになるようにサルフアグアニジンを添加し
て平板培地を作製し、これに接種した。30℃に10
日間放置後コロニーとして生育する菌株即ちサル
フアグアニジン耐性変異株を採取しこのうちトリ
プトフアン生産能のすぐれた変異株AJ12118
（FERM−P7374 FERM BP−478）（サルフアグ
アニジン耐性、トリプトフアンアナログ耐性、パ
ラアミノフエニルアラニン耐性、パラフロロフエ
ニルアラニン耐性、チロシンハイドロキサメート
耐性、フエニルアラニン要求性、及びチロシン要
求性）を採取した。この変異株は実施例に示すよ
うに親株よりトリプトフアンを2.16倍多く生成し
た。 次にこのAJ12118株のサルフアグアニジンに対
する耐性の度合を調べた結果を第二表に示す。 第一表に示す最少培地にサルフアグアニジンを
第二表に示した濃度になるように溶解して平板培
地を作り各々の培地に完全培地（酵母エキス10
ｇ／、ポリペプトン10ｇ／、塩化ナトリウム
５ｇ／、グルコース５ｇ／、Ｌ−メチオニン
200mg／、Ｌ−チロシン200mg／、を含みPH
7.0）に生育したコリネバクテリウムグルタミク
ムFERM−P1674及びコリネバクテリウムグルタ
ミクムAJ12118（FERM−P7374 FERM BP478）
をおよそ107コ接種したのち30℃で３日間培養を
行ない生成したコロニー数を調べた。その結果を
第二表に示す。 尚本発明で言うサルフアグアニジン耐性とは上
記培養条件下においてサルフアグアニジンを
1000μｇ／ml含む上記培地に微生物をおよそ107コ
接種し、30℃３日間培養後1000コ以上のコロニー
を生成する場合を言う。 トリプトフアン生産用の培養培地は特に制限す
るところはなく、炭素源、窒素源、無機塩及び必
要ならば有機微量栄養素を含有する通常の培地で
ある。炭素源として炭水化物（グルコース、フラ
クトース或いはデンプン、セルロース等の加水分
解物、糖蜜等）、有機酸（酢酸、クエン酸等）、ア
ルコール（グリセリン、エタノール等）或いは炭
化水素（ノルマルバラフイン等）が使用できる。
窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアガス、その他を、無機塩として
はリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄
塩、マンガン塩、その他微量金属塩等を必要に応
じて使用する。有機微量栄養素としては栄養要求
性のある場合には該当するアミノ酸、ビタミン、
脂肪酸類、有機塩基物質等を適量添加し、必要に
【表】
【表】
【表】
応じて更に生育促進物質としてアミノ酸、ビタミ
ン、味液（登録商標、大豆加水分解物）、酵母エ
キス、ペプトン、カザミノ酸、NZアミン、コー
ンスチープリカー等が使用できる。 培養条件は、通常の方法でPH５ないし９、温度
は20ないし40℃で好気的条件下に24ないし72時間
培養すれば良い。培養中にPHが下がる場合には炭
酸カルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニ
ア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する。
又、有機酸を炭素源とする場合はPHの上昇を鉱酸
又は有機酸で中和する。 トリプトフアンの単離採取は常法によつて行い
うる。得られたものはペーパークロマトグラム上
のRf値、エーリツヒ試薬によるトリプトフアン
特異反応、或いは微生物定量法による生物活性値
により、トリプトフアン標品のそれらと一致する
ことを確かめトリプトフアンと同定した。 トリプトフアンの定量はロイコノストツク メ
センテロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定
量法に従つて行つた。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第三表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、これ
を第四表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で72時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第四表の如く
であつた。
ン、味液（登録商標、大豆加水分解物）、酵母エ
キス、ペプトン、カザミノ酸、NZアミン、コー
ンスチープリカー等が使用できる。 培養条件は、通常の方法でPH５ないし９、温度
は20ないし40℃で好気的条件下に24ないし72時間
培養すれば良い。培養中にPHが下がる場合には炭
酸カルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニ
ア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する。
又、有機酸を炭素源とする場合はPHの上昇を鉱酸
又は有機酸で中和する。 トリプトフアンの単離採取は常法によつて行い
うる。得られたものはペーパークロマトグラム上
のRf値、エーリツヒ試薬によるトリプトフアン
特異反応、或いは微生物定量法による生物活性値
により、トリプトフアン標品のそれらと一致する
ことを確かめトリプトフアンと同定した。 トリプトフアンの定量はロイコノストツク メ
センテロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定
量法に従つて行つた。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第三表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、これ
を第四表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で72時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第四表の如く
であつた。
【表】
【表】
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属に属しサルフアグアニ
ジンに耐性を有し、かつＬ−トリプトフアン生産
能を有する微生物を液体培地中に好気的に培養し
培養液中にＬ−トリプトフアンを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とするＬ−トリプ
トフアンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24357283A JPS60137298A (ja) | 1983-12-23 | 1983-12-23 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
| DE8484302185T DE3464934D1 (en) | 1983-04-13 | 1984-03-30 | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process |
| EP84302185A EP0128637B1 (en) | 1983-04-13 | 1984-03-30 | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process |
| US06/599,922 US4618580A (en) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | Process for the production of L-tryptophan using sulfaguanidine-resistant microorganisms |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24357283A JPS60137298A (ja) | 1983-12-23 | 1983-12-23 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60137298A JPS60137298A (ja) | 1985-07-20 |
| JPH0347838B2 true JPH0347838B2 (ja) | 1991-07-22 |
Family
ID=17105823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24357283A Granted JPS60137298A (ja) | 1983-04-13 | 1983-12-23 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60137298A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (en) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for production of l-amino acid |
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP2749652A2 (en) | 2008-01-10 | 2014-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing a target substance by fermentation |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2011013707A1 (ja) | 2009-07-29 | 2013-01-10 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57132892A (en) * | 1981-02-12 | 1982-08-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-tyrosine by fermentation method |
-
1983
- 1983-12-23 JP JP24357283A patent/JPS60137298A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57132892A (en) * | 1981-02-12 | 1982-08-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-tyrosine by fermentation method |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (en) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for production of l-amino acid |
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP2749652A2 (en) | 2008-01-10 | 2014-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing a target substance by fermentation |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60137298A (ja) | 1985-07-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH02186995A (ja) | 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 | |
| JPH0491794A (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JPH0347838B2 (ja) | ||
| EP0128637B1 (en) | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process | |
| JPS6224074B2 (ja) | ||
| US5077207A (en) | Process for the production of L-threonine by fermentation | |
| JPH027634B2 (ja) | ||
| JPH0314436B2 (ja) | ||
| JPH0644871B2 (ja) | 発酵法によるｌ−ロイシンの製造法 | |
| JP2721975B2 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| JP2876743B2 (ja) | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 | |
| JP2995816B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JPH0429354B2 (ja) | ||
| JPH0555116B2 (ja) | ||
| JPH02295491A (ja) | Ｌ―イソロイシンの製造方法 | |
| JPS5811198B2 (ja) | ハツコウホウニヨルウロカニンサンノ セイゾウホウ | |
| JPS62296895A (ja) | Ｄ，Ｌ−α−ヒドロキシブチレ−トからのＬ−イソロイシンの製造法、およびコリネバクテリウム・グルタミクムの突然変異体 | |
| JPH0456598B2 (ja) | ||
| JPS6351678B2 (ja) | ||
| JPH027637B2 (ja) | ||
| JPH0555115B2 (ja) | ||
| JPS6234400B2 (ja) | ||
| JPS59154994A (ja) | 発酵法によるアミノ酸の製造法 | |
| JPS59120094A (ja) | 発酵法によるｌ−プロリンの製法 | |
| JPS61260891A (ja) | 発酵法によるｌ−スレオニンの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |