JPS59120094A - 発酵法によるl−プロリンの製法 - Google Patents
発酵法によるl−プロリンの製法Info
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- JPS59120094A JPS59120094A JP22853282A JP22853282A JPS59120094A JP S59120094 A JPS59120094 A JP S59120094A JP 22853282 A JP22853282 A JP 22853282A JP 22853282 A JP22853282 A JP 22853282A JP S59120094 A JPS59120094 A JP S59120094A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はコリネバクテリウム属に属し、ヒボキサンチン
および、イノシトールの少なくとも一種を生育に必要と
するし一プロリン生産性の微生物を培養する発酵法によ
るし一プロリンの製造法に関する。
および、イノシトールの少なくとも一種を生育に必要と
するし一プロリン生産性の微生物を培養する発酵法によ
るし一プロリンの製造法に関する。
L−プロリンは医薬・食品・飼料添加物等として有用な
アミノ酸である。
アミノ酸である。
従来発酵法によるし一プロリンの製造法として。
コリネバクテリウム属の微生物がL−プロリンを生成す
ることは公知である。
ることは公知である。
また2種々の要求性あるいは抵抗性を付与した変異株に
よる方法も知られている。
よる方法も知られている。
好収率の生産菌については常に開発が望まれており、こ
の目的のために変異株について検討の結果コリネバクテ
リウム属細菌にヒボキサンチンおよびイノシトールの少
なくとも1種に対する要求性を付与することにより、プ
ロリン生産能が向上することを見出し2本発明を完成す
るに至った。
の目的のために変異株について検討の結果コリネバクテ
リウム属細菌にヒボキサンチンおよびイノシトールの少
なくとも1種に対する要求性を付与することにより、プ
ロリン生産能が向上することを見出し2本発明を完成す
るに至った。
公に本発明の詳細な説明する。
すなわち3本発明によれば、コリネバクテリウム属に属
し、ヒボキサンチンおよびイノシトールの少なくとも1
種を生育に要求し、かつL−プロリン生産能を有する微
生物を炭素源、窒素源およびその他の栄養物質を含有す
る培地に培養し、生成したし一プロリンを採取すること
によりL−プロリンを製造することができる。
し、ヒボキサンチンおよびイノシトールの少なくとも1
種を生育に要求し、かつL−プロリン生産能を有する微
生物を炭素源、窒素源およびその他の栄養物質を含有す
る培地に培養し、生成したし一プロリンを採取すること
によりL−プロリンを製造することができる。
本発明で用いられる微生物としては、コリネバクテリウ
ム属に属し5 ヒボキサンチンおよびイノシトールの少
なくとも1種を生育に必要とする菌株より選ばれるL−
プロリン生産能を有する菌株が挙げられるが、更に他の
栄養要求性、またはサルファ剤、プロリンアナログ等の
薬剤耐性等を併せ有する菌株も使用できる。本発明に用
いる菌株は上記のごとき性質の他に、他のし一プロリン
生産に寄与するいかなる性質を備えていてもさしつかえ
ない。
ム属に属し5 ヒボキサンチンおよびイノシトールの少
なくとも1種を生育に必要とする菌株より選ばれるL−
プロリン生産能を有する菌株が挙げられるが、更に他の
栄養要求性、またはサルファ剤、プロリンアナログ等の
薬剤耐性等を併せ有する菌株も使用できる。本発明に用
いる菌株は上記のごとき性質の他に、他のし一プロリン
生産に寄与するいかなる性質を備えていてもさしつかえ
ない。
上記要求性変異株を得るための変異誘導法は紫外線照射
、X線照射あるいは薬剤処理(例えばニトロソグアニジ
ン、エチルメタンスルフォネート等)により行う他に自
然変異によっても該変異株は得られる。
、X線照射あるいは薬剤処理(例えばニトロソグアニジ
ン、エチルメタンスルフォネート等)により行う他に自
然変異によっても該変異株は得られる。
本発明の実施例で用いる菌株の変異操作をざらに詳細に
述べる。親株をブイヨン培地で一夜振盪培養後簗菌し、
トリス・マレート緩衝液(硫安1g/j!、MgSO4
H7H200−1g/(1゜CaC7!2・2H205
mg/(1,Fe SO4・7H200,25w/j!
を含ムpH6,00,05Mトリス・アレイン酸緩衝液
)で洗浄した後、ニトロソグアニジン1■/m+を溶か
した同経ih液に懸濁し、30分間30 ’cで静置後
直ちに同緩衝液で2度洗浄し3次いで?゛イヨン培地そ
の41!!濁液を植菌し、60分間30 ’cで振盪培
養を行い、培養後の液を104倍に稀釈してペプトン1
0g/di、iゲ素x*ス0.5 g/lU、 肉x
−+ス0.5 g/41゜NaC(l 0.25g/
di、寒天2.5g/dlからなる栄養培地(pH7,
2)に塗布し、30’14’2日間インキユヘートする
。生育したコロニーを常法により釣菌し、 グルコ−
xl、Og/a、NH4NO30,1g/dJ、NH4
C60,5g/d1.’KOHO,I g/di:
KH2POa 0.34 g/a、 Na 2SOa
0.2g/み、MgSO4・ 7 H200,0
2g/dl、 ビオチン50γ/I2.ビタミン8.
5mg/β、ニコチン酸125mg/β、パントテン
酸カルシウム12.5m1r/β1 トレースエレメン
ト((NH4)2 Mo 702n ・4 H209,
25+ng。
述べる。親株をブイヨン培地で一夜振盪培養後簗菌し、
トリス・マレート緩衝液(硫安1g/j!、MgSO4
H7H200−1g/(1゜CaC7!2・2H205
mg/(1,Fe SO4・7H200,25w/j!
を含ムpH6,00,05Mトリス・アレイン酸緩衝液
)で洗浄した後、ニトロソグアニジン1■/m+を溶か
した同経ih液に懸濁し、30分間30 ’cで静置後
直ちに同緩衝液で2度洗浄し3次いで?゛イヨン培地そ
の41!!濁液を植菌し、60分間30 ’cで振盪培
養を行い、培養後の液を104倍に稀釈してペプトン1
0g/di、iゲ素x*ス0.5 g/lU、 肉x
−+ス0.5 g/41゜NaC(l 0.25g/
di、寒天2.5g/dlからなる栄養培地(pH7,
2)に塗布し、30’14’2日間インキユヘートする
。生育したコロニーを常法により釣菌し、 グルコ−
xl、Og/a、NH4NO30,1g/dJ、NH4
C60,5g/d1.’KOHO,I g/di:
KH2POa 0.34 g/a、 Na 2SOa
0.2g/み、MgSO4・ 7 H200,0
2g/dl、 ビオチン50γ/I2.ビタミン8.
5mg/β、ニコチン酸125mg/β、パントテン
酸カルシウム12.5m1r/β1 トレースエレメン
ト((NH4)2 Mo 702n ・4 H209,
25+ng。
FeC(23・6H20242,5m1r、Zn5Oa
・7H2022mg、CuCβ2・2H2067,51
11g、Mn3O417,5mgを蒸留水に溶かして5
00m1としたもの)1+nl/ff、寒天2.5g/
aの組成を有する最少培地(pl+ 7.2) 、最少
培地にヒボキサンチン50■/βを添加した培地、最少
培地にイノシトール5■/βを添加した培地および最少
培地にヒボキサンチン50■/βとイノシトール5■/
1を添加した培地の4種類の培地に塗布し。
・7H2022mg、CuCβ2・2H2067,51
11g、Mn3O417,5mgを蒸留水に溶かして5
00m1としたもの)1+nl/ff、寒天2.5g/
aの組成を有する最少培地(pl+ 7.2) 、最少
培地にヒボキサンチン50■/βを添加した培地、最少
培地にイノシトール5■/βを添加した培地および最少
培地にヒボキサンチン50■/βとイノシトール5■/
1を添加した培地の4種類の培地に塗布し。
30°Cでインキュベートする。最少培地には生育モす
、他の3種類のいずれかに生育するコロニーの中からL
−プロリン生産性の優れた菌株を得る。
、他の3種類のいずれかに生育するコロニーの中からL
−プロリン生産性の優れた菌株を得る。
かくして得られるヒボキサンチンもしくはイノシトール
要求性でかつL−プロリン生産能を有する菌株としては
、コリネバクテリウム・アセトアジドフィルム ATC
C−13870から変異誘導されたH −2615(ヒ
ボキサンチン要求性株)(微工研菌寄第 6836 号
) 、 H−2617(イノシトール要求性株)(微工
研菌寄第 6837 号)が例示される。これら例示の
菌株の栄養要求性の程度についての実験結果を第1表に
示す。
要求性でかつL−プロリン生産能を有する菌株としては
、コリネバクテリウム・アセトアジドフィルム ATC
C−13870から変異誘導されたH −2615(ヒ
ボキサンチン要求性株)(微工研菌寄第 6836 号
) 、 H−2617(イノシトール要求性株)(微工
研菌寄第 6837 号)が例示される。これら例示の
菌株の栄養要求性の程度についての実験結果を第1表に
示す。
第1表
本発明で用いられる培地としては炭素源、窒素源、無機
物、その他使用菌株の必要とする微量の栄養素を程良く
含有するものであれは合成培地および天然培地のいずれ
も使用可能である。炭素源。
物、その他使用菌株の必要とする微量の栄養素を程良く
含有するものであれは合成培地および天然培地のいずれ
も使用可能である。炭素源。
窒素源は使用菌株の利用可能なものならはいずれの41
11flを用いることかできる。炭素源としては。
11flを用いることかできる。炭素源としては。
クルコース、フラクトース、ンユクロース、マルト−ス
、マンノース、ソルビトール等の炭水化物。
、マンノース、ソルビトール等の炭水化物。
糖アルコール、グリセロール、殿粉、殿粉加水分解物、
糖蜜などが使用でき、また酢酸、ピルビン酸、乳酸、フ
マール酸、グルコン酸などの有機酸。
糖蜜などが使用でき、また酢酸、ピルビン酸、乳酸、フ
マール酸、グルコン酸などの有機酸。
およびグルタミン酸、アスパラギン酸などのアミノ酸類
、あるいはエタノールなどの低級アルコールも使用可能
である。
、あるいはエタノールなどの低級アルコールも使用可能
である。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
、酢酸アンモニウムなどの各種無−t731および有機
アンモニウム塩類、あるいはグルコミン酸、アスパラギ
ン酸などのアミノ酸類、尿素および他の窒素含有物質例
えはペプトン、肉エキス5 コーン・スヂーブ・リカー
、カゼイン加水分解物、大豆粕の加水分解物などの窒素
含有有機物等が使用可能である。
アンモニウム、炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
、酢酸アンモニウムなどの各種無−t731および有機
アンモニウム塩類、あるいはグルコミン酸、アスパラギ
ン酸などのアミノ酸類、尿素および他の窒素含有物質例
えはペプトン、肉エキス5 コーン・スヂーブ・リカー
、カゼイン加水分解物、大豆粕の加水分解物などの窒素
含有有機物等が使用可能である。
L−グルタミン酸塩およびD−、L−オよびDL−ピロ
リドンカルボン酸の添加はし一プロリンの収率向上に特
に効果的である。
リドンカルボン酸の添加はし一プロリンの収率向上に特
に効果的である。
無機物としてはリン酸−カリウム、リン酸二カリウム、
硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第1鉄、硫酸
マンガンおよび炭酸カルシウム等を利用する。
硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第1鉄、硫酸
マンガンおよび炭酸カルシウム等を利用する。
さらに、ビオチン、ニコチンアミド、パントテン酸、サ
イアミン等の微生物の生育に必要なビタミン類も使用す
るが、前記のような他の培地組成に伴って培地に供され
れば特に加えなくともよい。
イアミン等の微生物の生育に必要なビタミン類も使用す
るが、前記のような他の培地組成に伴って培地に供され
れば特に加えなくともよい。
培養は振盪培養あるいは通気攪拌培養などの好気的条件
下で行う。培養温度は一般に20〜40°Cが好適であ
る。培地中のpHは中性付近(pH5〜9)に維持する
ことが高収率を上げるためには望ましいが、これらの温
度、pH条件は本発明の実施に必須の条件ではない。培
養期間は通常1〜5日間で培地中に著量のL−プロリン
が蓄積する。
下で行う。培養温度は一般に20〜40°Cが好適であ
る。培地中のpHは中性付近(pH5〜9)に維持する
ことが高収率を上げるためには望ましいが、これらの温
度、pH条件は本発明の実施に必須の条件ではない。培
養期間は通常1〜5日間で培地中に著量のL−プロリン
が蓄積する。
培養終了後、菌対を除去して実施例に示した如くイオン
交換樹脂および活性炭処理等の公知の方法で培養液から
し一プロリンが回収される。
交換樹脂および活性炭処理等の公知の方法で培養液から
し一プロリンが回収される。
次に実施例を示ず。
実施例1゜
肉エキス5g/β、ペプトン10g/β、酵母エキス3
g/l、食塩3g/Il (pH7,2)からなる組
成の種培養培地30m1を250m1容三角フラスコに
入れ殺菌後、第2表に示す菌株を接種して30℃、22
0rpmで24時間振とう培養する。
g/l、食塩3g/Il (pH7,2)からなる組
成の種培養培地30m1を250m1容三角フラスコに
入れ殺菌後、第2表に示す菌株を接種して30℃、22
0rpmで24時間振とう培養する。
下記の培地組成を有する本発酵培地3’ OOmlずつ
を24容バツフル付三角フラスコに分注し、殺菌後、前
記種培養液30m1を植菌し32°c、22Orpmで
4日間培養する。発酵液中に蓄積したし−プロリンの蓄
積量は第2表に示される。
を24容バツフル付三角フラスコに分注し、殺菌後、前
記種培養液30m1を植菌し32°c、22Orpmで
4日間培養する。発酵液中に蓄積したし−プロリンの蓄
積量は第2表に示される。
本発酵培地
グルコース100g/ff、KH2P○4 3g/ j
2 、 M g S O4・7I]200.5g/β、
硫安10g/p、FeSO4・7H2010■/I2.
ニコチン酸10■/β、チアミン塩酸塩100μg /
7!、ビオチン100μg / 7!、コーン・スチ
ープ・リカー20ビ/β、L−グルタミン酸ソーダ20
g/CおよびCaCO330g/β(pH7,4) 第 2 表 L−プロリン 実施例2゜ 下記のごとき組成を有する種培養培地200m1を2β
容バツフル付三角フラスコに入れ殺菌後H−2615ま
たはH−2617を接種し、30’C22Orpmで2
4時間振盪培養する。
2 、 M g S O4・7I]200.5g/β、
硫安10g/p、FeSO4・7H2010■/I2.
ニコチン酸10■/β、チアミン塩酸塩100μg /
7!、ビオチン100μg / 7!、コーン・スチ
ープ・リカー20ビ/β、L−グルタミン酸ソーダ20
g/CおよびCaCO330g/β(pH7,4) 第 2 表 L−プロリン 実施例2゜ 下記のごとき組成を有する種培養培地200m1を2β
容バツフル付三角フラスコに入れ殺菌後H−2615ま
たはH−2617を接種し、30’C22Orpmで2
4時間振盪培養する。
種培養培地
シュクロース60g/β、KH2P○a 2g/β、
MgS○4・7H200,5g/β。
MgS○4・7H200,5g/β。
Fe3O3・7H2010mg/j!、MnS○4・4
H2010■/β、コーンスチープ・リカー10g//
2.チアミン塩酸塩100μg/l、ビオチン100μ
g/jl!、尿素3g/β(pH7,4) 下記の組成の本発酵培地を211容ジヤー・ファーメン
タ−に700:nlずつ分注し、殺菌後前述の種培養液
を100m1植菌し、32℃にて通気攪拌培養する。培
養中のpHコントロー11番よ西V酸溶液を自動的に添
加してp H7,0?こ維(寺する。
H2010■/β、コーンスチープ・リカー10g//
2.チアミン塩酸塩100μg/l、ビオチン100μ
g/jl!、尿素3g/β(pH7,4) 下記の組成の本発酵培地を211容ジヤー・ファーメン
タ−に700:nlずつ分注し、殺菌後前述の種培養液
を100m1植菌し、32℃にて通気攪拌培養する。培
養中のpHコントロー11番よ西V酸溶液を自動的に添
加してp H7,0?こ維(寺する。
本発酵培地
シュクロース20 g/L 酢酸アンモニウム7g/β
、Mg5Oa・7H200,6g/β。
、Mg5Oa・7H200,6g/β。
KH2PO’4 4 g/ 7!、硫安5g/j2.F
eSO4・7H20’ 10rrg/l、MnSO4
HjH2010mg/l−、CuSO4・5H201■
/β、チアミン塩酸塩100μg / II 、 ビオ
チン100μg / It (p H7,4)72時間
培養によって初発液量番こ対し15%の酢酸を消費し、
H−2615,、H−2617のし−プロリン蓄積量は
それぞれ41g/β、39g/pである。同様に培養し
た親キ朱ATCC−13870は0.8g/βである。
eSO4・7H20’ 10rrg/l、MnSO4
HjH2010mg/l−、CuSO4・5H201■
/β、チアミン塩酸塩100μg / II 、 ビオ
チン100μg / It (p H7,4)72時間
培養によって初発液量番こ対し15%の酢酸を消費し、
H−2615,、H−2617のし−プロリン蓄積量は
それぞれ41g/β、39g/pである。同様に培養し
た親キ朱ATCC−13870は0.8g/βである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 コリネバクテリウム属に属し、ヒボキサンチンおよびイ
ノシトールの少なくとも一種を生育に要求するし一プロ
リン生産能を有する微生物を培養し、培養液中にL−プ
ロリンを生成E積せしめ。 これを採取することを特徴とするし一プロリンの製造法
。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22853282A JPS59120094A (ja) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | 発酵法によるl−プロリンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22853282A JPS59120094A (ja) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | 発酵法によるl−プロリンの製法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS59120094A true JPS59120094A (ja) | 1984-07-11 |
Family
ID=16877878
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP22853282A Pending JPS59120094A (ja) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | 発酵法によるl−プロリンの製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS59120094A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017071890A1 (en) | 2015-10-27 | 2017-05-04 | Nestec S.A. | Natural flavor base and process for its preparation |
-
1982
- 1982-12-27 JP JP22853282A patent/JPS59120094A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017071890A1 (en) | 2015-10-27 | 2017-05-04 | Nestec S.A. | Natural flavor base and process for its preparation |
US10980248B2 (en) | 2015-10-27 | 2021-04-20 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Natural flavor base and process for its preparation |
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