JPS6321479B2 - - Google Patents
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- JPS6321479B2 JPS6321479B2 JP5499680A JP5499680A JPS6321479B2 JP S6321479 B2 JPS6321479 B2 JP S6321479B2 JP 5499680 A JP5499680 A JP 5499680A JP 5499680 A JP5499680 A JP 5499680A JP S6321479 B2 JPS6321479 B2 JP S6321479B2
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- brevibacterium
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、発酵法によるＬ−グルタミンの製造
法に関する。 発酵法によるＬ−グルタミンの製造法として
は、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属の野性株を用いる方法、ブレビバクテリウム
属のサルフア剤に耐性を有する変異株を用いる方
法等が知られている。 本発明者らはより効率のよいＬ−グルタミン生
産菌を見い出すべく研究した結果、ブレビバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属の微生物より
変異誘導したα−ケトマロン酸、またはその塩に
耐性を有する変異株がより高い収率でＬ−グルタ
ミンを生産することを見い出した。この発明はこ
の知見に基づいて完成されるに至つたものであ
る。 本発明において用いられる微生物はブレバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属のα−ケトマ
ロン酸に耐性を有する変異株である。 本変異株の親株は、ブレビバクテリウム属又は
コリネバクテリウム属の特にコリネホルム Ｌ−
グルタミン酸生産性細菌として知られているもの
であり、例えば、以下のものがある。 ブレビバクテリウム・デイバリカタム ATCC
14020 ブレビバクテリウム・フラバム ATCC 14067 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC 13869 ブレビバクテリウム・サツカロリテイカム
ATCC 14066 コリネバクテリウム・アセトアシドフイルム
ATCC 14066 コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC
13032 これらの親株より本発明の変異株を変異誘導す
る方法はＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジンに接触せしめる等の通常の変異誘導
方法が適宜適用できる。変異処理した菌株から本
発明の変異株を分離する方法は、親株が生育でき
ないような量のα−ケトマロン酸を含む固体培地
中に生育できるような菌株を採取することにより
行なわれる。 また、本発明の変異株にサルフアグアニジン耐
性のようにすでにＬ−グルタミンの生産性を向上
せしめることが知られてる性者を更に付加するこ
とにより、収率が向上することが多い。 本発明の変異株の具体的な変異誘導方法と、α
−ケトマロン酸に対する耐性度とを示す実施例に
ついて以下に示す。 ブレビバクテリウム・フラバムATCC 14067又
はコリネバクテリウム・グルタミカムATCC
13032の菌体をＭ／30リン酸緩衝液にけん濁し、
これに250μｇ／mlのＮ−メチル−N′−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジンを加え、31.5℃、に30分
間保つた。ついで菌体を集めＭ／30リン酸緩衝液
でよく洗滌後下記の組成の培地（培地Ａ）に接種
し、31.5℃で４〜10日間培養した。培地上に生育
した菌株のうち、コロニーの大きなものを主に釣
菌した。 釣菌した菌株のほとんどが高いＬ−グルタミン
生産能を有していたが、その内特に生産能の高い
菌株 ブレビバクテリウム・フラバムAJ11573
（FERM−Ｐ 5492）及びコリネバクテリウム・
グルタミカムAJ11574（FERM−Ｐ 5493）を採
取した。 （培地Ａ） グルコース ２ｇ／dl MgSO4・7aq 0.04ｇ／dl MnSO4・7aq １mg／dl ビオチン 5μｇ／dl α−ケトマロン酸 ３ｇ／dl 寒 天 ２ｇ／dl KH2PO4 0.1ｇ／dl FeSO4・7aq １mg／dl （NH4）2SO4 １ｇ／dl サイアミン・HCl 10μｇ／dl 尿 素 0.3ｇ／dl PH7.0 本発明のα−ケトマロン酸耐性菌AJ11573およ
びAJ11574と耐性を有していない非耐性菌
ATCC14067およびATCC13032とについて、α−
ケトマロン酸添加濃度の変化に伴う生育度の変化
を調べたところ、第１表に示す通りであつた。
法に関する。 発酵法によるＬ−グルタミンの製造法として
は、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属の野性株を用いる方法、ブレビバクテリウム
属のサルフア剤に耐性を有する変異株を用いる方
法等が知られている。 本発明者らはより効率のよいＬ−グルタミン生
産菌を見い出すべく研究した結果、ブレビバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属の微生物より
変異誘導したα−ケトマロン酸、またはその塩に
耐性を有する変異株がより高い収率でＬ−グルタ
ミンを生産することを見い出した。この発明はこ
の知見に基づいて完成されるに至つたものであ
る。 本発明において用いられる微生物はブレバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属のα−ケトマ
ロン酸に耐性を有する変異株である。 本変異株の親株は、ブレビバクテリウム属又は
コリネバクテリウム属の特にコリネホルム Ｌ−
グルタミン酸生産性細菌として知られているもの
であり、例えば、以下のものがある。 ブレビバクテリウム・デイバリカタム ATCC
14020 ブレビバクテリウム・フラバム ATCC 14067 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC 13869 ブレビバクテリウム・サツカロリテイカム
ATCC 14066 コリネバクテリウム・アセトアシドフイルム
ATCC 14066 コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC
13032 これらの親株より本発明の変異株を変異誘導す
る方法はＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジンに接触せしめる等の通常の変異誘導
方法が適宜適用できる。変異処理した菌株から本
発明の変異株を分離する方法は、親株が生育でき
ないような量のα−ケトマロン酸を含む固体培地
中に生育できるような菌株を採取することにより
行なわれる。 また、本発明の変異株にサルフアグアニジン耐
性のようにすでにＬ−グルタミンの生産性を向上
せしめることが知られてる性者を更に付加するこ
とにより、収率が向上することが多い。 本発明の変異株の具体的な変異誘導方法と、α
−ケトマロン酸に対する耐性度とを示す実施例に
ついて以下に示す。 ブレビバクテリウム・フラバムATCC 14067又
はコリネバクテリウム・グルタミカムATCC
13032の菌体をＭ／30リン酸緩衝液にけん濁し、
これに250μｇ／mlのＮ−メチル−N′−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジンを加え、31.5℃、に30分
間保つた。ついで菌体を集めＭ／30リン酸緩衝液
でよく洗滌後下記の組成の培地（培地Ａ）に接種
し、31.5℃で４〜10日間培養した。培地上に生育
した菌株のうち、コロニーの大きなものを主に釣
菌した。 釣菌した菌株のほとんどが高いＬ−グルタミン
生産能を有していたが、その内特に生産能の高い
菌株 ブレビバクテリウム・フラバムAJ11573
（FERM−Ｐ 5492）及びコリネバクテリウム・
グルタミカムAJ11574（FERM−Ｐ 5493）を採
取した。 （培地Ａ） グルコース ２ｇ／dl MgSO4・7aq 0.04ｇ／dl MnSO4・7aq １mg／dl ビオチン 5μｇ／dl α−ケトマロン酸 ３ｇ／dl 寒 天 ２ｇ／dl KH2PO4 0.1ｇ／dl FeSO4・7aq １mg／dl （NH4）2SO4 １ｇ／dl サイアミン・HCl 10μｇ／dl 尿 素 0.3ｇ／dl PH7.0 本発明のα−ケトマロン酸耐性菌AJ11573およ
びAJ11574と耐性を有していない非耐性菌
ATCC14067およびATCC13032とについて、α−
ケトマロン酸添加濃度の変化に伴う生育度の変化
を調べたところ、第１表に示す通りであつた。
【表】
第１表の結果は、試験管に分注した下記組成の
最少培地３mlに、α−ケトマロン酸を第１表に示
した各濃度となるように溶解して培養液を調製
し、それぞれの培養液に、最少培地でよく洗滌し
た菌を植えつけ30℃、24時間培養して生育度を調
べたものである。 最少培地組成： グルコース ２ｇ／dl KH2PO4 0.1ｇ／dl MgSO4・7aq 0.04mg／dl FeSO4・7aq １mg／dl サイアミン・HCl 350γ／ ビオチン 100γ／ （NH4）2SO4 １ｇ／dl 尿 素 0.2ｇ／dl （PHは7.0に調製した） これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素
源、無機イオン及び更に必要に応じ、その他の有
機微量栄養素を含有する通常の培地である。 炭素源としてはグルコース、シユークロース、
澱粉加水分解物などの炭水化物、酢酸等の有機酸
等その他が使用できる。 窒素源としてはアンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩、尿素等が好適である。 培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地の
PHを４ないし８に、温度を25ないし37℃に調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。 かくして、１ないし７日間も培養すれば培地中
に著量のＬ−グルタミンが生成蓄積される。 培養液よりＬ−グルタミンを採取する方法はイ
オン交換樹脂による方法等通常の方法で採取でき
る。 実施例 １ グルコース５ｇ／dl、（NH4）2SO40.2ｇ／dl、
尿素0.2ｇ／dl、KH2PO40.15ｇ／dl、MgSO4・
7H2O0.04ｇ／dl、FeSO4・7H2O1mg／dl、サイ
アミン・HCl100μｇ／、ビオチン3μｇ／dl、大
豆蛋白酸加水分解液30mg／dl（全窒素として）を
含む種母培地をPH7.0に調節し、その50mlを500ml
容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。 これに第２表に示す菌株をそれぞれ接種し、
31.5℃に保ちつつ、12時間振盪培養した。 一方、グルコース11ｇ／dl、KH2PO40.25ｇ／
dl、MgSO4・7H2O40mg／dl、（NH4）2SO41.5
ｇ／dl、Na2SO41.5ｇ／dl、FeSO4・7H2O1mg／
dl、ビオチン4γ／、サイアミン・HCl350μｇ／
、大豆蛋白酸加水分解液25mg／dl（全窒素とし
て）を含むPH6.5に調節した培地の285mlを１容
フアーメンターに入れ殺菌した。これに上記種母
培養液をそれぞれ15mlずつ接種した。培養は31.5
℃にてアンモニアガスにてPH6.5ないし6.0に保持
しつつ通気撹拌下に残グルコースが0.5ｇ／dl以
下になる迄行つた。 Ｌ−グルタミンの対糖重量収率は第３表に示す
通りであつた。
最少培地３mlに、α−ケトマロン酸を第１表に示
した各濃度となるように溶解して培養液を調製
し、それぞれの培養液に、最少培地でよく洗滌し
た菌を植えつけ30℃、24時間培養して生育度を調
べたものである。 最少培地組成： グルコース ２ｇ／dl KH2PO4 0.1ｇ／dl MgSO4・7aq 0.04mg／dl FeSO4・7aq １mg／dl サイアミン・HCl 350γ／ ビオチン 100γ／ （NH4）2SO4 １ｇ／dl 尿 素 0.2ｇ／dl （PHは7.0に調製した） これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素
源、無機イオン及び更に必要に応じ、その他の有
機微量栄養素を含有する通常の培地である。 炭素源としてはグルコース、シユークロース、
澱粉加水分解物などの炭水化物、酢酸等の有機酸
等その他が使用できる。 窒素源としてはアンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩、尿素等が好適である。 培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地の
PHを４ないし８に、温度を25ないし37℃に調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。 かくして、１ないし７日間も培養すれば培地中
に著量のＬ−グルタミンが生成蓄積される。 培養液よりＬ−グルタミンを採取する方法はイ
オン交換樹脂による方法等通常の方法で採取でき
る。 実施例 １ グルコース５ｇ／dl、（NH4）2SO40.2ｇ／dl、
尿素0.2ｇ／dl、KH2PO40.15ｇ／dl、MgSO4・
7H2O0.04ｇ／dl、FeSO4・7H2O1mg／dl、サイ
アミン・HCl100μｇ／、ビオチン3μｇ／dl、大
豆蛋白酸加水分解液30mg／dl（全窒素として）を
含む種母培地をPH7.0に調節し、その50mlを500ml
容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。 これに第２表に示す菌株をそれぞれ接種し、
31.5℃に保ちつつ、12時間振盪培養した。 一方、グルコース11ｇ／dl、KH2PO40.25ｇ／
dl、MgSO4・7H2O40mg／dl、（NH4）2SO41.5
ｇ／dl、Na2SO41.5ｇ／dl、FeSO4・7H2O1mg／
dl、ビオチン4γ／、サイアミン・HCl350μｇ／
、大豆蛋白酸加水分解液25mg／dl（全窒素とし
て）を含むPH6.5に調節した培地の285mlを１容
フアーメンターに入れ殺菌した。これに上記種母
培養液をそれぞれ15mlずつ接種した。培養は31.5
℃にてアンモニアガスにてPH6.5ないし6.0に保持
しつつ通気撹拌下に残グルコースが0.5ｇ／dl以
下になる迄行つた。 Ｌ−グルタミンの対糖重量収率は第３表に示す
通りであつた。
【表】
ブレビバクテリウム・フラバム AJ 11573を
上記の方法で培養して、培養液１を得、これよ
り遠心分離にて菌体他を除き、上清を強酸性イオ
ン交換樹脂「ダイヤイオン」SK−1B（NH4 +型）
に通過させた。樹脂を水洗後2N−アンモニア水
にて溶出し、ついで溶出液を濃縮し、これよりＬ
−グルタミンの粗結晶31ｇを得た。
上記の方法で培養して、培養液１を得、これよ
り遠心分離にて菌体他を除き、上清を強酸性イオ
ン交換樹脂「ダイヤイオン」SK−1B（NH4 +型）
に通過させた。樹脂を水洗後2N−アンモニア水
にて溶出し、ついで溶出液を濃縮し、これよりＬ
−グルタミンの粗結晶31ｇを得た。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属に属し、α−ケトマロン酸に耐性であり、Ｌ
−グルタミンを培地中に生成蓄積する能力を有す
る微生物を培養し、培地中に生成蓄積したＬ−グ
ルタミンを採取することを特徴とするＬ−グルタ
ミンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5499680A JPS56151495A (en) | 1980-04-25 | 1980-04-25 | Production of l-glutamine through fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5499680A JPS56151495A (en) | 1980-04-25 | 1980-04-25 | Production of l-glutamine through fermentation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56151495A JPS56151495A (en) | 1981-11-24 |
| JPS6321479B2 true JPS6321479B2 (ja) | 1988-05-07 |
Family
ID=12986260
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5499680A Granted JPS56151495A (en) | 1980-04-25 | 1980-04-25 | Production of l-glutamine through fermentation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS56151495A (ja) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010110216A (ja) | 2007-02-20 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法 |
| JP2010130899A (ja) | 2007-03-14 | 2010-06-17 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| EP2147970B1 (en) | 2007-04-17 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an acidic substance having a carboxyl group |
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| ES2599482T3 (es) | 2011-07-29 | 2017-02-01 | Mitsui Chemicals, Inc. | Microorganismo que tiene un ciclo de fijación de dióxido de carbono introducido en el mismo |
| MY173771A (en) | 2011-11-11 | 2020-02-20 | Ajinomoto Kk | A method for producing a target substance by fermentation |
| US9828618B2 (en) | 2013-01-24 | 2017-11-28 | Mitsui Chemicals, Inc. | Microorganism having carbon dioxide fixation cycle introduced thereinto |
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| JP2016165225A (ja) | 2013-07-09 | 2016-09-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法 |
| EP3061828A4 (en) | 2013-10-23 | 2017-03-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance |
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-
1980
- 1980-04-25 JP JP5499680A patent/JPS56151495A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS56151495A (en) | 1981-11-24 |
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