JPS6115696A - 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法Info
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- JPS6115696A JPS6115696A JP13446184A JP13446184A JPS6115696A JP S6115696 A JPS6115696 A JP S6115696A JP 13446184 A JP13446184 A JP 13446184A JP 13446184 A JP13446184 A JP 13446184A JP S6115696 A JPS6115696 A JP S6115696A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
Ｌ−インロイシンはアミノ酸輸液及び総合アミノ酸製剤
の重要な成分である。本発明はこのＬ−インロイシンを
発酵法で製造する方法を改良するものである。
の重要な成分である。本発明はこのＬ−インロイシンを
発酵法で製造する方法を改良するものである。
ブレビバクテリウム属及びコリネパ夛チリウム属の微生
物がＬ−イソロイシン生産能を有するためには、α−ア
ミノ−β−ヒドロキシ吉草酸（以下ＡＨＶと略す）等へ
の耐性を付与せしめれば良いことがわかっている。更に
、前記の薬剤耐性に加えて０−メチルスレオニン耐性、
β−ヒドロキシロイシン耐性又はトリクロロアラニン耐
性を付与すること、及びプリン系物質又はリジン等の要
求性を付与することによ！１ｌＬ−イソロイシンの生産
能が向上することは知られている。
物がＬ−イソロイシン生産能を有するためには、α−ア
ミノ−β−ヒドロキシ吉草酸（以下ＡＨＶと略す）等へ
の耐性を付与せしめれば良いことがわかっている。更に
、前記の薬剤耐性に加えて０−メチルスレオニン耐性、
β−ヒドロキシロイシン耐性又はトリクロロアラニン耐
性を付与すること、及びプリン系物質又はリジン等の要
求性を付与することによ！１ｌＬ−イソロイシンの生産
能が向上することは知られている。
Ｌ−インロイシンの発酵収率及び蓄積を向上させること
は工業生産上に於て、重要な問題である。
は工業生産上に於て、重要な問題である。
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り、従来よシ知られているブレビバクテリウム属及びコ
リネＲクテリウム属に属するＬ−インロイシン生産能を
有する微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を
見いだすべく研究した結果、メチルリジン（以下ＭＬと
略す。）に耐性を付与した菌株の中に、従来のし一イソ
ロイシン生産菌よシも高収率でＬ−インロイシンを生産
する菌株が存在することを発見した。
り、従来よシ知られているブレビバクテリウム属及びコ
リネＲクテリウム属に属するＬ−インロイシン生産能を
有する微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を
見いだすべく研究した結果、メチルリジン（以下ＭＬと
略す。）に耐性を付与した菌株の中に、従来のし一イソ
ロイシン生産菌よシも高収率でＬ−インロイシンを生産
する菌株が存在することを発見した。
即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリネバクテ
リウム属に属し、ＭＬ耐性を有し、且つＬ−イソロイシ
ン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地中
に生成蓄積したＬ−イソロイシンを採取することを特徴
とするし一イソロイシンの製造法に関する。
リウム属に属し、ＭＬ耐性を有し、且つＬ−イソロイシ
ン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地中
に生成蓄積したＬ−イソロイシンを採取することを特徴
とするし一イソロイシンの製造法に関する。
本発明のＭＬとしてはγ−ＭＬ、β−ＭＬ。
δ−ＭＬ、ε−ＭＬ等のメチルリジンがちシ、これらに
対する耐性菌はＬ−イソロイシン生産能全向上せしめる
のに有効である。
対する耐性菌はＬ−イソロイシン生産能全向上せしめる
のに有効である。
本発明において用いられる微生物はブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属に属し、メチルリジン耐性
を有し、かつＬ−インロイシン生産能を有する変異株で
ある。
属又はコリネバクテリウム属に属し、メチルリジン耐性
を有し、かつＬ−インロイシン生産能を有する変異株で
ある。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に先にＬ−イ
ソロイシン生産能を付与し、次いでＭＬ耐性を付与して
も良いし、又先にＭＬ耐性を付与し、次いでイソロイシ
ン生産能を付与しても良い。
ソロイシン生産能を付与し、次いでＭＬ耐性を付与して
も良いし、又先にＭＬ耐性を付与し、次いでイソロイシ
ン生産能を付与しても良い。
本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテリウム属
又はコリネバクテリウム属等のコリネホルムＬ−グルタ
ミン酸生産菌として知られているものであシ、例えば以
下のものがある。
又はコリネバクテリウム属等のコリネホルムＬ−グルタ
ミン酸生産菌として知られているものであシ、例えば以
下のものがある。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＴ
ＣＣ１３８６９ブレビバクラリウム・デイパリカタム
ＡＴＣＣ１４０２０ブレビバクテリウム・サ
ラカロリティカム ＡＴＣＣ１４０６６プレビパ
クテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１４
０６７コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ１３０３２コリネバクテリウム・アセトアミ
ドフィラム ＡＴＣＣ１３８７０これらの親株より
本発明の変異株を得る方法は、Ｎ−メチル−Ｎ′−二ト
ローＮ−二トロソグアニジン処理する等の適格の変異誘
導方法が適用できる。
ＣＣ１３８６９ブレビバクラリウム・デイパリカタム
ＡＴＣＣ１４０２０ブレビバクテリウム・サ
ラカロリティカム ＡＴＣＣ１４０６６プレビパ
クテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１４
０６７コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ１３０３２コリネバクテリウム・アセトアミ
ドフィラム ＡＴＣＣ１３８７０これらの親株より
本発明の変異株を得る方法は、Ｎ−メチル−Ｎ′−二ト
ローＮ−二トロソグアニジン処理する等の適格の変異誘
導方法が適用できる。
変異処理した菌液から本発明の変異株を分離する方法は
ＭＬを含む培地で生育するような菌株を採取することに
よって行われる。
ＭＬを含む培地で生育するような菌株を採取することに
よって行われる。
本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法とＭＬとし
てｒ−ＭＬを使用した場合のγ−ＭＩ、に対する菌株の
生育度の関係を以下に示す。
てｒ−ＭＬを使用した場合のγ−ＭＩ、に対する菌株の
生育度の関係を以下に示す。
ブイヨン寒天スラント上に３０′Ｃで２４時間生育させ
たブレビバクテリウム・フラバムＡＪ３６８６ＦＥＲＭ
−Ｐ ２４３３ （ＡＴＣＣ１４０６７よシ誘導した
ＡＨＶ耐性株）及びコリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＪ１２１５０ ＦＥＲＭ−Ｐｒ′７６ワ４−（ＡＴＣ
Ｃ１３０３２よシ誘導したＡＨＶ耐性株）の菌体をＭ／
３０！Ｊン酸緩衝液に懸濁し菌体濃度１０〜１０ ／ｍ
ｌの菌体懸濁液Ｋ ５００ ＩＩＩ／ｍｌのＮ−メチル
−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え３０℃
に２０分間保持した。ついで遠心分離して菌体を集め、
Ｍ／３０リン酸緩衝液で良く洗滌した後、下記組成の培
地に接種し、３１．５℃で２〜】０日間培養した。
たブレビバクテリウム・フラバムＡＪ３６８６ＦＥＲＭ
−Ｐ ２４３３ （ＡＴＣＣ１４０６７よシ誘導した
ＡＨＶ耐性株）及びコリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＪ１２１５０ ＦＥＲＭ−Ｐｒ′７６ワ４−（ＡＴＣ
Ｃ１３０３２よシ誘導したＡＨＶ耐性株）の菌体をＭ／
３０！Ｊン酸緩衝液に懸濁し菌体濃度１０〜１０ ／ｍ
ｌの菌体懸濁液Ｋ ５００ ＩＩＩ／ｍｌのＮ−メチル
−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え３０℃
に２０分間保持した。ついで遠心分離して菌体を集め、
Ｍ／３０リン酸緩衝液で良く洗滌した後、下記組成の培
地に接種し、３１．５℃で２〜】０日間培養した。
培地組成
成分 含 ａニ
ゲルコース １．０ ｇ／ ｄｔ尿
素 ０．２〃ＫＨ２ＰＯ４０，
１＃ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１／／ Ｆｅ５０ ・７ Ｈ２Ｏ０，（１０２’ＭｎＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ０，００２／／ビオチン １０
０μ９／ｌザイアミン塩「、′ン膓 １００μｍ
／ｌｒ−ＭＬ Ｏ，２，９／ｄ
ｔ寒 天 ２．０〃寒天培
地に生育した菌株の中からＬ−インロイシン生産能の高
い菌株としてブレビバクテリウム・フラハＡＡＪ１２１
４９ＦＥＲＭ−Ｐ ’７６’７’７ （ＡＨＶ耐性、
γ−メチルリジン耐性）、及びコリネ・９クテリウム・
グルタミクムＡ Ｊ １２１５１ ＦＥＲＭ−Ｐｒ７６
π （ＡＨＶ酬性株、γ−メチルリジン剛性）を得た
。
素 ０．２〃ＫＨ２ＰＯ４０，
１＃ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１／／ Ｆｅ５０ ・７ Ｈ２Ｏ０，（１０２’ＭｎＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ０，００２／／ビオチン １０
０μ９／ｌザイアミン塩「、′ン膓 １００μｍ
／ｌｒ−ＭＬ Ｏ，２，９／ｄ
ｔ寒 天 ２．０〃寒天培
地に生育した菌株の中からＬ−インロイシン生産能の高
い菌株としてブレビバクテリウム・フラハＡＡＪ１２１
４９ＦＥＲＭ−Ｐ ’７６’７’７ （ＡＨＶ耐性、
γ−メチルリジン耐性）、及びコリネ・９クテリウム・
グルタミクムＡ Ｊ １２１５１ ＦＥＲＭ−Ｐｒ７６
π （ＡＨＶ酬性株、γ−メチルリジン剛性）を得た
。
このようにして得られた変異様のγ−ＭＩ、耐性度を親
株と比較した。
株と比較した。
グルコース０．５１／ｄｔ 、尿素０．２ ＆／ｄｔ
、硫安０、１５ Ｉｉ／ｄｔ 、 ＫＨ２ＰＯ４０，３
１／ｄｔ 、 Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｇ／ｄｔ 、 Ｍｇ
ＳＯ４・７ｆ１２０ ０．０１１／ｄｔ 、 Ｃ＆Ｃ
１２−２Ｈ２００，１ヤ／ｄｌ＊ビオチン１００μｌｌ
／ｌ 、サイアミン塩酸塩１００ ｆｉＥ／ ／ ｌ−
、Ｆｅ１ｏ４・７ Ｈ２Ｏ０，００２Ｉ／ｄｔ２ＭｎＳ
０４・７Ｈ２００，００２Ｉ／ｄｔｌおよび表に示す量
のγ−ＭＬを含み、ｐｌ（７，０に調節した培地に天然
培地（ペゾトン１ ｆ／ ｄｔ＃ ＃母エキス１１／ｄ
ｔ 、 ＮａＣ１Ｏ，５１／ｄｉ 、 ｐＨ７，０）ス
ラントで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種
し、２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
、硫安０、１５ Ｉｉ／ｄｔ 、 ＫＨ２ＰＯ４０，３
１／ｄｔ 、 Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｇ／ｄｔ 、 Ｍｇ
ＳＯ４・７ｆ１２０ ０．０１１／ｄｔ 、 Ｃ＆Ｃ
１２−２Ｈ２００，１ヤ／ｄｌ＊ビオチン１００μｌｌ
／ｌ 、サイアミン塩酸塩１００ ｆｉＥ／ ／ ｌ−
、Ｆｅ１ｏ４・７ Ｈ２Ｏ０，００２Ｉ／ｄｔ２ＭｎＳ
０４・７Ｈ２００，００２Ｉ／ｄｔｌおよび表に示す量
のγ−ＭＬを含み、ｐｌ（７，０に調節した培地に天然
培地（ペゾトン１ ｆ／ ｄｔ＃ ＃母エキス１１／ｄ
ｔ 、 ＮａＣ１Ｏ，５１／ｄｉ 、 ｐＨ７，０）ス
ラントで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種
し、２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
第１表
上述の変異株にＯ−メチルスレオニン耐性、β−ヒドロ
キシロイシン耐性又はトリクロロアラニン耐性のように
すてにＬ−インロイシンの生産性を向上せしめることが
知られている性質を更に付加することによシ収率が向上
する場合が多い。
キシロイシン耐性又はトリクロロアラニン耐性のように
すてにＬ−インロイシンの生産性を向上せしめることが
知られている性質を更に付加することによシ収率が向上
する場合が多い。
このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭素源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を潤足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
、窒素源、無機イオン、上記要求性を潤足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シェフロース等の炭水化物
、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア水、
アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。無機
イオンとしてはカリイオン。
、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア水、
アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。無機
イオンとしてはカリイオン。
ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、リン酸イオン
その他が必要に応じ適宜培地に添加される。
その他が必要に応じ適宜培地に添加される。
培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地の−（を４
ないし８に温度を２５℃ないし３７℃に調節しつつ行え
ばより好ましい結果が得られる。かくして工ないし７日
間も培養すれば培地中に著量のし一イソロイシンが生成
蓄積される。培養液よシＬ−イソロイシンを採取する方
法はイオン交換樹脂による方法等通常の方法で採取でき
る。
ないし８に温度を２５℃ないし３７℃に調節しつつ行え
ばより好ましい結果が得られる。かくして工ないし７日
間も培養すれば培地中に著量のし一イソロイシンが生成
蓄積される。培養液よシＬ−イソロイシンを採取する方
法はイオン交換樹脂による方法等通常の方法で採取でき
る。
以下実施例にて説明する。
実施例１
グルコース１０１７ｄｌ 、 （ＮＨ４）２Ｓｏ４７９
／ｄｔ 。
／ｄｔ 。
ＫＨ２ＰＯ４０，１７９／ｄｔ 、 ＭｇＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ０，０４１１／ｄｔ 。
Ｈ２Ｏ０，０４１１／ｄｔ 。
Ｆｅ２Ｏ２・７ Ｈ２Ｏ１ｍ９／ｄｔ 、 ＭｎＳＯ４
−４Ｈ２Ｏ１ｍ９／ａｔ 。
−４Ｈ２Ｏ１ｍ９／ａｔ 。
サイアミン・ＨＣｌ １００μｇ／１ｍビチオン１００
μＩ／ｌ、大豆蛋白酸加水分解液６０ηｙ／ｄｚ（全Ｖ
素として）炭酸カルシウム５ 、！ｉ’ ／ｄｔ （別
殺菌）を含む培地をｐＨ７，０に調節し、その２０ｍ１
を５００ｍ／容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。これ
に第第１表に示す菌株を一白金耳接種し、３１．５℃に
保ちつつ４日間振盪した。各菌株の培養液中には第２表
に示す搦のＬ−イソロイシンが蓄積した。
μＩ／ｌ、大豆蛋白酸加水分解液６０ηｙ／ｄｚ（全Ｖ
素として）炭酸カルシウム５ 、！ｉ’ ／ｄｔ （別
殺菌）を含む培地をｐＨ７，０に調節し、その２０ｍ１
を５００ｍ／容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。これ
に第第１表に示す菌株を一白金耳接種し、３１．５℃に
保ちつつ４日間振盪した。各菌株の培養液中には第２表
に示す搦のＬ−イソロイシンが蓄積した。
Ａ Ｊ １２１４９を上記の方法で培養して培養液１ｔ
を得、これよシ遠心分離にて菌体を除き、上清を、強酸
性イオン交換樹脂［ダイヤイオンＪＳＫ−ＩＢ（ＮＨ４
＋型）に通過させた。樹脂を水洗後、２Ｎ−アンモニア
水にて溶出し、ついで溶出液をｊ？洋縮し、これよりし
−イソロイシンの和結晶１７．０．５”ｆ得た。
を得、これよシ遠心分離にて菌体を除き、上清を、強酸
性イオン交換樹脂［ダイヤイオンＪＳＫ−ＩＢ（ＮＨ４
＋型）に通過させた。樹脂を水洗後、２Ｎ−アンモニア
水にて溶出し、ついで溶出液をｊ？洋縮し、これよりし
−イソロイシンの和結晶１７．０．５”ｆ得た。
第２表
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に属し
メチルリジン耐性を有し、且つＬ−イソロイシン生産能
を有する微生物を液体培地中で培養し、培地中に生成蓄
積したＬ−イソロイシンを採取することを特徴とするＬ
−イソロイシンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13446184A JPS6115696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
| EP85108049A EP0167132B1 (en) | 1984-06-29 | 1985-06-28 | Process for producing l-isoleucine by fermentation |
| DE8585108049T DE3585052D1 (de) | 1984-06-29 | 1985-06-28 | Verfahren zur herstellung von l-isoleucin durch fermentation. |
| US06/750,289 US4656135A (en) | 1984-06-29 | 1985-07-01 | Process for producing L-isoleucine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13446184A JPS6115696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6115696A true JPS6115696A (ja) | 1986-01-23 |
| JPH0362395B2 JPH0362395B2 (ja) | 1991-09-25 |
Family
ID=15128870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13446184A Granted JPS6115696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6115696A (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (en) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for production of l-amino acid |
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2008102572A1 (ja) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸または核酸の製造方法 |
| WO2009088049A1 (ja) | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Ajinomoto Co., Inc. | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2009093703A1 (ja) | 2008-01-23 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
| WO2011013707A1 (ja) | 2009-07-29 | 2011-02-03 | 味の素株式会社 | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2015005406A1 (ja) | 2013-07-09 | 2015-01-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| WO2015050234A1 (ja) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
| WO2015060391A1 (ja) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| EP3085705A1 (en) | 2015-04-22 | 2016-10-26 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing l-isoleucine using a bacterium of the family enterobacteriaceae having overexpressed the cyca gene |
| EP3385389A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid from fructose |
-
1984
- 1984-06-29 JP JP13446184A patent/JPS6115696A/ja active Granted
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2008044409A1 (en) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for production of l-amino acid |
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2008102572A1 (ja) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸または核酸の製造方法 |
| EP2749652A2 (en) | 2008-01-10 | 2014-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing a target substance by fermentation |
| WO2009088049A1 (ja) | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Ajinomoto Co., Inc. | 発酵法による目的物質の製造法 |
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| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2015005406A1 (ja) | 2013-07-09 | 2015-01-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| EP3521433A1 (en) | 2013-07-09 | 2019-08-07 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-glutamic acid |
| WO2015050234A1 (ja) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
| WO2015060391A1 (ja) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| EP3085705A1 (en) | 2015-04-22 | 2016-10-26 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing l-isoleucine using a bacterium of the family enterobacteriaceae having overexpressed the cyca gene |
| US9896704B2 (en) | 2015-04-22 | 2018-02-20 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-isoleucine using a bacterium of the family Enterobacteriaceae having overexpressed the cycA gene |
| EP3385389A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid from fructose |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0362395B2 (ja) | 1991-09-25 |
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