JPS60251893A - 発酵法によるｌ−アルギニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−アルギニンの製造法Info
- Publication number
- JPS60251893A JPS60251893A JP11033884A JP11033884A JPS60251893A JP S60251893 A JPS60251893 A JP S60251893A JP 11033884 A JP11033884 A JP 11033884A JP 11033884 A JP11033884 A JP 11033884A JP S60251893 A JPS60251893 A JP S60251893A
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- Japan
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- arginine
- producing
- brevibacterium
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- corynebacterium
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
Ｌ−アルギニンは肝機能促進薬、アミノ酸輸液及び総合
アミノ酸製剤等の重要な成分である。本発明はこのＬ−
アルギニンを発酵法で製造する方法を改良するものであ
る。
アミノ酸製剤等の重要な成分である。本発明はこのＬ−
アルギニンを発酵法で製造する方法を改良するものであ
る。
ブレビバクテリウム馬屋゛びコリネバクテリウム属の微
生物がＬ−アルギニン生産能を有するためには、２−チ
アゾールアラニン（以下２．− ＴＡと略ス。）、アル
ギニンヒドロキサメート等への耐性を付与せしめれば良
いことがわかりている。更に、前記の薬剤耐性に加えて
サルファ剤、アルギノール耐性又は８−アザ−グアニン
等の薬剤に耐性を付与すること、及びＬ−ヒスチジン、
Ｌ−ゾロリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリフ’）ファン
又ハＬ−リジン等のアミノ酸に対する要求性を付与する
ことＫよｆｉＬ−アルギニンの生産能が向上することは
知られている。
生物がＬ−アルギニン生産能を有するためには、２−チ
アゾールアラニン（以下２．− ＴＡと略ス。）、アル
ギニンヒドロキサメート等への耐性を付与せしめれば良
いことがわかりている。更に、前記の薬剤耐性に加えて
サルファ剤、アルギノール耐性又は８−アザ−グアニン
等の薬剤に耐性を付与すること、及びＬ−ヒスチジン、
Ｌ−ゾロリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリフ’）ファン
又ハＬ−リジン等のアミノ酸に対する要求性を付与する
ことＫよｆｉＬ−アルギニンの生産能が向上することは
知られている。
Ｌ−アルギニンの製造コストを低下させるために発酵収
率を向上させることは重要な問題である。
率を向上させることは重要な問題である。
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
シ、従来よυ知られているブレビパフチリウム属及びコ
リネバクテリウム属に属するし−アルギニン生産能を有
する微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見
いだすべく研究した結果、α−アミノ−β−ヒドロキシ
吉草酸（以下ＡＨＶと略す。）に耐性を付与した菌株の
中に、従来のＬ−アルギニン生産菌よシも高収率でＬ−
アルギニンを生産する菌株が存在することを発見した。
シ、従来よυ知られているブレビパフチリウム属及びコ
リネバクテリウム属に属するし−アルギニン生産能を有
する微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見
いだすべく研究した結果、α−アミノ−β−ヒドロキシ
吉草酸（以下ＡＨＶと略す。）に耐性を付与した菌株の
中に、従来のＬ−アルギニン生産菌よシも高収率でＬ−
アルギニンを生産する菌株が存在することを発見した。
即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリネバクテ
リウム属に属し、ＡＨＶ耐性を有し、且つＬ−アルギニ
ン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地中
に生成・蓄積したし一アルギニンを採取することを特徴
とするＬ−アルギニンの製造法に関する。
リウム属に属し、ＡＨＶ耐性を有し、且つＬ−アルギニ
ン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地中
に生成・蓄積したし一アルギニンを採取することを特徴
とするＬ−アルギニンの製造法に関する。
本発明において用いられる微生物はブレビ／４クテリウ
ム属又はコリネバクテリウム属に属し、ＡＨＶ耐性を有
し、かつＬ−アルギニン生産能を有する変異株である。
ム属又はコリネバクテリウム属に属し、ＡＨＶ耐性を有
し、かつＬ−アルギニン生産能を有する変異株である。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に、先にＬ−
アルギニン生産能を付付与しても良い。
アルギニン生産能を付付与しても良い。
本変異株の親株となる野性株は、ブレビバクテリウム属
又はコリネバクテリウム属の特にコリネホルムし一グル
タミン酸生産性細菌として知られているものであシ、例
えば、以下のものがある。
又はコリネバクテリウム属の特にコリネホルムし一グル
タミン酸生産性細菌として知られているものであシ、例
えば、以下のものがある。
ブレビパフチリウム・デイパリカタム ＡＴＣＣ１４０
２０フレヒハクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ’ １４
０６７プレビパクテリウム・ラクトフェルメンタム Ａ
ＴＣＣ１３８６９プレピノ々クテリウム・サラカロリテ
ィカム ＡＴＣＣ１４０６６コリネパクテリウム・アセ
トアシドフィルム ＡＴＣＣ１３８７０コリネバクテリ
ウム・グルタミクム ＡＴＣＣ１３０３２これらの親株
よシ本発明の変異株を変異誘導する方法は、Ｎ−メチル
−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソ ログアニジンに接触せしめる等の通常の変異誘導方法が
適宜適用できる。変異処理した菌株から本発明の変異株
を分離する方法は、ＡＨ％”ｉ含む培地で生育するよう
な菌株を採取することによって行われる。
２０フレヒハクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ’ １４
０６７プレビパクテリウム・ラクトフェルメンタム Ａ
ＴＣＣ１３８６９プレピノ々クテリウム・サラカロリテ
ィカム ＡＴＣＣ１４０６６コリネパクテリウム・アセ
トアシドフィルム ＡＴＣＣ１３８７０コリネバクテリ
ウム・グルタミクム ＡＴＣＣ１３０３２これらの親株
よシ本発明の変異株を変異誘導する方法は、Ｎ−メチル
−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソ ログアニジンに接触せしめる等の通常の変異誘導方法が
適宜適用できる。変異処理した菌株から本発明の変異株
を分離する方法は、ＡＨ％”ｉ含む培地で生育するよう
な菌株を採取することによって行われる。
本発明の変異株の具体的な変異誘導方法とＡＨＶ濃度と
菌株の生育度の関係を以下に示す。
菌株の生育度の関係を以下に示す。
ブイヨン寒天スラント上に３０℃で２４時間生 □育さ
せたブレビパフチリウム・フラバムＡＪ１１１６９ＦＥ
ＲＭ−Ｐ４１６１ （ＡＴＣＣ１４０６７よシ誘導した
２−ＴＡ耐性株）及びコリネバクテリウム・グルタミク
ムＡＪ １２０９２ ＦＦＲＭ−Ｐ７２７３ （ＡＴＣ
Ｃ１３０３２よシ誘導した２ −ＴＡ耐性株）の菌体を
Ｍ／３０ ！ｊン酸緩衝液に懸濁し菌体濃度１０８〜１
０’／ｄの菌体懸濁液に５００ ｔｔｇ／ｒｎｌのＮ−
メチ＃−Ｎ’−：トローソ Ｎ−ニトロ−グアニジンを加え３０Ｃに２０分間保持し
た。ついで遠心分離して菌体を集め、Ｍ／３０１７ン酸
緩衝液で良く洗滌した後、下記組成の培地に接種し、３
１．５℃で４〜１ｏ日間培警した。
せたブレビパフチリウム・フラバムＡＪ１１１６９ＦＥ
ＲＭ−Ｐ４１６１ （ＡＴＣＣ１４０６７よシ誘導した
２−ＴＡ耐性株）及びコリネバクテリウム・グルタミク
ムＡＪ １２０９２ ＦＦＲＭ−Ｐ７２７３ （ＡＴＣ
Ｃ１３０３２よシ誘導した２ −ＴＡ耐性株）の菌体を
Ｍ／３０ ！ｊン酸緩衝液に懸濁し菌体濃度１０８〜１
０’／ｄの菌体懸濁液に５００ ｔｔｇ／ｒｎｌのＮ−
メチ＃−Ｎ’−：トローソ Ｎ−ニトロ−グアニジンを加え３０Ｃに２０分間保持し
た。ついで遠心分離して菌体を集め、Ｍ／３０１７ン酸
緩衝液で良く洗滌した後、下記組成の培地に接種し、３
１．５℃で４〜１ｏ日間培警した。
グルコース １．０ ｐ／ｌｕ
尿 素 ０．２ 〃
ＫＴ（２Ｐ Ｏ４０−１ｔｔ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１ｔｔ
ＦｅＳ０４・７Ｈ２００，００２〃
ＭｎＳＯ４−７Ｈ２ｏ 、 ０．００２ ｔｔビオチン
１００ μルー サイアミン塩酸塩 １００ ｔｔ ＡＨｖＯ，１１／ｄｉ 寒 天 ２．ｏ〃 寒天培地に生育した菌株の中から、Ｌ−アルギ株と比較
した。
１００ μルー サイアミン塩酸塩 １００ ｔｔ ＡＨｖＯ，１１／ｄｉ 寒 天 ２．ｏ〃 寒天培地に生育した菌株の中から、Ｌ−アルギ株と比較
した。
グルコースＯ１ｓ ｐ／１ｉｔｓ尿素ｏ、 １５１１／
ｄｌ、硫安０、１５１／／ｄｌ、 ＫＨ２ＰＯ４０，３
１１／ｄｉ、 Ｋ２）ＩＰＯ４０，１１／／ｄｔ。
ｄｌ、硫安０、１５１／／ｄｌ、 ＫＨ２ＰＯ４０，３
１１／ｄｉ、 Ｋ２）ＩＰＯ４０，１１／／ｄｔ。
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０１１１／ａｔ、 ＣｈＣ１
２−２Ｈ２００，１ｒｒＫ／／ｄｉ。
２−２Ｈ２００，１ｒｒＫ／／ｄｉ。
ビオチンエ００μＩ／ｌ、サイアミン塩酸塩１００μＩ
Ｉ／ｌ 、Ｆ＠８０４’７Ｔ（２０ｏ、ｏ Ｏ２１１／
ｄｔ、 Ｍｎ３Ｏ４・７Ｈ２００、００２１／ｄｌおよ
び表に示す量のＡＨＶを含み、−７，０に調節した培地
に、天然培地（ペプトン１１／ｄｔ、酵−エキ、ｘ、
１１／／ｄｌ％ＮａＣ１０，５１／ｄｌ、 ｐＨ７，０
）スラントで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して
接種し、２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
Ｉ／ｌ 、Ｆ＠８０４’７Ｔ（２０ｏ、ｏ Ｏ２１１／
ｄｔ、 Ｍｎ３Ｏ４・７Ｈ２００、００２１／ｄｌおよ
び表に示す量のＡＨＶを含み、−７，０に調節した培地
に、天然培地（ペプトン１１／ｄｔ、酵−エキ、ｘ、
１１／／ｄｌ％ＮａＣ１０，５１／ｄｌ、 ｐＨ７，０
）スラントで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して
接種し、２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
第 １ 表
上述の変異株にサルファグアニ・シン耐性、アルギニツ
ール耐性、８−アザグアニン耐性のように丁でにＬ−ア
ルギニンの生産性を向上せしめることが知られている性
質を更に付加することによ多収率が向上する場合が多い
＠ 〔作用〕 このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭素源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
ール耐性、８−アザグアニン耐性のように丁でにＬ−ア
ルギニンの生産性を向上せしめることが知られている性
質を更に付加することによ多収率が向上する場合が多い
＠ 〔作用〕 このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭素源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
炭水化物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモ
ニア水、アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適であ
る。無機イオンとしてはカリイオン、ナトリウムイオン
、マグネシウムイオン、リン酸イオンその他が必要に応
じ適宜培地に添加される。
ニア水、アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適であ
る。無機イオンとしてはカリイオン、ナトリウムイオン
、マグネシウムイオン、リン酸イオンその他が必要に応
じ適宜培地に添加される。
培養は好気的条件が望オしく、培養の間培地のｐｉ（を
４ないし８に温度を２５℃ないし３７℃に調節しつつ行
えばより好ましい結果が得られる。かくして１ないし７
日間も培養すれば培地中に著量のＬ−アルギニンが生成
蓄積される。
４ないし８に温度を２５℃ないし３７℃に調節しつつ行
えばより好ましい結果が得られる。かくして１ないし７
日間も培養すれば培地中に著量のＬ−アルギニンが生成
蓄積される。
培養液よシム−アルギニンを採取する方法は、イオン交
換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
以下実施例にて説明する。
実施例
）レ
グーコース１０９７ｄｔ、 （ＮＨ４）２Ｓｏ４７１１
／ｄｉ。
／ｄｉ。
ＫＨ２ＰＯ４０，１１／ｄｉ、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０
０，０４ｇ／ｄｉ。
０，０４ｇ／ｄｉ。
ｐ’ｅｓｏ４・７Ｈ２０１ｍ９／ｄｉ、、ＭｎＳＯ４’
４Ｈ，，０１ηＱ／ｄｉ、サイ大豆彊白酸加水分解液６
０ｍｑ／ｄｅ（全窒素として）炭酸カルシウム５１７ｄ
ｅ（別殺菌）を含む培地をｐＨ７，０に調節し、ソ（Ｄ
２０ ｍｌを５”’００ｄ容肩付フラスコに入れ加熱
殺菌した。これに第１表に示す菌株を□−白金耳接種し
、３１．５℃に保ちつつ４日間振盪した。各菌株の培養
液中には第−表に示す量のし一アルギニンがそれぞれ生
成蓄積していた。
４Ｈ，，０１ηＱ／ｄｉ、サイ大豆彊白酸加水分解液６
０ｍｑ／ｄｅ（全窒素として）炭酸カルシウム５１７ｄ
ｅ（別殺菌）を含む培地をｐＨ７，０に調節し、ソ（Ｄ
２０ ｍｌを５”’００ｄ容肩付フラスコに入れ加熱
殺菌した。これに第１表に示す菌株を□−白金耳接種し
、３１．５℃に保ちつつ４日間振盪した。各菌株の培養
液中には第−表に示す量のし一アルギニンがそれぞれ生
成蓄積していた。
ＡＪ１２１４４を上記の方法で培養して培養液１ｔを得
、これより遠心分離にて菌体能を除き、上清を弱酸性イ
オン交換樹脂「アンノＺ−ライト」Ｃ−５０（ＮＨ４＋
型）に通過させた。樹脂を水洗後、２ＮＮＨＯＨにてＬ
−アルギニンを溶出し、ついで溶出液を濃縮し、これよ
、９Ｌ−アルギニンの粗結晶２４．０１！ ／ｅｔｔを
得た。
、これより遠心分離にて菌体能を除き、上清を弱酸性イ
オン交換樹脂「アンノＺ−ライト」Ｃ−５０（ＮＨ４＋
型）に通過させた。樹脂を水洗後、２ＮＮＨＯＨにてＬ
−アルギニンを溶出し、ついで溶出液を濃縮し、これよ
、９Ｌ−アルギニンの粗結晶２４．０１！ ／ｅｔｔを
得た。
特許出願人 味の素株式会社
手続補止１１
１、事件の表示
昭和５９年特許願第１１０３３８月
２、発明の名称
発酵法によるＬ−アルギニンの製造法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
住所 東京都中央区京橋−丁目５番８号５、補正により
増加する発明の数 な（）６、補正の対象 明細書の発
明の詳細な説明の欄７、補正の内容 明細内閉１１頁、
７行口の「２４．０ｇ／ｄｌ＠得た。」をｒ２４．Ｏを
得た。」と訂正−４る。
増加する発明の数 な（）６、補正の対象 明細書の発
明の詳細な説明の欄７、補正の内容 明細内閉１１頁、
７行口の「２４．０ｇ／ｄｌ＠得た。」をｒ２４．Ｏを
得た。」と訂正−４る。
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に属し
α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐性を有し、且つＬ
−アルギニン生産能を有する微生物を液体培地中で培養
し、培地中に生成・蓄積したＬ−アルギニンを採取する
ことを特徴とするＬ−アルギニンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11033884A JPS60251893A (ja) | 1984-05-30 | 1984-05-30 | 発酵法によるｌ−アルギニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11033884A JPS60251893A (ja) | 1984-05-30 | 1984-05-30 | 発酵法によるｌ−アルギニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60251893A true JPS60251893A (ja) | 1985-12-12 |
| JPH0527388B2 JPH0527388B2 (ja) | 1993-04-21 |
Family
ID=14533220
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11033884A Granted JPS60251893A (ja) | 1984-05-30 | 1984-05-30 | 発酵法によるｌ−アルギニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60251893A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0336387A2 (en) * | 1988-04-07 | 1989-10-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for producing L-arginine |
-
1984
- 1984-05-30 JP JP11033884A patent/JPS60251893A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0336387A2 (en) * | 1988-04-07 | 1989-10-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for producing L-arginine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0527388B2 (ja) | 1993-04-21 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |