JPS63185392A - 発酵法によるl−スレオニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるl−スレオニンの製造法Info
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は発酵法によるL−スレオニンの製造法に関する
。
。
従来の技術
従来、L−スレオニンの製造法としては、ブレビバクテ
リウム又はコリネバクテリウム属のα−アミノ−β−ヒ
ドロキシ吉草酸(AHv)に耐性を有する変異株を用い
る方法(特公昭45−26708)等が知られている。
リウム又はコリネバクテリウム属のα−アミノ−β−ヒ
ドロキシ吉草酸(AHv)に耐性を有する変異株を用い
る方法(特公昭45−26708)等が知られている。
発明が解決しようとする問題点
従来の方法においては、L−スレオニンの発酵収率は満
足すべきものでなく、収率を向上させることは工業生産
上に於て重要な問題である。
足すべきものでなく、収率を向上させることは工業生産
上に於て重要な問題である。
問題点を解決するための手段
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り従来より知られているブレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属に属するL−スレオニン生産能を有す
る微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見い
出すべく研究した結果、きコツエノール酸(以下MPA
と略す。)に耐性を付与した菌株の中に、従来のL−ス
レオニン生産菌よりも高収率でL−スレオニンを生産す
る菌株が存在することを発見した。
り従来より知られているブレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属に属するL−スレオニン生産能を有す
る微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見い
出すべく研究した結果、きコツエノール酸(以下MPA
と略す。)に耐性を付与した菌株の中に、従来のL−ス
レオニン生産菌よりも高収率でL−スレオニンを生産す
る菌株が存在することを発見した。
本発明に使用する微生物としては、ブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属に属し、MPAに耐性を有
し、かつL−スレオニン生産能を有する微生物であれば
、化学変異剤、X線もしくは紫外線処理で誘導さnる変
異株又は細胞融合法、遺伝子組換え法等で誘導される組
換え体等、いずれも用いられる。
属又はコリネバクテリウム属に属し、MPAに耐性を有
し、かつL−スレオニン生産能を有する微生物であれば
、化学変異剤、X線もしくは紫外線処理で誘導さnる変
異株又は細胞融合法、遺伝子組換え法等で誘導される組
換え体等、いずれも用いられる。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に先にL−ス
レオニン生産能を付与し、次いでMPA耐性を付与して
も良いし、又、先にMPA耐性を付与し、次−でL−ス
レオニン生産能を付与しても良い。又、AHV耐性のL
−イソロイシン生産菌よりMPA耐性を誘導することに
より、L−スレオニン生産能とMPA耐性を同時に有す
るL−スレオニン生産菌を取得することも出来る。
レオニン生産能を付与し、次いでMPA耐性を付与して
も良いし、又、先にMPA耐性を付与し、次−でL−ス
レオニン生産能を付与しても良い。又、AHV耐性のL
−イソロイシン生産菌よりMPA耐性を誘導することに
より、L−スレオニン生産能とMPA耐性を同時に有す
るL−スレオニン生産菌を取得することも出来る。
以上のL−スレオニン生産菌株にL−スレオニン生産能
を向上させる様な各種の栄養要求性、例えばインロイシ
ン要求、メチオニン要求、アラニン要求、ジアミメピメ
リン酸要求又はリジン要求等を付与した変異株の時は、
発酵収率が更に向上する場合が多い。
を向上させる様な各種の栄養要求性、例えばインロイシ
ン要求、メチオニン要求、アラニン要求、ジアミメピメ
リン酸要求又はリジン要求等を付与した変異株の時は、
発酵収率が更に向上する場合が多い。
本発明の微生物を誘導するための代表的な野生株として
は下記のような微生物がある。
は下記のような微生物がある。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ATCC
13869ブレピノ々クテリウム・ディパリティカム
ATCC14020ブレビバクテリウム・フラバ
ム ATCC14067コリネパクテリ
ウム・グルタミクム ATCC13032コリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィラム ATCC13
870本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法とM
PAに対する菌株の生育度の関係を以下に示す。
13869ブレピノ々クテリウム・ディパリティカム
ATCC14020ブレビバクテリウム・フラバ
ム ATCC14067コリネパクテリ
ウム・グルタミクム ATCC13032コリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィラム ATCC13
870本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法とM
PAに対する菌株の生育度の関係を以下に示す。
ブイヨン寒天スラント上に30℃で24時間生育させた
ブレビバクテリウム・フラバムATCC21269(A
TCC14067より誘導したAHV耐性株)及びコリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィラムAJ 1231
5 (ATCC13870より誘導したAHV耐性株)
の菌体をM/301,1ン酸緩衝液に懸濁し10屓の菌
体懸濁液に250μIy4nlのN−メチル−N′−二
トローN−ニトロソグアニシンを加え30℃に15分間
靜装した。ついで同緩衝液で2回遠心洗滌後、下記組成
の培地に接種し、31℃で5日間培養した。
ブレビバクテリウム・フラバムATCC21269(A
TCC14067より誘導したAHV耐性株)及びコリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィラムAJ 1231
5 (ATCC13870より誘導したAHV耐性株)
の菌体をM/301,1ン酸緩衝液に懸濁し10屓の菌
体懸濁液に250μIy4nlのN−メチル−N′−二
トローN−ニトロソグアニシンを加え30℃に15分間
靜装した。ついで同緩衝液で2回遠心洗滌後、下記組成
の培地に接種し、31℃で5日間培養した。
培地組成
(pH7,0)
成 分 含 量グルコース
1.0 11/dl尿 素
0.21KH2PO40,l
N MgSO4−7B20 0.1 7F
s804 ’ 7H200,002zMnSO4”7H
200,0021 ビオチン 100 μm1/1サイアミン
塩酸塩 100 〃MPA
O,21/dl寒 天
2.0 #寒天培地に生育した菌
株の中からL−スレオニン生産能の高い菌株としてブレ
ビバクテリウム・フラバムAJ 12312 、 FE
RMflP−1173(AHV耐性、 MPA酎性耐及
びコリネバクテリウム・アセトアシドフィラムAJ 1
2316 (A群耐性、 MPA耐性)を得た。
1.0 11/dl尿 素
0.21KH2PO40,l
N MgSO4−7B20 0.1 7F
s804 ’ 7H200,002zMnSO4”7H
200,0021 ビオチン 100 μm1/1サイアミン
塩酸塩 100 〃MPA
O,21/dl寒 天
2.0 #寒天培地に生育した菌
株の中からL−スレオニン生産能の高い菌株としてブレ
ビバクテリウム・フラバムAJ 12312 、 FE
RMflP−1173(AHV耐性、 MPA酎性耐及
びコリネバクテリウム・アセトアシドフィラムAJ 1
2316 (A群耐性、 MPA耐性)を得た。
さらに、上記培地組成にL−イソロイシン15Φtを添
加し、同様の変異操作によシ、プレビパクテリアム・フ
ラバムAJ 12313 (ATCC14067より
誘導したAHV耐性、イソロイシン要求株)及びコリネ
バクテリウム・アセトアシドフィラムAJ 1231
7 (ATCC13870より誘導したAHV耐性、イ
ソロイシン要求株)から、各々、L−スレオニン生産能
の高い菌株として、ブレビバクテリウム・フラバムAJ
12314(AHV耐性。
加し、同様の変異操作によシ、プレビパクテリアム・フ
ラバムAJ 12313 (ATCC14067より
誘導したAHV耐性、イソロイシン要求株)及びコリネ
バクテリウム・アセトアシドフィラムAJ 1231
7 (ATCC13870より誘導したAHV耐性、イ
ソロイシン要求株)から、各々、L−スレオニン生産能
の高い菌株として、ブレビバクテリウム・フラバムAJ
12314(AHV耐性。
イソロイシン要求性、 MPA耐性)及びコリネバクテ
リウム・アセトアシドフィラムAJ 12318FE
RM BP−11’72 (AHV耐性、イソロイシ
ン要求性、 MPA耐性)を誘導した。
リウム・アセトアシドフィラムAJ 12318FE
RM BP−11’72 (AHV耐性、イソロイシ
ン要求性、 MPA耐性)を誘導した。
このようにして得られた変異株のMPA耐性度を親株と
比較した。
比較した。
グルコース0.5&/dt、尿素0.211/dt、硫
安0.151/di 、 KI(2PO40,3,9/
dt、 K2HPO40,I Fl/dt 。
安0.151/di 、 KI(2PO40,3,9/
dt、 K2HPO40,I Fl/dt 。
MgSO4’7H200,0111/di 、 ChC
12’2H200,1mylα。
12’2H200,1mylα。
ビオチン100μ9/l 、サイアミン・塩酸塩100
μll / l 、Fe5O4T 7H200,002
1/dl 、 MnSO4’ 7H200,002F/
み、イソロイシン要求性変異株のときはL−インロイシ
ン15〜/di添加、および表に示す量の野人を含み、
pH7,0に調節した培地にブイヨンスラントで24時
間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、24時間培
養して生育度を濁度で測定した。
μll / l 、Fe5O4T 7H200,002
1/dl 、 MnSO4’ 7H200,002F/
み、イソロイシン要求性変異株のときはL−インロイシ
ン15〜/di添加、および表に示す量の野人を含み、
pH7,0に調節した培地にブイヨンスラントで24時
間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、24時間培
養して生育度を濁度で測定した。
第 1 表
上述の変異株にO−メチルスレオニン耐性、D−スレオ
ニyit性、β−ヒドロキシロイシン耐性又はビタミン
−P耐性のようにすてにL−スレオニンの生産性を向上
せしめることが知られてbる性質を更に付加することに
よシ、収率が向上する場合が多−0 〔作用〕 このような変異株を培養する際に吊込る培地は、炭素源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
ニyit性、β−ヒドロキシロイシン耐性又はビタミン
−P耐性のようにすてにL−スレオニンの生産性を向上
せしめることが知られてbる性質を更に付加することに
よシ、収率が向上する場合が多−0 〔作用〕 このような変異株を培養する際に吊込る培地は、炭素源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シェフロース等の炭水化物
、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア水、
アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。無機
イオンとしてはカリイオン。
、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア水、
アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。無機
イオンとしてはカリイオン。
ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、リン酸イオン
その他が必要に応じ適宜培地に添加される。
その他が必要に応じ適宜培地に添加される。
培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地のpHを4
なwl、Bに温度を25℃ないし37℃に調節しつつ行
えばより好ましい結果が得られる。かくして1ないし7
日間も培養すれば培地中に若葉のL−スレオニンが生成
蓄積され、かつ、培地中へのL−リジンの生成は極めて
少ない。培養液よ、9L−スレオニンを採取する方法は
イオン交換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
なwl、Bに温度を25℃ないし37℃に調節しつつ行
えばより好ましい結果が得られる。かくして1ないし7
日間も培養すれば培地中に若葉のL−スレオニンが生成
蓄積され、かつ、培地中へのL−リジンの生成は極めて
少ない。培養液よ、9L−スレオニンを採取する方法は
イオン交換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
以下実施例にて説明する。
実施例1
グルコース10j9/dt、硫酸アンモニウム41/d
t。
t。
KH2PO40,19/a 、 MgSO4”7H20
0,197dl 、 F@SO4’7H201Tn9/
dl 、 MnSO4’4H201rn9/dt、ビオ
チン100μ9/l、サイアミン・HC4IQQμm1
/13 、大豆蛋白酸加水分解液80rv−N/#、炭
酸カルシウム517dl(別殺菌添加)を含む培地をp
H7,0に調節し、その20プを5QQmA!容肩付フ
ラスコに入れ加熱殺菌した。これに第1表に示す1株を
一白金耳接種し、31,5℃に保ちつつ4日間振盪培養
した。各菌株の培養液中には第3表に示す量のし一スレ
オニンが蓄積した。AJ 12312を上記の方法で
培養して培養液11を得、これよシ遠心分離にて菌体を
除き、上清を強酸性イオン交換樹脂[ダイヤイオンJS
K−IBに通過させた。樹脂を水洗後、2N−アンモニ
ア水にて溶出し、ついて溶出液を濃縮し、これよりL−
スレオニンの結晶6.2Iを得た。
0,197dl 、 F@SO4’7H201Tn9/
dl 、 MnSO4’4H201rn9/dt、ビオ
チン100μ9/l、サイアミン・HC4IQQμm1
/13 、大豆蛋白酸加水分解液80rv−N/#、炭
酸カルシウム517dl(別殺菌添加)を含む培地をp
H7,0に調節し、その20プを5QQmA!容肩付フ
ラスコに入れ加熱殺菌した。これに第1表に示す1株を
一白金耳接種し、31,5℃に保ちつつ4日間振盪培養
した。各菌株の培養液中には第3表に示す量のし一スレ
オニンが蓄積した。AJ 12312を上記の方法で
培養して培養液11を得、これよシ遠心分離にて菌体を
除き、上清を強酸性イオン交換樹脂[ダイヤイオンJS
K−IBに通過させた。樹脂を水洗後、2N−アンモニ
ア水にて溶出し、ついて溶出液を濃縮し、これよりL−
スレオニンの結晶6.2Iを得た。
第2表
ATCC21269AHVr
9.5AJ 12313 AHVreIi
s−14,OAJ 12314 AHV’、
l1e−,MPA’ 16.2AJ 1231
5 AHV’ 8.
6AJ 12316 AHV’、MPAr
12.0AJ12317 AHV’、l1
e−13,0AHVr: AW耐性 MPAr: MPA耐性 11e−:イソロイシン要求性 実施例2 グ/l/:l−スsg/g+a酸アンモニウム0.2J
i’/d。
9.5AJ 12313 AHVreIi
s−14,OAJ 12314 AHV’、
l1e−,MPA’ 16.2AJ 1231
5 AHV’ 8.
6AJ 12316 AHV’、MPAr
12.0AJ12317 AHV’、l1
e−13,0AHVr: AW耐性 MPAr: MPA耐性 11e−:イソロイシン要求性 実施例2 グ/l/:l−スsg/g+a酸アンモニウム0.2J
i’/d。
尿素0.211/di 、 fG(2PO40,151
/di 、 MgSO4・7H200,04J/#、
FeSO4”7H201m?7dl、ビタミンB、−塩
酸塩100μI/l 、ビオチン300μm1/11
、 大豆蛋白質加水分解液140Φt(全窒素として
)を含む母 ミロ培地をpH7,0に調節し、その50ゴを500ゴ
容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。
/di 、 MgSO4・7H200,04J/#、
FeSO4”7H201m?7dl、ビタミンB、−塩
酸塩100μI/l 、ビオチン300μm1/11
、 大豆蛋白質加水分解液140Φt(全窒素として
)を含む母 ミロ培地をpH7,0に調節し、その50ゴを500ゴ
容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。
これに第3表に示す菌株をそれぞれ接種し、母
31.5℃に保ちつつ、18時間振盪培養し種口培養液
を得た。
を得た。
一方、グルコース21 /di 、 a Rアンモニウ
ム11/di 、 KH2PO40,15g7dl 、
MgSO4・7H200,041/di 、 FeS
O4”7H201m9/# 、 MnSO4”7H20
11719乙もビオチン50μg/!、ビタミンB、・
塩酸塩500μg/11 、大豆蛋白酸加水分解物(全
窒素として)32rng/dl 、使用菌株がL−イソ
ロイシンを要求する場合は、L−イソロイシン40■/
dtを含み、pH7,0に調整した培地の285祷を1
ノ容ファーメンタ−母 に入れ殺菌した。これに橿S培養液をそれぞれ1SmJ
ずつ接種した。培養中、酢酸と酢酸アンモニウムとのモ
ル比率が1 = 0.2の混合液(酢酸濃度として70
117di)を添加しつつ培養pH7,5に保持しつつ
通気攪拌下に3日間培養した。L−スレオニンの蓄積と
対酢酸重量収率は第3表に示す通りであった。
ム11/di 、 KH2PO40,15g7dl 、
MgSO4・7H200,041/di 、 FeS
O4”7H201m9/# 、 MnSO4”7H20
11719乙もビオチン50μg/!、ビタミンB、・
塩酸塩500μg/11 、大豆蛋白酸加水分解物(全
窒素として)32rng/dl 、使用菌株がL−イソ
ロイシンを要求する場合は、L−イソロイシン40■/
dtを含み、pH7,0に調整した培地の285祷を1
ノ容ファーメンタ−母 に入れ殺菌した。これに橿S培養液をそれぞれ1SmJ
ずつ接種した。培養中、酢酸と酢酸アンモニウムとのモ
ル比率が1 = 0.2の混合液(酢酸濃度として70
117di)を添加しつつ培養pH7,5に保持しつつ
通気攪拌下に3日間培養した。L−スレオニンの蓄積と
対酢酸重量収率は第3表に示す通りであった。
第 3 表
Claims (1)
- ブレビバクテリウム層又はコリネバクテリウム属に属し
、ミコフェノール酸に耐性であり、L−スレオニンを培
地中に生成蓄積する能力を有する微生物を培養し、培地
中に生成蓄積したL−スレオニンを採取することを特徴
とする発酵法によるL−スレオニンの製造法。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR8713461A FR2604447B1 (fr) | 1986-09-29 | 1987-09-29 | Procede de production de l-threonine par fermentation |
US07/571,821 US5188949A (en) | 1986-09-29 | 1990-08-22 | Method for producing L-threonine by fermentation |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP23097786 | 1986-09-29 | ||
JP61-230977 | 1986-09-29 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63185392A true JPS63185392A (ja) | 1988-07-30 |
JPH0659229B2 JPH0659229B2 (ja) | 1994-08-10 |
Family
ID=16916288
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP27128686A Expired - Fee Related JPH0659229B2 (ja) | 1986-09-29 | 1986-11-14 | 発酵法によるl−スレオニンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0659229B2 (ja) |
-
1986
- 1986-11-14 JP JP27128686A patent/JPH0659229B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0659229B2 (ja) | 1994-08-10 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |