JPH0659229B2 - 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−スレオニンの製造法Info
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- JPH0659229B2 JPH0659229B2 JP27128686A JP27128686A JPH0659229B2 JP H0659229 B2 JPH0659229 B2 JP H0659229B2 JP 27128686 A JP27128686 A JP 27128686A JP 27128686 A JP27128686 A JP 27128686A JP H0659229 B2 JPH0659229 B2 JP H0659229B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は発酵法によるＬ−スレオニンの製造法に関す
る。
る。
従来の技術 従来、Ｌ−スレオニンの製造法としては、ブレビバクテ
リウム又はコリネバクテリウム属のα−アミノ−β−ヒ
ドロキシ吉草酸（AHV）に耐性を有する変異株を用いる
方法（特公昭45-26708）等が知られている。
リウム又はコリネバクテリウム属のα−アミノ−β−ヒ
ドロキシ吉草酸（AHV）に耐性を有する変異株を用いる
方法（特公昭45-26708）等が知られている。
発明が解決しようとする問題点 従来の方法においては、Ｌ−スレオニンの発酵収率は満
足すべきものでなく、収率を向上させることは工業生産
上に於て重要な問題である。
足すべきものでなく、収率を向上させることは工業生産
上に於て重要な問題である。
問題点を解決するための手段 本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り従来より知られているブレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属に属するＬ−スレオニン生産能を有す
る微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見い
出すべく研究した結果、ミコフェノール酸（以下MPAと
略す。）に耐性を付与した菌株の中に、従来のＬ−スレ
オニン生産菌よりも高収率でＬ−スレオニンを生産する
菌株が存在することを発見した。
り従来より知られているブレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属に属するＬ−スレオニン生産能を有す
る微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見い
出すべく研究した結果、ミコフェノール酸（以下MPAと
略す。）に耐性を付与した菌株の中に、従来のＬ−スレ
オニン生産菌よりも高収率でＬ−スレオニンを生産する
菌株が存在することを発見した。
本発明に使用する微生物としては、ブレビバクテリウム
属又はコリネバクテリウム属に属し、MPAに耐性を有
し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物であれ
ば、化学変異剤、Ｘ線もしくは紫外線処理で誘導される
変異株又は細胞融合法、遺伝子組換え法等で誘導される
組換え体等、いずれも用いられる。
属又はコリネバクテリウム属に属し、MPAに耐性を有
し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物であれ
ば、化学変異剤、Ｘ線もしくは紫外線処理で誘導される
変異株又は細胞融合法、遺伝子組換え法等で誘導される
組換え体等、いずれも用いられる。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に先にＬ−ス
レオニン生産能を付与し、次いでMPA耐性を付与しても
良いし、又、先にMPA耐性を付与し、次いでＬ−スレオ
ニン生産能を付与しても良い。又、AHV耐性のＬ−イソ
ロイシン生産菌よりMPA耐性を誘導することにより、Ｌ
−スレオニン生産能とMPA耐性を同時に有するＬ−スレ
オニン生産菌を取得することも出来る。
レオニン生産能を付与し、次いでMPA耐性を付与しても
良いし、又、先にMPA耐性を付与し、次いでＬ−スレオ
ニン生産能を付与しても良い。又、AHV耐性のＬ−イソ
ロイシン生産菌よりMPA耐性を誘導することにより、Ｌ
−スレオニン生産能とMPA耐性を同時に有するＬ−スレ
オニン生産菌を取得することも出来る。
以上のＬ−スレオニン生産菌株にＬ−スレオニン生産能
を向上させる様な各種の栄養要求性、例えばイソロイシ
ン要求、メチオニン要求、アラニン要求、ジアミメピメ
リン酸要求又はリジン要求等を付与した変異株の時は、
発酵収率が更に向上する場合が多い。
を向上させる様な各種の栄養要求性、例えばイソロイシ
ン要求、メチオニン要求、アラニン要求、ジアミメピメ
リン酸要求又はリジン要求等を付与した変異株の時は、
発酵収率が更に向上する場合が多い。
本発明の微生物を誘導するための代表的な野生株として
は下記のような微生物がある。ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ATCC13869ブレビバクテリウム・ディバリティカム ATCC14020ブレビバクテリウム・フラバム ATCC14067コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC13032コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ATCC13870 本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法とMPAに対
する菌株の生育度の関係を以下に示す。
は下記のような微生物がある。ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ATCC13869ブレビバクテリウム・ディバリティカム ATCC14020ブレビバクテリウム・フラバム ATCC14067コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC13032コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ATCC13870 本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法とMPAに対
する菌株の生育度の関係を以下に示す。
ブイヨン寒天スラント上に３０℃で２４時間生育させた
ブレビバクテリウム・フラバムATCC21269（ATCC14067よ
り誘導したAHV耐性株）及びコリネバクテリウム・アセ
トアシドフィラムAJ12315（ATCC13870より誘導したAHV
耐性株）の菌体をM/30リン酸緩衝液に懸濁し１０９／ml
の菌体懸濁液に２５０μｇ／mlのＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え３０℃に１５分間
静置した。ついで同緩衝液で２回遠心洗滌後、下記組成
の培地に接種し、３１℃で５日間培養した。
ブレビバクテリウム・フラバムATCC21269（ATCC14067よ
り誘導したAHV耐性株）及びコリネバクテリウム・アセ
トアシドフィラムAJ12315（ATCC13870より誘導したAHV
耐性株）の菌体をM/30リン酸緩衝液に懸濁し１０９／ml
の菌体懸濁液に２５０μｇ／mlのＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え３０℃に１５分間
静置した。ついで同緩衝液で２回遠心洗滌後、下記組成
の培地に接種し、３１℃で５日間培養した。
寒天培地に生育した菌株の中からＬ−スレオニン生産能
の高い菌株としてブレビバクテリウム・フラバムAJ1231
2，FERM BP-1173（AHV耐性，MPA耐性）及びコリネバク
テリウム・アセトアシドフィラムAJ12316（AHV耐性，MP
A耐性）を得た。
の高い菌株としてブレビバクテリウム・フラバムAJ1231
2，FERM BP-1173（AHV耐性，MPA耐性）及びコリネバク
テリウム・アセトアシドフィラムAJ12316（AHV耐性，MP
A耐性）を得た。
さらに、上記培地組成にＬ−イソロイシン１５mg/dlを
添加し、同様の変異操作により、ブレビバクテリアム・
フラバムAJ12313（ATCC14067より誘導したAHV耐性，イ
ソロイシン要求株）及びコリネバクテリウム・アセトア
シドフィラムAJ12317（ATCC13870より誘導したAHV耐
性，イソロイシン要求株）から、各々、Ｌ−スレオニン
生産能の高い菌株として、ブレビバクテリウム・フラバ
ムAJ12314（AHV耐性，イソロイシン要求性，MPA耐性）
及びコリネバクテリウム・アセトアシドフィラムAJ1231
8 FERM BP-1172（AHV耐性，イソロイシン要求性，MPA耐
性）を誘導した。
添加し、同様の変異操作により、ブレビバクテリアム・
フラバムAJ12313（ATCC14067より誘導したAHV耐性，イ
ソロイシン要求株）及びコリネバクテリウム・アセトア
シドフィラムAJ12317（ATCC13870より誘導したAHV耐
性，イソロイシン要求株）から、各々、Ｌ−スレオニン
生産能の高い菌株として、ブレビバクテリウム・フラバ
ムAJ12314（AHV耐性，イソロイシン要求性，MPA耐性）
及びコリネバクテリウム・アセトアシドフィラムAJ1231
8 FERM BP-1172（AHV耐性，イソロイシン要求性，MPA耐
性）を誘導した。
このようにして得られた変異株のMPA耐性度を親株と比
較した。
較した。
グルコース０．５ｇ／dl，尿素０．２ｇ／dl，硫安０．
１５ｇ／dl，KH2PO4０．３ｇ／dl，K2HPO4０．１ｇ／d
l，MgSO4・7H2O０．０１ｇ／dl，CaCl2・2H2O０．１mg／d
l，ビオチン１００μｇ／，サイアミン・塩酸塩１０
０μｇ／，FeSO4・7H2O０．００２ｇ／dl，MnSO4・7H2O
０．００２ｇ／dl，イソロイシン要求性変異株のときは
Ｌ−イソロイシン１５mg／dl添加、および表に示す量の
MPAを含み、pH７．０に調節した培地にブイヨンスラン
トで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、
２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
１５ｇ／dl，KH2PO4０．３ｇ／dl，K2HPO4０．１ｇ／d
l，MgSO4・7H2O０．０１ｇ／dl，CaCl2・2H2O０．１mg／d
l，ビオチン１００μｇ／，サイアミン・塩酸塩１０
０μｇ／，FeSO4・7H2O０．００２ｇ／dl，MnSO4・7H2O
０．００２ｇ／dl，イソロイシン要求性変異株のときは
Ｌ−イソロイシン１５mg／dl添加、および表に示す量の
MPAを含み、pH７．０に調節した培地にブイヨンスラン
トで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、
２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
上述の変異株にＯ−メチルスレオニン耐性，Ｄ−スレオ
ニン耐性，β−ヒドロキシロイシン耐性又はビタミン−
Ｐ耐性のようにすでにＬ−スレオニンの生産性を向上せ
しめることが知られている性質を更に付加することによ
り、収率が向上する場合が多い。
ニン耐性，β−ヒドロキシロイシン耐性又はビタミン−
Ｐ耐性のようにすでにＬ−スレオニンの生産性を向上せ
しめることが知られている性質を更に付加することによ
り、収率が向上する場合が多い。
このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭素
源，窒素源，無機イオン，上記要求性を満足させるべき
物質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素
を含有する通常の培地である。
源，窒素源，無機イオン，上記要求性を満足させるべき
物質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素
を含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース，シュクロース等の炭水化
物，酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア
水，アンモニアガス，アンモニウム塩等が好適である。
無機イオンとしてはカリイオン，ナトリウムイオン，マ
グネシウムイオン，リン酸イオンその他が必要に応じ適
宜培地に添加される。
物，酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア
水，アンモニアガス，アンモニウム塩等が好適である。
無機イオンとしてはカリイオン，ナトリウムイオン，マ
グネシウムイオン，リン酸イオンその他が必要に応じ適
宜培地に添加される。
培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地のpHを４な
いし８に温度を２５℃ないし３７℃に調節しつつ行えば
より好ましい結果が得られる。かくして１ないし７日間
も培養すれば培地中に著量のＬ−スレオニンが生成蓄積
され、かつ、培地中へのＬ−リジンの生成は極めて少な
い。培養液よりＬ−スレオニンを採取する方法はイオン
交換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
いし８に温度を２５℃ないし３７℃に調節しつつ行えば
より好ましい結果が得られる。かくして１ないし７日間
も培養すれば培地中に著量のＬ−スレオニンが生成蓄積
され、かつ、培地中へのＬ−リジンの生成は極めて少な
い。培養液よりＬ−スレオニンを採取する方法はイオン
交換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
以下実施例にて説明する。
実施例１ グルコース１０ｇ／dl，硫酸アンモニウム４ｇ／dl，KH
2PO4０．１ｇ／dl，MgSO4・7H2O０．１ｇ／dl，FeSO4・7H
2O１mg／dl，MnSO4・4H2O１mg／dl，ビオチン１００μｇ
／，サイアミン・HCl１００μｇ／，大豆蛋白酸加
水分解液８０mg−Ｎ／dl，炭酸カルシウム５ｇ／dl（別
殺菌添加）を含む培地をpH７．０に調節し、その２０ml
を５００ml容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。これに
第１表に示す菌株を一白金耳接種し、３１．５℃に保ち
つつ４日間振盪培養した。各菌株の培養液中には第３表
に示す量のＬ−スレオニンが蓄積した。AJ12312を上記
の方法で培養して培養液１を得、これより遠心分離に
て菌体を除き、上清を強酸性イオン交換樹脂「ダイヤイ
オン」ＳＫ−１Ｂに通過させた。樹脂を水洗後、２Ｎ−
アンモニア水にて溶出し、ついて溶出液を濃縮し、これ
よりＬ−スレオニンの結晶６．２ｇを得た。
2PO4０．１ｇ／dl，MgSO4・7H2O０．１ｇ／dl，FeSO4・7H
2O１mg／dl，MnSO4・4H2O１mg／dl，ビオチン１００μｇ
／，サイアミン・HCl１００μｇ／，大豆蛋白酸加
水分解液８０mg−Ｎ／dl，炭酸カルシウム５ｇ／dl（別
殺菌添加）を含む培地をpH７．０に調節し、その２０ml
を５００ml容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。これに
第１表に示す菌株を一白金耳接種し、３１．５℃に保ち
つつ４日間振盪培養した。各菌株の培養液中には第３表
に示す量のＬ−スレオニンが蓄積した。AJ12312を上記
の方法で培養して培養液１を得、これより遠心分離に
て菌体を除き、上清を強酸性イオン交換樹脂「ダイヤイ
オン」ＳＫ−１Ｂに通過させた。樹脂を水洗後、２Ｎ−
アンモニア水にて溶出し、ついて溶出液を濃縮し、これ
よりＬ−スレオニンの結晶６．２ｇを得た。
実施例２ グルコース５ｇ／dl，硫酸アンモニウム０．２ｇ／dl，
尿素０．２ｇ／dl，KH2PO4０．１５ｇ／dl，MgSO4・7H2O
０．０４ｇ／dl，FeSO4・7H2O１mg／dl，ビタミンＢ１・
塩酸塩１００μｇ／，ビオチン３００μｇ／，大豆
蛋白質加水分解液１４０mg／dl（全窒素として）を含む
種母培地をpH７．０に調節し、その５０mlを５００ml容
肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。
尿素０．２ｇ／dl，KH2PO4０．１５ｇ／dl，MgSO4・7H2O
０．０４ｇ／dl，FeSO4・7H2O１mg／dl，ビタミンＢ１・
塩酸塩１００μｇ／，ビオチン３００μｇ／，大豆
蛋白質加水分解液１４０mg／dl（全窒素として）を含む
種母培地をpH７．０に調節し、その５０mlを５００ml容
肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。
これに第３表に示す菌株をそれぞれ接種し、３１．５℃
に保ちつつ、１８時間振盪培養し種母培養液を得た。
に保ちつつ、１８時間振盪培養し種母培養液を得た。
一方、グルコース２ｇ／dl，硫酸アンモニウム１ｇ／d
l，KH2PO4０．１５ｇ／dl，MgSO4・7H2O０．０４ｇ／d
l，FeSO4・7H2O１mg／dl，MnSO4・7H2O１mg／dl，ビオチ
ン５０μｇ／，ビタミンＢ１・塩酸塩５００μｇ／
，大豆蛋白酸加水分解物（全窒素として）３２mg／d
l，使用菌株がＬ−イソロイシンを要求する場合は、Ｌ
−イソロイシン４０mg／dlを含み、pH７．０に調整した
培地の２８５mlを１容ファーメンターに入れ殺菌し
た。これに種母培養液をそれぞれ１５mlずつ接種した。
培養中、酢酸と酢酸アンモニウムとのモル比率が１＝
０．２の混合液（酢酸濃度として７０ｇ／dl）を添加し
つつ培養がpH７．５に保持しつつ通気攪拌下に３日間培
養した。Ｌ−スレオニンの蓄積と対酢酸重量収率は第３
表に示す通りであった。
l，KH2PO4０．１５ｇ／dl，MgSO4・7H2O０．０４ｇ／d
l，FeSO4・7H2O１mg／dl，MnSO4・7H2O１mg／dl，ビオチ
ン５０μｇ／，ビタミンＢ１・塩酸塩５００μｇ／
，大豆蛋白酸加水分解物（全窒素として）３２mg／d
l，使用菌株がＬ−イソロイシンを要求する場合は、Ｌ
−イソロイシン４０mg／dlを含み、pH７．０に調整した
培地の２８５mlを１容ファーメンターに入れ殺菌し
た。これに種母培養液をそれぞれ１５mlずつ接種した。
培養中、酢酸と酢酸アンモニウムとのモル比率が１＝
０．２の混合液（酢酸濃度として７０ｇ／dl）を添加し
つつ培養がpH７．５に保持しつつ通気攪拌下に３日間培
養した。Ｌ−スレオニンの蓄積と対酢酸重量収率は第３
表に示す通りであった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鈴木 武 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社川崎工場内 審査官 斉藤 真由美
Claims (1)
- 【請求項１】ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属に属し、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸に耐
性かつミコフェノール酸に耐性であり、Ｌ−スレオニン
を培地中に生成蓄積する能力を有する微生物を培養し、
培地中に生成蓄積したＬ−スレオニンを採取することを
特徴とする発酵法によるＬ−スレオニンの製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8713461A FR2604447B1 (fr) | 1986-09-29 | 1987-09-29 | Procede de production de l-threonine par fermentation |
| US07/571,821 US5188949A (en) | 1986-09-29 | 1990-08-22 | Method for producing L-threonine by fermentation |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23097786 | 1986-09-29 | ||
| JP61-230977 | 1986-09-29 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63185392A JPS63185392A (ja) | 1988-07-30 |
| JPH0659229B2 true JPH0659229B2 (ja) | 1994-08-10 |
Family
ID=16916288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27128686A Expired - Fee Related JPH0659229B2 (ja) | 1986-09-29 | 1986-11-14 | 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0659229B2 (ja) |
-
1986
- 1986-11-14 JP JP27128686A patent/JPH0659229B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63185392A (ja) | 1988-07-30 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |