JPH0822233B2 - 醗酵法によるｌ−スレオニンの製造法 - Google Patents
醗酵法によるｌ−スレオニンの製造法Info
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- JPH0822233B2 JPH0822233B2 JP12699888A JP12699888A JPH0822233B2 JP H0822233 B2 JPH0822233 B2 JP H0822233B2 JP 12699888 A JP12699888 A JP 12699888A JP 12699888 A JP12699888 A JP 12699888A JP H0822233 B2 JPH0822233 B2 JP H0822233B2
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ−スレオニンは、必須アミノ酸の一つであり医薬品
や食品添加物、飼料添加物等に利用されている。本発明
は、醗酵法によるＬ−スレオニンの製造方法に関するも
のである。
や食品添加物、飼料添加物等に利用されている。本発明
は、醗酵法によるＬ−スレオニンの製造方法に関するも
のである。
従来、プロテウス属に属する微生物を用いた醗酵法に
よるＬ−スレオニンの製造法として、具体的な種とし
て、プロテウス レトゲリが多く使用されてきた。しか
し、現在このプロテウス・レトゲリは、バージーズ マ
ニュアル オブ システマティック バクテリオロジー
第１版（BERGEY'S MANUAL OF Systematic Bacter
iology Volume １）では、プロビデンシア属に属して
いる。
よるＬ−スレオニンの製造法として、具体的な種とし
て、プロテウス レトゲリが多く使用されてきた。しか
し、現在このプロテウス・レトゲリは、バージーズ マ
ニュアル オブ システマティック バクテリオロジー
第１版（BERGEY'S MANUAL OF Systematic Bacter
iology Volume １）では、プロビデンシア属に属して
いる。
プロテウスまたはプロビデンシア属に属する微生物を
用いた醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法としては、
例えばＬ−イソロイシン要求性を有する微生物を用いる
方法（特公昭43−4440）が知られている。
用いた醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法としては、
例えばＬ−イソロイシン要求性を有する微生物を用いる
方法（特公昭43−4440）が知られている。
しかし、この方法によるＬ−スレオニンの生成蓄積濃
度は高価なホモセリンを培地に添加しない限り十分に満
足できるものではなかった。本発明者らは、ホモセリン
を使用しない場合でも生産性の高いＬ−スレオニンの製
造法について鋭意研究した結果、プロビデンシア属に属
し８−アザグアニン耐性を有する変異株が著量のＬ−ス
レオニンを蓄積することを見出し本発明を完成するに至
った。
度は高価なホモセリンを培地に添加しない限り十分に満
足できるものではなかった。本発明者らは、ホモセリン
を使用しない場合でも生産性の高いＬ−スレオニンの製
造法について鋭意研究した結果、プロビデンシア属に属
し８−アザグアニン耐性を有する変異株が著量のＬ−ス
レオニンを蓄積することを見出し本発明を完成するに至
った。
本発明は、プロビデンシア属に属し、８−アザグアニ
ン耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生
物を培養し、培地中にＬ−スレオニンを生成蓄積せし
め、該培養物からＬ−スレオニンを採取することを特徴
とする醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法に関する。
ン耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生
物を培養し、培地中にＬ−スレオニンを生成蓄積せし
め、該培養物からＬ−スレオニンを採取することを特徴
とする醗酵法によるＬ−スレオニンの製造法に関する。
本発明で使用される微生物としてはプロビデンシア属
に属し８−アザグアニン耐性、例えば８−アザグアニン
を25μg/ml添加した培地中での相対生育度が約50％以上
の耐性を有する微生物が好ましく、該耐性を有していれ
ば他の薬剤に対する耐性あるいはアミノ酸、核酸、ビタ
ミンなどの栄養要求性などいくつかの性質をあわせて持
っている微生物のいずれも使用できる。
に属し８−アザグアニン耐性、例えば８−アザグアニン
を25μg/ml添加した培地中での相対生育度が約50％以上
の耐性を有する微生物が好ましく、該耐性を有していれ
ば他の薬剤に対する耐性あるいはアミノ酸、核酸、ビタ
ミンなどの栄養要求性などいくつかの性質をあわせて持
っている微生物のいずれも使用できる。
このような微生物の代表的なものとしては、プロビデ
ンシア属に属する微生物に紫外線照射、γ−線照射、Ｎ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンなど
の薬剤処理等の変異処理をして得た変異株をあげること
ができる。
ンシア属に属する微生物に紫外線照射、γ−線照射、Ｎ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンなど
の薬剤処理等の変異処理をして得た変異株をあげること
ができる。
変異処理した菌体から本発明の変異株を分離する方法
は、親株が生育できないような量の８−アザグアニンを
含む固体培地中に生育できるような菌株を採取すること
により行われる。
は、親株が生育できないような量の８−アザグアニンを
含む固体培地中に生育できるような菌株を採取すること
により行われる。
本発明で使用される微生物として具体的には、例えば
プロビデンシア レトゲリNK−878002株（微工研菌寄第
10009号）があげられる。このプロビデンシア レトゲ
リNK−878002株（微工研菌寄第10009号）は、プロビデ
ンシア レトゲリを変異処理して得られたもので、その
菌学的諸性質は以下のとおりである。
プロビデンシア レトゲリNK−878002株（微工研菌寄第
10009号）があげられる。このプロビデンシア レトゲ
リNK−878002株（微工研菌寄第10009号）は、プロビデ
ンシア レトゲリを変異処理して得られたもので、その
菌学的諸性質は以下のとおりである。
（ａ） 形 態 肉汁寒天斜面上で30℃２日間培養後の観察では細胞は
直径0.6〜0.8μ長さ1.5〜2.5μの長桿菌である。細胞の
多形性はない。運動性はあり、周鞭毛を有する。又、胞
子は形成しない。グラム染色は陰性で、抗酸性を示さな
い。
直径0.6〜0.8μ長さ1.5〜2.5μの長桿菌である。細胞の
多形性はない。運動性はあり、周鞭毛を有する。又、胞
子は形成しない。グラム染色は陰性で、抗酸性を示さな
い。
（ｂ） 各種培地上での生育状態 30℃で培養し、１ないし７日間にわたって観察した。
肉汁寒天平板培養：コロニーは正円、円状に隆起し、
周縁表面とも平滑乳白色やや透明、幾分光沢を有する。
生育は普通である。色素は生成しない。
周縁表面とも平滑乳白色やや透明、幾分光沢を有する。
生育は普通である。色素は生成しない。
肉汁寒天斜面培養：疣状から広布状で光沢があり乳白
色、やや透明、隆起状、あるいは中凹状となる。
色、やや透明、隆起状、あるいは中凹状となる。
肉汁液体培養：表面発育認められず、濁度中位で余剰
菌体は沈澱する。
菌体は沈澱する。
ゼラチンさくし培養：ゼラチンは液化しない。
（ｃ） 生理的性質 硝酸塩の還元：陽性 MRテスト：陽性 VPテスト：陰性 インドールの生成：陽性 クエン酸の利用：陽性 ウレアーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 フェニールアラニン デアミナーゼ：陽性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 アルギニン ジヒドロラーゼ：陰性 リジン デカルボキシラーゼ：陰性 オルニチン デカルボキシラーゼ：陰性 硫化水素の生成：陰性 酸素に対する態度：嫌気性、好気性で発育 糖からの酸の生成 Ｌ−アラビノース 陰性 Ｄ−グルコース 陽性 Ｄ−マンノース 陽性 シヨ糖 陰性 マルトース 陰性 トレハロース 陰性 Ｄ−ソルビット 陰性 Ｄ−マンニット 陽性 イノシット 陽性 エスクリン 陰性 Ｄ−アラビトール 陽性 アドニット 陽性 ラムノース 陽性 メリビオース 陰性 アミグダリン 陰性 以上の菌学的諸性質をバージーズ マニュアル オブ
システマティック バクテリオロジー 第１版（BERG
EY'S MANUAL OF Systematic Bacteriology Volume
１）に記載の種と照合すると、プロビデンシア レト
ゲリと一致する。
システマティック バクテリオロジー 第１版（BERG
EY'S MANUAL OF Systematic Bacteriology Volume
１）に記載の種と照合すると、プロビデンシア レト
ゲリと一致する。
本発明で使用するNK−878002株と親株について、８−
アザグアニン添加濃度の変化に伴う生育度の変化を調べ
たところ表１に示す通りであった。
アザグアニン添加濃度の変化に伴う生育度の変化を調べ
たところ表１に示す通りであった。
尚、本試験は、次のようにして行った。即ち、表２の
最小培地に８−アザグアニンを添加した培地を用い、長
さ180mm、径18mmの試験官に10mlの培地を分注・殺菌し
たものにそれぞれの菌株を接種し24時間、30℃で振盪培
養した後、610nmにおける吸光度を測定した。
最小培地に８−アザグアニンを添加した培地を用い、長
さ180mm、径18mmの試験官に10mlの培地を分注・殺菌し
たものにそれぞれの菌株を接種し24時間、30℃で振盪培
養した後、610nmにおける吸光度を測定した。
本発明におけるＬ−スレオニン生産用の培地は、炭素
源としてはグルコース、フラクトース、澱粉およびその
分解物等の種類、フマール酸、コハク酸、クエン酸等の
有機酸などが好適であり、窒素源としては硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、アンモニア水、アンモニアガ
ス等が好適である。無機塩としてはナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウム、マンガン、リン酸など
の塩類を必要に応じて使用する。
源としてはグルコース、フラクトース、澱粉およびその
分解物等の種類、フマール酸、コハク酸、クエン酸等の
有機酸などが好適であり、窒素源としては硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、アンモニア水、アンモニアガ
ス等が好適である。無機塩としてはナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウム、マンガン、リン酸など
の塩類を必要に応じて使用する。
又、微量のビタミン類、核酸類は必要に応じて添加す
る。又、使用菌の要求物質は単品として添加してもそれ
を含有する天然系物質のいずれを用いてもよく、天然系
物質として例えばコーンスチープリカー、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス等がある。
る。又、使用菌の要求物質は単品として添加してもそれ
を含有する天然系物質のいずれを用いてもよく、天然系
物質として例えばコーンスチープリカー、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス等がある。
培養条件は振盪培養、通気撹拌培養などの好気的条件
下で行うのが良く培養中のpHは４〜９の範囲に炭酸カル
シウムやアンモニア水、アンモニアガス、鉱酸で保つの
がよい。又、培養温度は20℃〜40℃の間が良く、培養日
数は通常２〜６日である。
下で行うのが良く培養中のpHは４〜９の範囲に炭酸カル
シウムやアンモニア水、アンモニアガス、鉱酸で保つの
がよい。又、培養温度は20℃〜40℃の間が良く、培養日
数は通常２〜６日である。
培養終了液からＬ−スレオニンを採取する方法は公知
のイオン交換樹脂法、濃縮法、吸着法、塩析法などを併
用して行うことが出来る。
のイオン交換樹脂法、濃縮法、吸着法、塩析法などを併
用して行うことが出来る。
後記実施例及び参考例に示す如く、８−アザグアニン
耐性変異株とその親株を培養した結果を表３に示した。
耐性変異株とその親株を培養した結果を表３に示した。
本発明例のプロビデンシア レトゲリNK−878002株で
は、スレオニンの蓄積濃度が顕著に向上した。
は、スレオニンの蓄積濃度が顕著に向上した。
参考例 ８−アザグアニン耐性株の取得 プロビデンシア レトゲリの菌体を100γ/ml N−メチ
ル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン溶液（0.05
Mリン酸緩衝液）にけん濁し、30℃に10分保った後遠沈
集菌し生理食塩水で洗浄する。これを再び遠沈集菌し、
生理食塩水にけん濁した菌液を８−アザグアニン100g/l
を含有した寒天平板培地（グルコース0.2％、硫安0.1
％、K2HPO40.7％、KH2PO40.3％、MgSO40.01％、クエン
酸ナトリウム0.01％、Ｌ−イソロイシン0.05％）に塗布
し30℃、72時間培養し生育した大きなコロニーを釣菌分
離して、８−アザグアニン耐性株（プロビデンシア レ
トゲリNK−878002株）を取得した。
ル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン溶液（0.05
Mリン酸緩衝液）にけん濁し、30℃に10分保った後遠沈
集菌し生理食塩水で洗浄する。これを再び遠沈集菌し、
生理食塩水にけん濁した菌液を８−アザグアニン100g/l
を含有した寒天平板培地（グルコース0.2％、硫安0.1
％、K2HPO40.7％、KH2PO40.3％、MgSO40.01％、クエン
酸ナトリウム0.01％、Ｌ−イソロイシン0.05％）に塗布
し30℃、72時間培養し生育した大きなコロニーを釣菌分
離して、８−アザグアニン耐性株（プロビデンシア レ
トゲリNK−878002株）を取得した。
表４に示す組成のシード培地100mlを500ml容三角コル
ベンに分注し、115℃で15分間殺菌する。次いでそのシ
ード培地にNK−878002株を接種し、30℃で24時間培養す
る。その後表４に示す生産培地20mlを500ml容三角コル
ベンに分注し、115℃で15分間殺菌した培地にその培養
物を５％となるよう接種し、30℃で４日間振盪培養す
る。培養終了時のＬ−スレオニン蓄積量は6.2g/であ
った。培養終了液1000mlを遠心して菌体及び炭酸カルシ
ウム等の不溶物を除去し上澄液を陽イオン交換樹脂（H+
型）に通塔する。吸着したＬ−スレオニンを3.0％のア
ンモニア水で溶出しＬ−スレオニン含有区分を濃縮して
Ｌ−スレオニンの粗結晶を得た。粗結晶を水で溶解して
再び濃縮してＬ−スレオニンの結晶4.5gを得た。
ベンに分注し、115℃で15分間殺菌する。次いでそのシ
ード培地にNK−878002株を接種し、30℃で24時間培養す
る。その後表４に示す生産培地20mlを500ml容三角コル
ベンに分注し、115℃で15分間殺菌した培地にその培養
物を５％となるよう接種し、30℃で４日間振盪培養す
る。培養終了時のＬ−スレオニン蓄積量は6.2g/であ
った。培養終了液1000mlを遠心して菌体及び炭酸カルシ
ウム等の不溶物を除去し上澄液を陽イオン交換樹脂（H+
型）に通塔する。吸着したＬ−スレオニンを3.0％のア
ンモニア水で溶出しＬ−スレオニン含有区分を濃縮して
Ｌ−スレオニンの粗結晶を得た。粗結晶を水で溶解して
再び濃縮してＬ−スレオニンの結晶4.5gを得た。
実施例で使用した菌株を親株におきかえて同様の方法
で培養した。培養終了時のＬ−スレオニン蓄積量は1.8g
/であった。また、実施例と同様の方法で精製しＬ−
スレオニンの結晶1.3gを得た。
で培養した。培養終了時のＬ−スレオニン蓄積量は1.8g
/であった。また、実施例と同様の方法で精製しＬ−
スレオニンの結晶1.3gを得た。
Claims (2)
- 【請求項１】プロビデンシア属に属し、８−アザグアニ
ン耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微生
物を培養し、培地中に生成蓄積したＬ−スレオニンを採
取することを特徴とするＬ−スレオニンの製造法。 - 【請求項２】プロビデンシア属に属し８−アザグアニン
耐性を有しかつＬ−スレオニン生産能を有する微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12699888A JPH0822233B2 (ja) | 1988-05-26 | 1988-05-26 | 醗酵法によるｌ−スレオニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12699888A JPH0822233B2 (ja) | 1988-05-26 | 1988-05-26 | 醗酵法によるｌ−スレオニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01296993A JPH01296993A (ja) | 1989-11-30 |
| JPH0822233B2 true JPH0822233B2 (ja) | 1996-03-06 |
Family
ID=14949139
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12699888A Expired - Fee Related JPH0822233B2 (ja) | 1988-05-26 | 1988-05-26 | 醗酵法によるｌ−スレオニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0822233B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3151073B2 (ja) * | 1992-02-25 | 2001-04-03 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
-
1988
- 1988-05-26 JP JP12699888A patent/JPH0822233B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01296993A (ja) | 1989-11-30 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |