JP4380305B2 - 発酵法によるl−アミノ酸の製造法 - Google Patents
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Description
また、この制御領域は、プロモーター領域と開始コドンの間に存在する数十塩基からなるリーダー配列とアテニュエーターからなることが知られている。
ノ酸、特にL−スレオニン又はL−イソロイシンを生産する能力を向上させることを課題とする。
(1) L−スレオニン又はL−イソロイシン生産能を有するエシェリヒア属細菌であって、スレオニンオペロン固有のプロモーターにより発現が制御され、かつアテニュエーションによる制御が解除されるようにリーダー配列とアテニュエーターが除去されたスレオニンオペロンを保持することを特徴とする、エシェリヒア属細菌。
(2) 前記スレオニンオペロンをプラスミド上に保持する(1)のエシェリヒア属細菌。
(3) 前記スレオニンオペロンを染色体上に保持する(1)のエシェリヒア属細菌。
(4) L−イソロイシン生合成系酵素の活性が増強され、L−イソロイシン生産能を有する、(1)のエシェリヒア属細菌。
(5) リーダー配列及びアテニュエーターを含むアテニュエーションに関与する領域、スレオニンオペロン固有のプロモーター、並びにthrABC構造遺伝子を含むスレオニンオペロンにおいて、少なくともリーダー配列とアテニュエーター配列が除去されたことを特徴とするスレオニンオペロン。
(6) 配列番号1に示す配列の塩基番号188〜310に相当する配列が除去された配列を有する、(5)のスレオニンオペロン。
(7) 配列番号1に示す配列の塩基番号168〜310に相当する配列が除去された配列を有する、(5)のスレオニンオペロン。
(8) 配列番号1に示す配列の塩基番号148〜310に相当する配列が除去された配列を有する、(5)のスレオニンオペロン。
(9) (1)〜(4)のいずれかのエシェリヒア属細菌を培地中で培養し、該培地中にL−スレオニン又はL−イソロイシンを生成・蓄積せしめ、L−スレオニン又はL−イソロイシンを培地から採取することを特徴とする、L−スレオニン又はL−イソロイシンの製造法。
<1>本発明のエシェリヒア属細菌
本発明のエシェリヒア属細菌は、L−スレオニン又はL−イソロイシン生産能を有するエシェリヒア属細菌であって、スレオニンオペロン固有のプロモーターにより発現が制御され、かつアテニュエーションによる制御が解除されるようにリーダー配列とアテニュエーターが除去されたスレオニンオペロン(以下、本発明のスレオニンオペロンということがある)を保持することを特徴とする、エシェリヒア属細菌である。本発明のエシェリヒ
ア属細菌は、L−スレオニン及びL−イソロイシン生産能を両方有するものであってもよい。
12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, United States of America)より分譲を受けることが出来る。すなわち各菌株毎に対応する登録番号が付与されており、この登録番号を利用して分譲を受けることが出来る。各菌株に対応する登録番号は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションのカタログに記載されている。
以下、エシェリヒア属細菌にL−スレオニン又はL−イソロイシン生産能を付与する方法について述べる。なお、本発明において、「L−スレオニン生産能」とは、培地中で培養したときに、培地中にL−スレオニンを生成し、蓄積する能力をいう。また、本発明において、「L−イソロイシン生産能」とは、培地中で培養したときに、培地中にL−イソロイシンを生成し、蓄積する能力をいう。
-29559号公報、特開平05−227977号公報、特開平5−227977号公報)や、スレオニンオペロンをプラスミドで増幅した菌株(特開平2−109985号公報)、ピルビン酸カルボキシラーゼをコードする遺伝子及びニコチンアミド・ヌクレオチド・トランスヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を増幅した菌株(特開2002−51787号公報)等が挙げられる。
Collection of Industrial Microorganisms (VKPM), GNII Genetika )に登録番号VKPM B-3996 のもとに寄託されている。また、このVKPM B-3996株は、ストレプトマイシン耐性マーカーを有する広域ベクタープラスミドpAYC32(Chistorerdov, A.Y., Tsygankov, Y.D.Plasmid, 1986, 16, 161-167を参照のこと)にスレオニン生合成系遺伝子(スレオニンオペロン:thrABC)を挿入して得られたプラスミドpVIC40(WO90/04636国際公開パンフレット)を保持している。このpVIC40においては、スレオニンオペロン中のthrAがコードするアスパルトキナーゼI−ホモセリンデヒドロゲナーゼIの、L−スレオニンによるフィードバック阻害が解除されている。
スレオニンオペロンの転写はイソロイシン、又はスレオニンが存在することで、アテニュエーションと呼ばれる転写制御を受け、転写が減衰されることが知られている(J.Mol.Biol(1985) 183,529-541)。このアテニュエーションによる制御を解除することは、これらのアミノ酸を高生産する上で重要である。
な機構で行われる。すなわち、細胞内のイソロイシン、スレオニンの濃度が高いとき、培養液中のスレオニニル-tRNA及びイソロイシル-tRNAの濃度が上昇する。従って、スレオニン、イソロイシンコドンを多くコードするリーダーペプチドを翻訳するのに充分なtRNA−アミノ酸複合体が細胞内に存在することになる。従ってリーダー配列がスムーズに転写、翻訳され、リーダーペプチド自身の終始コドンで翻訳が終結する。さらに、アテニュエーターの回文配列が相補的に結合することによって、ステムループ構造を形成し、ステムループ構造がターミネーターとして機能することにより転写が終結する。従って、スレオニンオペロンまで転写が進行しにくくなり、スレオニン生合成系遺伝子の発現量が減少することとなる。
遺伝子」は、アスパルトキナーゼI−ホモセリンデヒドロゲナーゼ、ホモセリンキナーゼ、及びスレオニンシンターゼの活性を有するタンパク質をそれぞれコードする限り、改変されたものであってもよい。例えば、既述したpVIC40に搭載されたthrABC遺伝子のように、L-スレオニンによるフィードバック阻害が解除されるように改変されたものであってもよい。
ーゼI−ホモセリンデヒドロゲナーゼ(thrA)、ホモセリンキナーゼ(thrB)、スレオニンシンターゼ(thrC)の比活性が野生株又は親株に比べて増大することを意味する。ここで、比較対象となる野生型のエシェリヒア属細菌としては、例えばエシェリヒア・コリ W3110(ATCC27325)が挙げられる。
211 (1991) ), pHSG415、pHSG422(Hashimoto-Gotoh, T. et al, 16,227-235(1981)等が挙げられる。
上記のようにしてスレオニンオペロンのアテニュエーションに関与する領域を欠失させる、あるいは変異を導入することにより、スレオニンオペロンの発現量が増大したL−スレオニン又はL−イソロイシンを生産する能力を有するエシェリヒア属細菌を培地に培養し、培地中にスレオニン又はイソロイシンを生成蓄積せしめ、スレオニン又はイソロイシンを該培地から採取することにより、L−スレオニン、又はL−イソロイシンを製造することが出来る。なお、L−スレオニン及びL−イソロイシンを同時に製造してもよい。
<1>アテニュエーター除去用プラスミドの作製
エシェリヒア・コリで自律複製可能なスレオニンオペロンを搭載したプラスミドpVIC40(特表平3−501682)を制限酵素HindIIIとBamHIで制限酵素処理し、スレオニンオペロンを含む約6Kbpの断片を得た。次にpBR322(宝酒造株式会社から購入)を制限酵素HindIII、BamHI処理し、この領域に上述のスレオニンオペロンを含む約6Kbpの断片を挿入し、pBRT3240Aを得た。このpBRT3240AをMluI処理した部位に、配列番号8に示すオリゴヌク
レオチドとその相補鎖を結合させて得られる制限酵素XbaI認識部位を導入したアダプターをプラスミドに挿入して、プラスミドpBR3240Aを得た。
スレオニンオペロンのアテニュエーター領域が除去したプラスミドpVICΔT3を増幅した形質転換体Gif33/pVICΔT3と、アテニュエーターが野生型のプラスミドpVIC40を増幅したプラスミドGif33/pVIC40を用いて以下の培養を行い、ホモセリンデヒドロゲナーゼ(以下、HDと呼ぶ)活性を測定した。
上述の記載通り、アテニュエーターの除去のみでは、イソロイシン添加下でのアテニュエーション制御を回避することはできなかった。そこで、アテニュエーション領域の除去に加え、リーダー配列を段階的に除去させることとした。まずpVIC40を鋳型としてPCRを行い、リーダー配列領域除去型の配列を作製した。プロモーター上流領域に位置する配列の相補鎖である配列番号9に示すオリゴヌクレオチドと、配列番号10−14に示すオリゴヌクレオチドを用いて、PCRを行い、プロモーターと種々のリーダー配列の長さを持つthrAの上流領域を取得した。本DNA断片を常法により精製し、pHSG398(宝酒造製)のHincII処理物に連結してそれぞれプロモーターと種々のリーダー配列の長さが、配列番号9と10で増幅した配列に由来するプラスミドpHPBthr, 配列番号9と11で増幅した配列に由来するプラスミドpHPCthr, 配列番号9と12で増幅した配列に由来するプラスミドpHPDthr, 配列番号9と13で増幅した配列に由来するプラスミドpHPEthr, 配列番号9と14で増幅した配列に由来するプラスミドpHPFthrを得た。次にこの5種のプラスミドを制限酵素HindIIIとBamHIで処理し、thrA上流領域を含む断片をpBR322(ニッポンジーン社製)のHindIII、BamHI領域に導入し、プラスミドpBRBthr,pBRCthr,pBRDthr,pBREthr,pBRFthrを取得した。
取得されたプラスミドのいくつかについて、リーダー配列除去の効果があるかどうか確認した。これらのリーダー配列を含む配列を段階的に除去した配列を持つプラスミドpDAT3,pFAT3と対照となるプラスミドpVIC40をHD欠損株であるGif33に導入し、ストレプトマイシン耐性を指標に形質転換体を取得した。プラスミドpDAT3,pFAT3を導入した株をそれぞれGif33/pDAT3, Gif33/pFAT3と名付けた。
<1> TDH6株へのthrC遺伝子導入株の構築
アテニュエーターとリーダー配列の除去により、アテニュエーションによる制御が解除されたプラスミドpDAT3のスレオニンオペロンのアテニュエーション領域の配列を染色体上に導入してその効果を確認した。スレオニン生産能をもつTDH6株はスレオニンシンターゼをコードする遺伝子thrCが欠損している。従って野性株であるエシェリヒア・コリW3110株(ATCC27325)を供与菌として、P1 transductionを用いた常法によりTDH6株からthrCが野生型になった株を取得した。
受容菌であるプラスミドが脱落したTDH6株に供与菌からのファージを加え、2.5mMCaCl2存在下で約20分37℃で静置させ、ファージを吸着させ、10mM Na-citrateを添加、30minほど
37℃で反応させ、吸着反応を停止させた。
温度感受性プラスミドpTS2DDをTDH6株のthrC導入株に導入した。この温度感受性プラスミドpTS2DDを上記のthrC導入株W13に形質転換し、LB+テトラサイクリンプレートで30℃でコロニーを選択した。選択したクローンを30℃で一晩培養した後、培養液を10-3希釈して、LB+テトラサイクリンプレートに巻き、42℃でコロニーを選択した。選択したクローンをLB+テトラサイクリンプレートに塗り広げて30℃で培養した後、液体培地にうえつぎ、42℃で4−5時間振とう培養した。適時希釈した培養液をLBプレートにまき、得られたコロニーのうち数百コロニーをLBプレートとLBテトラサイクリンプレートに植菌し、生育を確認することで、テトラサイクリン感受性株を選択した。テトラサイクリン感受性株の数株についてコロニーPCRを行い、アテニュエーション解除型スレオニンオペロンが導入されているかを確認した。このようにして、TDH6からthrCを導入してアテ
ニュエーションを解除したW13112株を取得した。また、この時同時に染色体上のアテニュエーションは野生型であるが、TDH6型のスレオニンオペロンに置換された株としてW1325株が取得できた。
染色体上のスレオニンオペロンのアテニュエーション領域のリーダー配列とアテニュエーターが欠損したW13112株とアテニュエーション領域と、野生型である対象株となるW1325株を、実施例1<2>で記載してある方法で培養を行い、実施例2<2>で記載してある方法でL−スレオニンの濃度を測定した。スレオニン生産量の相対値は、それぞれの形質転換体ごとにイソロイシン無添加でのL−スレオニン生産量を100とした場合の相対値を示した。結果を表4に示す。
実施例3で、染色体上のアテニュエーション解除型スレオニンオペロンに置換した株では、イソロイシン添加下でもL−スレオニンの蓄積量は低下せず、次にアテニュエーション領域が野生型のスレオニンオペロンを増幅したプラスミドpVIC40を導入し、染色体上でスレオニンオペロンのアテニュエーション領域を解除した効果を確認した。
<1>染色体上アテニュエーション解除型スレオニンオペロン導入株からのL−イソロイ
シン生産菌の構築と評価
イソロイシンは、L−スレオニンを前駆体として生成され、L−スレオニン菌からイソロイシン生合成系を強化することによっても取得される(特開平09-121872号公報、特開2002-051787号公報)。従って、イソロイシン生合成系を強化するため、実施例5で用いたTDH6/pVIC40株とW13112/pVIC40株に、イソロイシン生合成増幅プラスミドである、pMWD5を導入した。pMWD5は、イソロイシンオペロンのアテニュエーションに必要な領域が欠失されたイソロイシンオペロンを含むプラスミドである(特開平09-121872号公報)。プラスミドpMWD5を形質転換により、実施例5に記載のTDH6/pVIC40, W13112/pVIC40株に導入し、アンピシリン耐性を指標に形質転換体を得た。TDH6/pVIC40にpMWD5を導入した株を、TDH6/pVIC40 pMWD5、W13112/pVIC40にpMWD5を導入した株をW13112/pVIC40 pMWD5と名付けた。
TDH6/pVIC40 pMWD5株 W13112/pVIC40 pMWD5株からプラスミドを抽出し、目的のプラスミドが増幅されていることを確認した。
効果があることが確認出来た。
Claims (7)
- L−スレオニン又はL−イソロイシン生産能を有するエシェリヒア属細菌であって、スレオニンオペロン固有のプロモーターにより発現が制御され、かつ、配列番号1に示す配列の塩基番号168〜310または148〜310に相当するリーダー配列とアテニュエーター配列が除去されたスレオニンオペロンを保持することを特徴とする、エシェリヒア属細菌。
- 前記スレオニンオペロンをプラスミド上に保持する請求項1に記載のエシェリヒア属細菌。
- 前記スレオニンオペロンを染色体上に保持する請求項1に記載のエシェリヒア属細菌。
- L−イソロイシン生合成系酵素の活性が増強され、L−イソロイシン生産能を有する、請求項1に記載のエシェリヒア属細菌。
- エシェリヒア・コリである、請求項1〜4のいずれか一項に記載のエシェリヒア属細菌。
- リーダー配列及びアテニュエーターを含むアテニュエーションに関与する領域、スレオニンオペロン固有のプロモーター、並びにthrABC構造遺伝子を含むスレオニンオペロンにおいて、配列番号1に示す配列の塩基番号168〜310または148〜310に相当するリーダー配列とアテニュエーター配列が除去されたことを特徴とするスレオニンオペロン。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載のエシェリヒア属細菌を培地中で培養し、該培地中にL−スレオニン又はL−イソロイシンを生成・蓄積せしめ、L−スレオニン又はL−イソロイシンを培地から採取することを特徴とする、L−スレオニン又はL−イソロイシンの製造法。
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US7344874B2 (en) * | 2004-03-04 | 2008-03-18 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
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EP2035569A1 (en) * | 2006-06-01 | 2009-03-18 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family with attenuated expression of the rcsa gene |
KR100885616B1 (ko) * | 2006-06-26 | 2009-02-24 | 씨제이제일제당 (주) | 글리세롤을 이용한 아미노산의 생산 방법 |
RU2337961C2 (ru) * | 2006-07-04 | 2008-11-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН rspAB |
JP5407858B2 (ja) * | 2006-07-19 | 2014-02-05 | 味の素株式会社 | 腸内細菌科の細菌を用いたl−アミノ酸の製造方法 |
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EP2094858B1 (en) * | 2006-12-11 | 2015-02-18 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing an l-amino acid |
RU2006143864A (ru) | 2006-12-12 | 2008-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
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RU2006145712A (ru) * | 2006-12-22 | 2008-06-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина |
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JP5217780B2 (ja) * | 2008-02-08 | 2013-06-19 | 味の素株式会社 | L−アミノ酸を生産する微生物及びl−アミノ酸の製造法 |
RU2008105793A (ru) | 2008-02-19 | 2009-08-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена |
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WO2010084995A2 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid |
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RU2010101135A (ru) | 2010-01-15 | 2011-07-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата |
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RU2011134436A (ru) | 2011-08-18 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности |
JP6449653B2 (ja) * | 2012-01-10 | 2019-01-09 | シージェイ チェイルジェダン コーポレーションCj Cheiljedang Corporation | L−トリプトファン産生能が強化されたエシェリキア属微生物及びこれを用いてl−トリプトファンを産生する方法 |
RU2012112651A (ru) | 2012-04-02 | 2013-10-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | САМОИНДУЦИРУЕМАЯ ЭКСПРЕССИОННАЯ СИСТЕМА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛЕЗНЫХ МЕТАБОЛИТОВ С ПОМОЩЬЮ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae |
UA125112C2 (uk) | 2012-04-09 | 2022-01-12 | Енвіролоджикс Інк. | Спосіб ампліфікації полінуклеотиду |
RU2550269C2 (ru) | 2012-08-17 | 2015-05-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, СОДЕРЖАЩЕЙ N-АЦЕТИЛОРНИТИНДЕАЦЕТИЛАЗУ С НАРУШЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ |
RU2013118637A (ru) | 2013-04-23 | 2014-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK |
CN105008532B (zh) | 2013-05-13 | 2017-07-21 | 味之素株式会社 | L‑氨基酸的制造方法 |
RU2013140115A (ru) | 2013-08-30 | 2015-03-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB |
JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのl−アミノ酸の製造方法 |
EP3053999B1 (en) | 2013-10-02 | 2019-11-20 | Ajinomoto Co., Inc. | Ammonia control apparatus and ammonia control method |
RU2013144250A (ru) | 2013-10-02 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР |
JP6459962B2 (ja) | 2013-10-21 | 2019-01-30 | 味の素株式会社 | L−アミノ酸の製造法 |
JP6519476B2 (ja) | 2013-10-23 | 2019-05-29 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
RU2013147882A (ru) | 2013-10-28 | 2015-05-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕН ПУТЬ ДЕГРАДАЦИИ ПУТРЕСЦИНА |
RU2014105547A (ru) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Адзиномото Ко., Инк. | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL |
MX2016013877A (es) * | 2014-04-22 | 2017-03-09 | Envirologix Inc | Composiciones y metodos para mejorar y/o predecir la amplificacion de adn. |
RU2015114955A (ru) | 2015-04-22 | 2016-11-10 | Аджиномото Ко., Инк. | Способ получения L-изолейцина с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой сверхэкспрессирован ген cycA |
RU2015120052A (ru) | 2015-05-28 | 2016-12-20 | Аджиномото Ко., Инк. | Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA |
BR112018017227A2 (pt) | 2016-02-25 | 2019-02-05 | Ajinomoto Kk | método para produzir um l-aminoácido |
US11492616B2 (en) * | 2016-10-27 | 2022-11-08 | Institute Of Microbiology, Chinese Academy Of Sciences | Method for modifying amino acid attenuator and use of same in production |
CN106480035B (zh) * | 2016-10-27 | 2019-01-11 | 中国科学院微生物研究所 | 一种5’-utr元件及其在生产中的应用 |
CN106520801B (zh) * | 2016-10-27 | 2019-12-20 | 中国科学院微生物研究所 | 苏氨酸衰减子的突变体及其应用以及解除苏氨酸操纵子反馈阻遏的方法 |
JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | L-アミノ酸の製造法 |
EP3732298A1 (en) | 2017-12-26 | 2020-11-04 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of producing glycine by fermentation |
EP3788161A1 (en) | 2018-05-04 | 2021-03-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-methionine using a bacterium of the genus pantoea |
WO2020067487A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-methionine using a bacterium |
EP3861109A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
WO2020138178A1 (en) | 2018-12-27 | 2020-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing basic l-amino acids or salts thereof by fermentation of an enterobacteriaceae bacterium |
JP2022521544A (ja) | 2019-02-22 | 2022-04-08 | 味の素株式会社 | ydiJ遺伝子を過剰発現する腸内細菌科に属する細菌を用いたL-アミノ酸の製造方法 |
JP2022526181A (ja) | 2019-04-05 | 2022-05-23 | 味の素株式会社 | L-アミノ酸の製造方法 |
JP2022550084A (ja) | 2019-09-25 | 2022-11-30 | 味の素株式会社 | 細菌の発酵によるl-アミノ酸の製造方法 |
JP2022550349A (ja) | 2019-09-25 | 2022-12-01 | 味の素株式会社 | 細菌の発酵による2-メチル酪酸の製造方法 |
Family Cites Families (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU875663A1 (ru) * | 1978-06-30 | 1982-09-15 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени |
SU943282A1 (ru) * | 1979-07-13 | 1982-07-15 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Способ получени L-треонина |
WO1987002984A1 (en) * | 1985-11-12 | 1987-05-21 | American Biogenetics Corporation | Biogenetic cassette |
US5175107A (en) * | 1988-10-25 | 1992-12-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of escherichia coli bkiim b-3996 as the producer of l-threonine |
US5705371A (en) * | 1990-06-12 | 1998-01-06 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine |
US5976843A (en) * | 1992-04-22 | 1999-11-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine |
US5132999A (en) * | 1991-01-30 | 1992-07-21 | General Electric Company | Inductive x-ray tube high voltage transient suppression |
JP3036930B2 (ja) * | 1991-11-11 | 2000-04-24 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるl−イソロイシンの製造法 |
JP3151073B2 (ja) * | 1992-02-25 | 2001-04-03 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
US5998178A (en) * | 1994-05-30 | 1999-12-07 | Ajinomoto Co., Ltd. | L-isoleucine-producing bacterium and method for preparing L-isoleucine through fermentation |
CN1124340C (zh) * | 1994-08-30 | 2003-10-15 | 味之素株式会社 | L-缬氨酸和l-亮氨酸的生产方法 |
US5939307A (en) * | 1996-07-30 | 1999-08-17 | The Archer-Daniels-Midland Company | Strains of Escherichia coli, methods of preparing the same and use thereof in fermentation processes for l-threonine production |
RU2144564C1 (ru) * | 1998-10-13 | 2000-01-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ |
RU2175351C2 (ru) * | 1998-12-30 | 2001-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот |
EP1241246B1 (en) * | 1999-12-24 | 2008-12-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-amino acid |
RU2212447C2 (ru) * | 2000-04-26 | 2003-09-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты) |
JP4380029B2 (ja) * | 2000-07-05 | 2009-12-09 | 味の素株式会社 | 微生物を利用した物質の製造法 |
JP4265093B2 (ja) * | 2000-08-11 | 2009-05-20 | 味の素株式会社 | スレオニン及びイソロイシンの製造法 |
US7220571B2 (en) * | 2000-09-28 | 2007-05-22 | Archer-Daniels-Midland Company | Escherichia coli strains which over-produce L-threonine and processes for the production of L-threonine by fermentation |
JP2002330763A (ja) * | 2001-05-02 | 2002-11-19 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
KR100451299B1 (ko) * | 2002-03-21 | 2004-10-06 | 씨제이 주식회사 | L―쓰레오닌의 제조방법 |
KR100459758B1 (ko) * | 2002-05-15 | 2004-12-03 | 씨제이 주식회사 | 이소루이신 조절이 해제된 트레오닌 오페론 염기서열 및그를 포함하는 형질전환 세포를 이용한 l-트레오닌의생산방법 |
EP1460128B1 (en) * | 2003-03-03 | 2016-11-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-arginine or L-lysine by fermentation |
EP1484410B1 (en) * | 2003-06-05 | 2011-11-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Fermentation methods using modified bacteria with increased byproduct uptake. |
KR100786987B1 (ko) * | 2004-01-30 | 2007-12-18 | 아지노모토 가부시키가이샤 | L-아미노산 생산 미생물 및 l-아미노산 생산 방법 |
US7344874B2 (en) * | 2004-03-04 | 2008-03-18 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
US7300776B2 (en) * | 2004-04-26 | 2007-11-27 | Ajinomoto Co., Inc. | L-amino acid-producing bacterium and a method for producing L-amino acid |
US7482140B2 (en) * | 2004-06-15 | 2009-01-27 | Ajinomoto Co., Inc. | L-tyrosine-producing bacterium and a method for producing L-tyrosine |
US7205132B2 (en) * | 2004-09-10 | 2007-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
-
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