JP2000236893A - Ｌ−アミノ酸を製造する方法 - Google Patents
Ｌ−アミノ酸を製造する方法Info
- Publication number
- JP2000236893A JP2000236893A JP2000040048A JP2000040048A JP2000236893A JP 2000236893 A JP2000236893 A JP 2000236893A JP 2000040048 A JP2000040048 A JP 2000040048A JP 2000040048 A JP2000040048 A JP 2000040048A JP 2000236893 A JP2000236893 A JP 2000236893A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bacterium
- amino acid
- producing
- amino acids
- glutamate dehydrogenase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y104/00—Oxidoreductases acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
- C12Y104/01—Oxidoreductases acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.4.1)
- C12Y104/01002—Glutamate dehydrogenase (1.4.1.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0014—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
- C12N9/0016—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with NAD or NADP as acceptor (1.4.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/227—Tryptophan
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine
Abstract
(57)【要約】
【課題】 コリネフォルム細菌を用いるＬ−アミノ酸の
発酵的製造法 【解決手段】 その中でグルタミン酸デヒドロゲナーゼ
遺伝子を増幅させるコリネフォルム細菌を用いてＬ−ア
ミノ酸を製造する。
発酵的製造法 【解決手段】 その中でグルタミン酸デヒドロゲナーゼ
遺伝子を増幅させるコリネフォルム細菌を用いてＬ−ア
ミノ酸を製造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、その中でグルタミ
ン酸デヒドロゲナーゼを増幅させるコリネフォルム細菌
の使用下にＬ−アミノ酸を発酵法で製造する方法に関す
る。
ン酸デヒドロゲナーゼを増幅させるコリネフォルム細菌
の使用下にＬ−アミノ酸を発酵法で製造する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】Ｌ−アミノ酸は、動物飼育、ヒト医療で
又は薬剤工業で使用されている。
又は薬剤工業で使用されている。
【０００３】Ｌ−アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸を生産する
コリネフォルム細菌の菌株、殊にコリネバクテリウム・
グルタミクム（Corynebacterium Glutamicum)を用いて
発酵法で製造される。この製品群の大きい重要性に基づ
き、絶えずこの製法を改善する研究がなされている。こ
の方法の改善は、例えば撹拌又は酸素供給のような発酵
技術的手段又は栄養培地の組成、例えば発酵の間の糖濃
度又は例えばイオン交換体クロマトグラフィによる製品
の後処理又は微生物それ自体の固有の能力特性に関連し
うる。
コリネフォルム細菌の菌株、殊にコリネバクテリウム・
グルタミクム（Corynebacterium Glutamicum)を用いて
発酵法で製造される。この製品群の大きい重要性に基づ
き、絶えずこの製法を改善する研究がなされている。こ
の方法の改善は、例えば撹拌又は酸素供給のような発酵
技術的手段又は栄養培地の組成、例えば発酵の間の糖濃
度又は例えばイオン交換体クロマトグラフィによる製品
の後処理又は微生物それ自体の固有の能力特性に関連し
うる。
【０００４】これらの微生物の能力特性の改善のため
に、突然変異生成、選択及び変異体選択が使用される。
こうして、抗代謝生成物、例えばリシン−類縁体Ｓ−
（２−アミノエチル）−システインに対して抵抗性であ
るか又は調節的に重要であるアミノ酸に関して栄養要求
性でありＬ−アミノ酸を生産する菌株が得られる。
に、突然変異生成、選択及び変異体選択が使用される。
こうして、抗代謝生成物、例えばリシン−類縁体Ｓ−
（２−アミノエチル）−システインに対して抵抗性であ
るか又は調節的に重要であるアミノ酸に関して栄養要求
性でありＬ−アミノ酸を生産する菌株が得られる。
【０００５】数年前から、同様に組み換えＤＮＡ技術の
方法がＬ−アミノ酸を生産するコリネバクテリウム・グ
ルタミクムの菌株の改善のために使用されており、ここ
では、個々の生合成遺伝子を増幅させ、Ｌ−アミノ酸生
産への作用を検査している。この課題に関する概要記事
は、特にキノシタ（Kinoshita)（”Glutamic Acid Bact
eria", Biology of Industreial Microorganisms, De
main and Solomon (Eds), Benjamin Cummings,London,
UK, 1985, 115-142 ）、ヒリガー（Hilliger ）(Bio
Tec 2, 40-44(1991)） 、ジェッテン（Jetten ）及び
シンスキイ（ Sinskey ）(Critical Reviews in Biotec
hnology 15, 73- 103(1995)) 及びサーム（Sahm ）等
（Annuals of the New York Academy of Science 782,
25-39(1996)) に見い出される。
方法がＬ−アミノ酸を生産するコリネバクテリウム・グ
ルタミクムの菌株の改善のために使用されており、ここ
では、個々の生合成遺伝子を増幅させ、Ｌ−アミノ酸生
産への作用を検査している。この課題に関する概要記事
は、特にキノシタ（Kinoshita)（”Glutamic Acid Bact
eria", Biology of Industreial Microorganisms, De
main and Solomon (Eds), Benjamin Cummings,London,
UK, 1985, 115-142 ）、ヒリガー（Hilliger ）(Bio
Tec 2, 40-44(1991)） 、ジェッテン（Jetten ）及び
シンスキイ（ Sinskey ）(Critical Reviews in Biotec
hnology 15, 73- 103(1995)) 及びサーム（Sahm ）等
（Annuals of the New York Academy of Science 782,
25-39(1996)) に見い出される。
【０００６】酵素グルタメート−デヒドロゲナーゼは、
α−ケトグルタール酸の還元的アミノ化でグルタミン酸
を生じる反応に触媒作用をする。フランス特許出願公開
公報第２５７５４９２号明細書には、グルタメート−デ
ヒドロゲナーゼ−遺伝子を有するコリネバクテリウム・
メラッセコラ（C.melassecola)８０１からのＤＮＡ−フ
ラグメントが記載されている。そこではグルタミン酸生
産を高めるために、これをコリネバクテリウム・メラッ
セコラの発酵時に使用できる可能性が通常であった。コ
リネバクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２の
グルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子のヌクレオチド配
列は、ベールマン（Boermann）等により記載されている
（Molecular Microbiology 6, 317-326 (1992))。ペ
プトストレプトコッカス・アサッカロライテイクス（Pe
ptostreptococcus asaccharolytics)のグルタミン酸デ
ヒドロゲナーゼ−遺伝子のヌクレオチド配列がスネデコ
ル（Snedecor）等により見つけられている（Journal of
Bacteriology 193, 6162-6167 (1991)) 。
α−ケトグルタール酸の還元的アミノ化でグルタミン酸
を生じる反応に触媒作用をする。フランス特許出願公開
公報第２５７５４９２号明細書には、グルタメート−デ
ヒドロゲナーゼ−遺伝子を有するコリネバクテリウム・
メラッセコラ（C.melassecola)８０１からのＤＮＡ−フ
ラグメントが記載されている。そこではグルタミン酸生
産を高めるために、これをコリネバクテリウム・メラッ
セコラの発酵時に使用できる可能性が通常であった。コ
リネバクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２の
グルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子のヌクレオチド配
列は、ベールマン（Boermann）等により記載されている
（Molecular Microbiology 6, 317-326 (1992))。ペ
プトストレプトコッカス・アサッカロライテイクス（Pe
ptostreptococcus asaccharolytics)のグルタミン酸デ
ヒドロゲナーゼ−遺伝子のヌクレオチド配列がスネデコ
ル（Snedecor）等により見つけられている（Journal of
Bacteriology 193, 6162-6167 (1991)) 。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、他のＬ−ア
ミノ酸の改善された発酵的製法のための新規手段を提供
することを課題としている。
ミノ酸の改善された発酵的製法のための新規手段を提供
することを課題としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】Ｌ−アミノ酸は動物飼
育、ヒト医療で及び医薬品工業で使用されている。従っ
て、Ｌ−アミノ酸の製造のための改善された方法を提供
することに一般的重要性がある。
育、ヒト医療で及び医薬品工業で使用されている。従っ
て、Ｌ−アミノ酸の製造のための改善された方法を提供
することに一般的重要性がある。
【０００９】以後に記載のＬ−アミノ酸は、蛋白質形成
アミノ酸 Ｌ−リシン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイ
シン、Ｌ−バリン、Ｌ−プロリン、Ｌ−トリプトファン
及び場合によりそれらの塩及びＬ−ホモセリン、特にＬ
−リシン、Ｌ−スレオニン及びＬ−トリプトファンを意
味する。
アミノ酸 Ｌ−リシン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイ
シン、Ｌ−バリン、Ｌ−プロリン、Ｌ−トリプトファン
及び場合によりそれらの塩及びＬ−ホモセリン、特にＬ
−リシン、Ｌ−スレオニン及びＬ−トリプトファンを意
味する。
【００１０】本発明は、特に既に相応するＬ−アミノ酸
を生産し、その中で酵素グルタミン酸デヒドロゲナーゼ
をコードするヌクレオチド配列を増幅させる、特に過剰
発現させるコリネフォルム細菌を用いるＬ−アミノ酸の
発酵的製法を提供する。
を生産し、その中で酵素グルタミン酸デヒドロゲナーゼ
をコードするヌクレオチド配列を増幅させる、特に過剰
発現させるコリネフォルム細菌を用いるＬ−アミノ酸の
発酵的製法を提供する。
【００１１】有利な実施態様は、請求項中に記載されて
いる。
いる。
【００１２】この関係で、用語「増幅」は、その酵素
が、相応するＤＮＡでコードされている微生物中での、
例えば遺伝子又は遺伝子類のコピー数の増加、強力プロ
モーター又は増加された活性を有する相応する酵素をコ
ードする遺伝子の使用及び場合によってはこれらの手段
の組合せによる１種以上の酵素の細胞内活性の増加を意
味する。
が、相応するＤＮＡでコードされている微生物中での、
例えば遺伝子又は遺伝子類のコピー数の増加、強力プロ
モーター又は増加された活性を有する相応する酵素をコ
ードする遺伝子の使用及び場合によってはこれらの手段
の組合せによる１種以上の酵素の細胞内活性の増加を意
味する。
【００１３】本発明により準備される微生物は、グルコ
ース、スクロース、ラクトース、フルクトース、マルト
ース、糖蜜、澱粉、セルロースから又はグリセロール及
びエタノールからＬ−アミノ酸を製造することができ
る。この微生物の代表は、特にコリネバクテリウム属の
コリネフォルム細菌でありうる。コリネバクテリウム属
の中で、当業者にＬ−アミノ酸を生産することのできる
ことが公知であるコリネバクテリウム・グルタミクムが
特に挙げられる。
ース、スクロース、ラクトース、フルクトース、マルト
ース、糖蜜、澱粉、セルロースから又はグリセロール及
びエタノールからＬ−アミノ酸を製造することができ
る。この微生物の代表は、特にコリネバクテリウム属の
コリネフォルム細菌でありうる。コリネバクテリウム属
の中で、当業者にＬ−アミノ酸を生産することのできる
ことが公知であるコリネバクテリウム・グルタミクムが
特に挙げられる。
【００１４】コリネバクテリウム属の、特にコリネバク
テリウム・グルタミクムの好適な菌株は、公知の野生型
の菌株である：コリネバクテリウム・グルタミクムＡＴ
ＣＣ１３０３２、コリネバクテリウム・アセトグルタミ
クム（C. acetoglutamicum）ＡＴＣＣ１５８０６、コリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィルム（C. acetoacid
ophilum）ＡＴＣＣ１３８７０、コリネバクテリウム・
テルモアミノゲネス（C. thermoaminogenes）ＦＥＲＭ
ＢＰ−１５３９、ブレビバクテリウム・フラブム（Brev
ibacterium flavum）ＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバク
テリウム・ラクトフェルメンツム（B. lactofermentu
m）ＡＴＣＣ１３８６９及びブレビバクテリウム・デイ
バリカツム（B. divaricatum）ＡＴＣＣ１４０２０、及
びこれらから生じる変異体又は菌株、例えば Ｌ−リシン生産性菌株：コリネバクテリウム・グルタミ
クムＦＥＲＭ−Ｐ１７０９ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ１７８０及
びブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ
−Ｐ１７１２、又はＬ−スレオニン生産性菌株：コリネ
バクテリウム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ５８３５ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ４１６４及
びブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ
−Ｐ４１８０、又はＬ−イソロイシン生産性菌株：コリ
ネバクテリウム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ７５６ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ７５９及び
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ−
Ｐ４１９２、又はＬ−バリン生産性菌株：ブレビバクテ
リウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ５１２及びブレビバクテ
リウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ−Ｐ１８４５及
びＬ−トリプトファン生産性菌株：コリネバクテリウム
・グルタミクムＦＥＲＭ−ＢＰ４７８ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−ＢＰ４７５及
びブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ
−Ｐ７１２７ 。
テリウム・グルタミクムの好適な菌株は、公知の野生型
の菌株である：コリネバクテリウム・グルタミクムＡＴ
ＣＣ１３０３２、コリネバクテリウム・アセトグルタミ
クム（C. acetoglutamicum）ＡＴＣＣ１５８０６、コリ
ネバクテリウム・アセトアシドフィルム（C. acetoacid
ophilum）ＡＴＣＣ１３８７０、コリネバクテリウム・
テルモアミノゲネス（C. thermoaminogenes）ＦＥＲＭ
ＢＰ−１５３９、ブレビバクテリウム・フラブム（Brev
ibacterium flavum）ＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバク
テリウム・ラクトフェルメンツム（B. lactofermentu
m）ＡＴＣＣ１３８６９及びブレビバクテリウム・デイ
バリカツム（B. divaricatum）ＡＴＣＣ１４０２０、及
びこれらから生じる変異体又は菌株、例えば Ｌ−リシン生産性菌株：コリネバクテリウム・グルタミ
クムＦＥＲＭ−Ｐ１７０９ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ１７８０及
びブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ
−Ｐ１７１２、又はＬ−スレオニン生産性菌株：コリネ
バクテリウム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ５８３５ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ４１６４及
びブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ
−Ｐ４１８０、又はＬ−イソロイシン生産性菌株：コリ
ネバクテリウム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ７５６ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ７５９及び
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ−
Ｐ４１９２、又はＬ−バリン生産性菌株：ブレビバクテ
リウム・フラブムＦＥＲＭ−Ｐ５１２及びブレビバクテ
リウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ−Ｐ１８４５及
びＬ−トリプトファン生産性菌株：コリネバクテリウム
・グルタミクムＦＥＲＭ−ＢＰ４７８ ブレビバクテリウム・フラブムＦＥＲＭ−ＢＰ４７５及
びブレビバクテリウム・ラクトフェルメンツムＦＥＲＭ
−Ｐ７１２７ 。
【００１５】本発明者は、Ｌ−グルタミン酸デヒドロゲ
ナーゼの過剰発現の後に、コリネフォルム細菌は、改善
された方法でＬ−アミノ酸を生産することを発見した、
この際、Ｌ−グルタミン酸はここでは請求されない。
ナーゼの過剰発現の後に、コリネフォルム細菌は、改善
された方法でＬ−アミノ酸を生産することを発見した、
この際、Ｌ−グルタミン酸はここでは請求されない。
【００１６】ベールマン（Boermann）等により記載され
たＣ．グルタミクムのグルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺
伝子（Molecular Microbiology 6, 317-326(1992)）が
本発明により使用することができる。他の微生物から
の、例えばペプトレツトコッカス・アサッカロライテイ
クス（Peptostreptococcus asaccharolyticus）（これ
は、Snedecor等のJournal of Bacteriology 173,6162-6
167(1991)に記載されている）からのグルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼも好適である。遺伝暗号の縮重から又は機
能的に中性のセンス突然変異から生じる記載遺伝子の対
立遺伝子も使用できる。
たＣ．グルタミクムのグルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺
伝子（Molecular Microbiology 6, 317-326(1992)）が
本発明により使用することができる。他の微生物から
の、例えばペプトレツトコッカス・アサッカロライテイ
クス（Peptostreptococcus asaccharolyticus）（これ
は、Snedecor等のJournal of Bacteriology 173,6162-6
167(1991)に記載されている）からのグルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼも好適である。遺伝暗号の縮重から又は機
能的に中性のセンス突然変異から生じる記載遺伝子の対
立遺伝子も使用できる。
【００１７】過剰発現は、相応する遺伝子コピー数を増
加することにより達成することができるか又は構造遺伝
子の上流に位置するプロモーター及び調節領域を突然変
異させることができる。構造遺伝子の上流で取り込まれ
た発現カセットは、同様に作動する。付加的に誘導可能
なプロモーターを用いて発酵的Ｌ−アミノ酸生産の間の
発現を増加することができる。発現は、ｍＲＮＡの寿命
を延長させる手段によっても改善される。酵素活性は、
酵素蛋白質の分解を阻止することにより更に増幅され
る。遺伝子又は遺伝子構造は、変動性コピー数でプラス
ミド中に存在できるか又は染色体中に組み込まれ、かつ
増幅されることができる。関連する遺伝子の過剰発現
は、栄養培地の組成及び培養条件の変動により達成する
ことによってもできる。
加することにより達成することができるか又は構造遺伝
子の上流に位置するプロモーター及び調節領域を突然変
異させることができる。構造遺伝子の上流で取り込まれ
た発現カセットは、同様に作動する。付加的に誘導可能
なプロモーターを用いて発酵的Ｌ−アミノ酸生産の間の
発現を増加することができる。発現は、ｍＲＮＡの寿命
を延長させる手段によっても改善される。酵素活性は、
酵素蛋白質の分解を阻止することにより更に増幅され
る。遺伝子又は遺伝子構造は、変動性コピー数でプラス
ミド中に存在できるか又は染色体中に組み込まれ、かつ
増幅されることができる。関連する遺伝子の過剰発現
は、栄養培地の組成及び培養条件の変動により達成する
ことによってもできる。
【００１８】これに関して、当業者にとっては次の文献
中に概要を見つけることができるであろう：特にマルチ
ン（Martin）等の（Bio/Tecnology 5, 137-146(198
7)）、グエレロ（Guerrero）等（Gene 138, 35-41(199
4））、ツチヤ（Tsuchiya）及びモリナガ（Morinaga）
（Bio/Technology 6, 428-430(1988)、アイクマンズ（E
ikmanns）等（Gene 102, 93-98(1991)）、欧州特許ＥＰ
Ｓ０４７２８６９、ＵＳ特許４６０１８９３、シュバル
ツアー（Schwarzer）及びピュラー（Pueler) (Bio/Tec
hnology 9,84-87(1991)）、ラインシャイド（Reinschei
d）等（Applied and Environmental Microbiology 60.
126-132(1994））、ラバレ（LaBarre）等（Journal of
Bacteriology 175, 1001-1007(1993））、特許出願Ｗ
Ｏ９６／１５２４６、イエンセン（Jensen）及びハマー
（Hammer) (Biotechnology and Bioengineering 58, 19
1-195(1998））、マクラデス（Makrides)(Microbiologi
cal Reviews 60: 512-538(1996））及び遺伝子及び分子
生物学の公知の教科書。
中に概要を見つけることができるであろう：特にマルチ
ン（Martin）等の（Bio/Tecnology 5, 137-146(198
7)）、グエレロ（Guerrero）等（Gene 138, 35-41(199
4））、ツチヤ（Tsuchiya）及びモリナガ（Morinaga）
（Bio/Technology 6, 428-430(1988)、アイクマンズ（E
ikmanns）等（Gene 102, 93-98(1991)）、欧州特許ＥＰ
Ｓ０４７２８６９、ＵＳ特許４６０１８９３、シュバル
ツアー（Schwarzer）及びピュラー（Pueler) (Bio/Tec
hnology 9,84-87(1991)）、ラインシャイド（Reinschei
d）等（Applied and Environmental Microbiology 60.
126-132(1994））、ラバレ（LaBarre）等（Journal of
Bacteriology 175, 1001-1007(1993））、特許出願Ｗ
Ｏ９６／１５２４６、イエンセン（Jensen）及びハマー
（Hammer) (Biotechnology and Bioengineering 58, 19
1-195(1998））、マクラデス（Makrides)(Microbiologi
cal Reviews 60: 512-538(1996））及び遺伝子及び分子
生物学の公知の教科書。
【００１９】それを用いてグルタミン酸デヒドロゲナー
ゼが過剰発現されるプラスミドの例はｐＥＫ１.９ｇｄ
ｈ−１及びｐＥＫＥｘｐｇｄｈであり、これらは菌株Ａ
ＴＣＣ１３０３２／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１及びＤＨ５
α／ｐＥＫＥｘｐｇｄｈ中に存在する。プラスミドｐＥ
Ｋ１.９ｇｄｈ−１はＣ．グルタミクムのＮＡＤＰ−依
存性グルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子を含有するシ
ャトルベクターである。プラスミドｐＥＫＥｘｐｇｄｈ
は、ペプトストレプトコッカス・アサッカロライテイク
スのＮＡＤＰ−依存性グルタミン酸デヒドロゲナーゼ
［遺伝子］を含有するシャトルベクターである。
ゼが過剰発現されるプラスミドの例はｐＥＫ１.９ｇｄ
ｈ−１及びｐＥＫＥｘｐｇｄｈであり、これらは菌株Ａ
ＴＣＣ１３０３２／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１及びＤＨ５
α／ｐＥＫＥｘｐｇｄｈ中に存在する。プラスミドｐＥ
Ｋ１.９ｇｄｈ−１はＣ．グルタミクムのＮＡＤＰ−依
存性グルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子を含有するシ
ャトルベクターである。プラスミドｐＥＫＥｘｐｇｄｈ
は、ペプトストレプトコッカス・アサッカロライテイク
スのＮＡＤＰ−依存性グルタミン酸デヒドロゲナーゼ
［遺伝子］を含有するシャトルベクターである。
【００２０】付加的に相応するＬ−アミノ酸の生産のた
めに、特定のアミノ酸生合成経路の酵素１種以上並びに
グルタミン酸デヒドロゲナーゼを過剰発現させることが
有利でありうる。従って、例えば ・付加的に、Ｌ−リシン生産性コリネフォルム細菌の改
善のためにジヒドロジピコリネートシンターゼをコード
するｄａｐＡ遺伝子を過剰発現させることができるる
（ＥＰ−Ｂ０１９７３３５）、 ・付加的に、Ｌ−バリン生産性コリネフォルム細菌を改
善するためにアセトヒドロキシ酸シンターゼをコードす
る遺伝子を過剰発現させることができる（ＥＰ−Ｂ０３
５６７３９）、 ・付加的に、Ｌ−トリプトファン生産性コリネフォルム
細菌を改善するためにアントラニル酸ホスホリボシルト
ランスフェラーゼをコードする遺伝子を過剰発現させる
ことができる（ＥＰ−Ｂ０１２４０４８）、 ・付加的に、Ｌ−ホモセリン又はＬ−スレオニン又はＬ
−イソロイシンを生産するコリネフォルム細菌を改善す
るためにホモセリンデヒドロゲナーゼをコードする遺伝
子を過剰発現させることができる（ＥＰ−Ａ０１３１１
７１）。
めに、特定のアミノ酸生合成経路の酵素１種以上並びに
グルタミン酸デヒドロゲナーゼを過剰発現させることが
有利でありうる。従って、例えば ・付加的に、Ｌ−リシン生産性コリネフォルム細菌の改
善のためにジヒドロジピコリネートシンターゼをコード
するｄａｐＡ遺伝子を過剰発現させることができるる
（ＥＰ−Ｂ０１９７３３５）、 ・付加的に、Ｌ−バリン生産性コリネフォルム細菌を改
善するためにアセトヒドロキシ酸シンターゼをコードす
る遺伝子を過剰発現させることができる（ＥＰ−Ｂ０３
５６７３９）、 ・付加的に、Ｌ−トリプトファン生産性コリネフォルム
細菌を改善するためにアントラニル酸ホスホリボシルト
ランスフェラーゼをコードする遺伝子を過剰発現させる
ことができる（ＥＰ−Ｂ０１２４０４８）、 ・付加的に、Ｌ−ホモセリン又はＬ−スレオニン又はＬ
−イソロイシンを生産するコリネフォルム細菌を改善す
るためにホモセリンデヒドロゲナーゼをコードする遺伝
子を過剰発現させることができる（ＥＰ−Ａ０１３１１
７１）。
【００２１】更に、相応するＬ−アミノ酸の生産のため
に、グルタミン酸デヒドロゲナーゼの過剰発現に加え
て、不所望の副反応を排除することが有利である（Naka
yama:"Breeding of Amino Acid Producing Micro-organ
isms" in: Overproduction ofMicrobial Products,Krum
phanzl,Sikyta,Vanek(eds.),Academic Press, London,U
K1982）。
に、グルタミン酸デヒドロゲナーゼの過剰発現に加え
て、不所望の副反応を排除することが有利である（Naka
yama:"Breeding of Amino Acid Producing Micro-organ
isms" in: Overproduction ofMicrobial Products,Krum
phanzl,Sikyta,Vanek(eds.),Academic Press, London,U
K1982）。
【００２２】Ｌ−アミノ酸生産の目的のために、本発明
による微生物を連続的に又は非連続的に、バッチ法又は
供給バッチ法（Fed batch process)又は繰り返し供給バ
ッチ法を用いて培養することができる。公知培養法の概
要は、ヒミール（Chmiel）の教科書（Bioprozesstechni
k 1.Einfuehrung in die Bioverfahrenstechnik(Gustav
Fisher Verlag,Stuttgart、1991))又はストラス(Storha
s)の教科書(Bioreaktoren und periphere Einrichtunge
n(Vieweg Verlag,Braunschweig/Wiesbaden,1994））に
記載されている。
による微生物を連続的に又は非連続的に、バッチ法又は
供給バッチ法（Fed batch process)又は繰り返し供給バ
ッチ法を用いて培養することができる。公知培養法の概
要は、ヒミール（Chmiel）の教科書（Bioprozesstechni
k 1.Einfuehrung in die Bioverfahrenstechnik(Gustav
Fisher Verlag,Stuttgart、1991))又はストラス(Storha
s)の教科書(Bioreaktoren und periphere Einrichtunge
n(Vieweg Verlag,Braunschweig/Wiesbaden,1994））に
記載されている。
【００２３】使用されるべき培養培地は、これら特定の
菌株の要求を適切に満足すべきである。種々の微生物用
の培養培地が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆ
ｏｒＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ．Ｃ．，ＵＳＡ，１９８１）からの”Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ＧｅｎｅｒａｌＢａ
ｃｔｅｒｉｌｏｇｙ”に記載されている。使用できる炭
素源には、糖及び炭水化物、例えばグルコース、スクロ
ース、ラクトース、フルクトース、マルトース、糖蜜、
澱粉及びセルロース、油脂類、例えば大豆油、ひまわり
油、落花生油及びココナツ油、脂肪酸、例えばパルミチ
ン酸、ステアリン酸及びリノール酸、アルコール類、例
えばグリセロール及びエタノール及び有機酸、例えば酢
酸が包含される。これらの物質は、各々単独で又は混合
物として使用できる。使用できる窒素源は、窒素を含有
する有機化合物、例えばペプトン、酵母エキス、肉エキ
ス、麦芽エキス、コーンステイープリカー、大豆粉及び
尿素又は無機化合物、例えば硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、炭酸アンモニウム及び
硝酸アンモニウムより成る。これら窒素源はそれぞれ単
独で又は混合物として使用することができる。使用でき
る燐源は、燐酸二水素カリウム又は燐酸水素二カリウム
又はナトリウムを含有する相応する塩である。更に、培
養培地は更に金属塩、例えば硫酸マグネシウム又は硫酸
鉄（これらは成長のために必要である）を含有すべきで
ある。最後に、重要な成長促進物質、例えばアミノ酸及
びビタミンを前記物質に加えて使用することもできる。
更にこの培地に好適な前駆物質を添加するのも好適であ
る。記載の供給物質は、単一バッチとしてこの培養液に
添加できるか又は培養の間に適切に供給することができ
る。
菌株の要求を適切に満足すべきである。種々の微生物用
の培養培地が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆ
ｏｒＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ．Ｃ．，ＵＳＡ，１９８１）からの”Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ＧｅｎｅｒａｌＢａ
ｃｔｅｒｉｌｏｇｙ”に記載されている。使用できる炭
素源には、糖及び炭水化物、例えばグルコース、スクロ
ース、ラクトース、フルクトース、マルトース、糖蜜、
澱粉及びセルロース、油脂類、例えば大豆油、ひまわり
油、落花生油及びココナツ油、脂肪酸、例えばパルミチ
ン酸、ステアリン酸及びリノール酸、アルコール類、例
えばグリセロール及びエタノール及び有機酸、例えば酢
酸が包含される。これらの物質は、各々単独で又は混合
物として使用できる。使用できる窒素源は、窒素を含有
する有機化合物、例えばペプトン、酵母エキス、肉エキ
ス、麦芽エキス、コーンステイープリカー、大豆粉及び
尿素又は無機化合物、例えば硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、炭酸アンモニウム及び
硝酸アンモニウムより成る。これら窒素源はそれぞれ単
独で又は混合物として使用することができる。使用でき
る燐源は、燐酸二水素カリウム又は燐酸水素二カリウム
又はナトリウムを含有する相応する塩である。更に、培
養培地は更に金属塩、例えば硫酸マグネシウム又は硫酸
鉄（これらは成長のために必要である）を含有すべきで
ある。最後に、重要な成長促進物質、例えばアミノ酸及
びビタミンを前記物質に加えて使用することもできる。
更にこの培地に好適な前駆物質を添加するのも好適であ
る。記載の供給物質は、単一バッチとしてこの培養液に
添加できるか又は培養の間に適切に供給することができ
る。
【００２４】塩基性化合物、例えば水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、アンモニア又は酸性化合物、例えば燐
酸又は硫酸が培養物のｐＨ値の調節のために適切に使用
できる。起泡の制御のために消泡剤、例えば脂肪酸ポリ
グリコールエステルを使用することができる。好適な選
択的に作用する物質、例えば抗菌剤を、この培地にプラ
スミド安定性を保持するために添加することができる。
酸素又は酸素含有ガス混合物、例えば空気が、好気性条
件を保持するためにこの培養物に導入される。この培養
物の温度は、通常２０〜４５℃、有利に２５〜４０℃で
ある。所望のＬ−アミノ酸の最大量が形成されるまでこ
の培養を継続する。この目的は、通常１０〜１６０時間
以内に達成される。
水酸化カリウム、アンモニア又は酸性化合物、例えば燐
酸又は硫酸が培養物のｐＨ値の調節のために適切に使用
できる。起泡の制御のために消泡剤、例えば脂肪酸ポリ
グリコールエステルを使用することができる。好適な選
択的に作用する物質、例えば抗菌剤を、この培地にプラ
スミド安定性を保持するために添加することができる。
酸素又は酸素含有ガス混合物、例えば空気が、好気性条
件を保持するためにこの培養物に導入される。この培養
物の温度は、通常２０〜４５℃、有利に２５〜４０℃で
ある。所望のＬ−アミノ酸の最大量が形成されるまでこ
の培養を継続する。この目的は、通常１０〜１６０時間
以内に達成される。
【００２５】Ｌ−アミノ酸は、スペックマン（Spackme
n）等（Analytical Chemistry、30、1190(1958））により
記載されているように、アニオン交換クロマトグラフィ
に引き続くニンヒドリン誘導体化を用いて自動的に分析
することができる。
n）等（Analytical Chemistry、30、1190(1958））により
記載されているように、アニオン交換クロマトグラフィ
に引き続くニンヒドリン誘導体化を用いて自動的に分析
することができる。
【００２６】次の微生物はＤｅｕｔｃｈ Ｓａｍｍｌｕ
ｎｇ ｆｕｅｒ Ｍｉｋｒｏｒｇａｎｉｓｍ ｕｎｄ
Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（DSMZ,Braunschweig,German
y）に、ブダペスト条約に従って寄託されている：コリ
ネバクテリウム・グルタミクム菌株ＡＴＣＣ１３０３２
／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１ ＤＳＭ１２６１４として、
エセリキア・コリーＫ１２菌株ＤＨ５α／ｐＥＫＥｐｇ
ｄｈ ＤＳＭ１２６１３として。
ｎｇ ｆｕｅｒ Ｍｉｋｒｏｒｇａｎｉｓｍ ｕｎｄ
Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（DSMZ,Braunschweig,German
y）に、ブダペスト条約に従って寄託されている：コリ
ネバクテリウム・グルタミクム菌株ＡＴＣＣ１３０３２
／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１ ＤＳＭ１２６１４として、
エセリキア・コリーＫ１２菌株ＤＨ５α／ｐＥＫＥｐｇ
ｄｈ ＤＳＭ１２６１３として。
【００２７】
【実施例】次の実験例で本発明を詳細に説明する。
【００２８】この目的のために、アミノ酸生産性菌株を
用いる試験（ここでは特許請求されている方法の優秀性
が開示される）を実施した： ａ）Ｌ−リシン生産性の菌株コリネバクテリウム・グル
タミクムＤＳＭ５７１５（ＥＰ−Ｂ−０４３５１３２）
及び ｂ）Ｌ−スレオニン及びＬ−イソロイシン生産性菌株ブ
レビバクテリウム・フラブムＤＳＭ５３９９（ＥＰ−Ｂ
−０３８５９４０）及び ｃ）Ｌ−バリン生産性でイソロイシン要求性の菌株ＡＴ
ＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡ（これはＤＳＭ１２４５５と
してDeutchen Sammlung fuer Mikroorganismen und Zel
lkulturen in Braunschweig(Germany）にブダペスト条
約に従って寄託されている。
用いる試験（ここでは特許請求されている方法の優秀性
が開示される）を実施した： ａ）Ｌ−リシン生産性の菌株コリネバクテリウム・グル
タミクムＤＳＭ５７１５（ＥＰ−Ｂ−０４３５１３２）
及び ｂ）Ｌ−スレオニン及びＬ−イソロイシン生産性菌株ブ
レビバクテリウム・フラブムＤＳＭ５３９９（ＥＰ−Ｂ
−０３８５９４０）及び ｃ）Ｌ−バリン生産性でイソロイシン要求性の菌株ＡＴ
ＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡ（これはＤＳＭ１２４５５と
してDeutchen Sammlung fuer Mikroorganismen und Zel
lkulturen in Braunschweig(Germany）にブダペスト条
約に従って寄託されている。
【００２９】例１ 増幅されたグルタミン酸デヒドロゲナーゼを用いるＬ−
アミノ酸プロジューサーの製造 プラスミドｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１は、ベ-ルマン等（Mo
lecular Microbiology6, 317-326(1992））に記載され
ているプラスミドｐＥＫ１.９ｇｄｈに関連している。
これを、ＡＴＣＣ１３０３２／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１
から単離した。公知のプラスミドｐＥＫＥｘｐｇｄｈ
（Marx等、Metabolic Engineering 1, 35-48(1999））
（これは、ペプトストレプトコッカス・アサッカロライ
テイクスのグルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子を有す
る（Snedecor 等、Journal of Bacteriology 173, 61
62-6167(1991））をＥ．コリー菌株ＤＨ５α／ｐＥＫＥ
ｘｐｇｄｈから同様な方法で単離した。
アミノ酸プロジューサーの製造 プラスミドｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１は、ベ-ルマン等（Mo
lecular Microbiology6, 317-326(1992））に記載され
ているプラスミドｐＥＫ１.９ｇｄｈに関連している。
これを、ＡＴＣＣ１３０３２／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１
から単離した。公知のプラスミドｐＥＫＥｘｐｇｄｈ
（Marx等、Metabolic Engineering 1, 35-48(1999））
（これは、ペプトストレプトコッカス・アサッカロライ
テイクスのグルタミン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子を有す
る（Snedecor 等、Journal of Bacteriology 173, 61
62-6167(1991））をＥ．コリー菌株ＤＨ５α／ｐＥＫＥ
ｘｐｇｄｈから同様な方法で単離した。
【００３０】菌株ＤＳＭ５７１５、ＤＳＭ５３９９及び
ＡＴＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡをリーブル（Liebl）等
による記載（FEMS Microbiology Letters 65,299-304(1
989））のように、プラスミドｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１を
用いて形質転換させた。形質転換体をＭｅｒｃｋ社（Da
mstadt,Germany）からの脳／心臓−寒天（これはカナマ
イシン５０ｍｇ／ｌで補充されている）上で選択した。
こうして、菌株ＤＳＭ５７１５／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−
１、ＤＳＭ５３９９／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１及びＡＴ
ＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡ／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１が
得られた。同様に、菌株ＤＳＭ５７１５をプラスミドｐ
ＥＫＥｘｐｇｄｈで形質転換して、菌株ＤＳＭ５７１５
／ｐＥＫｘｐｇｄｈを得た。
ＡＴＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡをリーブル（Liebl）等
による記載（FEMS Microbiology Letters 65,299-304(1
989））のように、プラスミドｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１を
用いて形質転換させた。形質転換体をＭｅｒｃｋ社（Da
mstadt,Germany）からの脳／心臓−寒天（これはカナマ
イシン５０ｍｇ／ｌで補充されている）上で選択した。
こうして、菌株ＤＳＭ５７１５／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−
１、ＤＳＭ５３９９／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１及びＡＴ
ＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡ／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１が
得られた。同様に、菌株ＤＳＭ５７１５をプラスミドｐ
ＥＫＥｘｐｇｄｈで形質転換して、菌株ＤＳＭ５７１５
／ｐＥＫｘｐｇｄｈを得た。
【００３１】例２ Ｌ−リシンの製造 菌株ＤＳＭ５７１５／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１をトリプ
トン１６ｇ／ｌ、酵母エキス１０ｇ／ｌ及びＮａＣｌ５
ｇ／ｌを含有する複合培地２ＴＹ中で予備培養した。こ
のために、２個のフロースポイラー付き５００ｍｌエー
レンマイヤーフラスコ中に含有された培地２ＴＹ６０ｍ
ｌに、この菌株の接種ループを接種し、培養液を１５０
ｒｐｍ及び３０℃で１２時間恒温保持した。
トン１６ｇ／ｌ、酵母エキス１０ｇ／ｌ及びＮａＣｌ５
ｇ／ｌを含有する複合培地２ＴＹ中で予備培養した。こ
のために、２個のフロースポイラー付き５００ｍｌエー
レンマイヤーフラスコ中に含有された培地２ＴＹ６０ｍ
ｌに、この菌株の接種ループを接種し、培養液を１５０
ｒｐｍ及び３０℃で１２時間恒温保持した。
【００３２】接種のために、２個のフロースポイラー付
き５００ｍｌエーレンマイヤーフラスコ中に含有された
製造培地６０ｍｌに、予備培養液をセパテックミニフー
ジュ（Sepatech Minifuge) RF (Heraeus、Hanau,German
y）遠心分離器中、５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離
した。上澄みを捨て、ペレットを製造培地１ｍｌ中に再
懸濁させた。この細胞懸濁液の少量を製造培地に、約
２.０のＯＤ６００が得られるように添加した。使用さ
れた製造培地は、カイルハウエル（Keilhauer)等(Journ
al of Bacteriology 175, 5595-5603 (1993））により
記載された、グルコース２０ｇ／ｌ、ロイシン３５０ｍ
ｇ／ｌ及び硫酸カナマイシン５０ｍｇ／ｌが補充され
た、７.０のｐＨを有する培地ＣＧＸＩＩであった（第
１表）。この培養液を３０℃及び１５０ｒｐｍで７２時
間恒温保持した。
き５００ｍｌエーレンマイヤーフラスコ中に含有された
製造培地６０ｍｌに、予備培養液をセパテックミニフー
ジュ（Sepatech Minifuge) RF (Heraeus、Hanau,German
y）遠心分離器中、５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離
した。上澄みを捨て、ペレットを製造培地１ｍｌ中に再
懸濁させた。この細胞懸濁液の少量を製造培地に、約
２.０のＯＤ６００が得られるように添加した。使用さ
れた製造培地は、カイルハウエル（Keilhauer)等(Journ
al of Bacteriology 175, 5595-5603 (1993））により
記載された、グルコース２０ｇ／ｌ、ロイシン３５０ｍ
ｇ／ｌ及び硫酸カナマイシン５０ｍｇ／ｌが補充され
た、７.０のｐＨを有する培地ＣＧＸＩＩであった（第
１表）。この培養液を３０℃及び１５０ｒｐｍで７２時
間恒温保持した。
【００３３】
【表１】
【００３４】次いで、６００ｎｍの測定波長で光学密度
（ＯＤ）（Ｂiochrom Novaspec 4049, LKB Instrument
GmbH,Graefelfing, Germany）を、及び形成されたＬ−
リシンの濃度をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ−ＢｉｏＴｒｏｎｉ
ｋ社（Hamburg,Germany）からのアミノ酸分析装置を用
いてイオン交換クロマトグラフィ及びニンヒドリン検査
を伴うポスト−カラム反応により測定した。試験の結果
を第２表に示す。
（ＯＤ）（Ｂiochrom Novaspec 4049, LKB Instrument
GmbH,Graefelfing, Germany）を、及び形成されたＬ−
リシンの濃度をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ−ＢｉｏＴｒｏｎｉ
ｋ社（Hamburg,Germany）からのアミノ酸分析装置を用
いてイオン交換クロマトグラフィ及びニンヒドリン検査
を伴うポスト−カラム反応により測定した。試験の結果
を第２表に示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】例３ Ｌ−スレオニン及びＬ−イソロイシンの製造 菌株ＤＳＭ５３９９／ｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１を、カナ
マイシン５０μｇ／ｍｌを有する完全培地ＣｇＩＩＩ
（Kase & Nakayama,Agricultural and Biological Chem
istry 36(9)1611-1621(1972））中で予備培養した。こ
のために、４個のフロースポイラー付き１００ｍｌエー
レンマイヤーフラスコ中に含有された培地ＣｇＩＩＩ１
０ｍｌに、菌株の接種ループを接種し、この培養液を２
４０ｒｐｍ及び３０℃で１６時間恒温保持した。
マイシン５０μｇ／ｍｌを有する完全培地ＣｇＩＩＩ
（Kase & Nakayama,Agricultural and Biological Chem
istry 36(9)1611-1621(1972））中で予備培養した。こ
のために、４個のフロースポイラー付き１００ｍｌエー
レンマイヤーフラスコ中に含有された培地ＣｇＩＩＩ１
０ｍｌに、菌株の接種ループを接種し、この培養液を２
４０ｒｐｍ及び３０℃で１６時間恒温保持した。
【００３７】製造培地１０ｍｌの接種のために、４個の
フロースポイラー付き１００ｍｌエーレンマイヤーフラ
スコ中に含有した予備培養液のＯＤ（６６０ｎｍ）を測
定した。主培養液を０.１のＯＤで接種した。使用され
た製造培地は、カイルハウエル等により記載された培地
ＣｇＸＩＩであった（Journal of Bacteriology 1993,
175: 5595-5603）。この培地の組成は例２中に示さ
れている。グルコース４％及び硫酸カナマイシン５０ｍ
ｇ／ｌが添加された。セルを３３℃、２５０ｒｐｍ及び
８０％湿度で４８時間恒温保持した。
フロースポイラー付き１００ｍｌエーレンマイヤーフラ
スコ中に含有した予備培養液のＯＤ（６６０ｎｍ）を測
定した。主培養液を０.１のＯＤで接種した。使用され
た製造培地は、カイルハウエル等により記載された培地
ＣｇＸＩＩであった（Journal of Bacteriology 1993,
175: 5595-5603）。この培地の組成は例２中に示さ
れている。グルコース４％及び硫酸カナマイシン５０ｍ
ｇ／ｌが添加された。セルを３３℃、２５０ｒｐｍ及び
８０％湿度で４８時間恒温保持した。
【００３８】次いで、６６０ｎｍで光学密度を測定し、
形成されたＬ−スレオニン及びＬ−イソロイシンの濃度
を例２に記載のように測定した。第３表はこの試験の結
果を示している。
形成されたＬ−スレオニン及びＬ−イソロイシンの濃度
を例２に記載のように測定した。第３表はこの試験の結
果を示している。
【００３９】
【表３】
【００４０】例４ Ｌ−バリンの製造 菌株ＡＴＣＣ１３０３２ΔｉｌｖＡ／ｐＥＫ１.９ｇｄ
ｈ−１を、カナマイシン５０μｇ／ｍｌを有する完全培
地ＣｇＩＩＩ（Kase & Nakayama,Agriculturaland Biol
ogical Chemistry 36(9)1611-1621(1972））中で予備培
養した。このために、４個のフロースポイラー付き５０
０ｍｌエーレンマイヤーフラスコ中に含有された培地Ｃ
ｇＩＩＩ ５０ｍｌに菌株の接種ループを接種し、培養
液を１４０ｒｐｍ及び３０℃で１６時間恒温保持した。
ｈ−１を、カナマイシン５０μｇ／ｍｌを有する完全培
地ＣｇＩＩＩ（Kase & Nakayama,Agriculturaland Biol
ogical Chemistry 36(9)1611-1621(1972））中で予備培
養した。このために、４個のフロースポイラー付き５０
０ｍｌエーレンマイヤーフラスコ中に含有された培地Ｃ
ｇＩＩＩ ５０ｍｌに菌株の接種ループを接種し、培養
液を１４０ｒｐｍ及び３０℃で１６時間恒温保持した。
【００４１】４個のフロースポイラー付き５００ｍｌエ
ーレンマイヤーフラスコ中に含有された製造培地６０ｍ
ｌの接種のために、予備培養液のＯＤ（６６０ｎｍ）を
測定した。主培養液を遠心分離し、上澄みを捨てた。ペ
レットを製造培地５ｍｌ中に再懸濁させ、主培養液を接
種し、０.３のＯＤにした。使用される製造培地は、例
３に記載のように培地ＣｇＸＩＩ（グルコール４％を有
する）であった（Keilhauer 等.,Journal of Bacteriol
ogy 1993 175:5595-5603）。このセルを３０℃、１５０
ｒｐｍで４８時間恒温保持した。
ーレンマイヤーフラスコ中に含有された製造培地６０ｍ
ｌの接種のために、予備培養液のＯＤ（６６０ｎｍ）を
測定した。主培養液を遠心分離し、上澄みを捨てた。ペ
レットを製造培地５ｍｌ中に再懸濁させ、主培養液を接
種し、０.３のＯＤにした。使用される製造培地は、例
３に記載のように培地ＣｇＸＩＩ（グルコール４％を有
する）であった（Keilhauer 等.,Journal of Bacteriol
ogy 1993 175:5595-5603）。このセルを３０℃、１５０
ｒｐｍで４８時間恒温保持した。
【００４２】次いで、６６０ｎｍでの光学密度及び形成
されたＬ−バリンの濃度を例２に記載のように測定し
た。第４表は、この試験の結果を示している。
されたＬ−バリンの濃度を例２に記載のように測定し
た。第４表は、この試験の結果を示している。
【００４３】
【表４】
【００４４】例５ Ｌ−リシン、Ｌ−バリン及びＬ−アラニンの製造 菌株ＤＳＭ５７１５／ｐＥＫＥｘｐｇｄｈをトリプトン
１６ｇ／ｌ、酵母エキス１０ｇ／ｌ及びＮａＣｌ５ｇ／
ｌを含有する複合培地２ＴＹ中で予備培養した。このた
めに、２個のフロースポイラー付き５００ｍｌエーレン
マイヤーフラスコ中に含有された培地２ＴＹの６０ｍｌ
に菌株の接種ループを接種し、培養液を１５０ｒｐｍ、
３０℃で１２時間恒温保持した。
１６ｇ／ｌ、酵母エキス１０ｇ／ｌ及びＮａＣｌ５ｇ／
ｌを含有する複合培地２ＴＹ中で予備培養した。このた
めに、２個のフロースポイラー付き５００ｍｌエーレン
マイヤーフラスコ中に含有された培地２ＴＹの６０ｍｌ
に菌株の接種ループを接種し、培養液を１５０ｒｐｍ、
３０℃で１２時間恒温保持した。
【００４５】２個のフロースポイラー付き５００ｍｌエ
ーレンマイヤーフラスコ中に含有される製造培地６０ｍ
ｌを接種するために、この予備培養液をセパテックミニ
フュージＲＦ遠心分離器（Heraeus、Hanau,germany）中
で５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上澄みを捨
て、ペレットを製造培地１ｍｌ中に再懸濁させた。この
セル懸濁液の一部分を製造培地に添加して、約０.４の
ＯＤ６００を得た。使用された製造培地は、ｐＨ７でグ
ルコース２５ｇ／ｌ、ロイシン３５０ｍｇ／ｌ、３−モ
ルホリノプロパンスルホン酸４２ｇ／ｌ及び硫酸カナマ
イシン５０ｍｇ／ｌが補充されたシュルンプフ（Schrum
pf）等により記載された培地ＣＧＣ（第５表）であった
（Journal of Bacteriology173,4510-4516(1991））。
この培養液を３０℃で１５０ｒｐｍで３０分間恒温保持
した。
ーレンマイヤーフラスコ中に含有される製造培地６０ｍ
ｌを接種するために、この予備培養液をセパテックミニ
フュージＲＦ遠心分離器（Heraeus、Hanau,germany）中
で５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上澄みを捨
て、ペレットを製造培地１ｍｌ中に再懸濁させた。この
セル懸濁液の一部分を製造培地に添加して、約０.４の
ＯＤ６００を得た。使用された製造培地は、ｐＨ７でグ
ルコース２５ｇ／ｌ、ロイシン３５０ｍｇ／ｌ、３−モ
ルホリノプロパンスルホン酸４２ｇ／ｌ及び硫酸カナマ
イシン５０ｍｇ／ｌが補充されたシュルンプフ（Schrum
pf）等により記載された培地ＣＧＣ（第５表）であった
（Journal of Bacteriology173,4510-4516(1991））。
この培養液を３０℃で１５０ｒｐｍで３０分間恒温保持
した。
【００４６】
【表５】
【００４７】次いで、６００ｎｍの波長での光学密度
（ＯＤ）（Biochrom Novaspec 4049,LKB Instrument Gm
bH,Graefelfing,Germany）及び形成されたＬ−アラニ
ン、ｌ−リシン及びＬ−バリンの濃度を、Ｅｐｐｅｎｄ
ｏｒｆ−ＢｉｏＴｒｏｎｉ社（Hamburg,Germany）から
のアミノ酸分析装置を用いてイオン交換クロマトグラフ
ィ及びニンヒドリン検査を伴うポスト−カラム反応によ
り測定した。第６表はこの試験の結果を示している。
（ＯＤ）（Biochrom Novaspec 4049,LKB Instrument Gm
bH,Graefelfing,Germany）及び形成されたＬ−アラニ
ン、ｌ−リシン及びＬ−バリンの濃度を、Ｅｐｐｅｎｄ
ｏｒｆ−ＢｉｏＴｒｏｎｉ社（Hamburg,Germany）から
のアミノ酸分析装置を用いてイオン交換クロマトグラフ
ィ及びニンヒドリン検査を伴うポスト−カラム反応によ
り測定した。第６表はこの試験の結果を示している。
【００４８】
【表６】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:15） (71)出願人 599000142 フォルシュングスツェントルム ユーリッ ヒ ゲゼルシャフト ミット ベシュレン クテル ハフツング ドイツ連邦共和国ユーリッヒ （番地な し) (72)発明者 アヒム マルクス ドイツ連邦共和国 ビーレフェルト アル テンブレーデ ４ベー (72)発明者 ベティーナ メッケル ドイツ連邦共和国 ビーレフェルト ミッ テルシュトラーセ 15 (72)発明者 ヴァルター プフェッファーレ ドイツ連邦共和国 ハレ ヤーンシュトラ ーセ 33 (72)発明者 ヘルマン ザーム ドイツ連邦共和国 ユーリッヒ ヴェンデ リヌスシュトラーセ 71 (72)発明者 アルベルト デ グラーフ オランダ国 セーベー ヘールレン ヘー ルラーバーン 67 (72)発明者 ロータール エッゲリング ドイツ連邦共和国 ユーリッヒ エルゼン カンプ ６
Claims (10)
- 【請求項１】 コリネフォルム細菌の発酵によりＬ−ア
ミノ酸を製造する場合に、その中でグルタミン酸デヒド
ロゲナーゼをコードするヌクレオチド配列を増幅させ
る、殊に過剰発現させる細菌を使用することを特徴とす
る、コリネフォルム細菌の発酵によりＬ−アミノ酸を製
造する方法。 - 【請求項２】 使用細菌中で生産されるグルタミン酸デ
ヒドロゲナーゼはＮＡＤＰ−依存性である、請求項１に
記載の方法。 - 【請求項３】 使用細菌中で生産されるグルタミン酸デ
ヒドロゲナーゼはＮＡＤ−依存性である、請求項１に記
載の方法。 - 【請求項４】 その中で所望のＬ−アミノ酸の形成のた
めの物質代謝経路の残りの遺伝子を付加的に増幅させる
細菌を使用する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項５】 その中で所望のＬ−アミノ酸の形成を低
減する物質代謝経路を少なくとも部分的に遮断する細菌
を使用する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項６】 プラスミドベクターで形質転換された菌
株を使用し、このプラスミドベクターはグルタミン酸デ
ヒドロゲナーゼをコードするヌクレオチド配列を有す
る、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項７】 コリネバクテリウム・グルタミクム中の
ＤＳＭ１２６１４の番号で寄託されているプラスミドベ
クターｐＥＫ１.９ｇｄｈ−１で形質転換された細菌を
使用する、請求項６に記載の方法。 - 【請求項８】 Ｅ・コリー中のＤＳＭ１２６１３の番号
で寄託されているプラスミドベクターｐＥＫＥｘｐｇｄ
ｈで形質転換された細菌を使用する、請求項６に記載の
方法。 - 【請求項９】 次の工程： ａ）その中で少なくともグルタミン酸デヒドロゲナーゼ
−遺伝子を増幅させるＬ−アミノ酸生産性の細菌の発
酵、 ｂ）培地中又は細菌の細胞中に所望のＬ−アミノ酸の蓄
積及び ｃ）Ｌ−アミノ酸の単離 を実施することを特徴とする、請求項１から８までのい
ずれか１項に記載のＬ−アミノ酸を発酵的に製造する方
法。 - 【請求項１０】 アミノ酸 Ｌ−リシン、Ｌ−スレオニ
ン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン、Ｌ−プロリン、Ｌ
−トリプトファン及びＬ−ホモセリンの１種以上を生産
するコリネフォルム細菌を使用する、請求項１から９ま
でのいずれか１項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19907347A DE19907347A1 (de) | 1999-02-20 | 1999-02-20 | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung coryneformer Bakterien |
| US09/324,940 US6355454B1 (en) | 1999-02-20 | 1999-06-03 | Process for the fermentative production of L-amino acids using coryneform bacteria |
| US19907347.3 | 1999-06-03 | ||
| US09/324940 | 1999-06-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000236893A true JP2000236893A (ja) | 2000-09-05 |
Family
ID=26051968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000040048A Pending JP2000236893A (ja) | 1999-02-20 | 2000-02-17 | Ｌ−アミノ酸を製造する方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1029919B1 (ja) |
| JP (1) | JP2000236893A (ja) |
| CN (1) | CN1222622C (ja) |
| AT (1) | ATE263246T1 (ja) |
| AU (1) | AU770187B2 (ja) |
| BR (1) | BRPI0000897B1 (ja) |
| CA (1) | CA2299105A1 (ja) |
| ES (1) | ES2218009T3 (ja) |
| HU (1) | HUP0000747A2 (ja) |
| ID (1) | ID24801A (ja) |
| RU (1) | RU2247778C2 (ja) |
| SK (1) | SK1942000A3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044453A1 (fr) * | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Procédé de production d'un acide aminé l |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3965821B2 (ja) * | 1999-03-09 | 2007-08-29 | 味の素株式会社 | Ｌ−リジンの製造法 |
| US6939692B2 (en) | 2000-09-12 | 2005-09-06 | Degussa Ag | Nucleotide sequences coding for the pknB gene |
| WO2002022828A1 (en) * | 2000-09-12 | 2002-03-21 | Degussa Ag | Isolation and sequencing of the pknb gene of c. glutamicum |
| DE10045496A1 (de) * | 2000-09-14 | 2002-03-28 | Degussa | Neue für das ptsi-Gen kodierende Nukleotidsequenzen |
| DE102004037572A1 (de) * | 2004-08-03 | 2006-02-23 | Degussa Ag | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| DE102006050489A1 (de) | 2006-10-26 | 2008-04-30 | Evonik Degussa Gmbh | Allele des prpD1-Gens aus coryneformen Bakterien |
| DE102006054202A1 (de) * | 2006-11-17 | 2008-05-21 | Evonik Degussa Gmbh | Allele des oxyR-Gens aus coryneformen Bakterien |
| CN101565723B (zh) * | 2009-05-25 | 2011-06-01 | 河南孟成生物药业股份有限公司 | 一种l-色氨酸的发酵生产工艺 |
| CN102653736A (zh) * | 2012-04-12 | 2012-09-05 | 大连大学 | 微生物发酵生产谷氨酸脱氢酶的方法 |
| CN103184247A (zh) * | 2013-04-08 | 2013-07-03 | 绍兴市安杰生物科技有限公司 | 一种l-赖氨酸联产l-乳酸的方法 |
| DK2811028T3 (en) * | 2013-06-03 | 2017-05-01 | Evonik Degussa Gmbh | Process for Preparation of L-Valine Using Recombinant Coryn Bacteria Containing the Propionate Inducible IlvBN Operon |
| KR101518860B1 (ko) * | 2013-10-11 | 2015-05-12 | 씨제이제일제당 (주) | L-아미노산의 생산 방법 |
| RU2697005C2 (ru) * | 2013-10-11 | 2019-08-08 | СиДжей ЧЕИЛДЗЕДАНГ КОРП. | Способ получения l-аминокислот |
| CN105505894A (zh) * | 2014-09-24 | 2016-04-20 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶突变体及其应用 |
| CN105506014B (zh) * | 2015-12-23 | 2019-02-12 | 湖南宝利士生物技术有限公司 | 高光学纯l-高丝氨酸及其衍生物的生物合成方法 |
| KR102112240B1 (ko) * | 2018-09-28 | 2020-05-18 | 씨제이제일제당 주식회사 | 알파-글루코시다제의 활성이 강화된 l-아미노산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 |
| CN109337854B (zh) * | 2018-11-19 | 2020-11-03 | 南京工业大学 | 一株敲除胞外核酸酶ExeR的谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用 |
| CN111197014B (zh) * | 2020-04-01 | 2022-11-08 | 宜昌三峡普诺丁生物制药有限公司 | 谷氨酸棒状杆菌诱变菌株及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2575492B1 (fr) * | 1984-12-27 | 1988-09-16 | Asahi Chemical Ind | Fragment d'adn contenant un gene codant pour la glutamate deshydrogenase, adn recombinant le contenant, et microorganisme contenant l'adn recombinant |
| GB2223754B (en) * | 1988-09-12 | 1992-07-22 | Degussa | Dna encoding phosphoenolpyruvate carboxylase |
| DE3943117A1 (de) * | 1989-12-27 | 1991-07-04 | Forschungszentrum Juelich Gmbh | Verfahren zur fermentativen herstellung von aminosaeure, insbesondere l-lysin, dafuer geeignete mikroorganismen und rekombinante dna |
| FI980551A (fi) * | 1998-03-11 | 1999-09-12 | Valtion Teknillinen | Transformoidut mikro-organismit, joilla on parannettuja ominaisuuksia |
-
2000
- 2000-02-08 EP EP00102601A patent/EP1029919B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-08 ES ES00102601T patent/ES2218009T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-08 AT AT00102601T patent/ATE263246T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-02-14 SK SK194-2000A patent/SK1942000A3/sk unknown
- 2000-02-17 JP JP2000040048A patent/JP2000236893A/ja active Pending
- 2000-02-18 HU HU0000747A patent/HUP0000747A2/hu unknown
- 2000-02-18 RU RU2000103965/13A patent/RU2247778C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-02-18 ID IDP20000125A patent/ID24801A/id unknown
- 2000-02-18 AU AU17600/00A patent/AU770187B2/en not_active Ceased
- 2000-02-18 CN CNB00102728XA patent/CN1222622C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-18 CA CA002299105A patent/CA2299105A1/en not_active Abandoned
- 2000-02-21 BR BRPI0000897A patent/BRPI0000897B1/pt active IP Right Grant
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044453A1 (fr) * | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Procédé de production d'un acide aminé l |
| US8367371B2 (en) | 2006-10-10 | 2013-02-05 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for production of L-amino acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE263246T1 (de) | 2004-04-15 |
| EP1029919A3 (de) | 2001-11-07 |
| SK1942000A3 (en) | 2000-09-12 |
| EP1029919B1 (de) | 2004-03-31 |
| HUP0000747A2 (en) | 2002-09-28 |
| RU2247778C2 (ru) | 2005-03-10 |
| ES2218009T3 (es) | 2004-11-16 |
| AU1760000A (en) | 2000-08-24 |
| CN1266905A (zh) | 2000-09-20 |
| HU0000747D0 (en) | 2000-04-28 |
| EP1029919A2 (de) | 2000-08-23 |
| CA2299105A1 (en) | 2000-08-20 |
| ID24801A (id) | 2000-08-24 |
| CN1222622C (zh) | 2005-10-12 |
| BRPI0000897B1 (pt) | 2016-11-22 |
| BR0000897A (pt) | 2001-05-02 |
| AU770187B2 (en) | 2004-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5618164B2 (ja) | 外来種由来のグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼの活性を獲得したコリネバクテリウム属のｌ−リシン生産方法 | |
| JP2000236893A (ja) | Ｌ−アミノ酸を製造する方法 | |
| US6355454B1 (en) | Process for the fermentative production of L-amino acids using coryneform bacteria | |
| US8592177B2 (en) | Process for the fermentative preparation of organic chemical compounds using Coryneform bacteria in which the sugR gene is present in attenuated form | |
| JP2008538899A (ja) | Ｌ−アミノ酸の発酵的製造方法 | |
| US20030199045A1 (en) | Process for the preparation of L-amino acids with amplification of the zwf gene | |
| EP1179073B1 (en) | Process for the fermentative preparation of l-amino acids with amplification of the zwf gene | |
| US20030175911A1 (en) | Process for the preparation of L-amino acids with amplification of the zwf gene | |
| EP1179076B9 (en) | Process for the fermentative preparation of l-amino acids with amplification of the gnd gene | |
| AU2236900A (en) | Process for the production of L-amino acids by fermentation using coryeform | |
| US6379934B1 (en) | Process for the fermentative preparation of L-amino acids using coryneform bacteria | |
| US20020028490A1 (en) | Process for the production of L-amino acids by fermentation using coryneform bacteria | |
| EP1179084B1 (en) | Process for the fermentative preparation of l-amino acids with amplification of the tkt gene | |
| KR100816472B1 (ko) | 글루타메이트 에이비씨-타입 트랜스포터 활성이 결실된코리네박테리아 및 이를 이용한 엘-라이신 생산방법 | |
| KR100645769B1 (ko) | 에이에스피 에이 유전자가 파괴된 코리네박테리움을 이용한엘-라이신의 제조방법 | |
| MXPA00001638A (en) | Process for the fermentative production of l-amino acids using coryneform bacteria | |
| MXPA00002332A (es) | Procedimiento para la preparacion por fermentacion de l-aminoacidos utilizando bacterias coreniformes | |
| MXPA00004870A (en) | Process for the fermentative preparation of l-amino acids using coryneform bacteria |