JPS589693A - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製法Info
- Publication number
- JPS589693A JPS589693A JP10474581A JP10474581A JPS589693A JP S589693 A JPS589693 A JP S589693A JP 10474581 A JP10474581 A JP 10474581A JP 10474581 A JP10474581 A JP 10474581A JP S589693 A JPS589693 A JP S589693A
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- Japan
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- glutamic acid
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- serratia
- serratia marcescens
- succinic acid
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- Pending
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製法に関する
。
。
Ｌ−グルタミン酸は調味料や医薬品の原料として利用さ
れているアミノ酸であり、Ｌ−グルタミン酸を発酵法に
より製造する方法は多数報告されている。しかし、その
ほとんどすべては、ブレビバクテリウム属、コリネバク
テリウム属、ミクロコツカス属、ミクロバクテリウム属
などいわゆるＬ−グルタミン酸生産菌に属する菌株を用
いる方法である。
れているアミノ酸であり、Ｌ−グルタミン酸を発酵法に
より製造する方法は多数報告されている。しかし、その
ほとんどすべては、ブレビバクテリウム属、コリネバク
テリウム属、ミクロコツカス属、ミクロバクテリウム属
などいわゆるＬ−グルタミン酸生産菌に属する菌株を用
いる方法である。
本発明者らは１発酵法によるＬ−グルタミン酸の製法を
新たに確立すべく種々検討した結果、セラチア属に属す
る菌株の野生株はほとんどＬ−グルタミン酸を生成蓄積
しないが、δ−ハイドロキシリジンに対する耐性変異も
しくはコハク酸要求性変異をセラチア属に属する菌株に
付与すれば、該変異株が著量のＬ−グルタミン酸を生成
蓄積するという新知見を見い出し１本発明を完成するに
至った。
新たに確立すべく種々検討した結果、セラチア属に属す
る菌株の野生株はほとんどＬ−グルタミン酸を生成蓄積
しないが、δ−ハイドロキシリジンに対する耐性変異も
しくはコハク酸要求性変異をセラチア属に属する菌株に
付与すれば、該変異株が著量のＬ−グルタミン酸を生成
蓄積するという新知見を見い出し１本発明を完成するに
至った。
本発明方法で用いられる菌株の代表的な例としては１例
えばセラチア・マルセッセンス（パージ−のマニュアル
・オブ・デターミネイティブ・バクテリオロジー、第８
版、第３２６頁参照）に属し、かつδ−パイドロキシリ
ジン耐性もしくはコハク酸要求性を有するＬ−グルタミ
ン酸生産性変異株があげられる。
えばセラチア・マルセッセンス（パージ−のマニュアル
・オブ・デターミネイティブ・バクテリオロジー、第８
版、第３２６頁参照）に属し、かつδ−パイドロキシリ
ジン耐性もしくはコハク酸要求性を有するＬ−グルタミ
ン酸生産性変異株があげられる。
セラチア・マルセッセンスに属し、δ−ハイドロキ゛シ
リジン耐性を有するＬ−グルタミン酸生産性変異株は、
親株（例えば、セラチア・マルセッセンスＢＹ株、セラ
チア・マルセッセンス５ｒ４１株）を通常の変異誘起剤
（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロング
アニジン、エチルメタンスルホネート等］で処理するこ
とによって変異を誘起せしめたのち、ａ−ハイドロキシ
リジン０゜２〜２０１１Ｆ／ｄを添加した平板培地（例
えばデービスの最小培地）に適当量の１−Ｉｌａ歇を塗
布し、３０℃で２〜５日間培養し、生じたコロニーを釣
菌分離することにより得ることができる。この様にして
取得した菌株の代表的な例としては１例えばセラチア・
マルセッセンス＾Ｈｒ−３０株（微工研菌寄第ｂ０４９
号）があげられる。
リジン耐性を有するＬ−グルタミン酸生産性変異株は、
親株（例えば、セラチア・マルセッセンスＢＹ株、セラ
チア・マルセッセンス５ｒ４１株）を通常の変異誘起剤
（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロング
アニジン、エチルメタンスルホネート等］で処理するこ
とによって変異を誘起せしめたのち、ａ−ハイドロキシ
リジン０゜２〜２０１１Ｆ／ｄを添加した平板培地（例
えばデービスの最小培地）に適当量の１−Ｉｌａ歇を塗
布し、３０℃で２〜５日間培養し、生じたコロニーを釣
菌分離することにより得ることができる。この様にして
取得した菌株の代表的な例としては１例えばセラチア・
マルセッセンス＾Ｈｒ−３０株（微工研菌寄第ｂ０４９
号）があげられる。
一方、セラチア・マルセッセンスに属し、コハク酸要求
性を有するＬ−グルタミン酸生産性変異株は、１ｉｆｉ
記の如き親株を前記と同様にして変異誘起処理したのち
、ブイヨン平板培地に適当量つ菌懸ＩＩ液を塗布し、３
０℃で１〜３日間培養し、コハク酸ナトリウムを添加し
た平板培地で生育するが、無添加の平板培地で生育しな
い菌株を釣菌分離することにより取得できる。この様に
して取得した菌株の代表的な例としては１例えばセラチ
ア・マルセッセンス５ＵＣ−１００株（微工研ｍ寄ｔｓ
６θ４７号）があげられる。尚、上記の如（して取得し
たコハク酸要求性変異株はコハク酸の代りにＬ−リジン
と・Ｌ−メチオニンを培地に加えることによっても生育
できる性質を有することもある。
性を有するＬ−グルタミン酸生産性変異株は、１ｉｆｉ
記の如き親株を前記と同様にして変異誘起処理したのち
、ブイヨン平板培地に適当量つ菌懸ＩＩ液を塗布し、３
０℃で１〜３日間培養し、コハク酸ナトリウムを添加し
た平板培地で生育するが、無添加の平板培地で生育しな
い菌株を釣菌分離することにより取得できる。この様に
して取得した菌株の代表的な例としては１例えばセラチ
ア・マルセッセンス５ＵＣ−１００株（微工研ｍ寄ｔｓ
６θ４７号）があげられる。尚、上記の如（して取得し
たコハク酸要求性変異株はコハク酸の代りにＬ−リジン
と・Ｌ−メチオニンを培地に加えることによっても生育
できる性質を有することもある。
か（して優られる変異株のＬ−グルタミン酸生産 ５−
用培地としては、炭素源としてブドウ糖、シ四糖、糖蜜
の如き糖類、コハク酸、クエン酸、フマール酸の如き有
機゛酸、グリセロールの如きアルコール類を１０〜２０
ｓ、窒素源としてフマール酸゛アンモニウム、コハク酸
アンモニウムの如き有機アンモニウム塩、ａｔ化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウムの如き無機アンモニウムｓ番
尿素等を１〜１０％、有機栄養物としてコーン・ステイ
ープ・リカー、ペプトン、酵母エキス、−無角エキス等
を０８〜１囁の範囲でそれぞれ適当量含有し、他に無機
物としてリン酸カリウム、硫酸マグネシウムを少量加え
た培地が好適に使用できる。これらの他に、培地の−を
６〜８に保つため炭酸カルシウムあるいはアンモニア水
を必要に応じて添加してもよい。
の如き糖類、コハク酸、クエン酸、フマール酸の如き有
機゛酸、グリセロールの如きアルコール類を１０〜２０
ｓ、窒素源としてフマール酸゛アンモニウム、コハク酸
アンモニウムの如き有機アンモニウム塩、ａｔ化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウムの如き無機アンモニウムｓ番
尿素等を１〜１０％、有機栄養物としてコーン・ステイ
ープ・リカー、ペプトン、酵母エキス、−無角エキス等
を０８〜１囁の範囲でそれぞれ適当量含有し、他に無機
物としてリン酸カリウム、硫酸マグネシウムを少量加え
た培地が好適に使用できる。これらの他に、培地の−を
６〜８に保つため炭酸カルシウムあるいはアンモニア水
を必要に応じて添加してもよい。
本発明方法によれば上記培地に前記のＬ−グルタミン酸
生産性変異株を接種し、２５〜４０℃にて振とう培養あ
るいは通気攪拌培養の如き好気的条件下で２〜７日間培
養することによって培地にｉ−グルタミン酸を著量蓄積
せしめることができる。
生産性変異株を接種し、２５〜４０℃にて振とう培養あ
るいは通気攪拌培養の如き好気的条件下で２〜７日間培
養することによって培地にｉ−グルタミン酸を著量蓄積
せしめることができる。
６−
生成したＬ−グルタミン酸は培養終了後、菌体その他の
不溶物を除去し０次いでイオン交換樹脂を用いる通常の
分離精製操作によって容易に採取できる。以下実施例を
あげて本発明方法を説明する雫 が、実施例中Ｌ−グルタミン酸の確認はペーパークロマ
トグラムのニンヒドリンまたはイサチン反応により、そ
の定量はロイコノストック・メツセンチロイデスＰ−６
０によるバイオアッセイによって行なった。
不溶物を除去し０次いでイオン交換樹脂を用いる通常の
分離精製操作によって容易に採取できる。以下実施例を
あげて本発明方法を説明する雫 が、実施例中Ｌ−グルタミン酸の確認はペーパークロマ
トグラムのニンヒドリンまたはイサチン反応により、そ
の定量はロイコノストック・メツセンチロイデスＰ−６
０によるバイオアッセイによって行なった。
実施例 １
ブドウ糖２％、デキストリン１０％、尿素２％、塩化ア
ンモニウム１％、リン酸第二カリウム０゜１囁、硫酸マ
グネシウム・７水和物０．０５％ 、酵母゛エキス０．
５％、炭酸カルシウム３′％を含む発酵培地（ｐ）１７
）Ｉｓ−を５００−容重とうコルベンに注入し、加熱滅
菌した。但し、ブドウ糖とデキ、ストリンは別滅ｍｅ添
加した。この発酵培地にブイヨン斜面培地で３０℃にて
一晩培養したセラチア・マルセッセンスＡＨ’−３Ｑ株
（微工研菌寄第ｂ０４９号）を１白金耳植菌した。３０
℃、 １４０回転／分、振幅７備の条件下で３日間培養
した時、１１．Ｏｗｊ／−のＬ−グルタミン酸が培地中
に生成蓄積された。上記培養液１１を集めて熱処理した
後、ろ過によって菌体その他の不溶物を除去した。ろ液
をアンバーライトＩＲ−１２０ＢＣＨ型２１．７グを碍
た。
ンモニウム１％、リン酸第二カリウム０゜１囁、硫酸マ
グネシウム・７水和物０．０５％ 、酵母゛エキス０．
５％、炭酸カルシウム３′％を含む発酵培地（ｐ）１７
）Ｉｓ−を５００−容重とうコルベンに注入し、加熱滅
菌した。但し、ブドウ糖とデキ、ストリンは別滅ｍｅ添
加した。この発酵培地にブイヨン斜面培地で３０℃にて
一晩培養したセラチア・マルセッセンスＡＨ’−３Ｑ株
（微工研菌寄第ｂ０４９号）を１白金耳植菌した。３０
℃、 １４０回転／分、振幅７備の条件下で３日間培養
した時、１１．Ｏｗｊ／−のＬ−グルタミン酸が培地中
に生成蓄積された。上記培養液１１を集めて熱処理した
後、ろ過によって菌体その他の不溶物を除去した。ろ液
をアンバーライトＩＲ−１２０ＢＣＨ型２１．７グを碍
た。
実施例 ２
シｖｓ Ｉｆ １４％、フマール酸アンモニウム３％。
コハク酸アンモニウム１囁、尿素２％、リン酸第２カリ
ウム０．１％、硫酸マグネシウム・７水和物０．０５％
、コーン・ステイープ・リカー０．３％。
ウム０．１％、硫酸マグネシウム・７水和物０．０５％
、コーン・ステイープ・リカー０．３％。
酵母エキス０．３鳴及び炭酸カルシウム０．５％を含む
発酵培地（ｐＨ７）を用い、セラチア・マルセッセンス
ＢＵＣ−１００株（徽工研醒寄第６０４−り号ンを実施
例１と同様にして培養したところ、４日間の培養で５０
．６”Ｗ／−のＬ−グルタミン酸が培地中に蓄積した。
発酵培地（ｐＨ７）を用い、セラチア・マルセッセンス
ＢＵＣ−１００株（徽工研醒寄第６０４−り号ンを実施
例１と同様にして培養したところ、４日間の培養で５０
．６”Ｗ／−のＬ−グルタミン酸が培地中に蓄積した。
その培養液１１を集めて実施例１と同様に処理しＬ−グ
ルタミン酸の結晶３５．５Ｆを得た。
ルタミン酸の結晶３５．５Ｆを得た。
なオ対照としてセラチア・マルセッセンスの野生株であ
るＩｊＹ株と５ｒ４１株を実施例１および実施例２と同
様にして培養したところ、Ｌ−グルタミン酸の蓄積量は
１〜２ ”ｆ／＋ｗＪの範囲内であった。
るＩｊＹ株と５ｒ４１株を実施例１および実施例２と同
様にして培養したところ、Ｌ−グルタミン酸の蓄積量は
１〜２ ”ｆ／＋ｗＪの範囲内であった。
参考例 １
（セラチア・マルセッセンスＡＨｒ−３０株の取得方法
） セラチア・マルセッセンスＨＹ株をブイヨン培地に少量
接種し、３０℃にて培養した。培養液中の細菌数がおよ
そ１０”１ｌＩｌ胞／−に達したところでＮ〜メチル−
Ｎ′−二）ｏ−Ｎ−ニトロソクアニジンの１〜−水溶液
を０．２岬／−になるように加えて３０℃て２０分間培
養した後遠必分離した。上清を捨て、新しいブイヨン培
地を加えて細胞を懸濁した。再度、遠心分離し上清を捨
てた後新しいブイヨン培地を加えて３０℃でも６時間培
養した。
） セラチア・マルセッセンスＨＹ株をブイヨン培地に少量
接種し、３０℃にて培養した。培養液中の細菌数がおよ
そ１０”１ｌＩｌ胞／−に達したところでＮ〜メチル−
Ｎ′−二）ｏ−Ｎ−ニトロソクアニジンの１〜−水溶液
を０．２岬／−になるように加えて３０℃て２０分間培
養した後遠必分離した。上清を捨て、新しいブイヨン培
地を加えて細胞を懸濁した。再度、遠心分離し上清を捨
てた後新しいブイヨン培地を加えて３０℃でも６時間培
養した。
この培養液を遠心分離し上清を捨て生理食塩水を、加え
て細胞を懸濁した。この細胞懸濁液０．１ｍをδ−ハイ
ドロキシリジン２ ”％’ｓｇを添加した寒天平 ９− 板培地（ブドウ糖０．５％、リン酸第二カルシウム０．
７％、リン酸第１カリウム０．３１Ｇ、硫酸マグネシラ
ー・７水和物０．０１％、硫酸アンモニウム０゜１囁を
含む最小培地）に自重した。これを３０℃にて３日間培
養して生じたコロニーを釣１分離し、Ｌ−グルタミン酸
生産性を実施例１に記載したようにして調べてセラチア
・マルセツセンスＡＨ’−３０株を取得した。
て細胞を懸濁した。この細胞懸濁液０．１ｍをδ−ハイ
ドロキシリジン２ ”％’ｓｇを添加した寒天平 ９− 板培地（ブドウ糖０．５％、リン酸第二カルシウム０．
７％、リン酸第１カリウム０．３１Ｇ、硫酸マグネシラ
ー・７水和物０．０１％、硫酸アンモニウム０゜１囁を
含む最小培地）に自重した。これを３０℃にて３日間培
養して生じたコロニーを釣１分離し、Ｌ−グルタミン酸
生産性を実施例１に記載したようにして調べてセラチア
・マルセツセンスＡＨ’−３０株を取得した。
参考例２
（セラチア・マルセツセンス５ＬＩＣ−１００株の取得
方法） セラチア・マルセフセンスｓｒ＋１株を参考例１と同様
にして買−メチル−飼′−二トローＮ−二トロングアニ
ジン処理し、細胞懸濁液を脚製した。
方法） セラチア・マルセフセンスｓｒ＋１株を参考例１と同様
にして買−メチル−飼′−二トローＮ−二トロングアニ
ジン処理し、細胞懸濁液を脚製した。
この懸濁液を生理食塩水で稀釈して、詔よそ１０”細胞
／−になるように調整した。その０．１−をブイヨン寒
天平板培地に塗布して３０℃にて２４時間培養し生じた
コロニーから通常のレプリカ法し蛋白質・核酸、酵素別
量細−・ファージ遺伝実験法（１９７２）第２５〜３４
員〕によってコノ１り１０− 酸要求性麦興株であるＳＵＣ−１００株を取得した。な
お、コハク酸要求性の有無は参考例】に記載した最小培
地を用い、コハク酸二ナトリウム０゜２Ｓの添加または
無添加培地での生育の有無によって調べた。
／−になるように調整した。その０．１−をブイヨン寒
天平板培地に塗布して３０℃にて２４時間培養し生じた
コロニーから通常のレプリカ法し蛋白質・核酸、酵素別
量細−・ファージ遺伝実験法（１９７２）第２５〜３４
員〕によってコノ１り１０− 酸要求性麦興株であるＳＵＣ−１００株を取得した。な
お、コハク酸要求性の有無は参考例】に記載した最小培
地を用い、コハク酸二ナトリウム０゜２Ｓの添加または
無添加培地での生育の有無によって調べた。
Claims (5)
- （１）セラチア属に属し、δ−ハイドロキシリジン耐性
またはコハク酸要求性を有するＬグルタミン酸生産菌株
を培養し、該培養物からＬ−グルタミン酸を採取する仁
とを特徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の製法。 - （２）使用菌株がセラチア属に属し、δ−ハイドロキシ
リジン耐性を有するＬ−グルタミン酸生産菌である特許
請求の範囲第１項記載の製法。 - （３）使用菌株がセラチア属に属し、コハク酸要求性を
有するＬ−グルタミン酸生産菌である特許請求の範囲第
１項記載の製法。 - （４）使用菌株がセラチア・マルセッセンスに属し、δ
−ハイドロキシリジン耐性を有するＬ−グルタミン酸生
産菌である特許請求の範囲第１項記載の製法 - （５）使用菌株がセラチア・マルセッセンスに属し、コ
ハク酸要求性を有するＬ−グルタミン酸生菌である特許
請求の範囲第１項記載の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10474581A JPS589693A (ja) | 1981-07-03 | 1981-07-03 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10474581A JPS589693A (ja) | 1981-07-03 | 1981-07-03 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS589693A true JPS589693A (ja) | 1983-01-20 |
Family
ID=14389023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10474581A Pending JPS589693A (ja) | 1981-07-03 | 1981-07-03 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS589693A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0952221B1 (en) * | 1998-03-18 | 2004-11-17 | Ajinomoto Co., Inc. | L-Glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid |
-
1981
- 1981-07-03 JP JP10474581A patent/JPS589693A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0952221B1 (en) * | 1998-03-18 | 2004-11-17 | Ajinomoto Co., Inc. | L-Glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid |
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